低氧对肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达及增殖的影响

目的探讨低氧在肾脏疾病进展中的作用机制.方法将肾小管上皮细胞MDCK分别置于低氧3%和正常氧18%条件下,培养24,48,72和96 h.应用台盼蓝排除法计数活细胞,观察细胞增殖;应用流式细胞仪观察细胞周期;以及半定量RT-PCR检测MDCK细胞TGF-β1mRNA的表达.结果低氧可促进MDCK细胞增殖,G0-G1期细胞比例减少,G0-M期细胞比例增多.低氧可促进TGF-β1 mRNA的表达,而且呈一定时间相关性.结论慢性低氧致肾间质纤维化的机制与低氧引起的细胞增殖和细胞周期的改变有关,而这些改变又可能与低氧引起的细胞分泌生长因子改变有关.     

低氧对肾上管上皮细胞转化生长因子β1表达及增殖的影响

目的 探讨低氧在肾脏疾病进展中的作用机制。方法 将肾小管上皮细胞MDCK分别置于低氧3％和正常氧18％条件下，培养24，48，72和96h。应用台盼蓝排除法计数活细胞，观察细胞增殖；应用流式细胞仪观察细胞周期；以及半定量RT－PCR检测MDCK细胞TGF－β1mRNA的表达。结果 低氧可促进MDCK细胞增殖，G0－G1期细胞细胞减少，G2－M期细胞比例增多。低氧可促进TGF－β1 mRNA的表达，而且呈一定时间相关性。结论 慢性低氧致肾间质纤维化的机制与低氧引起的细胞增殖和细胞周期的改变有关，而这些改变又可能与低氧引起的细胞分泌生长因子改变有关。     

烧伤对肝脏转化生长因子-β_1表达及血浆转化生长因子-β_1水平的影响

肝脏在创伤后的急性炎症反应中起重要调节作用,转化生长因子(TGF)-β_1是具有多种功能的细胞因子,可对肝细胞产生抑制或致死的作用。有报道创伤后血浆TGF-β_1水平和部分肝切除术后肝细胞TGF-β_1mRNA均升高。该实验旨在研究烧伤后肝脏TGF-β_1表达、血浆TGF-β_1水平和肝细胞凋亡之间的关系。 选用BALB/c小鼠,随机分三组;假烧伤(S组);25％TBSAⅢ度烧伤(M组);50％BASAⅢ度烧伤(L组)。伤后腹腔注射林格     

转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子的表达

近年来研究表明,肾间质损害的主要参与者炎性细胞在趋化因子招募下开始浸润至肾间质并进一步活化,因此趋化因子的表达与肾脏疾病,尤其是与肾小管间质病变的关系受到众多研究者的关注.     

富半胱氨酸蛋白61对转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

转化生长因子β1(TGF-β1)是一种重要的炎性因子,也是介导肾小管上皮细胞凋亡最关键的细胞因子[1].富半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61,Cyr61)是一种即刻早期基因产物,在肾损伤、炎性反应等因素下表达增高.Cyr61具有促进上皮细胞黏附、迁移和增殖,诱导心血管形成,参与炎性反应等作用[2],但Cyr61对炎性因子导致的人肾小管上皮细胞凋亡的影响尚不清楚.为此,我们观察了Cyr61对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞凋亡的作用.     

罗格列酮对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子(TGF)β1对人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)表达结缔组织生长因子(CTGF)的诱导情况,以及罗格列酮对其影响和作用途径。方法应用RT-PCR方法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)mRNA表达。应用Western印迹方法检测CTGF和纤连蛋白(FN)的蛋白表达。结果(1)HK-2细胞低水平表达CTGFmRNA和蛋白,TGF-β1呈剂量和时间依赖性增加HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白表达(P<0.01)。(2)罗格列酮和15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)呈剂量依赖性抑制TGF—β1(4ng/ml)诱导的HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白的表达。(3)过氧化物酶体增殖体激活受体(PPAR)γ特异性抑制剂GW9662(1μmol/L)完全阻断罗格列酮和15d—PGJ2对CTGFmRNA和蛋白表达的抑制作用。(4)与单纯TGF-β14ng/ml刺激组相比,罗格列酮5、10μmol/L处理组HK-2细胞FN蛋白分别下调39.9%和53.4%(P<0.01),并呈剂量依赖性(P<0.01),而GW9662完全阻断该作用。结论在体外,罗格列酮可通过激活肾小管上皮细胞PPARγ抑制TGF-β1诱导的CTGF转录和表达,同时也可抑制FN的表达。     

激活蛋白1诱饵寡核苷酸对肾小管上皮细胞转化生长因子β1和白介素1β基因及蛋白表达的影响

核转录因子激活蛋白1（AP-1）在肾小管上皮细胞的活化、炎症介质产生的信号转导中起着重要作用。诱饵（decoy）核酸技术作为一个新的基因治疗策略．可特异性地阻断核转录因子的活性而抑制下游基因的表达．也极可能成为有效治疗肾脏疾病的新方法。本研究借助阳离子脂质体介导的基因转染技术，     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

转化生长因子-β1介导的足细胞凋亡

足细胞（podocyte）,即肾小球脏层上皮细胞,直接附着在肾小球基底膜（GBM）上,是肾小球血液滤过屏障重要的细胞结构。足细胞既是免疫介导,也是非免疫介导损伤靶点,肾小球肾炎时足细胞的无序凋亡可能导致肾小球无功能的瘢痕形成。转化生长因子-β1（TGF-β1）是一种多功能的细胞因子,在损伤的肾小球内,呈典型上调。越来越多的研究表明TGF-β1介导了肾小球足细胞的凋亡,在肾小球硬化过程中发挥着重要作用。     

转化生长因子-β1对鼠肝细胞凋亡的调控研究

目的　探讨正常和硬化肝细胞中转化生长因子 (TGF) β1的作用及其与凋亡的关系。方法　应用胶原酶原位灌注法分离正常和肝硬化小鼠的肝细胞。利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳及Hoechst 3 3 3 42对正常肝细胞进行染色来检测TGF β1(5 μg/L)诱导的凋亡。 结果　胶原酶原位灌流法分离肝细胞的活率为 95 .2 0 %。电泳发现正常肝细胞具有梯形条带 (5 5 .0 0 % ) ,硬化肝细胞则很少出现 (18.75 % )。应用Hoechst染色发现 ,正常肝细胞的凋亡率 (5 8.0 3 % )明显高于未处理组(18.76% ,P <0 .0 5 )。结论　硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。     

转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响

目的探讨转化生长因子[β1（TCF-β1）对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子（CTGF）基因启动子活性的调控作用，以及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc，将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng／ml，最佳刺激时间为12h，荧光素酶相对活性分别为对照组的1．82倍和2．10倍（P〈0．05）。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、蛋白激酶p38（p38MAPK）和c-Jun-氨基末端激酶（JNK）通路，对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性．并在一定浓度范围内（0．5～10μmol／L）促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响，但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性，在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。     

表皮生长因子受体在梗阻性黄疸肝内胆管上皮细胞的表达及意义

目的:观察表皮生长因子受体在梗阻性黄疸肝内胆管上皮细胞的表达.方法:通过大白鼠胆总管结扎模型,观察胆道梗阻时肝内胆管增生在肝纤维化中的作用;表皮生长因子(EGF)与肝内胆管增生的关系.结果:胆总管结扎2周后肝小叶汇管区有明显的胆管增生和肝纤维化,胆总管结扎4周导致肝硬变形成;透射电镜显示胆总管结扎2周时胆管上皮细胞基底侧可见大量的胶原纤维和增厚的基底膜物质.胶原纤维与胆管上皮细胞紧贴:肝脏EGF受体免疫组化染色显示胆总管结扎2周时肝内胆管上皮细胞胞浆、胞膜及胞核出现阳性染色反应.结论:胆道梗阻时增生的胆管通过破坏肝小叶结构和产生胶原纤维及基底膜物质,参与肝纤维化过程;EGF在胆道梗阻肝内胆管增生过程中起重要作用     

黄葵胶囊对大鼠IgA肾病转化生长因子-β1表达的影响

黄葵胶囊是从多年临床实践总结出的经验处方,现代药理研究亦表明,该药具有抗感染、抗血小板聚集、调节免疫,对肾小球、肾小管损伤有保护作用,目前已广泛应用于慢性肾脏病治疗。本实验拟通过建立大鼠IgA肾病模型观察黄葵胶囊对IgA肾病转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。     

转化生长因子β对白介素-1β诱导人骨关节炎软骨细胞表达NO的影响

目的 探讨转化生长因子β(TGF-β)对白介素-1β(IL-1β)诱导人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞表达一氧化氮(mitrlc oxide,NO)的影响.方法 体外培养OA患者软骨细胞,施以不同浓度的IL-1β,收集细胞培养液,检测其上清液表达NO的情况;选取某一合适浓度的IL-1β,然后施以不同浓度的TGF-β,检测其上清液表达N0的情况.结果 IL-1β诱导下,软骨细胞增加NO的表达,并呈剂量依赖关系;而TGF-β可抑制IL-1β诱导软骨细胞表达NO的作用,随着TGF-β剂量的加大,抑制N0的作用愈明显.结论 TGF-β具有抑制IL-1β诱导人骨关节炎OA软骨细胞表达NO的作用.TGF-β可能是OA的一种保护因子.     

血管紧张素Ⅱ对人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1及转化生长因子β1表达的影响

血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)是RAS系统的重要成分,是导致肾脏损伤的重要因素.为进一步探讨在Ang Ⅱ肾小管间质纤维化中的作用,我们观察了Ang Ⅱ对体外培养的人肾小管上皮细胞血小板反应蛋白1(TSP1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.     

L-精氨酸对梗阻性黄疸大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及其意义

目的　研究梗阻性黄疸 (简称梗黄 )时大鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况 ,并探讨 L -精氨酸 (L - Arg)对其影响及相关机制。方法　将雄性 S- D大鼠随机分为 5组 (n=1 0 ) ,除 1组外 ,采用双重结扎胆总管造成梗黄模型 ,7d后 ,不同组大鼠分别给予 L - Arg和 /或 L -精氨酸甲酯 (L - NAME) ,2 1天后测定肾组织中一氧化氮 (NO)的量 ,分别应用 TU NEL方法及透射电镜检测并观察肾小管上皮细胞的凋亡情况。结果　 NO水平 :3组明显高于 2组 (P<0 .0 1 ) ;2组则高于 1组 (P<0 .0 1 )。通过TU NEL方法显示 :在 1组中凋亡的肾小管上皮细胞最少 ,呈散在分布 ,而 5组出现的则最多。与 2组相比 ,3组中标记阳性的肾小管上皮细胞明显减少。肾小管上皮细胞凋亡计数 ;与 1组相比 ,2、3、4、5组均明显增生 (P<0 .0 1 ) ,3组显著低于 2组 (P<0 .0 1 ) ,5组与 2组相比 ,凋亡细胞增加 (P<0 .0 5 )。与上述结果相对应 ,透射电镜观察显示 ,肾小管上皮细胞的凋亡改变在各组之间的区别也是比较明显的。结论　梗黄可引起肾小管上皮细胞出现明显的凋亡改变 ,而 L - Arg通过 L - Arg- NO通路具有减轻肾小管上皮细胞凋亡的作用     

含谷氨酰胺白TPPN对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜形态学的影响

目的：研究不同氨基酸配方的TPN对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜形态学的影响。材料与方法：封闭群SD大鼠45只，平均分为5组。A组；假手术经口饮食对照组，B组：胆总管结扎经口饮食对照组；C至E组为胆总管结扎加TPN组，其中C组以15－氨基酸800为氮源，D组以Novamin为氮源，E组以Glamin为氮源，E组以Glamin为氮源。各组TPN为等氮，等热量。分别于TPN0h,72h和120h处死实验大鼠。作空肠和结肠光镜检查及绒毛高度的图象分析，并对空肠作电镜检查。结果：C组大鼠的空肠和结肠绒毛高度均低于相应的饮食组，空肠微绒毛稀疏，缺如：D组大鼠的空肠绒毛高度低于相应的饮食组，结肠绒毛高度则高于相应的饮食组，而E组大鼠，其空肠和结肠绒毛高度与相应的饮食组无显著差异，明显高于C组和D组，空肠微绒毛结构保持较好。结论：胆总管结扎术后，可造成大鼠肝外梗阻性黄疸，并对其空肠及结肠黏膜萎缩具有独立影响作用。提供平衡氨基酸溶液的TPN可有效促进机体对外源性氨基酸的利用而减轻标准TPN对肠黏膜的负面影响。富含Gln的TPN有助于预防标准TPN引起的肠道黏膜萎缩。     

慢性脊髓损伤及减压对转化生长因子β1表达的影响

目的研究大鼠慢性脊髓损伤及减压后转化生长因子β1及其mRNA的表达变化.方法健康Wistar 大鼠36只,制备慢性脊髓压迫中、重度及减压后3、7、14 d模型,以正常大鼠作对照组.用免疫组织化学和原位杂交技术,观察各组压迫段压迫邻近(距压迫边缘5 mm)段脊髓组织TGF-β1及其mRNA的分布和含量变化.用改变Tarlov评分和斜坡实验观察大鼠慢性脊髓压迫及减压后神经功能的相关变化.结果正常大鼠脊髓不表达TGF-β1.慢性脊髓压迫中、重度及减压后3、7 d出现大量的TGF-β1阳性细胞;脊髓重度压迫组TGF-β1表达强度达高峰,阳性细胞的灰度为120.33±10.97.脊髓重度压迫组TGF-β1mRNA表达阳性细胞的灰度为86.51±11.75.减压14 d组TGF-β1阳性细胞偶见.脊髓的神经功能于中、重度压迫组显著下降,减压后逐渐恢复.结论大鼠慢性脊髓损伤及减压后,TGF-β1表达显著增加,有一定的保护作用.     

梗阻性黄疸时脾切除对肠黏膜屏障影响的实验研究

目的 探讨脾脏在梗阻性黄疸(阻黄)中对肠黏膜屏障的作用及其机制.方法 50只Wistar大鼠随机分组,阻黄组开腹结扎胆总管;阻黄+脾切除组,同时切除脾脏.术后7d观察血浆内毒素水平的变化,用乳果糖/甘露醇(L/M)比值检测肠黏膜通透性;采用免疫组织化学、Western印迹检测末端回肠紧密连接蛋白闭锁小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白的表达,并利用图像分析系统对Western印迹图像进行定量分析.结果 阻黄+脾切除后L/M的比值和血浆内毒素水平较阻黄组明显下降(均P=0.001).与阻黄组相比,阻黄+脾切除组的平均肠绒毛高度和隐窝深度有所上升(P=0.019、0.001).免疫组化显示术后7 d阻黄组ZO-1蛋白强阳性表达数(6/18)下降明显(P=0.021),阻黄+脾切除组(8/17)染色较阻黄组变化不大;闭锁蛋白的染色阻黄+脾切除组强阳性表达(7/17)高于阻黄组(4/18)(P=0.026).通过对Western印迹图像进行定量分析也得出同样的结论.结论 阻黄后肠黏膜通透性增加,肠黏膜屏障受损.同时切除脾脏,肠紧密连接蛋白成分的数量和分布改变,肠黏膜屏障的损害减轻.     

梗阻性黄疸时脾切除对肠黏膜屏障影响的实验研究

目的 探讨脾脏在梗阻性黄疸(阻黄)中对肠黏膜屏障的作用及其机制.方法 50只Wistar大鼠随机分组,阻黄组开腹结扎胆总管;阻黄+脾切除组,同时切除脾脏.术后7d观察血浆内毒素水平的变化,用乳果糖/甘露醇(L/M)比值检测肠黏膜通透性;采用免疫组织化学、Western印迹检测末端回肠紧密连接蛋白闭锁小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白的表达,并利用图像分析系统对Western印迹图像进行定量分析.结果 阻黄+脾切除后L/M的比值和血浆内毒素水平较阻黄组明显下降(均P=0.001).与阻黄组相比,阻黄+脾切除组的平均肠绒毛高度和隐窝深度有所上升(P=0.019、0.001).免疫组化显示术后7 d阻黄组ZO-1蛋白强阳性表达数(6/18)下降明显(P=0.021),阻黄+脾切除组(8/17)染色较阻黄组变化不大;闭锁蛋白的染色阻黄+脾切除组强阳性表达(7/17)高于阻黄组(4/18)(P=0.026).通过对Western印迹图像进行定量分析也得出同样的结论.结论 阻黄后肠黏膜通透性增加,肠黏膜屏障受损.同时切除脾脏,肠紧密连接蛋白成分的数量和分布改变,肠黏膜屏障的损害减轻.

Abstract：

Objective To investigate the effects of splenectomy on the intestine mucosa barrier in rats with obstructive jaundice. Methods 50 Wistar rats were divided randomly into the obstructive jaundice group (OJ), in which the animals underwent operation to ligate common bile duct, and the obstructive jaundice + splenectomy group (OJ+ S). Seven days post-operation, plasma endotoxin levels were detected. Intestinal mucosa permeability was measured by the ratios of lactulose and mannitol (L/M). Immunohistochemistry and Western blot were used to examine the expression of tight junction proteins (ZO-1 and occludin) in the distal ileum mucosa. Western blots images were analyzed quantitatively. Results Average ratios of L/M and plasma endotoxin were decreased obviously in the OJ+S group compared to those in the OJ group (all P=0. 001). Compared with the OJ group, the average intestinal villus height and mucosa thickness were upgraded somewhat in the OJ + S group (P = 0.019, 0. 001 ). By immunohistochemistry staining seven days post-operation, same comment as above the amounts of strong positive expression of ZO-1 were significantly decreased in the OJ group (6/18, P-0. 021). There wewas no difference between the OJ+S group(8/17) and the OJ group.The amount of strong positive expression of occludin was higher in the OJ + S group than that of the OJ group(10/17 vs 4/18, P= 0. 026). The same outcomes were obtained by quantitative Western blot images. Conclusion The intestinal epithelial permeability was increased in rats with obstructive jaundice,and intestinal barrier was damaged. After excising spleen, the amount and distribution of tight junction proteins were changed and the impairment of intestinal barrier was abated.