YY1对卵巢癌细胞增殖和侵袭作用影响及其分子机制

目的探讨Yin Yang 1(YY1)对卵巢癌细胞增殖和侵袭的作用影响及其分子机制。方法选取本院2017年10月至2018年5月收治的85例卵巢癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)分别检测卵巢癌组织(OCT)及其癌旁组织(PT)和正常组织(NT)中YY1的表达;Western Blot检测5种常见的卵巢癌细胞系中YY1的表达;采用siRNA干扰技术下调YY1在卵巢癌细胞系HO8910PM中的表达,qRT-PCR检测干扰前后细胞系YY1的表达;CCK-8和Trans-well检测RNA干扰前后HO8910PM细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化;Western Blot分析RNA干扰前后YY1与上皮间充质转化(EMT)标志蛋白之间的变化。结果qRT-PCR和Western Blot检测结果显示,卵巢癌组织中YY1的表达显著高于癌旁组织和正常组织(P0.05);Western Blot结果显示YY1在HO8910PM细胞系中表达最高;利用siRNA干扰卵巢癌细胞系YY1的表达后,其在HO8910PM表达显著降低(P0.05);YY1下调后,卵巢癌细胞HO8910PM增殖和侵袭能力及上皮间质转化相关蛋白N-cadherin和Vimentin表达均显著低于未下调YY1的阴性对照组(P0.05),而E-cadherin的表达显著升高(P0.05)。结论YY1通过调节EMT机制影响卵巢癌增殖和侵袭能力。     

MLH1、PRMT5在卵巢癌组织中的表达及意义

目的探讨错配修复蛋白MutL同系物1(MLH1)、精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在卵巢癌组织中的表达及意义。方法选取2017年1月至2019年8月中国人民解放军空军军医大学第一附属医院保存的卵巢癌组织标本为卵巢癌组(n=132),同期因全子宫双侧附件切除术获得的正常卵巢组织为对照组(n=80),常规石蜡包埋后,采用免疫组化染色法检测MLH1、PRMT5表达情况。统计分析MLH1、PRMT5之间及两者分别与患者临床病理特征、生存时间的联系。结果卵巢癌组MLH1阳性表达率显著低于对照组(49.24%vs. 90.00%,P0.05),而PRMT5阳性表达率显著高于对照组(62.12%vs. 16.25%,P0.05);国际妇产科协会(FIGO)分期为Ⅲ～Ⅳ期组织MLH1阳性表达率显著低于Ⅰ～Ⅱ期组织(28.00%vs. 62.20%,P0.05);FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴结转移者组织PRMT5阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移组织(分别为82.00%vs. 50.00%、74.16%vs. 37.21%和83.33%vs. 36.67%,均P0.05);卵巢癌组织MLH1与PRMT5表达呈负相关(r_s=-0.605,P0.05);MLH1阳性且PRMT5阴性表达患者中位总体生存时间为19.80(12,25)个月,显著高于MLH1阴性且PRMT5阴性者[12.40(7,14)个月]、MLH1阳性且PRMT5阳性者[10.40(6,14)个月]和MLH1阴性且PRMT5阳性患者[8.40(5,10)个月](P0.05)。结论卵巢癌组织MLH1表达下调而PRMT5表达上调,与临床病理特征有一定关系,值得进一步研究。     

卵巢癌铂耐药患者肿瘤组织中LINC01151的表达及诊断效能研究

目的 寻找和卵巢癌发生、进展以及铂类化疗耐药相关的lncRNA,从而为卵巢癌早期筛查和治疗方案的选择提供新型检测标志物。方法 从顺铂耐药卵巢癌细胞株芯片筛选差异表达的lncRNA,分析TCGA和GTEx数据库中的卵巢癌测序数据,比较LINC01151在卵巢癌组织、癌旁组织、转移肿瘤组织中表达情况,及与患者整体生存周期的相关性。25对卵巢癌肿瘤组织和癌旁组织临床样本中检测LINC01151的表达水平,比较正常卵巢上皮细胞和不同卵巢癌细胞株中LINC01151的表达,以及顺铂敏感卵巢癌细胞和顺铂诱导耐药的卵巢癌细胞中LINC01151的表达,分析LINC01151与肿瘤发生、耐药的相关联。结果 从顺铂耐药卵巢癌细胞株芯片中筛选差异表达的lncRNA,其中LINC01151表达差异显著。芯片中相关数据显示,LINC01151特异性在顺铂耐药的卵巢癌细胞株中高表达。通过qPCR验证发现,LINC01151在卵巢癌组织和细胞中特异性高表达,且与顺铂敏感细胞相比,顺铂诱导耐药的细胞株中LINC01151高表达。结论 LINC01151可能是卵巢癌铂类耐药的标志物,可能可以作为卵巢癌的诊断或预后的生物标志物;临床应用中利用LINC01151对患者进行筛选、分类,有利于精准化、个体化治疗,可能对改善肿瘤患者预后具有重要意义。     

卵巢癌铂耐药患者肿瘤组织中LINC01151的表达及诊断效能研究

目的 寻找和卵巢癌发生、进展以及铂类化疗耐药相关的lncRNA,从而为卵巢癌早期筛查和治疗方案的选择提供新型检测标志物。方法 从顺铂耐药卵巢癌细胞株芯片筛选差异表达的lncRNA,分析TCGA和GTEx数据库中的卵巢癌测序数据,比较LINC01151在卵巢癌组织、癌旁组织、转移肿瘤组织中表达情况,及与患者整体生存周期的相关性。25对卵巢癌肿瘤组织和癌旁组织临床样本中检测LINC01151的表达水平,比较正常卵巢上皮细胞和不同卵巢癌细胞株中LINC01151的表达,以及顺铂敏感卵巢癌细胞和顺铂诱导耐药的卵巢癌细胞中LINC01151的表达,分析LINC01151与肿瘤发生、耐药的相关联。结果 从顺铂耐药卵巢癌细胞株芯片中筛选差异表达的lncRNA,其中LINC01151表达差异显著。芯片中相关数据显示,LINC01151特异性在顺铂耐药的卵巢癌细胞株中高表达。通过qPCR验证发现,LINC01151在卵巢癌组织和细胞中特异性高表达,且与顺铂敏感细胞相比,顺铂诱导耐药的细胞株中LINC01151高表达。结论 LINC01151可能是卵巢癌铂类耐药的标志物,可能可以作为卵巢癌的诊断或预后的生物标志物;临床应用中利用LINC01151对患者进行筛选、分类,有利于精准化、个体化治疗,可能对改善肿瘤患者预后具有重要意义。     

SKOV3、MRTFA在卵巢癌中的表达及其对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响

目的探讨SKOV3、MRTFA在卵巢癌中的表达变化及其对肿瘤细胞增殖、侵袭能力的影响。方法将2017年6月至2019年5月宁波市鄞州人民医院收治的91例卵巢癌患者作为观察对象,对卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量和临床特征关系进行分析;对卵巢癌SKOV3细胞进行培养,分为MRTFA干扰组、阴性对照组和对照组(各组具体处理因素要列出),经Transwell法测定SKOV3细胞侵袭能力,通过Western-blot法测定SKOV3细胞内MRTFA蛋白表达。结果卵巢癌组织、癌旁组织内MRTFA mRNA相对表达量分别是(1.92±0.09)、(1.08±0.14),卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=48.146,P=0.000);肿瘤直径<10 cm、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者卵巢癌组织内MRTFA mRNA相对表达量分别低于肿瘤直径≥10 cm、低分化、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期及淋巴结转移卵巢癌患者(P<0.05)。MRTFA干扰组卵巢癌SKOV3细胞培养24、48、72及96 h后吸光度值均低于对照组及阴性对照组(P<0.05);MRTFA干扰组的卵巢癌SKOV3细胞培养24 h后侵袭细胞数(86.72±4.69)低于阴性对照组(121.89±3.65)和对照组(117.10±4.41),差异有统计学意义(P<0.05)。结论MRTFA在卵巢癌中表达异常增高,对MRTFA蛋白表达进行特异性抑制,能阻断SKOV3细胞增殖及侵袭,其作用机制可能和SRF蛋白诱导上皮间充质的转化过程存在相关性。     

NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达的临床意义及体外生物学效应

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)NRSN2-AS1在卵巢癌组织中表达的临床意义及体外生物学效应。方法临床收集84例卵巢癌组织及相应正常癌旁组织, 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测NRSN2-AS1表达, 并分析其与患者临床资料的关系;体外培养人卵巢上皮细胞HOSEpiC、人卵巢癌细胞A2780及OVCAR3, 于A2780及OVCAR3细胞中分别转染过表达及干扰NRSN2-AS1载体及相应的对照载体, 作为本研究的空白组、过表达组及对照组、干扰组;CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化;Transwell侵袭及迁移实验检测细胞转移能力的变化, RT-qPCR技术及蛋白质印记(Western blot)技术检测细胞NRSN2-AS1潜在下游基因SRY相关HMG盒转录因子12(SOX12)mRNA及蛋白的表达。结果 NRSN2-AS1在卵巢癌组织及细胞中显著高表达(P<0.05), 且其高表达与患者预后不良、淋巴结转移及高临床分期显著相关(P<0.05);空白组及过表达组NRSN2-AS1表达分别为:1.00±0.08...     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1靶向调控miR-876-5p对卵巢癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨长链非编码RNA MCM3AP-AS1(MCM3AP antisense RNA 1,MCM3AP-AS1)靶向调控微小RNA-876-5p(miR-876-5p)对卵巢癌SKOV3细胞增殖和转移的影响。方法选取2017年4月至2018年5月温州市中心医院妇产科收治的40例卵巢癌患者癌组织和相应癌旁组织标本,及卵巢癌细胞系(CaOV3、SKOV3、OVCAR3、OV90)和正常卵巢上皮细胞系(HOSE)。采用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测卵巢癌组织和细胞中lncRNA MCM3AP-AS1的表达水平;建立lncRNA MCM3AP-AS1低表达模型,采用MTT实验检测卵巢癌细胞增殖,采用transwell检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭水平;采用生物信息分析、荧光素酶实验、qRT-PCR验证lncRNA MCM3AP-AS1和miR-876-5p的靶向关系。结果lncRNA MCM3AP-AS1在卵巢癌组织中的水平为(8.45±0.86),高于癌旁组织(4.45±0.45);在卵巢癌细胞中的水平为CaOV3(1.53±0.12),SKOV3(1.82±0.23),OVCAR3(1.34±0.12),高于正常卵巢上皮细胞HOSE(1.00±0.10);下调lncRNA MCM3AP-AS1能降低卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;lncRNA MCM3AP-AS1能与miR-876-5p相互作用并下调其表达。结论lncRNA MCM3AP-AS1可通过靶向抑制miR-876-5p促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

CD133阳性干细胞在人卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨卵巢癌中CD133的表达情况及其临床病理学意义.方法:采用免疫组化方法检测46例上皮性卵巢癌、18例良性上皮性卵巢肿瘤组织及10例正常卵巢组织中CD133的表达情况.结果:正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织及卵巢癌中CD133的表达呈升高趋势,组间差异有统计学意义(P＜0.05). CD133的表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关(P＜0.05),而与年龄及组织类型无关.结论:CD133的高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关.     

卵巢癌患者凋亡抑制蛋白Survivin表达与血清糖类抗原153检测的临床意义

目的:探讨卵巢癌患者凋亡抑制蛋白Survivin表达与血清糖类抗原153(CA153)检测的临床意义及二者的关系.方法:分别应用免疫组织化学法和化学发光免疫法检测65例卵巢癌中Survivin表达情况与血清CA153的水平,进行相关性分析.结果:卵巢癌患者治疗前血清CA153浓度为(35.6±11.3)U/ml,治疗后为(11.8±3.6)U/ml,差异有统计学意义(t=2.915,P＜0.05);卵巢癌Survivin阳性率在不同肿瘤大小、组织学分级和临床分期中差异无统计学意义(P＞0.05);Survivin阳性表达患者中腋窝淋巴结转移率为68.0％ (24/50),Survivin阴性表达患者腋窝淋巴结转移率为6.7％(1/15),差异有统计学意义(X2= 17.465,P＜0.001);卵巢癌患者CA153浓度越高,Survivin表达阳性强度越大,二者呈正相关(r=0.425,P＜0.0S); Survivin表达阳性强度越大,腋窝淋巴结转移率越高.结论:卵巢癌中Survivin、CA153的联合检测可以判断预后,二者升高明显提示患者可能有腋窝淋巴结转移,预示患者预后不良.     

抑癌基因PTEN在卵巢癌中表达的研究

目的：研究卵巢癌组织中PTEN蛋白表达与临床病理因素的关系。方法运用免疫组织化学的方法检测67例卵巢癌组织,25例良性卵巢肿瘤和10例正常卵巢组织中PTEN蛋白的表达。结果在67例卵巢癌组织中有35例为阳性表达,卵巢良性肿瘤有22例阳性表达,正常卵巢组织中均为阳性表达,其间存在显著相关性（P＜0.05）,PTEN蛋白表达与卵巢癌的的病理分级、临床分期和淋巴结转移存在显著相关性（P＜0.05）,而与卵巢癌的组织类型无显著相关性（P＞0.05）。结论 PTEN蛋白的阳性表达及表达缺失对于评价卵巢癌的恶性程度、转移及预后有显著的临床价值。     

铁死亡在重症急性胰腺炎引起的急性肾损伤中的作用及其机制

目的:探讨铁死亡在重症急性胰腺炎(SAP)诱发急性肾损伤(AKI)的作用及其机制。方法:胰腺炎建模后24 h,将36只SD大鼠(购自青岛大学医学部实验室动物中心)采用完全随机分组法分为3组( n＝12)：假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组(SAP＋...     

番茄红素对缺氧/复氧诱导小鼠心肌细胞内质网应激和凋亡的影响

目的 评价番茄红素对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)引起的小鼠心肌细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)和凋亡的影响. 方法 建立C57BU6乳鼠心肌细胞H/R模型,采用随机数字表法将C57BL/6小鼠心肌细胞分为正常对照组(C组)、番茄红素组(Lyc组,含5μmol/L番茄红素的培养基预处理4h)、H/R组(H/R组,缺氧4h复氧6h)和番茄红素+H/R组(Lyc+H/R组,给予5μmol/L番茄红素预处理4h后行H/R处理).采用水溶性四氮唑-8(cell counting Kit-8,CCK-8)法检测心肌细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞搏动频率,TUNEL法检测细胞凋亡率,二氯荧光素法(dichlomnuorescein diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,实时荧光定量PCR (real-time PCR)检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及半胱天冬氨酸蛋白酶-12 (cysteme aspartate specific protease-12,caspase-12)mRNA的表达,Western blot法分析剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-12(cleaved cysteme aspartate specific protease-12,Cleaved-caspase-12)和剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteme aspartate specific protease-3,Cleaved-caspase-3)的表达. 结果 与C组比较,H/R组心肌细胞存活率显著降低[(100±5)％,(69±6)％](P＜0.01),搏动频率显著降低[(94±6),(28±5)次/min](P＜0.01),心肌细胞凋亡率[(4.9±1.5)％,(25.6±2.6)％]和ROS含量[(100±11)％,(226±10)％]显著升高(P＜0.01);CHOP mRNA[(1.00±0.10)、(2.60±0.19)]和GRP78 mRNA[(1.00±).18)、(4.12±0.23)]表达水平显著升高(P＜0.05);caspase-12 mRNA[(1.00±0.09)、(1.79±0.14)]、Cleaved-caspase-12[(1.00±0.08)、(1.85±0.10)]和Cleaved-caspase-3[(1.00±0.07)、(1.89±0.14)]表达水平显著升高(P＜0.05).与H/R组比较,Lyc+H/R组心肌细胞存活率明显升高[(69±6)％、(84±7)％](P＜0.05),搏动频率增加[(28±5)、(73±6)次/min] (P＜0.05),凋亡率显著降低[(25.6±2.6)％,(18.2±2.2)％](P＜0.05),细胞内ROS含量[(226±10)％、(140±16)％]明显降低,CHOP mRNA [(2.60±0.19)、(1.71±0.14)]和GRP78 mRNA[(4.12±0.23),(1.98±0.19)]表达水平显著降低(P＜O.05);caspase-12 mRNA[(1.79±0.14)、(1.38±0.11)]、Cleaved-caspase-12[(1.85±0.10)、(1.26±0.12)]和Cleaved-caspase-3[(1.89±0.14)、(1.36±0.12)]表达水平显著降低(P＜0.05). 结论 番茄红素可抑制H/R过程中的ERS及其凋亡信号途径而减轻心肌细胞损伤.     

KIF1A过表达对氧糖剥夺-再灌注损伤PC12细胞的作用机制研究

目的:研究Kinesin-3家族成员蛋白(Kinesin-3 family member1A,KIF1A)对氧糖剥夺-再灌注诱导的PC12细胞活力、自噬和凋亡的影响,为进一步研究KIF1A在脊髓缺血再灌注损伤治疗方面提供理论依据。方法:PC12细胞(美国ATCC公司)分为四组:A组,对照组,无处理;B组,氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组,PC12细胞用无糖DMEM培养基,于含混合气体(95%N2和5%CO2)的37℃恒温箱内密闭缺氧培养4h;C组,pcDNA3.1空质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1空质粒48h,进行OGD/R处理;D组,pcDNA3.1-KIF1A质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1-KIF1A质粒48h,进行OGD/R处理。B、C、D组经OGD/R处理后,更换常规培养基,正常孵育24h,收集细胞总RNA及蛋白质,进行实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)和Western blot检测KIF1A mRNA和蛋白的表达情况;CCK8检测细胞存活率变化;凋亡ELISA及Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡及Caspase-3活性;Western blot检测各组自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的蛋白表达变化。结果:与A组(1.00±0.00)相比,B组细胞KIF1A mRNA(0.41±0.05)和蛋白表达水平(0.52±0.07,P<0.05)显著下调;细胞活力[(51.60±7.35)%,P<0.05]显著降低。与B组(1.00±0.00)相比,C组空质粒对KIF1A mRNA(0.91±0.13)及蛋白质(1.08±0.08)表达,细胞活力[(51.60±7.35)%vs(47.30±4.16)%],细胞凋亡(1.95±0.18 vs 2.08±0.16,P>0.05)等无显著影响。而D组KIF1A过表达后能显著上调KIF1A mRNA(2.63±0.16)以及蛋白表达(2.51±0.18,P<0.05),显著缓解OGD/R引起的细胞存活率下降[(51.60±7.35)%vs(86.40±9.03)%]及凋亡[1.95±0.18 vs 1.36±0.12,P<0.05];与B组相比,D组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(1.68±0.14 vs 1.19±0.09,P<0.05)及pmTOR的表达(1.00±0.00 vs 1.26±0.02,P<0.05)显著受抑制,P62表达显著升高(0.53±0.05 vs 0.89±0.09,P<0.05)。结论:KIF1A过表达可促进缺血再灌注损伤诱导的PC12细胞存活、抑制细胞自噬与凋亡,其机制可能与抑制mTOR通路相关。     

内皮型一氧化氮合酶在大鼠糖尿病膀胱病变中的作用

目的 探讨大鼠糖尿病膀胱病变组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及意义.方法 雄性SD大鼠36只.随机分为正常组、多尿组和糖尿病组,每组12只.采用尿动力学方法对大鼠膀胱容量、单次排尿量、膀胱内最大压力、残尿壁和排尿率等指标进行评价,应用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测大鼠膀胱组织中eNOS mRNA和蛋白质的表达水平,统计学分析其与膀胱功能的相关性.结果 6周时正常组大鼠最大膀胱容量、单次排尿量、残余尿量分别为(0.75±0.04)、(0.70±0.02)和(0.06±0.00)ml,多尿组分别为(1.62±0.15)、(1.52±0.30)和(0.11±0.01)ml,糖尿病组分别为(2.29±0.16)、(2.06±0.25)和(0.23±0.01)ml,与正常组和多尿组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);12周时正常组上述指标分别为(0.86±0.06)、(0.80±0.04)和(0.07±0.00)ml,多尿组分别为(1.93±0.10)、(1.77±0.11)和(0.13±0.02)ml,糖尿病组分别为(2.65±0.26)、(2.09±0.21)和(0.56±0.06)ml,各组间差异具有统计学意义(P＜0.01).糖尿病组与6周时相比,各指标增加,其中残余尿量差异具有统计学意义(P＜0.01).6周时3组排尿率分别为(93.3±2.1)%、(93.2±2.7)%和(90.0±2.5)%,组间差异无统计学意义(P＞0.05);12周时分别为(93.1±2.2)%、(93.8±3.2)%和(78.1±2.6)%,糖尿病组小于其他2组(P＜0.05).各组膀胱内压力差异无统计学意义.糖尿病组膀胱压力曲线出现压力小波动,曲线不规则.6周时各组膀胱组织中eNOSmRNA表达相对灰度值分别为0.81±0.12、0.90±0.12和1.98±0.16,糖尿病组高于其他2组,差异具有统计学意义(P＜0.01);12周时为0.87±0.17、1.05±0.11和2.89±0.23,糖尿病组与6周时相比增加(P＜0.01).6周时各组eNOS蛋白表达相对灰度值分别为0.98±0.12、0.93±0.14和2.28±0.16,糖尿病组高于其他2组(P＜0.01);12周时为1.03±0.13、1.14±0.11和3.12±0.20,糖尿病组与6周时相比增加(P＜0.01).糖尿病组大鼠膀胱eNOS蛋白表达强度与排尿率旱负相关(r=-0.669,P＜0.01).结论 膀胱组织中eNOS mRNA和蛋白表达上调可能参与了糖尿病膀胱病变的发生发展.     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.     

Roux-en-Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肝脏胆汁酸信号及糖异生的影响

目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏胆汁酸信号及糖异生的影响。方法将16只健康雄性Sprague-Dawley大鼠通过高脂饲料喂养并腹腔注射链脲佐菌素诱导T2DM,随机数字表法分为假手术组(n=8)和手术组(n=8)。手术组行RYGB术,假手术组在与手术组相同位置行胃肠横断并原位吻合。术前及术后第1、2、4、6、8周测各组摄食量和空腹血糖;术前、术后2、8周行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素敏感试验(ITT);术后8周留取空腹血清检测总胆汁酸水平,留取肝脏组织用反转录聚合酶链反应检测法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)mRNA表达水平,应用SPSS 20.0软件进行统计分析,组间比较采用t检验。结果手术组术后第4、6、8周摄食量[(18±2)、(19±3)、(20±4)g/d]显著低于假手术组[(24±3)、(28±4)、(26±3)g/d],手术组术后第2、4、6、8周空腹血糖[(6.9±0.9)、(6.0±1.1)、(6.4±0.8)、(6.8±0.7)mmol/L]显著低于假手术组[(12.9±1.4)、(10.8±0.8)、(9.4±1.1)、(9.0±1.0)mmol/L],差异有统计学意义(t=4.707、5.091、3.394、9.209、9.982、6.239、5.098,P<0.05);术后2周,手术组OGTT、ITT曲线下面积[(898±118)、(428±85)mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1508±108)、(788±98)mmol/(L·min)],术后8周,手术组OGTT、ITT曲线下面积[(975±102)、(455±76)mmol/(L·min)]显著低于假手术组[(1575±96)、(775±86)mmol/(L·min)],差异有统计学意义(t=10.790、7.849、12.120、7.886,P<0.05);术后8周,手术组大鼠血清总胆汁酸[(105.17±14.81)μmol/L]显著高于假手术组[(68.87±10.81)μmol/L],差异有统计学意义(t=5.600,P<0.05);手术组与假手术组比较,肝脏FXR和SHP mRNA的表达显著上调(1.67±0.31比1.17±0.11、2.37±0.21比1.33±0.18),PEPCK和G6Pase mRNA的表达显著下调(0.77±0.12比1.15±0.14、0.87±0.08比1.05±0.10),差异有统计学意义(t=4.299、10.640、5.829、3.976,P<0.05)。结论RYGB术改善T2DM大鼠糖代谢的作用机制可能与术后肝脏胆汁酸信号上调进而抑制糖异生有关。     

臭椿酮抑制ENST00000441270/miR-149轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡的实验研究

目的探讨臭椿酮对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法根据检测结果实施分组,采用低(0.2μmol/L)、中(0.4μmol/L)、高剂量(0.6μmol/L)的臭椿酮干预结直肠癌SW1116细胞24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,集落形成实验检测克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ENST00000441270和微小RNA-149(miR-149)的表达水平。转染ENST00000441270小干扰RNA(si-ENST00000441270)至SW1116细胞,采用上述方法检测干扰ENST00000441270表达对SW1116细胞活力、克隆形成以及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证ENST00000441270与miR-149之间靶向关系。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果臭椿酮低剂量组SW1116细胞的活力[(0.84±0.05)比(0.84±0.05),t=0.529,P>0.05]、克隆形成数[(110.00±3.56)个比(111.33±3.86)个,t=0.499,P>0.05]、凋亡率[(7.56±0.80)%比(7.35±0.63)%,t=0.307,P>0.05]、ENST00000441270[(0.98±0.06)比(0.99±0.06),t=0.238,P>0.05]和miR-149[(1.01±0.07)比(0.99±0.07),t=0.303,P>0.05]表达与对照组比较,差异均无统计学意义。臭椿酮中、高剂量组SW1116细胞的活力(0.63±0.04、0.40±0.03比0.84±0.05,t=7.667、12.667,P<0.05]、克隆形成数[(85.67±2.87)个、(58.33±2.62)个比(111.33±3.86)个,t=9.487、24.666,P<0.05]、ENST00000441270表达[(0.69±0.05)、(0.41±0.03)比(0.99±0.06),t=7.138、13.799,P<0.05]低于对照组,差异均有统计学意义,细胞凋亡率[(12.61±0.91)%、(21.66±0.97)%比(7.35±0.63)%,t=7.715、12.036,P<0.05]、miR-149表达[(1.48±0.08)、(1.92±0.10)比(0.99±0.07),t=7.415、14.074,P<0.05]高于对照组,差异均有统计学意义。si-ENST00000441270组SW1116细胞活力[(0.35±0.02)比(0.88±0.05),t=17.047,P<0.05]、克隆形成数[(49.67±2.87)个比(112.67±3.40)个,t=24.525,P<0.05]低于阴性对照(si-NC)组,细胞凋亡率[(22.62±0.82)%比(7.58±0.65)%,t=24.896,P<0.05]高于si-NC组,差异均有统计学意义。miR-149是ENST00000441270的靶基因。结论0.4、0.6μmol/L的臭椿酮能够抑制结直肠癌细胞SW1116增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制ENST00000441270/miR-149分子轴有关。     

miR-483-5p通过下调CDK15促进肾上腺皮质癌增殖和侵袭

目的探讨miR-483-5p在肾上腺皮质癌中的作用及其可能的作用机制。方法荧光定量PCR法检测miR-483-5p和CDK15在肾上腺皮质癌组织和细胞系中的表达,CCK-8增殖试验测定miR-483-5p对细胞增殖的影响,Transwell法检测ACC细胞侵袭性的变化。荧光素酶试验和挽救实验验证miR-483-5p与CDK15相关的分子机制。结果miR-483-5p在肾上腺皮质癌组织中高表达(2.36±1.02 vs 1.09±0.43),CDK15在肾上腺皮质癌组织中低表达(0.57±0.26 vs 1.06±0.32)。荧光素酶检测证实CDK15是miR-483-5p的直接靶点。过表达miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进ACC细胞的增殖(24 h:0.26±0.03 vs 0.23±0.04,48 h:0.56±0.05 vs 0.41±0.03,72 h:0.73±0.04 vs 0.59±0.03)和侵袭能力(95.78±4.66 vs 23.89±2.52)。结论miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进肾上腺皮质癌的发生发展,其可作为肾上腺皮质癌的潜在生物标志物及治疗肾上腺皮质癌的新的作用靶点。     

siRNA腺病毒载体对兔骨髓基质细胞成脂分化的干扰效应

目的 观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因siRNA腺病毒载体阻断乙醇诱导兔骨髓基质细胞(MSCs)的成脂分化.方法 培养兔MSCs随机分为7组:N:对照组,M:模型组,CO:感染空载体组,C1:感染无关siRNA组,S1、S2、S3:干扰1、2、3组.将重组腺病毒载体转染细胞,检测MSCs内PPARγ mRNA、osteocalcin mRNA、PPARγ蛋白表达、甘油三酯、ALP活性和培养液骨钙素含量,并计数脂肪细胞.结果 N、M、CO、C1组PPARγ mRNA和osteocalcinmR-NA表达值分别为(0.39±0.02)、(0.75±0.03)、(0.74±0.03)、(0.73±0.02)和(1.09±0.19)、(0.50±0.10)、(0.46±0.12)、(0.49±0.13),M、CO、C1组脂肪细胞多,甘油三酯高,ALP活性与骨钙素量均低.S1、S2、S3组PPARγ mRNA和osteocalcin mRNA表达值分别为(0.28±0.03)、(0.30±0.03)、(0.31±0.01)和(0.92±0.09)、(0.87±0.32)、(0.93±0.25),脂肪细胞数、甘油三酯量、ALP活性值与骨钙素含量均接近正常,与M、CO、C1组间差异有统计学意义(P<0.05),与N组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 该腺病毒载体能阻断乙醇诱导的MSCs成脂分化.     

长链非编码RNA-XIST对脊髓损伤大鼠神经元凋亡影响及其机制的实验研究

目的:探讨长链非编码核糖核酸-X染色体失活基因(lncRNA-XIST)对脊髓损伤大鼠神经元凋亡过程的影响及其作用机制。方法:将成年SD大鼠(北京中国科学院实验动物中心提供)随机分为假手术组、脊髓损伤组、观察组,假手术组接受椎板切除术,脊髓损伤组和观察组椎板切除后使用脊髓打击器损伤脊髓。假手术组和脊髓损伤组脊髓内注射空...