成年小鼠心肌细胞的分离及电生理特性

目的 :摸索成年小鼠心肌细胞分离方法并观察其电生理特性。方法 :采用酶消化法分离单个心肌细胞 ,应用膜片钳全细胞记录技术记录钙电流和钾电流。结果 :本法分离所得心肌细胞横纹清晰 ,一次性复钙 ,可获得 5 0 %～6 0 %的耐钙细胞 ;并具有正常电生理活性 ,易于形成高阻封接 ,可用于钙电流和钾电流记录。结论 :本实验所采用的分离方法经济、简便、成功率高 ,所获细胞具有正常的电生理活性     

急性缺血对单个家兔窦房结起搏细胞钙通道的影响

目的:观察急性缺血对窦房结(SAN)起搏细胞(PCs)钙通道电流的影响,探讨急性缺血诱导自发性电活动改变的离子机制.方法:灌流缺血样台氏液(低pH、无葡萄糖以及100% N2饱和)模拟缺血;酶消化法分离家兔SAN PCs,采用穿孔膜片钳技术,记录电压依赖性的钙电流.结果:缺血可显著增大L-型钙电流(ICa,L)密度,并增大最大膜电导,使稳态-失活曲线右移,而对激活曲线无明显影响;然而缺血可明显抑制T-型钙电流(ICa,T).结论:急性缺血通过增大最大膜电导以及抑制通道的失活从而增强SAN PCs的ICa,L;急性缺血后ICa,L的密度增大以及ICa,T的密度减小可能是急性缺血诱导的自发性电活动改变的主要离子机制.     

丹参酮对肥厚心肌L-型钙电流的影响

目的心肌肥厚是导致心力衰竭、心律失常和猝死的高危因素.丹参酮已被证实能够有效地拮抗心肌肥厚的发生,但是对于其能否改变肥厚心肌上存在的电生理异常尚不清楚.方法本实验拟通过膜片钳和胞内钙测定技术,观察比较丹参酮和卡托普利对"一肾一夹"手术导致的肥厚心肌细胞膜上动作电位时间、L-型钙通道电流和胞内钙离子浓度的影响,来阐明丹参酮预防心脏肥厚发生心律失常可能的电生理基础.结果丹参酮可以显著的缩短肥厚心肌细胞中存在的动作电位时间延长(P＜0.001)、降低膜电容和ICa,L峰值幅度(P＜0.001),但不影响ICa,L密度,并能够显著减少胞内钙离子浓度.结论丹参酮能够在抗心肌肥厚的同时通过减少钙内流、缩短动作电位时间,起到预防心律失常的作用.     

丹参酮对肥厚心肌L-型钙电流的影响

目的心肌肥厚是导致心力衰竭、心律失常和猝死的高危因素。丹参酮已被证实能够有效地拮抗心肌肥厚的发生,但是对于其能否改变肥厚心肌上存在的电生理异常尚不清楚。方法本实验拟通过膜片钳和胞内钙测定技术,观察比较丹参酮和卡托普利对“一肾一夹”手术导致的肥厚心肌细胞膜上动作电位时间、L型钙通道电流和胞内钙离子浓度的影响,来阐明丹参酮预防心脏肥厚发生心律失常可能的电生理基础。结果丹参酮可以显著的缩短肥厚心肌细胞中存在的动作电位时间延长(P<0.001)、降低膜电容和ICa,L峰值幅度(P<0.001),但不影响ICa,L密度,并能够显著减少胞内钙离子浓度。结论丹参酮能够在抗心肌肥厚的同时通过减少钙内流、缩短动作电位时间,起到预防心律失常的作用。     

去甲肾上腺素对缺氧心肌细胞钙通道的影响

目的 :研究去甲肾上腺素 ( NE)对缺氧心肌细胞钙通道的影响。方法 :运用全细胞膜片钳记录技术检测 NE对缺氧豚鼠心肌细胞钙通道电流 ( ICa)的影响。结果 :NE( 1× 10 - 8m ol/ L)可明显增加缺氧及缺氧 /再灌注心肌细胞 ICa( P <0 .0 1,<0 .0 5 ) ,使缺氧心肌细胞 ICa电流 -电压曲线下移 ;在缺氧状态及缺氧 /再灌注状态下 ,NE对心肌细胞 ICa的作用差异无显著性意义 ( P >0 .0 5 )。结论 :NE增加心肌细胞 ICa为其致缺血及缺血 /再灌注性心律失常机制之一     

FK506对心肌梗死大鼠心功能及心肌细胞 L型钙通道的影响

目的 研究FK506对心肌梗死大鼠的心功能以及心肌细胞L型钙通道的影响。方法 结扎法制备大鼠急性心肌梗死模型;TTC染色观察心肌梗死面积;生物记录仪观察血流动力学改变;心脏彩超观察对心室射血分数的影响;试剂盒检测对血清BNP的影响;膜片钳检测对心室肌细胞依赖性钙电流的影响。结果 成功制备大鼠心肌梗死模型。TTC染色可见心肌梗死后坏死心肌面积,给予FK506组梗死面积有明显的降低;FK506对血流动力学异常指标、对心肌缺血大鼠心室射血分数有显著的改善作用,可显著降低大鼠模型血清中BNP的含量,但FK506对缺血缺氧后的心室肌细胞依赖性钙电流无影响。结论 FK506可明显改善心功能,具有潜在的治疗心肌梗死作用。     

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞膜L-型钙通道的影响

研究氧化苦参碱 (Oxy)对豚鼠心室肌细胞膜L 型钙通道的影响 ,探讨Oxy在离子通道水平的药理作用机制。用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞 ,应用膜片钳全细胞记录技术 ,观察不同浓度的Oxy对L 型钙通道的影响。结果 :用 0 .0 1 ,0 .1 ,1 ,1 0 μmol/L可浓度依赖性地增加L 型钙电流 (ICa L)。在 0 .1 μmol/L时 ,给药后电流密度增加约 31 %(P <0 .0 1 ) ,可使心肌细胞钙电流 电压曲线下移 ,但激活电位、峰电位及反转电位无改变 ;Oxy使激活曲线向负电位方向变化 ,半数激活电压增加 ;对失活曲线无明显影响 ,未改变ICa L失活特性。结论 :Oxy可浓度依赖性和电压依赖性地增加心肌细胞膜L 型钙通道电流     

LPS引起心肌细胞肌浆网钙漏流的机制及在内毒素心功能损伤中的作用

目的探究LPS引起心肌细胞肌浆网钙漏流的机制及在内毒素心功能损伤中的作用。方法应用膜片钳和激光共聚焦显微成像技术对LPS诱导的败血症休克大鼠心室肌细胞电生理活动以及钙信号的变化及其机制进行研究。结果(1)LPS引起心肌细胞收缩抑制;(2)LPS引起心肌细胞收缩偶联效率降低;(3)LPS引起钙火花发放增加。结论在LPS诱导的败血症休克大鼠模型上,心肌细胞RyR活动增加,钙火花发放增加,肌浆网钙漏流增强,肌浆网钙库容量部分耗竭,胞浆钙蓄积,心肌收缩抑制,导致心功能不全。     

胺碘酮急性和慢性给药对正常和肥厚心肌电生理作用的差别

目的研究胺碘酮对肥厚心肌与正常心肌急性和慢性电生理作用的差别。方法采用缩窄腹主动脉的SD大鼠为实验模型,4周后形成左室肥厚,应用酶解技术获得单个心室肌细胞;应用膜片钳技术检测内向电流INa、ICa-L和外向电流Ik、Ito、Ik1,应用多非利特阻滞Ikr,所测Ik代表Iks;急性实验采用不同浓度胺碘酮灌流心肌细胞,慢性试验采用胺碘酮100mg·kg-1·d-1灌胃4周。结果肥厚心肌细胞电重构特征为Ito、Ik、Iks、Ik1外向电流密度降低;胺碘酮对肥厚心肌急性电生理作用为INa、Iks阻滞强度大于正常心肌,但ICa-L阻滞弱于正常心肌;胺碘酮的慢性作用,正常心肌与肥厚心肌相似,表现Ito、Ik、Iks阻滞,对内向电流影响较小。结论胺碘酮对肥厚心肌细胞的急性和慢性电生理作用,均提示其有利于肥厚心肌的抗心律失常治疗。     

奎尼丁诱发心律失常的机制研究

目的观察奎尼丁对缺血心肌细胞钠电流的作用，探讨奎尼丁致心律失常发生的离子机制。方法采用大鼠冠状动脉左前降支结扎，制备心肌梗死（心梗）实验动物模型，每日给予奎尼丁（10mg／kg）灌胃，连续3个月．膜片钳技术观察奎尼丁对缺血后心肌细胞钠电流的作用。结果长期应用奎尼丁可导致心梗大鼠死亡率上升（Х^2=4．28，P〈0．05）。膜片钳测定结果表明，在刺激电压为-30mV时，奎尼丁组心肌细胞钠电流幅度为-（1284±129）pA，明显低于对照组的-（1985±204）pA，两组比较差异有统计学意义（t=3．015，P〈0．01）。结论奎尼丁对缺血后的心肌细胞钠电流具有较强的抑制作用；心肌缺血后，由于奎尼丁对不同离子电流的抑制作用不同，导致离子电流失衡，是奎尼丁致心律失常的离子机制。     

卡维地洛对心脏β1、β2和α1受体自身抗体及心功能的影响

目的旨在探讨卡维地洛在慢性心力衰竭(心衰)中的治疗作用及其对抗心脏β1、β2和α1受体自身抗体的影响.方法 54例心衰患者随机分为卡维地洛组34例和常规治疗组20例.常规治疗组应用血管紧张素转换酶抑制剂、利尿剂和洋地黄制剂.卡维地洛组在此基础上加用卡维地洛.随访半年,治疗前后采用超声心动图和酶联免疫法分别测定心功能和β1、β2和α1受体自身抗体进行疗效观察.结果 (1)治疗后卡维地洛组左室舒张期末内径和左室收缩期末内径分别为(57.50±7.29)mm和(43.17±8.27)mm,显著低于常规治疗组(64.09±7.40)mm和(52.93±8.35)mm;左室射血分数为(50.41±10.91)%,显著高于常规治疗组(41.70±7.45)%,P<0.01.(2)治疗后卡维地洛组三种抗体阳性率及抗体滴度均较治疗前显著降低(P<0.05),且卡维地洛组三种抗体阳性率及三种抗体滴度(分别为1∶ 72.44、1∶ 61.66和1∶ 67.30)均较常规治疗组(分别为1∶ 113.24、1∶ 110.66和1∶ 113.24)显著降低(P<0.05).结论卡维地洛通过β1、β2和α1受体阻滞作用,在改善心功能的同时降低肾上腺素能受体自身抗体的阳性率和抗体滴度,提示自身抗体参与心衰的发生、发展的病理生理过程,卡维地洛对其有抑制作用.     

鞘氨醇-1-磷酸对心脏肥大的作用及对心脏微血管内皮细胞的影响

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(S1P)对心脏肥大(CH)的作用与对心脏微血管内皮细胞(CMECs)功能及血管新生的调控,及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/血管内皮生长因子(PI3K/AKT/VEGF)通路的影响。方法收集51例CH患者和65例正常志愿者外周血,及其死亡捐赠的左心室心肌组织,采用免疫组织化学法(IHC)检测两组心肌组织S1P含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测外周血S1P、人二氢-S1P(DH-S1P)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量。采用免疫荧光法(IF)分别对两组心肌组织进行S1P和分化簇31(CD31)、S1P和Alpha-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共定位染色。采用免疫印迹法(WB)检测心肌组织S1P、S1P受体1-3(S1PR1-3)、α-SMA、CD31及PI3K/AKT通路的变化。分离培养原代CMECs,将第3代CMECs接种于12孔板中,建立肥大CMECs模型,分为两组:去氧肾上腺素(PE)组和PE+S1P(OE)组,每组6孔。OE组转染1μg的PDEST42-S1P-V5质粒24 h,IF对细胞进行染色。结果CH患者心肌组织S1P和血清S1P、DH-S1P和VEGF含量显著低于正常志愿者(t=6.994、7.822、5.982、9.811,P<0.05),且血清VEGF和S1P含量呈显著正相关性(r=0.427,P>0.01)。相比于正常志愿者,CH患者心肌组织CD31+S1P+双阳性共定位细胞占CD31阳性细胞比例显著降低(t=18.214,P<0.05);α-SMA+S1P+双阳性共定位细胞占α-SMA阳性细胞比例也显著降低(t=12.451,P<0.05)。与正常志愿者相比,CH患者心肌组织S1P、S1PR3、CD31和α-SMA蛋白含量明显降低(t=4.254、4.492、15.803、9.941,P<0.05),S1PR2含量明显增高(t=6.828,P<0.05),S1PR1含量无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。CH患者心脏组织p-PI3K、p-AKT和p-eNOS蛋白表达量明显低于正常志愿者(t=12.340、15.597、8.624,P<0.05)。相比于PE组,OE组中S1P和α-SMA双阳性共定位细胞占α-SMA阳性细胞比例显著增加,细胞培养上清中S1P和VEGF蛋白水平显著增加(t=6.894、5.213,P<0.05)。结论低水平的S1P可能通过抑制CMECs血管新生和间充质转换,及下调PI3K/AKT/eNOS通路在CH的发生发展中发挥重要作用。     

心脏再同步化治疗起搏参数优化对心脏同步性及心功能的影响

目的 应用组织多普勒研究心脏再同步化治疗(CRT)术后A-V、V-V间期优化对心脏同步性能及心功能的影响,探索A-V、V-V间期优化在增强CRT临床疗效中的作用.方法 32例慢性心力衰竭患者接受CRT治疗,于术后7天、3个月、6个月进行A-V、V-V间期优化,观察心脏同步性和心功能变化.采用彩色超声诊断仪进行图像采集及下线分析.结果 经观察,术后7天、3个月、6个月的A-V间期需行优化的例数分别为28例、10例、6例,V-V间期需行优化的例数分别为29例、6例、5例.与CRT术前相比:CRT治疗术后未优化时的左室12节段组织速度达峰时间标准差明显改善[(68.8±26.4)ms与(41.6±23.1)ms,P＜0.01],左室射血分数增加[(28±4)%与(31±3)%,P＜0.05],主动脉瓣前向血流速度时间积分增加[(13.6±3.1)cm与(15.5±4.3)cm,P＜0.05],舒张早期跨二尖瓣血流峰速和舒张早期心肌组织运动峰速的比值下降(13.1±5.3与9.3±4.3,P＜0.05),左室舒张充盈时间延长[(313.2±93.6)ms与(368.6±97.1)ms,P＜0.05].与术后未优化时相比:术后7天优化心脏同步性指标进一步改善(P＜0.05),心功能指标无明显改变;术后3个月、6个月优化与术后7天优化相比,心脏同步性指标无明显改变,P＞0.05;术后6个月优化的左室射血分数增加,左室舒张充盈时间延长,P＜0.01.结论 CRT术后7天,A-V、V-V间期优化治疗改善心脏同步指标;术后6个月优化进一步改善心功能.     

Utility of cardiac catheterization in pediatric cardiac patients on ECMO

Cardiac catheterization has been utilized rarely in children on extracorporeal membrane oxygenation (ECMO). We performed a retrospective review of 15 children with congenital heart disease who had undergone catheterization while on ECMO from December 1990–December 1995. The procedures, including four interventions, were successful in all patients with adequate evaluation of clinical questions. Unexpected diagnostic information of clinical importance was obtained in 40%, and clinical management of patients was significantly altered in 73%. All patients tolerated the procedure and transport well. The only significant complication was a retroperitoneal hemorrhage in one patient after approximately 12 hr. Although no patients died at catheterization, overall survival was poor, with 50% weaning from ECMO, 29% surviving to discharge, and 14% surviving at follow-up. We conclude that diagnostic and interventional catheterization may be performed in patients on ECMO with acceptable morbidity and mortality; however, long-term survival in this population is poor. Cathet. Cardiovasc. Intervent. 46:62–67, 1999. © 1999 Wiley-Liss, Inc.     

Impact of hand-carried cardiac ultrasound on diagnosis and management during cardiac consultation rounds.

AIM: To evaluate the impact of hand-carried cardiac ultrasound (HCU) on the diagnosis and management of patients during cardiac consultation rounds. METHODS AND RESULTS: One hundred and fifty patients hospitalized in non-cardiac units were included after the consulting cardiologist felt that an echocardiographic examination was indicated as part of his work-up. They were randomly allocated to echocardiography with an HCU device (SonoHeart, SonoSite, Inc.) (75 patients) or with a full-featured standard echo (FE) system (75 patients). The consulting cardiologist noted whether a definitive diagnosis was made or further study was necessary. Diagnosis and change in management were noted. In the HCU patient group there were 103 clinical questions. Seventy-two percent of the referral questions required no comprehensive echocardiographic evaluation. For questions of left ventricular function, valve abnormalities and pericardial effusion this was 98%. In 48% there was an immediate change in clinical management. In the FE patient group there were 94 clinical questions. In 32% the FE examination led to change in clinical management. CONCLUSION: HCU echocardiography provides clinically worthwhile assessment of left ventricular function, valve abnormalities and pericardial effusion in 98% of the cases. A direct assessment of cardiac function and anatomy at the bedside by an experienced cardiologist results in a significant immediate change in clinical management during consultation.     

左心室瘢痕负荷SPECT相位分析法检测及其对心脏再同步治疗疗效的影响

目的 观察慢性心力衰竭患者心脏再同步治疗(CRT)后有反应和无反应者之间左心室瘢痕负荷的差异性,评价左心室瘢痕负荷对CRT疗效的影响.方法 对30例2006年至2010年因慢性心力衰竭在南京医科大学第一附属医院接受CRT的患者进行静息核素心肌显像检查,应用相位分析技术检测左心室瘢痕负荷、收缩期相位时间标准差( phase S D)和带宽(BW)并用来评价心脏同步性.以术后6个月超声心动图的检测结果及随访6个月内是否因心力衰竭住院作为分组标准,左心室射血分数(LVEF)提高≥0.05且无因心力衰竭住院的患者入选反应组,LVEF提高＜0.05或者入院1次以上的患者入选无反应组,观察两组之间左心室瘢痕负荷和同步性指标之间的差异.结果 30例患者中反应组19例(男8例),无反应组11例(男8例).两组之间术前临床资料相似,年龄、性别均差异无统计学意义;有反应组术前QRS时限显著大于无反应组[(163.0±7.7)ms对(134.6±11.8) ms,P＜0.05];两组术前LVEF差异无统计学意义,但术后有反应组显著高于无反应组(0.49±0.02对0.33±0.15,P＜0.01).两组患者左心室瘢痕负荷和CRT术后左心室同步性差异具有统计学意义,有反应组患者的左心室瘢痕负荷明显低于无反应组(24.6％±3.6％对36.5％±3.9％,P=0.022);有反应组左心室同步性较好,收缩期相位时间标准差明显小于无反应组(28.1°±4.4°对56.1°±6.9°,P＜0.01),收缩期带宽明显小于无反应组(88.0°±13.9°对170.1°±24.4°,P＜0.01).左心室瘢痕负荷和心脏同步性对CRT疗效具有明显的影响.结论 接受CRT的慢性心力衰竭患者,左心室瘢痕负荷和CRT术后心脏同步性与CRT疗效密切相关.     

心脏不停跳心内直视术中心肌肌钙蛋白T的测定及意义

目的 研究心脏不停跳心内直视术围手术期心肌肌钙蛋白T(cTn-T)的变化及意义。方法 检测26例心脏不停跳心内直视术患者术前,术中及术后血清cTn-T及肌酸磷酸激酶同功酶(CK-MB)。结果 cTn-T明显增高,于停机时达到最高峰后,出现下降趋势,术后2周仍高于术前水平。术后心功能不良患者,cTn-T持续上升。CK-MB于术后2小时达最高峰,术后1周即恢复至术前水平。结论 心脏不停跳心内直视术中,血清cTn-T可用于监测围手术期心肌细胞损伤和估价心肌保护效果。并有可能作为反映预后的指标,其敏感性、特异性及持续时间优于CK-MB。