IL-1β促肝星状细胞增殖与JNK/AP-1信号转导通路的关系

目的探讨JNK/AP-1信号转导通路在白细胞介素-1β（IL-1β）介导的促肝星状细胞（HSC）增殖中的作用。方法应用W estern印记检测JNK的活化程度。应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响。应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性。结果IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,JNK特异性阻断剂SP600125可抑制此作用。IL-1β刺激大鼠HSC首先引起JNK活化,并呈现出一定的时效变化。IL-1β作用HSC后可使AP-1活性增强,并呈现出一定的时效变化,而SP600125可抑制此作用。结论IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK/AP-1信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用。     

益肝康抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制

目的:探讨活血化瘀中药复方“益肝康”抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制。方法:应用West-ern印记检测p38的活化程度;3H-Pro掺入法检测Ⅰ型胶原合成。结果:IL-1β有明显促大鼠HSCⅠ型胶原合成作用,IL-1β(10μg/L)作用培养的HSC24小时后,3H-Pro掺入量明显高于对照组(618.33±52.69vs388.83±49.72,P<0.01),阻断p38通路后,IL-1β的促HSCⅠ型胶原合成作用受到抑制。经不同浓度p38特异性阻断剂SB203580(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)预处理的各组细胞,3H-Pro掺入量分别为487.33±42.75、408.50±27.47、400.83±19.49,与对照组(未用SB203580预处理,629.67±69.88)相比,其掺入量均明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。益肝康可抑制IL-1β诱导的HSC中p38活性,与未用IL-1β处理组相比,在分别刺激HSCs5分钟、15分钟、30分钟和60分钟,HSC p38活性受到明显抑制(P<0.05,P<0.01)。经益肝康浸膏预孵育的益肝康 IL-1β组与单纯IL-1β组相比,p38活性明显受到抑制(1.550±0.410vs2.973±0.953,P<0.01)。结论:IL-1β可促进大鼠HSCⅠ型胶原合成;细胞内p38信号蛋白参与了IL-1β促HSCⅠ型胶原合成;益肝康可通过阻断p38通路,从而发挥抑制HSCⅠ型胶原合成作用。     

益肝康等活血化瘀中药抑制IL-1β刺激的HSC增殖及TIMP-1的表达

目的:探讨活血化瘀中药益肝康、丹参小复方、丹参对IL-1β刺激的活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)增殖及基质金属蛋白酶抑制因子 mRNA(TIMP mRNA)表达的影响．方法:体外培养活化的大鼠HSC,随机分为8 组:对照组(A组)、IL-1β 10 μg/L(B组)、IL- 1β 10μg/L 益肝康2 g/L干预组(C组)、IL- 1β 10 μg/L 丹参小复方2g/L干预组(D组)、 IL-1β 10μg/L 丹参2g/L干预组(E组)、丹参 2 g／L(F组)、丹参小复方2 g/L(G组)、益肝康 2 g／L(H组)．加药后24 h．应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测各组HSC增殖,采用半定量 RT-PCR方法检测各组HSC TIMP-1 mRNA的表达．结果:A组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达强于F、G、H组(1．291±0．09 vs 1．055±0．105, 1±0．07,0．883±0．06,P<0．01:0．591±0．064 vs 0．493±0．088．0．458±0．076．0．356±0．046． P<0．05或P<0．01);H组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达低于F组和G组(P<0．05);B组HSC 增殖和TIMP-1 mRNA表达均明显强于A组 (1．575±0．017 vs 1.291±0,09,P<0．01;1．369± 0．097 vs 0．591±0．064,P<0．01)和C、D、E组 (1．575±0．017 vs 0．906±0．09,1．015±0．081, 1．097±0．038,P<0．01;1．369±0．097 vs 0．694 ±0．078,0．854±0．05,0．898±0．12,P<0．01);C 组HSC增殖和TIMP-1 mRNA表达低于D组和 E组(P<0．05)．结论:益肝康等活血化瘀中药能抑制IL-1β刺激的HSCs增殖及TIMP-1 mRNA表达,发挥其抗肝纤维化功效．益肝康抗肝纤维化作用强于丹参小复方和丹参单药．     

IL-1β诱导肝星状细胞IL-1Ⅰ型受体及AP-1表达的研究

目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）对大鼠肝星状细胞（HSC）IL-1Ⅰ型受体（IL-1RⅠ）及激活蛋白-1（AP-1）表达的诱导作用。方法应用流式细胞技术检测IL-1RⅠ蛋白表达;应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性。结果IL-1β刺激HSC 2min后即见IL-1RⅠ表达增强,10min时达到高峰（P〈0．01）,随后有所降低,60min时仍保持较高的活化状态（P〈0．01）,120min后则基本接近初始水平;IL—1β作用HSC1、2和4h后,AP-1活性均较对照组明显增高（P〈0．01）。结论IL-1β以时间依赖方式诱导HSCIL-1RI及AP-1的表达。     

IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系

目的探讨IL-1β调控大鼠HSCsTIMP-1mRNA表达与JNK、p38 MAPK通路的关系。方法RT-PCR用于检测大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达；Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度。结果IL-1β（10ng／mL）作用培养的HSCs 24h后，TIMP-1 mRNA表达（1．191±0．079）明显高于对照组（0．545±0．091），有统计学意义（P〈0．01）；IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路。用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后，IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制，分别为10μmol／L，1．022±0．113;20μmol／L，0．8694±0．070；40μmol／L，0．666±0．123，与对照组相比（1．163±0．107），各浓度组均有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）。用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后，HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多，分别为10μmol／L，1．507±0．099；20μmol／L，1．698±0．107；40μmol／L，1．857±0．054。与对照组相比（1．027±0．061），各浓度组均有显著性差异（P均〈0．01）。结论IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展，JNK和p38信号蛋白参与了此过程，HSCs中两条通路均可被IL-1激活，但所起作用完全不同，它们相互作用相互调节，共同调控TIMP-1 mRNA的表达。     

拆方益肝康不同药物血清对肝星状细胞胶原代谢及TGF-β1的影响

目的:探讨益肝康抗肝纤维化作用机制、配伍意义,并采用对比血清药理学方法探讨更为科学的中药研究方法.方法:分别制备益肝康及其拆方-丹参小复方正常大鼠(A组,A1组:正常大鼠血清对照组;A2组:正常大鼠丹参小复方血清组;A3组:正常大鼠益肝康血清组)与肝纤维化大鼠(B组,B1组:肝纤维化大鼠血清对照组:B2组:肝纤维化大鼠丹参小复方血清组:B3组:肝纤维化大鼠益肝康血清组)药物血清,温育体外培养的HSC,3H-脯氨酸掺入法检测胶原合成,Western blot技术检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR技术检测TGF-β1 mRNA表达.结果:益肝康及丹参小复方正常大鼠与肝纤维化大鼠药物血清均可抑制HSC胶原合成(100mL/L时A组:2275.00±114.30 cpm,2401.87±108.50 cpm vs 2963.62±128.01 cpm;B组:2205.3l±108.97 clom,2462.70±177.02 epm vs 3179.12±223.34 cpm;200 mL时A组:2372.96±123.3 cpm Vs 2515.37±98.25 cpm vs 3209.38±110.75 cpm;B组:2394.29±1 50.50 cpm vs 2611.25±126.05 cpm vs 3490.46±183.16 cpm,P<0.05或0.01).100 mL时降低TGF-β1基因及蛋白表达(均P<0.01).2组在胶原合成、TGF-β1基因及蛋白表达益肝康组作用优于丹参小复方(均P<0.01),而益肝康组与丹参小复方组比较则B组血清作用优于A组(益肝康组:TGF-β1基因:0.356±0.032 vs 0.568±0.028;TGF-β1蛋白:0.458±0.009 vs 0.639±0.102;丹参小复方组:0.601±0.047 vs 0.810±0.051:0.612±0.126vs 0.860±0.138.P<0.05或LP<0.01).结论:益肝康及丹参小复方均可抑制HSC胶原合成,其主要机制之一是抑制TGF-β1基因和蛋白表达,益肝康更具配伍意义,肝纤维化大鼠药物血清药效优于正常大鼠血清药效.     

Interleukin-1 beta up-regulates tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 mRNA and phosphorylation of c-jun N-terminal kinase and p38 in hepatic stellate cells

AIM: To study the relationship between interleu-kin-1beta (IL-1β) up-regulating tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMMP-1) mRNA expression and phosphorylation of both c-jun N-terminal kinase (JNK) and p38 in rat hepatic stellate cells (HSC). METHODS: RT-PCR was performed to measure the expression of TIMMP-1 mRNA in rat HSC. Western blot was performed to measure IL-1β-induced JNK and p38 activities in rat HSC. RESULTS: TIMMP-1 mRNA expression (1.191±0.079) was much higher after treatment with IL-1β(10 ng/mL) for 24 h than in control group (0.545±0.091) (P<0.01). IL-1βactivated JNK and p38 in a time-dependent manner. After stimulation with IL-1βfor 0, 5, 15, 30, 60 and 120 min, the JNK activity was 0.982±0.299, 1.501±0.720, 2.133±0.882, 3.360±0.452, 2.181±0.789, and 1.385±0.368, respectively. There was a significant difference in JNK activity at 15 min (P<0.01), 30 min (P<0.01) and 60 min (P<0.01) in comparison to that at 0 min. The p38 activity was 1.061±0.310, 2.050±0.863, 2.380±0.573, 2.973±0.953, 2.421±0.793, and 1.755±0.433 at the 6 time points (0, 5, 15, 30, 60 and 120 min) respectively. There was a significant difference in p38 activity at 5 min (P<0.05), 15 min (P<0.01), 30 min (P<0.01) and 60 min (P<0.01) compared to that at 0 min. TIMMP-1 mRNA expression trended to decrease in 3 groups pretreated with different concentrations of SP600125 (10μmol/L, 1.022±0.113; 20μmol/L, 0.869±0.070; 40μmol/L, 0.666±0.123). Their decreases were all significant (P<0.05, P<0.01,P<0.01) in comparison to control group (without SP600125 treatment, 1.163±0.107). In the other 3 groups pretreated with different concentrations of SB203580 (10μmol/L, 1.507±0.099; 20μmol/L, 1.698±0.107; 40μmol/L, 1.857±0.054), the expression of TIMMP-1 mRNA increased. Their levels were higher than those in the control group (without SB203580 treatment, 1.027±0.061) with a significant statistical significance CONCLUSION: IL-1βhas a direct action on hepatic fi-brosis by up-regulating TIMMP-1 mRNA expression in rat HSC. JNK and p38 mitogen-activated protein kinases (MAPKs) are involved in IL-1β-induced TIMMP-1 gene expression, and play a distinct role in this process, indicating that p38 and JNK pathways cooperatively mediate TIMP-1 mRNA expression in rat HSC.     

血小板源生长因子BB通过JNK调控大鼠主动脉平滑肌细胞β-catenin核内外分布

目的探讨阻断JNK后对血小板源生长因子BB引起的细胞增殖的影响以及JNK对血小板源生长因子BB(50μg/L)刺激导致的β-catenin核内外分布的影响。方法应用CCK8法测定不同浓度JNK抑制剂SP600125(10、20和40μg/L)对血小板源生长因子BB诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。应用WesternBlotting法检测血小板源生长因子BB刺激后不同时间点p-JNK、JNK及胞浆和胞核β-catenin的表达变化,以及在应用不同浓度SP600125(10、20和40μg/L)后对p-JNK以及胞核β-catenin表达的影响。免疫荧光法检测血小板源生长因子BB刺激后和给予JNK抑制剂后β-catenin的核内外分布变化。结果血小板源生长因子BB(50μg/L)显著促进大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖(0.876±0.041比0.370±0.082,P0.01),在给予不同浓度(10、20和40μg/L)JNK抑制剂SP600125后平滑肌细胞增殖成浓度依赖性下降(0.635±0.063、0.470±0.044和0.381±0.054比0.876±0.041,P0.01)。血小板源生长因子BB刺激15 min后p-JNK及60 min后细胞核内β-catenin的表达达峰值,在给予不同浓度SP600125后p-JNK和细胞核内β-catenin的表达成浓度依赖性下降。免疫荧光检测提示血小板源生长因子BB刺激60 min后β-catenin核内聚集明显,而在给予SP600125(40μg/L)后β-catenin核内聚集受到了抑制。结论 JNK磷酸化在血小板源生长因子BB刺激引起的β-catenin核内聚集中起关键调节作用。     

C-JNK信号通路对糖尿病大鼠心肌Ito钾通道重构的影响

目的研究c-JNK信号通路在糖尿病(DM)大鼠左室心肌细胞电压门控钾通道(Kv)重构中的作用和内在调控机制。方法将50只健康SD大鼠随机分为DM组[n=25,采用链尿佐菌素(STZ)诱导成模]和对照组(sham)(n=25)。应用全细胞膜片钳方法记录DM组与sham组大鼠心室肌瞬时外向钾电流(Ito);使用非放射性JNK激酶分析kit进行c-Jun活性测定。应用JNK抑制剂SP600125(10M)对DM大鼠心肌细胞进行体外孵育,观察孵育前后心肌细胞Ito的变化。用硫氧还蛋白还原酶(TrxR)抑制剂金诺芬(AF)对经JNK抑制剂SP600125孵育的大鼠心肌细胞进行处理,观察处理前后心肌细胞Ito的变化。应用抗Kv4.2抗体对Kv4.2的含量进行检测,检测结果使用UVP生物成像系统进行分析。结果DM组心肌JNK活性显著升高超过1倍,而Ito显著降低[Sham组:(31.2±3.4)pA/pF,n=16;DM组:(15.4±3.1)pA/pF,n=17;P<0.05]。DM大鼠心室肌细胞经JNK抑制剂SP600125(10 M)处理4 h后,Ito电流密度可恢复至Sham组水平[DM+SP600125组:(31.9±3.8)pA/pF,n=18;Sham组:(31.2±3.4)pA/pF,n=16;P<0.05];且sham组经SP600125处理后的最大Ito电流强度[(29.8±3.4)pA/pF,n=9]和未经处理的sham组无统计学差异。DM心肌经膜渗透性蛋白抑制剂JNKI-1(10 M)处理后,Ito密度也有显著增加,而sham组经相同处理后无改变。TrxR抑制剂AF显著抑制了SP600125对DM大鼠心肌Ito电流的增大作用[DM+AF+SP600125:(15.5±3.2)pA/pF,n=17],而AF对sham组Ito无明显影响。JNK抑制剂SP600125治疗后DM大鼠心肌的Kv4.2蛋白表达量显著增大,尽管未完全恢复到sham组心肌水平,但与先前在DM大鼠心肌所观察到的Ito电流改变一致。而JNK抑制并没有明显改变sham组心肌的Kv4.2蛋白表达量。结论DM大鼠心肌钾通道重构是氧化还原敏感的,可能通过持续性激活c-JNK信号通路促进Ito重构。在DM心肌中,JNK活性显著增高,Kv通道的电流密度降低;抑制JNK信号通路后可显著改善Kv通道重构,这一过程可能被硫氧还原蛋白系统所调控。     

mTOR与JNK信号通路在人结肠癌HT-29细胞中的作用及相互关系

目的:探讨mTOR和JNK信号通路在结肠癌中作用及可能的相互作用关系.方法:免疫方法检测p-mTOR及p-JNK在结肠癌组织和正常结肠组织中的表达情况.体外培养人结肠癌细胞株HT-29细胞,转染mTOR siRNA抑制mTOR表达,使用JNK抑制剂SP600125抑制JNK表达.Western blot法分别检测抑制mTOR和JNK后HT-29细胞中p-JNK、p-mTOR蛋白的表达.结果:在人结肠癌组织中p-mTOR和p-JNK表达阳性率分别为60%和56%,且两者阳性表达相关性分析存在正相关性(r=0.480,P<0.01).HT-29细胞株中抑制mTOR信号通路后mTOR siRNA转染组和空白对照组、Control siRNA组比较增殖(A值)明显降低,差异具有统计学意义(0.275±0.033,0.460±0.376vs0.479±0.012,均P<0.01),mTOR siRNA转染组凋亡指数明显高于空白对照组和Control siRNA组,差异具有统计学意义(12.330±1.533,1.000±0.147vs1.667±0.577,均P<0.01).抑制JNK信号通路后可见随着SP600125...     

JNK信号转导通路在β-淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用机制

目的研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的机制以及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK—c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法在培养的PC12细胞中加入Aβ25-35共孵育，用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V)方法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果PC12细胞经过Aβ25-35处理后发生凋亡，呈时间依赖性细胞生存率下降，免疫学方法检测显示细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。流式细胞仪检测显示在使用SP600125后，细胞生存率上升，差异具有统计学意义。结论体外PC12细胞培养显示Aβ25-35可诱导细胞凋亡，SP600125对Aβ25-35的细胞毒性具有保护作用，JNK—c-Jun信号转导通路可能参与了上述细胞毒作用机制。     

肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1和Ⅰ型胶原的影响

目的:研究肝素与大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)作用后转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的变化及意义.方法:大鼠肝星状细胞以1×10~8/L浓度接种于96孔培养板,每孔100μL.实验分组为肝素Ⅰ组、肝素Ⅱ组、肝素Ⅲ组,加入肝素使各组培养液中肝素浓度分别是10,100,1000 mg/L,加生理盐水为对照组(每组6孔重复3次)培养48 h.培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存,ELISA法检测其上清液TGF-β1和Ⅰ型胶原水平,MTT法观察细胞增殖情况.结果:肝素Ⅱ组和Ⅲ组HSC培养上清液TGF-β1水平均显著低于对照组(4.59±1.27 ng/L,3.34±1.13 ng/L vs 5.95±1.72 ng/L,P均<0.01),肝素各组Ⅰ型胶原水平均低于对照组(87.20±9.30 ng/L,73.17±12.04 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,63.31±10.93 ng/L vs 95.61±12.55 ng/L,P均<0.05),肝素Ⅲ组平均吸光度低于肝素Ⅰ组和对照组(0.29±0.07 vs 0.42±0.12,0.46±0.17,P均<0.05).结论:大鼠肝星状细胞在肝素作用下TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌受抑制,其增殖减少.     

金黄益胆颗粒对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中ICAM-1、TGF-β1表达的影响

目的:探讨金黄益胆颗粒对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法:清洁级SD♂大鼠54只,随机分为对照组、模型组、治疗组,每组18只,各组又分为2h组、6h组及12h组3个时间段组,每个时间段组6只大鼠.5%牛磺胆酸钠逆行注射建立SAP大鼠动物模型.行胰腺组织镜下病理评分,免疫组织化学SP两步法检测胰腺组织中ICAM-1、TGF-β1蛋白的表达.结果:Schmidt胰腺组织镜下评分显示,与模型组比较,造模后6h、12h,治疗组大鼠胰腺组织的病理损害程度明显减轻(10.33±0.82vs14.00±0.63,P=0.000;9.67±0.82vs15.33±0.52,P=0.000).治疗组12h后ICAM-1阳性细胞表达明显减少(3.67±0.76vs6.40±0.72,P=0.000).治疗组6h和12h后TGF-β1表达明显增强(3.77±0.78vs0.60±1.00;5.17±1.42vs2.23±1.01,均P=0.000).结论:金黄益胆颗粒能够降低ICAM-1的表达,升高TGF-β1的表达,显著改善早期SAP大鼠胰腺...     

抑制糖原合成酶激酶3活性对Toll样受体4介导肝脏炎症反应的调节作用

目的 研究抑制糖原合成酶激酶3 β (GSK-3 β)活性对Toll样受体4介导的炎症反应的调节作用. 方法 以C57BL/6小鼠为研究对象,分别建立不同灌注时间的小鼠热缺血再灌注损伤模型以及通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠肝脏炎症模型；通过小鼠的股骨分离出骨髓干细胞,经过分化培养获得骨髓来源的巨噬细胞,随后通过LPS激活TLR4配体引发炎症细胞模型.通过SB216763抑制GSK-3β活性,分别干预小鼠肝脏炎症模型和炎症细胞模型.通过Western blot检测肝脏丝裂原活化蛋白激酶的表达；实时定量PCR方法检测细胞炎症因子的基因表达.用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,用LSD- f检验进行组间比较. 结果 在肝脏缺血再灌注过程中,丝裂原活化蛋白激酶(包括ERK、JNK和p38)的磷酸化水平在灌注1h后增加,ERK、JNK和p38的活性升高,但在4h后,这种活性激活消失,回归到起始水平.此外,LPS刺激巨噬细胞激活ERK、JNK在15 min被磷酸化而激活,p38蛋白在1h左右磷酸化而被激活.SB216763预处理一定程度上抑制了LPS刺激巨噬细胞的ERK、JNK和p38蛋白磷酸化的激活.无论是小鼠肝脏炎症模型还是炎症细胞模型,GSK-3 β活性抑制均促进了抗炎细胞因子白细胞介素10 (IL-10)的表达,而显著抑制了促炎细胞因子IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)α,IL-6和IL-1β的基因表达.在对照组、炎症组及SB216763干预组小鼠炎症模型中炎症因子基因表达结果显示,IL-10相对表达量分别为0.21±0.08,0.83±0.21,1.76±0.67,F=3.16,P=0.027;IL-12相对表达量分别为0.11±0.05,0.85±0.11,0.43±0.10,F=2.67,P=0.038；TNFα相对表达量分别为0.052±0.012,8.11 ±0.98, 3.9±0.82,F=4.13,P=0.016; IL-1 β相对表达量分别为0.12±0.07,2.51±0.62,1.28±0.33,F=2.22,P=0.030;IL-6相对表达量分别为0.22±0.08,6.37±0.81,2.11±0.63,F=3.21,P=0.024.结论 抑制GSK-3 β活性选择性地调节肝脏中枯否细胞抗炎和促炎因子的表达从而引起肝脏缺血再灌注损伤的改善,随着促炎细胞因子被抑制,使得炎症反应所诱导的肝细胞凋亡也间接地受到有效控制.     

IL-17和ECP与哮喘患者临床病情轻、重程度的关联性分析

目的探讨IL-17、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophile cationic protein,ECP)与哮喘患者病情严重度的关联性。方法前瞻性收集2013年1月至2016年1月我院收治的哮喘患者60例作为研究组(轻度哮喘、中度哮喘和重度哮喘各20例),同时收集60例健康成人作为对照组。主要观察指标为IL-17和ECP,次要观察指标为FEV_1和PEF。结果与健康成人对比,哮喘患者IL-17显著升高(71.92±22.12 vs.38.08±9.18 pg/mL,P=0.000);ECP显著升高(12.10±2.60 vs.2.52±1.87μg/L,P=0.000);FEV_1显著降低(53.82±10.20 vs.79.68±6.62%,P=0.000);PEF显著降低(475.27±38.86 vs.624.38±44.36 L/min,P=0.000)。随着哮喘严重度的增加,IL-17水平显著增加(P=0.000);ECP水平显著升高(P=0.000);FEV_1显著降低(P=0.000);PEF水平显著降低(P=0.000)。IL-17与ECP显著相关(r=0.763,P=0.000)。结论 IL-17和ECP与哮喘患者病情严重度紧密相关。     

Effects of ethanol on insulin-like growth factor-Ⅰ system in primary cultured rat hepatocytes： Implications of JNK1/2 and alcoholdehydrogenase

AIM： To evaluate the effects of ethanol on the insulin- like growth factor-Ⅰ （IGF-Ⅰ） system involved in c-Jun N-terminal kinase （JNK1/2） and alcoholdehydrogenase （ADH） activity in primary cultured rat hepatocytes. METHODS： Hepatocytes isolated from male Sprague-Dawley rats were incubated with various concentrations of ethanol for different durations of time. The cells were pretreated with SP600125 （10 μmol/L） and 4-MP （200 μmol/L）, and then treated with ethanol （200 mmol/L）. We then measured IGF-Ⅰ secretion, IGF-Ⅰ mRNA expression, cell viability and JNK1/2 activity by radioimmunoassay, RT-PCR, MTT assay and Western blot, respectively （n = 6）. RESULTS： Ethanol induced the activity of phospho （p）-JNK1/2, reaching a maximum at 60 min and then decreasing at 180 min. The effects of ethanol on the IGF-Ⅰ system were increased at 60 min （secretion： 7.11 ± 0.59 ng/mg protein vs 4.91 ± 0.51 ng/mg, mRNA expression： 150.2% ± 10.2% vs 101.5% ± 11.3%, P = 0.045） and then decreased at 180 min （secretion： 3.89 ± 0.25 ng/mg vs 5.4 ± 0.54 ng/mg protein; mRNA expression： 41.5% ± 10.4% vs 84.7% ± 12.1%, P = 0.04）, however cell viability was decreased in a dose- and time-dependent manner. SP600125 blocked the ethanol-induced changes （at 60 min）. Additionally, 4-methylpyrazole prevented the ethanol-induced decreases in the IGF-Ⅰ system, cell viability and p-JNK1/2 activity （at 180 min）. CONCLUSION： This study suggests that ethanol- induced p-JNK1/2 activation is associated with the IGF-Ⅰ system and cell viability in hepatocytes. Furthermore, alcohol dehydrogenase is involved in the relationship between ethanol-induced inactivation of p-JNK1/2 and the changes of the IGF-Ⅰ system and cell viability.     

β-雌二醇及其纳米粒对肝星状细胞TGF-β1和CTGF的影响

目的本研究首先观察纳米化后的β-雌二醇纳米粒是否和普通β-雌二醇一样对HSC增殖仍具有抑制作用；再比较β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒对TGF-β1和其下游信号CTGF mRNA和蛋白表达的影响；进一步探讨β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒抗肝纤维化的机制。方法①用不同浓度的β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒干预HSCs，噻唑蓝（MTT）法检测不同时间点β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒对HSCs增殖的影响。②用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF的mRNA表达的影响。③用免疫细胞化学方法分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF蛋白的表达的影响。结果MTT法发现β-雌二醇、β雌二醇纳米粒都能抑制HSCs的增殖，下调HSCs TGF-β1mRNA、CTGF mRNA的表达，减少HSCs TGF-β1、CTGF蛋白表达量，且β-雌二醇纳米粒作用更强。结论β-雌二醇纳米粒和β-雌二醇一样具有抑制HSC增殖的作用，其抗肝纤维化的机制可能是通过抑制TGF-β1及其下游信号CTGF的mRNA和蛋白表达有关。     

JNK MAPK信号通路在食管癌细胞系Eca-109细胞中的作用机制

目的探讨c-jun氨基末端激酶1/2（c-jun N-teuninal kinase,JNK 1/2）信号通路在食管癌细胞系Eca-109细胞中的作用。方法体外培养Eca-109细胞,以特异性JNK信号转导通路抑制剂SP600125处理Eca-109细胞;RT-PCR的方法检测JNK1和JNK2基因的表达,Western blot法检测JNK和p-JNK蛋白的表达,MTT（3-（4,5-Dimethylthiazol-2-yl）-2,5-di-phenyltetrazolium bromide）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Eca-109细胞经SP600125分别处理24h和48 h后,分别与对照组比较,JNK1 mRNA的表达无统计学差异（均P〉0.05）,JNK2 mRNA的表达也无统计学差异（均P〉0.05）,但活化的JNK即P-JNK1/2蛋白的表达显著减少,细胞的增殖显著被抑制,细胞的凋亡率有统计学差异（均P〈0.05）。结论 JNK信号通路可能在Eca-109细胞的发生发展中发挥重要作用。     

白介素-10对大鼠肝星状细胞核因子-κB、细胞因子及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:探讨白介素-10对大鼠肝星状细胞的干预作用和作用机制. 方法:分离大鼠肝星状细胞(HSC),采用不同浓度的白介素-10处理后,分别应用ELISA法和Northern blot检测大鼠HSC中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子- α和白介素-1β蛋白和mRNA的表达,采用凝胶迁移率法检测核因子κB(NF-κB)活性. 结果:白介素-10可明显下调大鼠HSC ICAM-1、TNF-α及IL-1β表达,并且抑制NF-κB活性,其效应呈浓度依赖性. 结论:白介素-10可能通过下调HSC ICAM-1、TNF-α及IL-1β表达和抑制NF-κB活性来发挥其抗炎和抗纤维化作用的.     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.