神经纤维瘤病1型基因32、33号外显子突变的检测

目的检测中国人神经纤维瘤病１型（ＮＦ１）基因３２、３３外显子突变。方法应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）法分析１４个ＮＦ１家系６２名成员及３０名正常对照外周血白细胞ＤＮＡ的ＮＦ１基因３２、３３号外显子。结果３个家系（２１．４％）、４例ＮＦ１患者（１１．１％）ＮＦ１基因３２号外显子的ＤＮＡＳＳＣＰ发生泳动变位,可能为ＮＦ１基因３２号外显子发生突变。家系中其他成员及正常对照无此现象。通过３种不同的ＳＳＣＰ实验条件,未发现３３号外显子异常泳动变位。结论３２号外显子可能为中国人ＮＦ１基因突变热点之一。本研究方法对ＮＦ１症状前诊断和产前诊断有重要应用价值。     

2例散发型神经纤维瘤病病人及其家系NF1基因突变的检测

目的 报道2例Ⅰ型神经纤维瘤病（NF1）病人及其家系NF1基因检测结果。方法 应用目标序列捕获高通量测序技术对2例NF1病人及其家系进行NF1基因测序,明确那不然致病基因型,并采用多重连接探针扩增技术和Sanger测序法进行验证。结果 2例均检测到基因突变,1例为33岁孕6周女性,NF1基因整体杂合缺失,其丈夫和胎儿未检测到相同的基因突变;1例3岁男孩,为移码突变,基因型为c.6408delA,为新发突变。结论 我们进行高通量测序检测NF1基因变异,发现1个新发突变位点,扩充了NF1基因的致病性突变位点。另外,对胎儿进行NF1基因检测,可能是避免NF1患儿出生的一个措施。     

中国人Ⅰ型神经纤维瘤病基因突变分析

目的对中国人Ⅰ型神经纤维瘤病（NF1）基因20、28、29、39号外显子进行基因突变分析及评价聚合酶链反应-单链构象多态／异源双链（PCR-SSCP／HA）技术在NFl基因诊断中的价值。方法应用PCR—SSCP／HA技术，结合DNA测序，筛查56例患者NF1基因20、28、29、39号外显子的突变或多态性。结果在20号外显子发现一个家系父子3人的SSCP／HA出现泳动异常，DNA测序证实为20号外显子上T—G的杂合突变即Leul 141Arg错义突变；发现1例患者28号外显子的SSCP／HA检测有泳动异常，测序证实为28号外显子5’端上游的第28位核苷酸G—T杂合；29、39号外显子未检测到泳动异常的条带。结论联合应用SSCP／HA的方法可提高基因突变检测敏感度及检出率，NF1基因20、28、29、39号外显子不是突变热点或突变率相对较高的区域。     

野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能

目的构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因（NF2）Ⅱ亚型的真核表达载体，观察其在人胚胎肾细胞293（HEK293）中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞（RT4）后的功能。方法以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板．应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2Ⅱ亚型基因，并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中：经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2Ⅱ亚型，用Lipofectamine2000脂质体导人人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平：随后转染大鼠神经鞘瘤细胞．利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响。结果经序列分析证实，克隆的NF2Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致。DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示，经双酶切后的质粒pEGFPcDNA片段大小约为4700bp：NF2Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为l770bp，NF2Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Westem Blotting方法得到证实；水溶性四氮唑法检测显示，转染pEGFP-NF2Ⅱ亚型并表达NF2Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同。结论所构建的野生型NF2Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达，且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性。     

NF2基因表达Merlin蛋白的作用机制

人类脑肿瘤中,2型神经纤维瘤病(Neurofibromatosis2,NF2)的肿瘤抑制蛋白Merlin普遍发生错误表达。突变基因位于人类染色体22q12,正常表达的蛋白质命名为Merlin或Schwannomin。Merlin与ERM蛋白家族有同源性,与埃兹蛋白(Ezrin)、根蛋白(Radixin)和膜突蛋白(Moesin)同属4.1蛋白超家族。目前研究相继发现多种能与Merlin发生相互作用的蛋白。本文旨在探讨这些蛋白在NF2发病中可能的作用机制。     

Ⅲ型胶原基因COL3A1多态性与脑梗死的相关性

目的 探讨湖南人群中COL3A1基因多态性与脑梗死疾病有无相关性。方法 收集脑梗死患者血样标本110例（包括散发和脑梗死家系的患者）及健康对照血样标本70例。采用聚合酶链反应-简单序列长度多态性（PCR-SSLP）及产物测序分析检测COL3A1基因的多态性。结果 湖南地区汉族脑梗死患者COL3A1基因多态位点基因分布与对照组相比，等位基因片段分布的频率不同，COL3A1基因等位基因型COL3A1-3基因频率分布（0．93）显著高于健康对照组（0．43），差异有统计学意义（χ^2=20．487，P〈0．01）。散发组脑梗死患者和家系组患者各基因分布差异无统计学意义。结论 COL3A1多态分布无明显年龄性别差异，COL3A1基因25号内含子VNTR多态可能与脑梗死的发病有关。     

遗传性痉挛性截瘫一家系的临床特点与spastin基因突变分析

目的　探讨常染色体显性遗传的遗传性痉挛性截瘫 (SPG)一家系的临床特点,并行spastin基因突变分析。方法　对整个家系进行详细的临床检查,先证者和另一例家系内患者进行了心肌酶学、头颅核磁共振成像(MRI)、胸髓MRI、肌电图、体感诱发电位检查。应用聚合酶链式反应 单链构象多态性(PCR SSCP)结合DNA序列分析方法,检测该家系中所有 5例患者和 4名有血缘关系的健康人及家系外 50名无血缘关系健康对照者spastin基因的突变情况。结果　先证者和家系内另一例SPG患者胸髓MRI显示胸髓萎缩;PCR SSCP检测发现家系内患者均出现异常SSCP电泳带,经测序证实为Leu378Gln突变。结论　该常染色体显性遗传SPG家系的患者具有典型的临床表现,为spastin基因Leu378Gln突变所致。     

Ⅰ型神经纤维瘤病基因28及31号外显子突变的检测

目的　探讨国人Ⅰ型神经纤维瘤病 (NF1)基因突变的热点。方法　用PCR SSCP方法检查NF1基因 2 8和 3 1号外显子共约 10 60bp ,约占NF1基因全部编码区的 6 95 %。结果　在 2 7个家系中 ,发现 4个家系 (14 82 % )、13例病人(2 3 64 % )存在NF1基因突变。结论　提示本组病例 2 8和 3 1号外显子可能为突变热点。对突变性质的定论有赖于DNA序列分析。     

神经纤维瘤病Ⅰ型的基因研究

神经纤维瘤病Ⅰ型 (NF1)是一种常见的常染色体显性遗传病。NF1基因位于 17q11 2 ,跨距 35 0kb的基因组DNA ,转录形成包含 6 0个外显子的 13kbmRNA ,负责编码由 2 818个氨基酸组成的神经纤维蛋白。其基因的突变可以导致神经纤维蛋白的截断及下调ras基因功能丧失。因此NF1基因的研究为NF1发病和防治的探索提供了理论依据。     

NF2基因对细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察Ⅱ型神经纤维瘤（neurofibromatosisⅡ，NF2）基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用脂质体介导法将携带野生型NF2的真核表达载体导入大鼠神经鞘瘤RT4细胞，质粒转染成功后实验细胞分为pEGFP-N1组、pEGFP-NF2组和对照组（未转染质粒组），以Western blot分析目的基因的表达，并采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期。结果pEGFP-NF2组细胞merlin蛋白出现明显高表达。pEGFP-NF2组细胞生长的抑制率高达37．7％，与对照组相比较，差异具有统计学意义（P〈0.05）；而pEGFP-N1组细胞生长的抑制率与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞仪检测显示NF2可以阻断细胞周期，使其处于G1-G0期。结论野生型NF2可抑制大鼠神经鞘瘤RT4细胞的增殖，阻断细胞周期，使其处于G1-G0期。     

载脂蛋白E基因多态性与血管性痴呆的关系

目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与血管性痴呆的关系,并分析其可能的作用机制。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测65例血管性痴呆患者(血管性痴呆组)和120名健康受试者(对照组)的ApoE基因型和基因频率;同时对血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白进行检测,分析ApoE基因多态性对血脂代谢的影响。结果血管性痴呆组与对照组均以ε3/3基因型出现频率最高,但血管性痴呆组患者的ε4基因出现频率(14.6%)显著高于对照组(4.6%,P<0.01)。血管性痴呆组血清总胆固醇水平明显高于对照组(P<0.05)。在血管性痴呆组,ε4基因具有升高血清总胆固醇水平的作用;而在正常对照组,ε2基因具有降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白水平的作用,说明ε4基因与血清总胆固醇水平升高具有相关性。结论ApoEε4是血管性痴呆发病的的遗传易感因子;血管性痴呆患者存在血脂代谢紊乱,且受ApoE基因的调控,ApoE基因可能通过引起血脂代谢紊乱而增加血管性痴呆发病危险性。     

载脂蛋白E基因多态性对血脂代谢的影响

目的 研究载脂蛋白E基因多态性与血脂代谢的关系。方法 以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术结合银染色方法对168名无血缘关系的健康汉族人载脂蛋白E基因型进行检测,分析各等位基因对血脂代谢的影响。结果 不同的载脂蛋白E等位基因携带者的血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及载脂蛋白B(ApoB)水平差异有显著性意义(P<0.O1),依次为ε_4>ε_3>ε_2(ε_4携带者的血脂水平最高)。结论 载脂蛋白E基因多态性是个体间血脂水平差异的独立遗传因素。ε_4等位基因具有明显升高血浆TC、LDL-C和载脂蛋白B水平的作用;而ε_2作用则相反。     

应用荧光半定量聚合酶链反应方法检测常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征parkin基因外显子重排突变分析

目的探讨常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征（autosomal recessive early-onset parkinsonism ,AREP）基因外显子重排突变情况。方法应用荧光半定量聚合酶链反应（PCR）方法对18个AREP家系进行parkin基因外显子重排突变分析。结果9个AREP家系含有parkin基因外显子重排突变，其中2个家系为外显子4纯合缺失，2个家系为外显子4杂合缺失，2个家系为外显子2杂合缺失，1家系为外显子3杂合缺失，1家系为外显子1杂合缺失，此外，1家系为外显子3和外显子4的复合杂合缺失。未见parkin基因外显子重复突变。结论我国AREP患者存在parkin基因外显子重排突变；parkin基因外显子重排突变可能是我国AREP患者的主要致病因素。     

中国南方汉族散发早发性帕金森综合征的parkin基因突变分析

目的 探讨中国南方汉族散发早发性帕金森综合征(early onset parkinsonism,EOP)的parkin基因突变特点.方法 应用实时荧光定量PCR技术结合DNA直接测序技术对156例中国南方汉族散发EOP患者进行parkin基因突变分析.结果 19例患者parkin基因突变,包括15例杂合突变、2例纯合突变、2例复杂杂合突变.17例患者外显子重排突变,其中12例外显子缺失突变,5例外显子双重重复突变.此外,3例患者存在点突变和(或)小片段缺失突变,其中ⅣS9+18C＞T、c.202-203delAG为已报道突变,c.813delT为未报道的新突变;parkin基因突变位点主要分布在其1～7号外显子.无parkin基因突变与有parkin基因突变的患者在临床表现及病情严重程度方面差异无统计学意义,但发病年龄[(40.9±6.8)岁与(35.5±10.0)岁,Z=-2.271,P=0.023)]、病程[(4.4±3.6)年与(7.6±4.0)年,Z=-3.680,P=0.000)]等方面差异有统计学意义.结论 中国南方汉族散发EOP患者parkin基因突变的频率为12.18%(19/156),外显子重排突变是其重要突变类型;外显子缺失突变是主要的突变形式;parkin基因1～7号外显子为突变热点.parkin基因突变与无parkin基因突变的EOP患者在临床表型上无明显差异,但其发病年龄较轻,病程较长,进展较缓慢.     

结节性硬化症TSC1基因编码外显子全长的突变检测与分析

目的研究结节性硬化症(TSC)TSC1基因所有编码外显子的基因突变特征和多态现象。方法采用聚合酶链反应单链构象多态(PCR SSCP)技术结合DNA测序对来源于21个家系的23例TSC患者、22名父母及60名健康对照进行TSC1基因编码外显子全长的基因突变和多态的检测。结果共检测出10种异常的SSCP带型,经DNA测序后证实为4种突变和6种多态,突变包括2种移码突变(352insA和2332insT)、1种剪接突变(729 1G→T)、1种无义突变Tyr761Ter(2504C→A),其中2332insT, 729 1G→T及Tyr761Ter为新型突变。以上突变均见于散发型患者,突变频率为4 /15。6种多态包括4种单核苷酸多态(347A→C, 1186T→C, 1556A→G, 1947T→C), 1种内含子区多态(2218 71delAG)及1种3′UTR区多态(3716 36T→C),其中3种为新多态。结论本组结果对研究我国TSC1基因突变特征提供了重要资料,未发现TSC1基因突变热区,且TSC1基因突变多见于散发型患者,提示中西方TSC1基因突变可能存在差异。     

中国人抗肌营养不良蛋白基因缺失的分布特点

目的了解国内Ｄｕｃｈｅｎｎｅ／Ｂｅｃｋｅｒ型肌营养不良症（ＤＭＤ／ＢＭＤ）患者基因缺失的分布特点。方法用１２对引物以多重ＰＣＲ检测与５６例ＤＭＤ／ＢＭＤ患者,分析缺失型患者抗肌营养不良蛋白（ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ）基因缺失的断裂点分布,并结合国内文献报道的２２１例病例资料,分析９对引物的总检出率及各引物的最佳组合。结果国内ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因缺失断裂点７２％位于４４～５１号内含子内,以４４号内含子最多（２２％）,５０号内含子次之（１７％）,位于４５～５１号内含子内的断裂点是４４号内含子的２．３倍。７号内含子断裂较少,仅４％的断裂点位于该内含子。９对引物的总检出率为４８％,其中５对引物的总检出率为４６％。两对引物的最佳组合为４８号和１７号,可检出３５％的患者。结论国内ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因４４～５１号内含子高度不稳定,容易发生断裂。７号内含子可能不是国内ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因缺失断裂的高发区域。在国内５对引物的总检出率接近９对引物,４８号和１７号外显子的二重ＰＣＲ扩增对于全国范围内ＤＭＤ／ＢＭＤ的筛选,尤其是结合其他方法进行大范围的产前筛选,不失为一种可取的选择。     

肝豆状核变性病基因突变的检测及酶切诊断方法

目的 筛选中国人肝豆状核变性的高频突变点,并建立酶切诊断方法。方法 对中国人ＷＤ３９个家系４５例患者的３￣２０号外显子进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析,对有异常者进行序列分析,并通过对该突变点的酶切再次筛选。     

中国汉族人群早发性帕金森综合征DJ-1基因突变分析

目的 探讨中国汉族人群早发性帕金森综合征(early-onset parkinsonism,EOP)DJ-1基因突变情况.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)结合DNA直接测序技术对160例EOP患者进行了DJ-1基因突变分析.结果 对DJ-1基因外显子重排突变分析发现,4例新的DJ-1基因外显子2的杂合缺失突变,突变频率2.5%(4/160);DNA直接测序方法未发现DJ-1基因的致病突变,发现了4种已报道的单核苷酸多态(SNP)和1种新的SNP,分别为:IVS4+30 T→G、IVS4+45 G→A、IVS4+46 G→A、IVS5+31 G→A和IVS6+52 C→T.结论 DJ-1基因外显子2的杂合缺失突变扩展了DJ-1基因的突变谱,可能是中国汉族人群EOP DJ-1基因突变的重要形式.