软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP—1、2及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白质酶组织抑制因子－1、2（TIMP－1、TIMP－2）及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRAN及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理。方案 制备大鼠纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP－1、TIMP－2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRAN和蛋白表达。结果 CCl4模型组TIMP－1、TIMP2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无一例阳性。结论 TIMP－1、TIMP－2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP－1、TIMP－2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用。     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、2及工、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1、2(TIMP-1、TIMP-2)及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理.方法制备大鼠肝纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP-1、TIMP-2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达.结果CC14模型组TIMP1、TIMP-2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组.正常组大鼠肝组织无一例阳性.结论TIMP-1、TIMP-2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP-1、TIMP-2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用.     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ，Ⅲ型胶原基因调节及蛋白表达的影响

目的：阐明软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠肝脏胶原基因调节及蛋白表达的影响,探索;肝纤维化发生的分子生物学机理,方法：采用免疫组化和原位杂交技术分别测定各组肝纤维大鼠治疗前后肝脏I,III型胶原的基因调节和蛋白表达,结果CCl4模型组大鼠肝脏,I,III型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组,正常组大鼠肝组织无1例阳性,结论：软肝缩脾丸治疗可显著降低肝纤维化大鼠肝脏I,III型胶原基因和蛋白表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

中药双甲五灵冲剂对免疫性肝纤维化大鼠抗肝纤维化的分子机制研究

目的探讨中药双甲五灵冲剂对免疫诱导型肝纤维化大鼠的治疗作用及机制。方法90只雌性Wistar大鼠。10只大鼠为正常对照组,80只大鼠予尾静脉注射人血白蛋白,建立免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为5组：预防组、治疗1组、治疗2组、秋水仙碱组、观察组。用光镜观察肝脏HE染色、VanGieson（VG）胶原染色,采用原位杂交及免疫组织化学染色技术检测大鼠肝脏组织中TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达强度;用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果免疫诱导型肝纤维化大鼠在造模结束后肝组织学改变呈进行性加重,以造模结束后3个月为著;TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白呈强阳性表达,电镜见观察组有较多激活的HSC及大量胶原纤维沉积在肝窦间隙及肝细胞间,经双甲五灵冲剂治疗后的大鼠与观察组大鼠相比,肝组织结构明显好转,纤维组织减少,未见到激活的HSC、TIMP-1和TIMP-2mRNA及蛋白表达与观察组相比均明显降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达明显降低（P〈0．05）,并且其效果为预防组效果最好,治疗1组较治疗2组效果好,三组均明显优于秋水仙碱组。结论双甲五灵冲剂可以逆转肝纤维化,抗肝纤维化机制可能是：①抑制肝星状细胞活化,减少ECM的生成及TIMP分泌;②直接抑制TIMP—1、TIMP-2mRNA及蛋白的表达;二者共同作用使得TIMP分泌减少,从而降低对MMPs的抑制,有利于MMPs对ECM的降解;③具有加速Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,抑制其生成及沉积的作用。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏基质转换及肝窦毛细血管化的影响

目的:观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化时肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)以及肝窦毛细血管化的影响,探讨其防治肝纤维化的作用。方法:250ml/L CCl_4经大鼠皮下注射制备肝纤维化模型并同时给予秋水仙碱、小和大剂量抗纤软肝颗粒治疗,用光镜和电镜观察肝组织病理变化;免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、层粘蛋白(LM)原住杂交的方法检测MMP-1 mRNA、TIMP-1 mRNA。结果:抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P<0.05),抑制TIMP-1的表达(P<0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.01);有效抑制Ⅳ型胶原、LM的生成和沉积(P<0.01),改善肝纤维化大鼠肝组织病理变化(P<0.01)。减轻肝窦毛细血管化程度。结论:抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,抑制肝窦毛细血管化的形成,从而产生抗肝纤维化的作用。     

MMP-1、TIMP-1与实验性肝纤维化形成过程中基质转换的关系及抗纤软肝颗粒的干预作用

目的：动态观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达，以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系，以及抗纤软肝颗粒对它们的影响。方法：将大鼠随机分为正常对照组、CCl4模型组与治疗组。采用250ml／L CCl4在大鼠皮下注射制备肝纤维化模型，并同时给与抗纤软肝颗粒治疗，各组分别于第3、5、7、9、11周分批处死大鼠，取肝脏标本。采用免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原，原位杂交的方法检测MMP-1 mRNA、TIMP-1 mRNA。结果：在肝纤维化形成过程中：①胶原持续增高，治疗组较同期模型组比较有不同程度的降低。②MMP-1 mRNA的表达先逐渐增强，后期有所下降；治疗组较同期模型组比较有不同程度的增强。③TIMP-1 mRNA的表达持续增强，治疗组较同期模型组比较有不同程度的减弱。TIMP-1 mRNA与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论：在肝纤维化过程中TIMP-1通过对MMP-1活性的抑制，导致ECM在肝脏内的过度沉积；抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达，抑制TIMP-1的表达。促进肢原降解而产生抗肝纤维化作用。     

虫草多糖脂质体对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响

目的:探讨虫草多糖脂质体(CPL)对CC14大鼠肝纤维化的预防作用及可能机制。方法:采用虫草多糖脂质体(CPL)预防CC14大鼠肝纤维化,运用免疫组和Northern杂交化检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达。结果:CPL预防组肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较模型对照组明显减少(P值分别<0.01);CPL预防组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达量明显下降,与模型组大鼠比较差异有显著性(P值分别<0.05)。结论:虫草多糖脂质体可以预防大鼠肝纤维化,其抗纤维化作用是通过在转录水平抑制肝脏胶原合成而实现的。     

硫代反义寡核苷酸对肝纤维化大鼠TIMP-1基因及蛋白表达的抑制作用

目的观察硫代反义寡核苷酸(asON)对实验性免疫性肝纤维化大鼠肝组织中TIMP-1基因和蛋白表达的抑制作用.方法根据TIMP-1二级结构基因组的调控序列、结构蛋白、编码区序列等分析,设计4组不同的asON.利用尾静脉注射将其导入肝纤维化大鼠模型体内;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的免疫组化、原位杂交法、胶原纤维特殊染色及电镜等观察asON对大鼠肝纤维化的影响.结果针对TIMP-1设计的asON经硫代修饰后在活体内能确切表达并能在mRNA水平上封闭实验性肝纤维化大鼠肝组织中TIMP 1的基因和蛋白表达,其结果可促进肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).肝纤维化病理学分级和电镜观察结果显示asON对肝纤维化的逆转具有一定效果.结论针对TIMP-1设计的硫代asON在动物体内具有良好的抗肝纤维化效应,从而为研制新一代抗肝纤维化基因治疗药物奠定了基础.     

复方861对大鼠肝星状细胞胶原合成及降解干预作用的体外研究

目的深入研究中药复方861抗肝纤维化的机理。方法向传一代肝星状细胞培养液中加入终浓度为10mg／ml的复方861作用48小时,收获细胞培养液观察Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原及TGFβ1的分泌量并测定胶原酶活性;收获肝星状细胞并提取总RNA,斑点杂交法检测胶原、胶原酶及其抑制TIMP1mRNA水平的变化。结果复方861可明显抑制肝星状细胞Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原及TGFβ1mRNA的表达及相应蛋白的分泌,同时可提高间质性胶原酶的活性并抑制TIMP1mRNA的表达。结论复方861在抑制胶原过度合成的同时,又可促进胶原的降解,从而使二者间的失衡得以纠正,达到抗肝纤维化的目的。     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1表达的影响

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制.方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过RT-PCR检测MMP-1、TIMP-1的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Masson胶原染色.结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠MMP-1的表达无明显影响(P>0.05),但可以抑制TIMP-1的表达(P<0.05),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.05);然而在病理形态学的观察中,未发现秋水仙碱治疗组与肝纤维化模型组之间存在的显著性差异(P>0.05).结论 秋水仙碱可以抑制纤维化肝脏TIMP-1的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用,但其作用有限.     

ⅩⅧ型胶原mRNA在实验性肝纤维化大鼠肝脏中的表达

目的了解XⅧ型胶原（collagenXⅧ,CXⅧ）mRNA在实验性肝纤维化中的定量改变。方法以逆行胆管硬化注射加结扎的方法制备大鼠胆管堵塞性肝纤维化模型,以假手术组大鼠为对照组。提取肝脏总RNA,以核酸酶保护分析（RNA酶保护分析）定量测定前胶原α1（XⅧ）mRNA水平,并与α1（Ⅰ）和金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP－1）的mRNA变化相比较。结果与假手术组大鼠相比,胆管堵塞性肝纤维化大鼠肝脏前胶原α1（Ⅰ）及TIMP－1mRNA水平分别升高20倍及4倍;而肝纤维化大鼠肝脏前胶原α1（XⅧ）mRNA水平仅升高到1.8倍。结论肝纤维化时肝脏XⅧ胶原仅轻度升高．这种变化类型可能和XⅧ胶原主要由肝实质细胞表达有关。     

白细胞介素-10对肝纤维化大鼠细胞外基质及其代谢酶表达的影响

目的探讨白细胞介素（IL）-10对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及其抗纤维化作用的可能机制.方法47只SD大鼠随机分为正常组（N组）和CCl4组（C组）.C组通过CCl4腹腔注射造模.至造模第9周,C组随机分为模型组（M组）、IL-10治疗组（T组）和自然恢复组（R组）.S-P免疫组化法检测肝脏MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,H-E染色判断肝纤维化程度.结果成功建立肝纤维化模型,肝病理组织学显示,与M组比较,T组肝纤维化程度有明显改善（P=0.001）,而R组未见明显好转.与N组比较,MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在M组表达明显升高（P＜0.01）,T组显著降低（P＜0.01）,R组表达较M组有所降低（P＜0.05）,但仍明显高于T组（P＜0.01）.结论IL-10可抑制纤维化大鼠肝组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,减弱细胞外基质合成,加速其降解进而发挥抗纤维化作用.     

维生素E对肝纤维化大鼠金属蛋白酶组织抑制因子-2、Ⅲ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究维生素E（VE）防治肝纤维化作用及可能存在的机制。方法 以四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,用VE乳剂（100mg/kg,2次／周）静脉注射,连续10周,免疫组织化学检测肝组织Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白（FN）沉积;原位杂交检测肝内金属蛋白酶组织抑制因子－2（TIMP－2）及α1（Ⅲ）前胶原mRNA表达。结果 治疗组大鼠肝内Ⅲ型胶原蛋白及FN形成较对照组减少;α1（Ⅲ）前胶原及TIMP－2mRNA表达降低,经图像分析,与对照组差异有显著性（P＜0.05）。结论 VE治疗可下调肝纤维化大鼠TIMP02基因表达,减少细胞外基质沉积,有助于实验性肝纤维化的恢复。     

复方益气活血化瘀中药对大鼠肝纤维化组织中胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型,研究以黄芪、丹参、三七为主的益气活血化瘀复方中药抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药干预组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型;根据病理学检查评价各组动物肝纤维化程度;应用RT-PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平;应用免疫组化检测各组肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达。结果中药干预组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平,以及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1的阳性表达均分别较模型组显著减轻与下降。结论益气活血化瘀复方中药能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

布洛芬抗兔血吸虫病肝纤维化的实验研究

目的:观察布洛芬抗兔血吸虫病肝纤维化时对兔肝组织Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRAN表达的影响。方法:建立兔血吸虫病肝纤维化模型。应用布洛芬治疗8周后处死全部实验兔,取其肝组织作冰冻切片,应用原位杂交技术检测CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、TIMP-1 mRNA,并用计算机彩色病理图像分析系统进行图像分析。结果:布洛芬组与模型对照组相比,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TlMP-1 mRNA表达减少,MMP-1 mRNA表达增加(P<0.05)。结论:布洛芬能抑制兔血吸虫病肝纤维化肝组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP-1 mRNA表达,增加MMP-1 mRNA表达,促进胶原降解,减少胶原沉积。     

复方中药861与961抗肝纤维化疗效比较的实验研究

比较复方 86 1与复方 96 1对四氯化碳实验性肝纤维化的防治效果。Wistar大鼠随机分为 4组 :对照组(10只 )、四氯化碳模型组 (2 0只 )、复方 86 1组 (15只 )、复方 96 1组 (15只 )。实验 8周 ,取肝组织 ,应用半定量逆转录多聚酶链反应方法 (RT -PCR)检测肝组织Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、TGF - β1、TIMP - 1的mRNA水平。病理组织染色 ,记分。复方 86 1、复方 96 1显著降低Ⅰ、Ⅲ型前胶原、TGFβ1和TIMP - 1mRNA水平 (P <0 0 1)。肝组织病理纤维化分级表明 :两复方抑制纤维结缔组织增生程度相似。复方 96 1与复方 86 1抗纤维化效果相近     

槲皮素抑制小鼠血吸虫病肝组织即早基因和基质金属蛋白酶组织抑制因子1的表达

分别运用槲皮素及吡喹酮治疗小鼠日本血吸虫肝纤维化。槲皮素治疗后小鼠肝纤维化程度减轻，肝组织中即早基因c-fos与c-jun及基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均明显低于感染对照组；与吡喹酮组相比，c-jun mRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显降低，而c-fos mRNA、TIMP1含量无显著改变，提示其远期抗血吸虫肝纤维化效果优于吡喹酮。     

芪参益气滴丸对肝纤维化大鼠肝脏胶原表达的影响

目的：应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型，研究芪参益气滴丸对纤维化肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法：70只大鼠随机分为正常对照组、模型组、芪参益气滴九干预组、模型对照组及芪参益气滴丸治疗组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组大鼠肝纤维化程度。应用RT—PCR法检测各组大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平；应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果：芪参益气滴丸干预组与治疗组大鼠的肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA水平及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的阳性表达，均分别较模型组与模型对照组显著减轻与下降。结论：芪参益气滴丸能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度．抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达是其抗肝纤维化的机制。     

强力宁对四氯化碳、乙醇诱导的肝纤维化大鼠模型肝脏Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

目的：探讨强力宁治疗对毒素性肝损伤－纤维化大鼠模型肝脏内Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达的影响，从分子水平揭示强力宁对肝纤维化的治疗作用及机理。方法：采用四氯化碳皮下注射和饮用乙醇水溶液方法诱导大鼠肝损伤－纤维化模型，同时部分予以强力宁治疗，在四氨化碳等处理后定期处死大鼠收集血清和肝脏标本，采用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法抽提肝组织总ＲＮＡ，用地高辛标记的Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｃＤＮＡ探针与各组肝组织总ＲＮＡ进行斑点杂交，比较各组标本肝脏Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达水平。结果：四氯化碳等损伤后肝脏内Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达显著增高，而强力宁能够抑制损伤后肝脏内Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的异常增高的表达。结论：强力宁能够通过抑制毒素致肝损伤动物模型肝脏内Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达来抑制肝纤维化的发生。     

奥曲肽对肝星状细胞胶原合成及TIMP-1、MMP-2表达的影响

目的研究奥曲肽(OCT)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)胶原分泌及TIMP-1mRNA、MMP-2mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠HSC,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的OCT,用ELISA法检测细胞上清液中的Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,半定量RT-PCR法检测OCT对HSC中MMP-2、TIMP-1 mRNA表达的影响。结果应用OCT干预后,HSC合成Ⅰ、Ⅲ型胶原减少,TIMP-1 mRNA的表达较少,而MMP-2 mRNA表达明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论OCT可以抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,增强MMP-2mRNA的表达,抑制TIMP-1mRNA的表达,这可能是OCT发挥抗肝纤维化作用的途径之一。