EGF对人视网膜色素上皮细胞胞间通讯功能和Cx43表达的影响

目的探讨培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞中连接蛋白Cx43的表达,以及表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对人视网膜色素上皮细胞间缝隙连接功能、细胞间通道蛋白Cx43表达的影响。方法免疫组化的方法观察Cx43在培养的人RPE细胞中的表达特点,用10mg·L-1、20mg·L-1、30mg·L-1不同浓度的EGF作用于培养的第4代人RPE细胞后,观察缝隙连接蛋白Cx43的表达强弱变化,用计算机灰度测量的方法评估表达的强度并作统计学分析。用LY染料传输方法测定细胞间隙连接功能,观察这3组不同浓度的EGF对人RPE细胞缝隙连接功能的影响。结果免疫组化染色显示体外培养的人RPE细胞表达缝隙连接蛋白Cx43,经计算机图像分析表明EGF使连接蛋白Cx43表达减弱,下调的程度与EGF的浓度呈正相关。LY染料传输试验显示在EGF作用下视网膜色素上皮细胞间通讯功能明显降低。结论体外培养的人RPE细胞表达Cx43,EGF可以减弱细胞间隙连接通讯功能、下调Cx43在人RPE细胞中的表达。     

p42/p44 MAPK信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞VEGF表达中的作用

目的　探讨p4 2 /p4 4丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activedproteinkinase ,MAPK)信号转导通路对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞VEGF表达中的作用。方法　利用CoCl2 建立培养的人RPE细胞缺氧模型,用2 0μmol·L-1p4 2 /p4 4MAPK特异性阻断剂PD980 5 9处理RPE细胞,在缺氧条件下分别培养0min、5min、10min、30min、6 0min和12 0min ,用Westernblot方法检测磷酸化p4 2 /p4 4MAPK表达;培养人RPE细胞1h、3h、6h、12h和2 4h ,用酶联免疫吸附试验(en zymelinkedimmunosorbantassay ,ELISA)检测缺氧条件下RPE细胞上清中VEGF的含量。结果　缺氧刺激5min、10min、30min、6 0min和12 0min时,磷酸化p4 2 / p4 4MAPK水平逐渐增高;相应PD980 5 9处理组磷酸化p4 2 / p4 4MAPK水平降低,只可见磷酸化p4 2MAPK条带。在缺氧1h、3h、6h、12h和2 4h时,RPE细胞上清液中VEGF含量随时间逐渐增加(P <0 .0 1) ,PD980 5 9处理组VEGF含量较对照组显著减少(P <0 .0 1)。结论　p4 2 /p4 4MAPK信号转导通路可能参与了缺氧引起的人RPE细胞VEGF的表达     

胰岛素对人视网膜色素上皮细胞表达低氧诱导因子-1α的影响

目的研究胰岛素诱导人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF 1α)的表达,及川芎嗪对其影响。方法应用免疫组化法检测不同浓度胰岛素作用下RPE中HIF1α的表达、同一浓度胰岛素作用于RPE不同时间HIF1α的表达、不同浓度川芎嗪对胰岛素作用下RPE中HIF1α的表达的影响。结果胰岛素作用4h,随着胰岛素浓度的增加,RPE中HIF1α的表达逐渐增加,以8×106U·L-1最为明显;8×106U·L-1胰岛素作用不同时间,以4h时RPE中HIF1α的表达较高;不同浓度的川芎嗪对胰岛素作用下的RPE中HIF1α的表达无影响。结论胰岛素可诱导RPE中HIF1α的表达,川芎嗪对胰岛素诱导的RPE中HIF1α的表达无影响。     

吲哚美辛诱导体外培养的视网膜色素上皮细胞凋亡

目的　探讨用吲哚美辛 ( indomethacin,IN)诱导体外培养的人胚胎视网膜色素上皮 ( retinal pigm entepithelium ,RPE)细胞的凋亡。方法　加入终浓度分别为 10 0、 2 0 0、40 0、 6 0 0μmol· L- 1 的 IN,作用 2 4h;6 0 0μm ol· L- 1 IN作用 6、 12、 2 4h后用透射电镜定性观察凋亡细胞 ,并用吖啶橙荧光染色进行定量和定性分析。结果　经 2 0 0、40 0、6 0 0 μm ol·L- 1 IN作用 2 4h后 RPE细胞凋亡指数分别为 ( 2 7.0 0 0 0± 1.3375 ) % ,( 5 1.0 0 0 0±1.370 3) % ,( 6 8.0 0 0 0± 1.6 86 5 ) %与对照组 ( 2 .0 0 0 0± 0 .42 16 ) %相比 ,差异有显著性( t=4.6 2 4,9.0 6 2 ,12 .2 0 6 ,P=0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 ) ,随着 IN浓度的增加 ,RPE细胞凋亡数逐渐增多 ;6 0 0μm ol· L- 1 IN作用 12、2 4h后 RPE细胞凋亡指数分别为 ( 44 .0 0 0 0±0 .843 3) % ,( 6 4.0 0 0 0± 1.2 6 49) %与对照组 ( 2 .0 0 0 0± 0 .42 16 ) %相比 ,差异有显著性( t=8.6 17,13.2 74,P=0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 )。结论　 IN能诱导体外培养的人胚胎 RPE细胞的凋亡 ,并且 RPE细胞的凋亡呈现出随浓度增加和时间延长凋亡细胞数明显增多。     

胰岛素对人视网膜色素上皮细胞表达低氧诱导因子-1а的影响

目的研究胰岛素诱导人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)低氧诱导因子-а(hypoxia-inducible factor -а,HIF-а)的表达,及川芎嗪对其影响. 方法应用免疫组化法检测不同浓度胰岛素作用下RPE中HIF-а的表达、同一浓度胰岛素作用于RPE不同时间HIF -а的表达、不同浓度川芎嗪对胰岛素作用下RPE中HIF-а的表达和影响结果胰岛素作用4 h,随着胰岛素浓度的增加,RPE中HIF-а的表达逐渐增加,以8×106U·L-1最为明显;8×106U·L-1胰岛素作用不同时间,以4 h时RPE中HIF-а的表达较高;不同浓度的川芎嗪对胰岛素作用下的RPE中HIF-а的表达无影响.结论胰岛素可诱导RPE中HIF-а的表达,川芎嗪对胰岛素诱导的RPE中HIF-а的表达无影响.     

白细胞介素-1β对视网膜色素上皮细胞产生白细胞介素-6的影响

目的观察重组人白细胞介素1β(interleukin1β,IL1β)对培养的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)细胞产生白细胞介素6(interleukin6,IL6)的影响。方法在人RPE细胞的培养液中分别加入终浓度为0μg·L-1、10μg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1的重组人IL1β,作用12h、24h、48h后,用酶联免疫吸附实验测定细胞上清液中IL6的质量浓度。结果50μg·L-1IL1β作用于RPE细胞48h内,RPE细胞产生IL6的量随时间延长而增加;在同一作用时间点,RPE细胞产生IL6的量随IL1β浓度的增高而增高。与对照组相比,当IL1β浓度达10μg·L-1时,二者之间即出现显著性差异(P<0.05),当IL1β浓度达100μg·L-1时,RPE细胞产生IL6的量呈平台高峰,不再升高,24h和48h组均有相同趋势。结论重组人IL1β促人RPE细胞分泌IL6在48h内具有时间和浓度依赖性。     

曲安奈德对培养的人视网膜色素上皮细胞的毒性作用

目的探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对视网膜色素上皮细胞可能潜在的毒性作用。方法质量浓度0mg·L-1、10mg·L-1、30mg·L-1、300mg·L-1TA分别作用ARPE19细胞24h和72h后通过TUNEL和电镜观察2种方法从形态和功能方面观察TA对ARPE19细胞生长的影响。结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg·L-1TA不影响ARPE19细胞的生长,但是随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P<0.01),随着时间延长,ARPE19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P<0.01);(2)电镜:质量浓度10mg·L-1TA作用后ARPE19细胞状态良好,但是随着质量浓度增加,细胞走向凋亡的形态越明显,微绒毛消失,核染色质边集,凋亡小体形成。结论一定浓度的TA能够诱导视网膜色素上皮细胞的凋亡,而且这种凋亡效应呈浓度和时间依赖关系。因此,TA对视网膜色素上皮细胞可能有潜在毒性。     

葛根素抑制糖基化终产物诱导的人视网膜色素上皮细胞增殖及低氧诱导因子-1α的表达

目的:研究葛根素是否抑制糖基化终产物(AGEs)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达。方法:应用MTT比色法检测不同浓度(0,0.01,0.1,1g/L)的葛根素对糖基化终产物(AGEs)诱导的人RPE细胞增殖的影响;应用免疫组织化学法和Western-blot分析法检测不同浓度(0,0.01,0.1,1g/L)葛根素对100mg/L的AGEs作用于人RPE细胞24h后HIF-1α的表达,并以计算机图像分析仪进行分析。结果:MTT比色法显示,不同浓度(0,0.01,0.1,1g/L)的葛根素对AGEs诱导的人RPE细胞增殖具有不同程度的抑制作用,抑制率分别为5.7%,24.1%,30.7%;不同浓度(0.01,0.1,1g/L)的葛根素与100mg/LAGEs共同作用于RPE细胞24h,免疫组织化学法检测显示,与AGEs组比较,0.01g/L以上浓度葛根素均能显著抑制AGEs诱导的RPE细胞HIF-1α的表达,0.01g/L葛根素使HIF-1α表达降低了10.2%,0.1g/L葛根素则降低了38.9%,1g/L葛根素则达到53.4%。Western-blot分析显示,与AGEs组比较,0.01g/L以上浓度葛根素均能显著抑制AGEs诱导的RPE细胞HIF-1α的表达,随着葛根素浓度的增加,HIF-1α免疫印迹带逐渐减弱,0.01g/L葛根素使HIF-1α表达降低了11.0%,0.1g/L葛根素则降低了40.3%,1g/L葛根素则达到54.4%。结论:葛根素可显著抑制AGEs诱导的人RPE细胞的增殖及HIF-1α的表达。     

染料木黄酮对培养的人视网膜色素上皮细胞增生和凋亡的影响

目的 观察不同浓度染料木黄酮对培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)的增生和凋亡的影响。 方法 通过四唑溴盐(MTT)比色法和核仁嗜银蛋白(AgNORs)染色分析，观察不同浓度(5、10、25、50、75、100 mg·L^-1)染料木黄酮作用12、24、48、72 h后对RPE细胞增生的影响。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色与光学显微镜和透射电子显微镜的形态学观察，研究其对RPE细胞凋亡的诱导作用，并与正常培养的人RPE细胞对照比较。 结果 25、50、75、100 mg·L^-1浓度的染料木黄酮可抑制RPE的增生，抑制率为12.0%~64.6%,与正常RPE细胞相比，差异有显著性的意义(P＜0.05)；随药物剂量的增加和作用时间的延长细胞核内AgNORs数量减少。TUNEL染色结果显示，50 mg·L^-1染料木黄酮作用24、48和72 h后，RPE细胞的凋亡百分数的中位数分别为7.6%、9.8%和13.7%。当浓度为75、100 mg·L^-1时，以上3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为10.3%、16.4%和23.4%；15.4%，21.2%和35.8%。透射电子显微镜观察结果显示，50 mg·L^-1染料木黄酮作用48h后，RPE细胞核内呈现凋亡特征。 结论 不同浓度的染料 木黄酮可以抑制RPE细胞的增生，有剂量效应关系和时间效应关系；当达到一定浓度时，染料木黄酮可以诱导RPE凋亡的发生。 （中华眼底病杂志，2004，20：241-244）     

Bcl-2及bFGF在维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的表达

目的探讨维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡作用,观察凋亡过程中原癌基因蛋白质(Bcl2)和碱性成纤维细胞生长因子(baic fibroblast growth factor,bFGF)的表达变化。方法应用80mg·L-1Ver作用于体外培养的人RPE细胞12h、24h、48h,吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色及透射电镜观察RPE细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Bcl2mRNA和bFGFmRNA表达变化。结果经Ver作用的体外培养的人RPE细胞具有典型的凋亡形态学特征:核染色质浓染、边集;细胞体积缩小。同时RPE细胞Bcl2mRNA表达下降;而bFGFmRNA表达随着作用时间延长,呈增高趋势。结论Ver可诱导体外培养人RPE细胞凋亡,凋亡过程中Bcl2表达逐渐下降,而bFGF表达增强。     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.