钙调神经磷酸酶CaNAαa和CaNAβ在肺癌中的表达及意义

目的：检测钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）Aα和Aβ亚基蛋白在肺癌细胞中的表达,研究CaN蛋白亚基的表达与肺癌骨转移发生是否相关。方法：应用PCR和Westernblot方法检测SBC-5、SBC-3和NCI—H345小细胞肺癌细胞中CaNAα和Aβ在基因和蛋白水平上的表达;通过免疫组织化学方法检测肺癌骨转移和肺癌无骨转移患者肺癌组织中CaNAα和Aβ的表达。结果：CaNAα和Aβ的表达强度在能产生骨转移的肺癌细胞SBC-5中明显高于非骨转移肺癌细胞SBC-3和NCI—H345。在肺癌伴有骨转移患者的肺癌组织中CaNAα和CaNAβ的表达强度也都明显较无骨转移肺癌患者组高（CaNAαP=n000;CaNAβP=n030）。结论：钙调神经磷酸酶不同亚基（CaNAα和Aβ）的表达可能在肺癌骨转移的发生和发展中具有重要意义。     

αvβ 3整合素在小细胞肺癌骨转移细胞株SBC-5中的表达及意义

目的:分析αvβ3整合素在特异性小细胞肺癌骨转移细胞株中的表达,探讨肺癌骨转移的机制.方法:RT-PCR、Western-blot和免疫荧光染色检测小细胞肺癌特异性骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3中αvβ3整合素的表达差异.结果:αvβ3整合素在SBC-5细胞株中的表达显著高于SBC-3细胞株.结论:αvβ3整合素可能与小细胞肺癌骨转移的发生相关,可能促进了小细胞肺癌骨转移的发生.     

钙调神经磷酸酶A与B在乳腺癌组织中的表达

目的：检测钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）信号转导通路蛋白在乳腺癌组织中的表达,分析CaN成员与乳腺癌临床病理特征的关系。方法：应用Western印迹法检测55例乳腺癌组织及其邻近正常组织的CaNAα、CaN Aβ与CaNB蛋白表达,免疫组织化学法检测CaN在细胞水平的分布。结果：CaN Aα、CaN Aβ与CaNB在乳腺癌组织中表达明显升高,分别为正常乳腺组织的6.45、4.67与2.31倍（P〈0.05）;CaN Aα与CaN Aβ表达水平与TNM分期较晚（Ⅲ/Ⅳ）有关（P=0.05）。结论：CaN信号转导通路蛋白的持续活化可能在乳腺癌的发生中起重要作用。     

血清中CaN和PTHrP测定在肺癌骨转移诊断和疗效判定中的意义

目的：探讨血清中钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）和甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone-related protein,PTHrP）的测定对肺癌骨转移患者的诊断及临床疗效评价的意义。方法：应用ELISA法检测患者血清CaN和PTHrP浓度,并比较其浓度在肺癌骨转移未治疗患者,非骨转移患者及骨转移治疗患者中的差异。结果：骨转移未治疗组患者血清CaN和PTHrP水平均明显高于非骨转移组（P〈0.01）,并高于骨转移治疗组（P〈0.01）。结论：血清CaN和PTHrP的测定对肺癌患者骨转移的诊断及疗效评价可能具有重要意义。     

αvβ_3整合素在小细胞肺癌骨转移细胞株SBC-5中的表达及意义

目的：分析αvβ3整合素在特异性小细胞肺癌骨转移细胞株中的表达,探讨肺癌骨转移的机制。方法：RT-PCR、Western-blot和免疫荧光染色检测小细胞肺癌特异性骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3中αvβ3整合素的表达差异。结果：αvβ3整合素在SBC-5细胞株中的表达显著高于SBC-3细胞株。结论：αvβ3整合素可能与小细胞肺癌骨转移的发生相关,可能促进了小细胞肺癌骨转移的发生。     

肺癌骨转移患者CaN、PTHRP的水平变化及诊断价值探讨

目的 探讨血清钙调磷酸酶(CaN)和甲状旁腺激素相关蛋白(PTHRP)对早期诊断肺癌骨转移的临床价值.方法 选取79例肺癌骨转移患者(转移组)和90例肺癌未发生骨转移患者(无转移组),检测两组患者的血清CaN、PTHRP、癌胚抗原(CEA)、CA125、骨碱性磷酸酶(BALP)的水平并进行比较分析.结果 转移组患者的血清CaN、PTHRP、CEA、CA125、BALP水平明显高于无转移组,差异有统计学意义(P﹤0.01).转移组患者的血清CaN、PTHRP与CEA、CA125、BALP水平均呈明显正相关(P﹤0.01).绘制ROC曲线,当选取CaN=590.4 U/ml为诊断临界点时,鉴别诊断肺癌骨转移的灵敏度为78.2%,特异度为84.0%,漏诊率为21.8%,误诊率为16.0%, ROC曲线下面积为0.872(95%CI:0.821~0.946);当选取PTHRP=6.81 ng/ml为诊断临界点时,鉴别诊断肺癌骨转移的灵敏度为70.4%,特异度为78.5%,漏诊率为29.6%,误诊率为21.5%,ROC曲线下面积为0.811(95%CI:0.785~0.863).结论 肺癌骨转移患者的血清CaN和PTHRP水平升高明显,对肺癌骨转移有一定的鉴别诊断价值.     

钙调神经磷酸酶Aα对不同骨转移潜能小细胞肺癌细胞株黏附作用的影响

目的:探讨CnAα在小细胞肺癌骨转移中对骨基质黏附作用的影响。方法:构建CnAα稳定高表达和低表达的小细胞肺癌细胞SBC-3和SBC-5细胞株;利用骨条技术对构建好的稳定表达细胞株的骨黏附能力强弱进行对比。结果:高骨转移潜能SBC-5细胞对骨组织的黏附能力强于非骨转移SBC-3细胞;上调CnAα的SBC-3细胞的黏附能力强于其亲本细胞SBC-3,而下调CnAα的SBC-5细胞的黏附能力低于其亲本SBC-5细胞。结论:CnAα可能是通过提高小细胞肺癌细胞对骨组织的黏附能力来促进肺癌骨转移。     

肺癌骨转移相关分子的比较蛋白质组学研究

目的:分析比较人肺癌不同骨转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选在肺癌骨转移中起重要作用的关键蛋白质分子。方法:利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析人肺癌骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3/DOX蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选肺癌骨转移相关蛋白质。结果:PDQuest 8.0软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好。SBC-5检测到(1116±64)个蛋白点,平均匹配率为84%;SBC-3/DOX检测到(1132±72)个蛋白点,平均匹配率为82%;蛋白质点分布以PI 4-7、相对分子质量20 000-80 000范围内最多。两种细胞株16个差异蛋白质点胰酶胶内酶解,质谱分析获得14张肽质量指纹谱,鉴定出Annexin A1,CaN,IGFBP-1,ADAM32等8种胶内差异蛋白质。结论:人肺癌不同骨转移潜能细胞株SBC-5和SBC-3/DOX的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,多种差异表达蛋白可能与肺癌骨转移相关。     

RCAN1在恶性肿瘤中的研究进展

钙调神经磷酸酶调节蛋白(Regulator of calcineurin 1,RCAN1)作为与钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)发生相互作用的内源性蛋白,在许多恶性肿瘤细胞中广泛表达,如小细胞肺癌、甲状腺癌、白血病、肝癌、恶性胶质细胞瘤、子宫内膜腺癌等。近年来研究显示,当RCAN1呈高表达状态时,可以通过多种途径来抑制肿瘤的增殖、分化、侵袭和转移,从而抑制肿瘤的进展。这些研究结果对患者的生存期和预后评估有着重要的指导作用,并对恶性肿瘤的治疗和干预奠定了一定的理论基础。     

miR-409-3 p调控靶基因Beclin-1抑制小细胞肺癌细胞的自噬进而抑制其生长和转移

目的:探究miR-409-3p及其靶基因对小细胞肺癌细胞自噬、生长和转移的影响.方法:qRT-PCR检测miR-409-3p在HPAEpiC、SBC-5、NCI-H446、HOP-92细胞中的表达,SBC-5细胞中转染miR-409-3p mimic和miR-NC,CCK8法检测转染后细胞增殖,Transwell小室法...     

上调GDF15表达对小细胞肺癌SBC-5细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨GDF15表达对小细胞肺癌SBC-5细胞增殖和侵袭能力的影响，寻找小细胞肺癌易发生 远处转移相关的可能分子标记物。方法:通过 RT-PCR和Western blot方法检测小细胞肺癌细胞株SBC-3和SBC-5中GDF15 mRNA及GDF15蛋白的表达；慢病毒感染构建GDF15过表达的SBC-5-GDF15细胞株（实验组:SBC-5-GDF15，对照组:SBC-5-NC），通过RT-PCR 和 Western blot鉴定感染效果；采用克隆形成实验和MTT实验检测上调GDF15表达对SBC-5细胞增殖能力的影响；侵袭实验检测上调GDF15表达对SBC-5细胞侵袭能力的影响。结果:在mRNA和蛋白水平上，GDF15在SBC-5细胞中的表达均显著低于SBC-3细胞，差异具有统计学意义（P<0.05）;慢病毒感染细胞后绿色荧光的比例大于80%，GDF15在 mRNA和蛋白表达水平均被明显上调；上调GDF15的表达抑制SBC-5细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。结论:DGF15抑制SBC-5细胞的增殖和侵袭能力，可能成为抑制小细胞肺癌转移的潜在靶点。     

整合素α5β1介导细胞外信号调节激酶信号转导通路对A549细胞生长和侵袭的影响

背景与目的近年研究显示整合素α5β1作为整合素家族的重要部分与非小细胞肺癌的转移性、浸润性和低分化趋向密切相关.本研究应用整合素α5/β1 siRNA双链及ERK抑制剂PD98095干预人肺癌细胞A549,探讨整合素α5β1蛋白表达对A549细胞生长和迁移能力的影响及其细胞内信号转导机制.方法实验分为未转染组、脂质体组、整合素α5β1 siRNA染组和PD98095组四组.采用免疫印迹(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549中整合素α5β1蛋白和mRNA表达水平,Western blot检测A549中ERK1/2、MMP-9和caspase-3蛋白水平,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和Annexin-V FITC PI双染色法检测A549增殖和凋亡.结果整合素α5/β1 siRNA双链在抑制α5/β1蛋白和mRNA表达的同时,可以下调ERK的mRNA和蛋白表达,并抑制其磷酸化水平.整合素α5/β1 siRNA双链和PD98059均可以明显抑制A549细胞的增殖,促进细胞凋亡和细胞内caspase-3蛋白表达,并抑制细胞内MMP-9蛋白表达.结论整合素α5β1可能通过介导的ERK信号转导通路参与了A549细胞的增殖和迁移调控.     

Aurora—A激酶在人类肺癌细胞株中的表达

目的：探讨aurora-A基因在正常肺组织与不同肺癌细胞中的表达。方法：采用半定量RT-PCR、Western blot方法，检测Aurora-A在高转移的肺癌细胞PG、肺腺癌细胞A549、大细胞肺癌细胞NCI-H460三种肺癌细胞株的表达情况。结果：RT-PCR结果显示，三种肺癌细胞与正常肺组织比较aurora-A mRNA均高表达，经图象分析，PG、A549、NCI-H460与正常肺组织中aurora-A／β-actin比值分别为1．14、1．16、0．84和0、26。Western blot结果经图象分析发现，A549、NCI-H460与PG的aurora-A／β-actin比值分别为21．13、6．43与8．96。三者比较，A549最高，PG其次，NCI-H460最低。结论：aurora-A在三种肺癌细胞中其mRNA及蛋白水平均呈高表达，不同细胞株其表达水平不同。aurora-A基因在肺癌细胞中高表达的结果提示，作为一种新的癌基因，aurora-A有可能成为肺癌新的肿瘤标记物及分子治疗靶点。     

MACC1基因siRNA对肺癌SBC-5细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨MACC1(metastasis-associated in colon cancer l)基因特异性siRNA(small interfering RNA)对肺癌细胞系SBC-5体外增殖和迁移的影响。方法:化学合成MACC1基因特异性siRNA,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染肺癌细胞系SBC-5细胞,RT-PCR和Western blot方法检测转染后SBC-5细胞中MACC1基因和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞的生长增殖状况;划痕试验观察细胞迁移能力的改变。结果:MACC1基因特异性siRNA转染细胞后,SBC-5细胞MACC1的mRNA和蛋白表达水平明显降低,MTT试验和划痕试验观察到转染MACC1-siRNA的SBC-5细胞增殖、迁移能力明显减弱。结论:MACC1基因特异性siRNA可以明显抑制肺癌SBC-5细胞增殖和迁移,MACC1可能成为肺癌治疗的新靶点。     

蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响。方法 通过蛋白印迹法检测蛋白激酶CK2α、β亚基在不同肺癌细胞系中的表达情况。平板克隆形成试验检测CK2激酶抑制剂醌茜素对肺腺癌细胞A549和大细胞肺癌细胞H460对X线的放射敏感性影响。流式细胞术检测醌茜素与X线联合作用对A549、H460细胞凋亡及周期分布影响。组间比较采用方差分析和成组t检验。结果 蛋白激酶CK2α、β亚基在对放射不敏感的A549、H1650、H460细胞中高表达, 而在放射敏感的小细胞肺癌H446细胞中低表达。使用醌茜素预处理的A549、H460细胞存活分数(SF)明显低于未处理组, 25 μmol/L的增敏比(D₀值比)分别为2.771、2.463。醌茜素可引起细胞凋亡增加, 但X线联合醌茜素与单独醌茜素作用相比未增加A549细胞和H460细胞凋亡(X线照射+醌茜素:单独醌茜素, A549细胞P= 0.487和H460细胞P=0.254), 然而X线联合醌茜素与单独X线照射或醌茜素作用相比可明显引起其G₂+M期阻滞(X线照射+醌茜素:单独X线照射, A549细胞P=0.000, H460细胞P=0.0024;X线照射+醌茜素:单独X线照射, A549细胞P=0.000, H460细胞P=0.000)。结论 通过醌茜素抑制蛋白激酶CK2活性可增加NSCLC细胞的放射敏感性。     

凋亡抑制基因survivin在多种肺癌细胞株中的表达及其意义

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在多种肺癌细胞株中的表达及其意义.方法:分别采用Real-time PCR与Western blot的方法,检测人肺腺癌细胞株A549、肺鳞癌细胞株SK-MES-1、大细胞肺癌细胞株NCI-H460、小细胞肺癌细胞株NCI-H446中survivin mRNA与蛋白的表达水平.结果:Real-time PCR检测发现四种肺癌细胞株中survivin mRNA均呈强阳性表达,且Western blot检测结果亦与 RT-PCR基本一致.结论:Survivin基因与肺癌发生、发展紧密相关,值得进一步深入研究.     

miRNA-101通过下调COX-2的表达影响肺癌细胞的生物学功能

目的：探讨miRNA-101(miR-101)在肺癌组织和细胞中的表达及其对人肺癌细胞增殖、克隆形成和成瘤能力的影响。方法： 采用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR技术分别检测10例患者肺癌组织及相应癌旁组织、人肺癌细胞A549和NCI-H26及正常人胚肺成纤维细胞MRC-5中环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）及miR-101的表达。A549和NCI-H26细胞分别转染miR-NC和miR-101构建过表达miR-101的细胞系及其对照,Western blotting、CCK-8和克隆形成实验分别检测过表达miR-101对A549、NCI-H26细胞中COX-2的表达、细胞增殖和克隆形成能力的影响。用A549、A549/NC、A549/101细胞在BALB/c裸鼠皮下构建移植瘤模型,观察过表达miR-101对A549细胞小鼠移植瘤生长的影响。结果： 在肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中,COX-2的表达明显高于癌旁组织（t=20.03,P=0.001）和MRC-5细胞（t=14.59,P=0.012）,而miR-101的表达则相反（组织：t=18.33,P=0.002 ;细胞：t=28.95,P=0.000）。成功构建过表达miR-101的A549/101、NCI-H26/101细胞系,与A549、NCI-H26细胞相比,A549/101（t=26.03,P=0.000）、NCI-H26/101（t=23.29,P<0.01）细胞内COX-2表达量显著降低,A549/101和NCI-H26/101细胞的活力和克隆形成能力也显著降低（均P<0.05）。A549/101细胞小鼠皮下肿瘤的生长速度较A549细胞和A549/NC细胞显著减慢（F=14.81,P=0.003）。结论： 肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中miR-101低表达、COX-2高表达,过表达miR-101可以抑制A549、NCI-H26细胞的增殖,其机制可能与下调了COX-2表达有关。     

高迁移率族蛋白B1激活NF-κB/αvβ3而增加A549细胞迁移与侵袭能力

背景与目的:高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在多种肿瘤中高表达,在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。本研究旨在探讨HMGB1促进肺癌A549细胞侵袭的分子机制。方法:肺癌A549细胞经HMGB1,NF-κB抑制剂6-amino-4-quinazoline(QNZ)或Bortezomib(Bort)处理后,划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验检测肿瘤细胞的迁移及侵袭能力;NF-κB荧光素酶报告基因实验检测NF-κB活性;Real-time RT-PCR和Western blot检测A549细胞NF-κB和整合素αvβ3表达。结果:HMGB1能增强A549细胞迁移和侵袭能力,增加NF-κBp65蛋白的表达,同时增强A549细胞NF-κB活性,Real-time RT-PCR和Western blot检测结果发现HMGB1上调肿瘤细胞αvβ3表达。NF-κB抑制剂QNZ或Bort消除HMGB1促进A549细胞迁移及侵袭,增强NF-κB表达和活性以及αvβ3表达的效应。结论:HMGB1通过激活A549细胞NF-κB上调αvβ3表达促进A549细胞迁移与侵袭行为。     

慢病毒载体介导的RNA干扰下调膜联蛋白A1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究AnnexinA1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建干扰AnnexinA1的慢病毒载体,转染至SBC-5细胞株;体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调AnnexinA1表达对小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。结果:干扰AnnexinA1的细胞株ANXA1 RNAi-SBC-5构建成功。与转染空载体的对照细胞相比,抑制AnnexinA1的表达能够显著抑制SBC-5细胞的增殖、迁移、侵袭能力。结论:AnnexinA1表达可能与肺癌骨转移密切相关。     

TOB1高表达抑制肺癌A549细胞体外迁移和侵袭

目的:探讨TOB1 (transducer of ErbB 2,1)高表达对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响.方法:应用RT-PCR法检测人支气管上皮细胞HBE和10种肺癌细胞中TOB1、PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)、RHOC(ras homolog gene family,member C)和NME1 (non-metastatic cells 1)mRNA的表达水平;将重组表达载体质粒pcDNA3.0-TOB1和“空载体”质粒pcDNA3.0转染到A549细胞中,建立TOB1高表达的A549/TOB1细胞和对照组A549/PC3细胞,应用体外划痕和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,RT-PCR法检测细胞中PTEN、BRMS1、RHOC和NME1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9蛋白的表达.结果:10种肺癌细胞中TOB1 mRNA的表达水平明显低于HBE细胞(P＜0.05),不同细胞株中TOB1 mRNA与PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平间呈正相关(P＜0.05).A549/TOB1细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于A549细胞(P＜0.05).A549/TOB1细胞中PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平明显高于A549细胞(P＜0.05),而RHOC mRNA的表达水平明显低于A549细胞(P＜0.05); A549/TOB1细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平明显低于A549细胞(P＜0.05).结论:外源性TOB1高表达可以明显抑制肺癌A549细胞的体外转移和侵袭,其机制可能与TOB1调控PTEN、BRMS1、RHOC和NME1的表达,进一步下调α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平有关.