一种显示肾组织结构的新染色法——酸性复红银染法

对肾小球和其他肾脏疾病的诊断,主要依赖于对活检标本的光镜、电镜观察,或利用免疫细胞化学技术进行诊断,但电镜及免疫组化方法并非在所有病理实验室都可施行,大部分诊断仍需依赖常规福尔马林固定、石蜡包埋组织进行普通染色和一系列特殊染色.如过碘酸雪夫氏反应,Masson染色法、地衣红弹性蛋白染色和银染法等.许多肾小球的异常取决于光镜的鉴别,因此,肾组织各种结构的清晰显示与分辨至关重要,我们将常规染色与一些特殊染色相结合,建立一种显示肾组织各种结构的染色方法.     

石蜡包埋肾活检组织改作电镜样品的快速制备方法

电镜检查在肾小球疾病的诊断中起着十分重要的作用,但在工作中常因电镜样品没有肾小球,而放弃最终的诊断,因此利用石蜡包埋的肾穿组织转制电镜样品有着极高的临床诊断意义.目前报道的石蜡包埋组织转制电镜样品的方法[1-3],存在着步骤繁琐、操作性差或不适合肾穿标本等缺点.为解决上述问题,我们结合肾活检超微病理观察要求,摸索了一种省略锇酸后固定的快速石蜡包埋组织改制电镜样品的方法.     

半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较

免疫金 -银染色 ( Immuno-gold- silver,IGS)是 1 983年 Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法 ,可在光镜下观察到阳性反应结果。此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可 ,给科学研究带来很大的方便。它特异性强 ,操作简便 ,而且经济 ,特别是近十几年来 ,经过不断改进 ,应用到半薄切片中 ,为免疫电镜的研究提供了基础。我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究。1、材料和方法　 1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块。 1 .2方法　 1 )用Na OH无水乙…     

PASM-Masson套染在肾穿刺活检中的应用

肾穿刺活检组织病理诊断是肾脏疾病诊断以及鉴别的重要方法,包括常规HE染色、特殊染色、免疫荧光染色及电镜检查等。其中,特殊染色是肾穿刺活检组织的重要辅助检查方法,主要包括PAS染色、PASM染色、Masson染色以及刚果红染色等。在日常工作中,如果对穿刺肾组织分别进行染色,所需时间长,工作量大,不利于病理医师镜下观察免疫复合物沉积及其位置[1]。     

临床肾脏穿刺超微病理诊断透射电镜制样的方法改进

肾脏疾病是临床常见的疾病之一,严重地威胁着人类的健康.随着肾脏穿刺组织病理活检技术的广泛开展,电镜超微病理诊断已成为肾脏疾病病理诊断中常规的检查方法,研究显示电镜观察对30%～50%的肾活检病例的诊断提供有价值的信息,电镜技术从过去的单纯应用于科研走向临床辅助检查,对肾脏疾病阐明病因、发病机制发挥了重要作用.同时,电镜对一些光镜认识不清的肾病能起到确定诊断、辅助诊断和分型的作用,对其他组织肿瘤的诊断、分型、识别组织来源、判断预后等,以及对肌肉的疾病、肝脏淤胆性疾病的诊断方面也都起到重要的作用.     

肾穿标本的电镜样品制备方法

由于肾脏穿刺时取到的样品很小,穿到的部位又不易掌握,所以穿到的组织中常常没有肾小球.而肾小球的病变情况对肾脏疾病的诊断关系很大.在按常规进行电镜制样时,组织中有无肾小球或是否是肾脏组织,只有在包埋好切厚片观察时才能知道.而用本文介绍的方法既可以在标本包埋前就知道标本中有无肾小球或是别的组织,又可缩短制样时间.为临床医生的诊断,更快地提供有参考价值的资料.1 材料与方法1.1 试剂 8%多聚甲醛,2%戊二醛,Dodecenyl-succinic Anhydride,Methyl nadic anhydride,Epon812,DMP-30[2.46-tri(dimethylaminomethyl)phenol]0.16ml.1.2 方法 病人的肾穿标本用8%多聚甲醛(pH7.30)和2%戊二醛等量混合液(最终浓度多聚甲醛     

小鼠肾脏发育中凋亡细胞的超微结构变化

1　材料和方法1 1　动物取昆明小鼠 ,雌雄比例 3∶1同窝饲养 ,以雌鼠阴道精栓出现为第 1日计算胎鼠胚龄。部分孕鼠分笼饲养 2 0日后 ,每天早八时观察分娩情况 ,新生仔鼠按生后计算日龄。选取 1 4、1 8日胎鼠各 4只 ,生后 1、7、1 4日龄仔鼠各 4只为观察对象。1 2　光镜和电镜标本制作　在冷操作条件下切开胎鼠和仔鼠腹部 ,取左肾于 2 5 %戊二醛内固定。胎鼠做全肾树脂包埋 ,仔鼠肾脏经肾门做矢状面切开 ,皮质和髓质分别进行树脂包埋。ＬＫＢ Ｖ型超薄切片机半薄连续切片 ,甲苯胺蓝染色 ,按Ｋｏｓｅｋｉ判断光镜下凋亡细胞后制超薄切片 ,…     

免疫电镜技术在肾活检中的应用

肾活检标本中 ,多数是免疫复合物介导的肾小球肾炎 ,通过免疫病理学方法检测肾小球内的免疫沉积物的性质和分布 ,对于最终的病理诊断至关重要。免疫电镜检查对肾小球炎的病理诊断虽然不是常规方法 ,但为了精确分析沉积于肾小球的抗原抗体复合物 ,免疫电镜仍为行之有效的手段。本文探讨了肾活检标本的低温包埋及常规树脂包埋的胶体金标记的透射电镜方法。材料和方法选取膜性肾病及 Ig A肾病患者肾活检组织标本各 2例 ,经固定 ( 4 %多聚甲醛加 0 .1 %戊二醛混合固定液于 4℃固定 2 h) ,蔗糖冲洗液洗后 ,0 .5 M氯化铵溶液封闭游离醛基 4℃ 30…     

肾穿标本六胺银染色的改进

肾穿标本六胺银染色的改进刘华庆，肖庆邦六胺银染色常用于显示基底膜。虽然显示基底膜的方法还有ＰＡＳ染色、Ｍａｓｓｏｎ三色等，但在诊断肾脏疾病中，尤其在诊断和研究肾小球疾病时，六胺银染色是最重要最常用的特殊染色，是ＨＥ和ＰＡＳ染色等方法难以取代的。我们采...     

HE染色在环氧树脂半薄切片中的应用

目前 ,对Ｅｐｏｎ812包埋的半薄切片进行光镜观察 ,其染色多数采用盐基性染料如美蓝、甲苯胺蓝、结晶紫、硫堇和碱性品红等无需脱脂的单色染色法。虽然方法简单、时间短 ,但效果很差 ,细胞核、细胞质、细胞膜与细胞间质的区别不明显 ,有时结构不清、难以定位 ,而且染色后的切片易褪色 ,不易做长期保存。笔者应用ＨＥ染色法 ,染色效果比较理想 ,特别对临床肾活检超微病理诊断定位有重要意义。现将方法和体会介绍如下。1　染色方法1.1　常规环氧树脂Ｅｐｏｎ812包埋 　组织经 3%戊二醛前固定 2ｈ ,1%锇酸后固定 1 5ｈ ,梯度乙醇 (5 0 %、70 %…     

免疫胶体金在标记超薄切片中抗原的几点体会

金标法是利用胶体金在碱性环境中带负电的性质 ,使其与抗体相吸引 ,从而将抗体标记。我们在使用免疫胶体金标记超薄切片抗原的实验中深深地体会到 ,要提高标记阳性的成功率 ,某些因素将在实验中起到很重要的作用。1、材料和方法1 .1材料　 2 0例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为 Ig A肾病的肾活检组织的环氧树脂包埋块。1 .2方法　取肾活检组织 ,经 0 .0 5 %戊二醛 ,1 %多聚甲醛 (二甲砷酸钠缓冲液配制 )固定 3- 4 h,1 % Os O4后固定 2 h,梯度丙酮脱水 ,Epon81 2包埋 ,6 0℃聚合 1 2 h,制备超薄切片 ( 5 0 - 70 nm) ,粘贴于带有 formar膜的…     

Warthin-Starry特殊染色、免疫组织化学和透射电镜在猫抓病病理诊断中的作用

目的 探讨Warthin-Starry银染色法、抗汉赛巴尔通体单克隆抗体和电镜在检测人巴尔通体感染、确诊猫抓病中的实用价值.方法 收集1998年1月至2008年12月诊断的77例符合猫抓病形态学改变的石蜡包埋淋巴结组织,分别使用Warthin-Starry银染色法和抗汉赛巴尔通体单克隆抗体的EnVision法进行病原体的检测.选择二者均检出丰富细菌的5例进行透射电镜观察.结果 (1)透射电镜查见汉赛巴尔通体呈多形性,圆形、椭圆形、短棒状、杆状,长0.489～1.110μm,宽0.333～0.534 tun,集群性生长.(2)61.0%(47/77)的病例Warthin-Starry银染色法查见排列成线、成簇、局灶性聚集的黑色、短小、棒状杆菌,细菌绝大多数分布在靠近被膜下的坏死灶内,以存在于细胞外为主.(3)72.7%(56/77)的病例抗汉赛巴尔通体单克隆抗体阳性表达,阳性信号主要呈点状、颗粒状,少数呈线样勾勒出细菌形状,信号定位与Warthin-Starry银染色法一致.(4)59.7%(46/77)的病例Warthin-Starry银染色和抗汉赛巴尔通体单克隆抗体染色均阳性.两种方法联用,病原体总体检出率为74.0%(57/77).二种方法检出率的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 应用Warthin-Starry银染色法、免疫组织化学和电镜技术检测猫抓病病原体能达到确诊猫抓病的目的 ,抗汉赛巴尔通体单克隆抗体染色是较Warthin-Starry银染色更理想的检测方法.     

肾穿标本六胺银染色中微波技术的改进

肾穿标本六胺银染色中微波技术的改进颜亚晖赵建新沈明肾脏疾病中常有肾小球基底膜的病变，而六胺银染色能清楚地显示基底膜。常规六胺银染色所需时间长，为此我们利用微波技术进行肾穿标本六胺银快速染色，使其染色质量较常规染色有了较大的提高，所需时间也大为缩短，结...     

六胺银加马松三色双重染色在肾穿刺活检组织中的应用

肾小球病是发病率较高的疾病，肾穿刺检查是确诊肾脏疾病的重要手段，光镜观察肾组织病变在进行肾小疾球疾病诊断和分类工作中起重要作用[1]。常规HE染色不能清晰地显示肾小球基膜，在实际工作中除免疫荧光抗体检测外， PAS、PASM、Masson 特殊染色才能将基膜清晰地显示出来[2]。尤其是六胺银加马松三色双重染色在光镜下观察基膜增厚和钉突、双轨，对诊断膜性肾小球肾炎及其它各种肾小球疾病有重要价值，是观察肾小球基膜改变的重要方法之一[3]。     

三种特殊染色方法的改进

随着病理技术的发展,免疫组织化学、原位杂交等技术越来越普及,与此同时,传统的特殊染色技术仍然是病理学诊断和鉴别诊断必不可少的技术.尤其在肾、骨髓活检组织的病理学诊断中,特殊染色与苏木精-伊红染色、免疫组织化学、电镜有着同等重要的地位.     

石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用

在肾脏的病理诊断中,肾穿刺组织必须进行冷冻切片免疫荧光染色[1,2]、石蜡切片HE、Masson、PAS、PASM染色和电镜检查等,以达到正确的诊断.光镜观察时须有10个以上的肾小球才能作出客观的诊断[3,4].在肾脏的病理诊断中,冷冻切片免疫荧光染色具有不可或缺的作用,但有时各种原因导致所取的肾小球数目不够或基层单位无冷冻切片设备等因素均给诊断带来困难.因此,我们通过对肾活检组织石蜡切片进行免疫荧光染色,取得了较好的效果,现介绍如下.     

肾穿刺组织荧光加苏木精染色效果观察

在肾脏病理诊断中 ,确定免疫复合物在肾组织中的沉积是很重要的。肾穿组织切片荧光染色后 ,肉眼和普通光镜下是无色的 ,不易观察组织结构 ,加染苏木后 ,则易行光镜观察 ,对荧光无影响。1　材料和方法　　我们取 10例新鲜肾穿组织 ,切 0 5ｃｍ进行冷冻切片 ,切片厚 3μｍ ,采用武汉博士德生物工程有限公司试剂分两组同时行ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ及Ｃ3ｃ荧光染色 ,37℃染色 30ｍｉｎ后行ＰＢＳ洗 3ｍｉｎ× 3次 ,蒸馏水洗。第一组直接缓冲甘油封片 ,第二组浅染苏木精 1ｍｉｎ ,水洗 ,缓冲甘油封片。在荧光镜下分别观察两组切片 ,发现两组切…     

庆大霉素在肾近端小管吸收途径的形态学证据

利用活体肾小管显微穿刺技术 ,将 3H-庆大霉素注入近端小管腔内 ,间隔 5分钟、2 0分钟后 ,用 1%戊二醛分别固定各自的肾小管 ,摘除肾脏 ,将含有显微穿刺的肾小管取出 ,1%锇酸后固定 1小时 ,逐级酒精脱水 ,Epon812包埋 ,半薄、超薄切片 ,铀铅双重染色。光镜放射自显影切片 ,浸入 L M- 1乳胶 7～ 8秒钟 ,置 4℃冰箱中 1～ 2周 ,显影、定影、甲苯胺兰染色 ,显微镜观察并摄影。电镜放射自显影超薄切片 ,碳喷镀后 ,利用金属套环法将 Ilfore- L4核乳胶涂片 ,放置 4℃冰箱中 2～ 3个月 ,显影、定影。JEM- 12 0 0型电子显微镜观察。结果 :光镜放…     

石蜡切片免疫组化套染PAS在肾活检组织病理诊断中的应用

在肾穿刺组织的病理诊断中,采用常规冷冻切片免疫荧光染色、石蜡切片HE染色、PAS染色、Masson染色、PASM染色以及电镜观察,以得到准确的病理诊断。但由于肾穿刺为有创性检查,再加上术者技术精疏有别以及患者个体差异,不仅所取组织十分细小,而且标本质量亦常不尽人意;另外,没有能力购置电镜的单位难以做超微诊断。因此需要我们摸索新的方法,以达到最大限度获得疾病信息,同时又省时、省力,且节约成本。作者实验室前期已经建立了石蜡切片免疫荧光染色法,其他学者也有相关报道[1-3]。最近又建立了肾活检组织石蜡切片免疫组化结合PAS染色方法,取得了较好的效果,现报道如下。     

免疫病理技术对诊断肾病的价值

众所周知,肾穿剌组织检查,包括光镜,免疫荧光（或免疫酶标）和电镜检查,对于肾脏疾病,尤其是肾小球病的组织病理学分类或病理学诊断常起决定性作用。而对其诊断的正确与否,又直接关系到对肾病患者的合理治疗及其预后的判断。肾活检组织的免疫病理学检查,即免疫荧光或免疫酶标技术对沉积于肾组织,