大鼠减体积肝移植腹腔出血的原因分析

目的 探讨大鼠减体积肝移植腹腔出血的原因.方法 实验大鼠均为健康的SD大鼠,体质量260～280 g,供体为雌性,受体为雄性,供、受体体质量相差10 g左右,一般为供体体质量比受体体质量轻;供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;受体采用双人裸眼配合操作建立大鼠减体积的稳定模型.结果 成功实施的270对大鼠减体积肝移植模型中,因腹腔出血而死亡44例,死亡率为16.3%;出血部位的总体分布为肝上下腔静脉吻合口出血28例次,肝脏包膜渗血9例次,肝左外侧叶减体积结扎点出血9例次,肝乳头叶结扎点出血7例次,肝三角叶结扎点出血7例次,右肾上腺和腰静脉出血5例次,肝脏人为损伤出血4例次,门静脉套管口出血4例次,肝下下腔静脉套管口出血4例次,其中肝上下腔静脉吻合口合并肝左外侧叶减体积结扎点出血的有8例,两个减体积结扎点均出血的5例;10例经过缝扎或单纯结扎后止血,肝脏包膜渗血采用热盐水冲洗、浸泡后自行止血6例.结论 减体积肝移植术后腹腔出血最常见的是肝上下腔静脉吻合口出血,通过对大鼠减体积肝移植术后腹腔出血的原因分析,其结果 可以指导我们实验手术操作的进一步改进.从而提高大鼠肝移植模型的实验手术成功率.     

大鼠减体积肝移植模型的技术改进及肝再生的初步观察

目的:建立稳定的大鼠减体积肝移植模型,并初步观察移植后肝脏再生的情况。方法:雄性SD大鼠,采用改良“二袖套法”建立大鼠减体积肝移植模型,无肝期(17.0±3.5)min。分别称取供、受体肝脏重量及供肝重量。术后1、4、7天处死大鼠,称取肝脏重量并取肝组织行组织学检查。结果:术后1周存活率85％。术后7天时受体肝脏重量已恢复至术前水平。组织学检查术后4、7天的肝组织可见二倍体及多倍体的肝细胞。结论:通过技术改进,提高了该模型建立的稳定性。大鼠减体积肝移植后供肝仍具有较强的再生能力。     

三袖套法大鼠减体积肝移植模型的建立

目的：建立简便实用的大鼠减体积肝移植模型。方法：切除供体大鼠肝脏体积的６８％后移植给受体大鼠，用袖套法吻合肝上下腔静脉，门静脉及肝下下腔静脉。结果：共施行减体积肝移植手术３６例，术后２４ｈ存活率９１．７％，７ｄ存活率５８．３％，７ｄ移植肝重量达原受体大鼠肝脏的７８．７％，１４ｄ，２１ｄ分别达到１０１．６％与１０２．１％，结论：三袖套法大鼠减体积肝移植模型操作简单，稳定可靠，重复性好，是一种理想的动     

不同体积大鼠原位肝移植的试验研究

目的探讨三种不同体积(100%、50%和30%)大鼠原位肝移植术后生存时间,肝功能变化等情况。评估移植物体积对于大鼠原位肝移植的影响。方法建立100%、50%和30%体积的大鼠原位肝移植模型,观察术后生存时间,术后肝功能改变及肝脏组织病理改变。结果术后14d生存率分别为:85%、70%和10%。术后肝功能变化表明30%肝移植组术后损伤较重。病理显示50%及30%肝移植组术后肝脏损害严重,30%组尤为明显。结论移植物的体积对于术后存活率具有明显影响,但外科技术的改进可能提高小移植物受体的术后存活率。     

大鼠肝移植术后肝脏再生

目的：研究不同体积大鼠肝脏移植后肝的再生性变化。方法：利用大鼠全肝原位移植和减体积肝移植模型,将不同体积的肝移植给体积相同的受体,观察术后移植肝的体积变化及超微结构的变化。结果：供体肝脏与受体肝脏重量相同,移植术后无明显变化,而供体肝脏小于受体肝脏,移植后迅速生长,7d可接近原受体肝脏的大小。结论：大鼠肝脏移植后再生能力增强,肝脏再生的大小取决于受体肝脏的大小,而与原\供体肝脏大小无关。     

胆汁淤积性肝硬化大鼠模型改良的研究

目的：构建肝纤维化大鼠模型,并对经典结扎胆总管(BDL)复制模型方法进行适当改进。方法：80只SD雄性成熟大鼠,按随机数字表法分为A组40只、B组40只,分别运用胆总管结扎法和肝门部肝总管缝扎法先后两次造模,各取其中10只为假手术组进行对照,术后1周眼眶取血采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL、GGT、A/G)检测,术后4周HE染色观察大鼠肝组织病理学变化,采用免疫组化染色分析肝脏组织α-SMA和CK-19表达水平。结果：两种方法均可均明显肝功能损害表现;部分标本胆小管增生明显,肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝脏α-SMA和CK-19表达水平明显升高,胆总管结扎组死亡率为66.7%,肝门部肝总管缝扎组死亡率为26.7%。结论：肝门缝扎法可成功建立胆汁淤积性肝硬化大鼠模型,能够明显降低模型动物死亡率,提高模型质量及实验效率。     

大鼠减体积肝移植术后肝脏细胞骨架差异蛋白的表达变化

目的 利用蛋白质组学及相关技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏参与细胞骨架差异蛋白的表达变化.方法 实验首先用改良法建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型,然后在术后1,3和7d获取移植术后肝脏组织,最后应用蛋白组学技术与预先获取的供、受体原肝脏组织建立双向凝胶电泳图谱,再利用串联质谱(MS-MS)分析及数据库对胶上差异表达的蛋白质点进行鉴定.结果 本次实验中所有蛋白质点采用变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择,结果总共发现了72个差异点,应用串联质谱分析和数据库等对差异质点进行分析和鉴定,发现有32个蛋白的功能比较明确,其中有3个差异表达的蛋白在减体积移植术后肝脏参与细胞骨架的过程,表达变化比较明显,差异蛋白质点总数占所有差异表达质点的7％.结论 应用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏病理生理过程中细胞骨架差异蛋白的变化,对于进一步研究细胞骨架蛋白在肝移植术后肝脏病理生理过程中的作用及作用机理有重要的意义.     

双搭桥分流法大鼠自体原位肝移植模型的建立

目的 :探讨大鼠自体原位肝移植模型的建立方法。方法 :分别采用门静脉和下腔静脉双搭桥法建立大鼠自体原位肝移植模型 ,即用自制双头静脉插管和静脉内置管完成门静脉 左肾静脉搭桥、肝后下腔静脉内置管行临时性分流 ,在体持续低温灌洗保存肝脏 ,观察复流后肝脏形态学变化和肝细胞超微结构改变。结果 :本模型手术成功率 94% ,搭桥时间 2 0～ 2 5min ,光镜及透射电镜下肝细胞结构形态无明显变化。结论 :双搭桥分流大鼠自体原位肝移植方法可行 ,能作为肝移植基础理论研究的模型。     

大鼠肝癌模型的化学诱导及肝癌肝移植模型的建立

目的 探讨大鼠肝癌模型的化学诱导方法和肝癌肝移植模型建立的手术操作技巧。方法 采用二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DENA）诱发大鼠肝癌；在Kamada用“二袖套法”吻合血管的基础上、进行改良，并重建大鼠肝动脉血供，建立肝癌大鼠原位肝移植（OLT）模型。结果 诱癌18周以后，诱发肝癌组大鼠行肝移植和不行肝移植两组的1个月存活率分别为56．3％和21．4％，其差异有统计学意义（x^2=5．129，P〈0．05）。大鼠肝癌肝移植实验组手术成功率为87．5％，肝移植对照组手术成功率为90．0％；肝癌肝移植实验组中，移植术后肿瘤的复发和转移多表现为肺部转移和腹腔转移，而移植肝肿瘤复发仅2例；肝癌肝移植实验组和肝移植对照组的两组累积生存率差异有统计学意义。结论 DENA诱发肝癌的方法能大批量诱发出相对稳定的肝脏肿瘤；肝癌肝移植可以明显提高肝癌大鼠生存率；重建肝动脉血供的大鼠原位肝移植模型的是一个更符合生理和肿瘤演进的OLT模型。     

双袖套法大鼠原位肝移植术的改进

目的 探讨双袖套法大鼠原位肝移植模型的手术改进方法。方法 采用自制套管,供受体SD大鼠均取腹部横切口,受体无肝期前预置门静脉缝扎牵引线,肝上下腔静脉采用血管膜端端“三定点”吻合法,门静脉及肝下下腔静脉采用袖套吻合法,用自制“小针沟”排气。结果 行大鼠原位肝移植术96次,其中正式实验40次。改进后正式实验,供体手术时间29min,袖套准备时间10min,受体手术时间51min,无肝期17min;2d存活率95％（38／40）,1周存活率92％（37／40）。结论 ①改进的双袖套法大鼠原位肝移植术可在单人直视下进行,安全确切实用。②所有吻合均应无张力、保持原位,耐心细致的手术操作是模型成功的关键。     

特利加压素联合FK-409在大鼠减体积肝移植模型中对移植肝的保护作用

目的 在大鼠减体积肝移植模型中联合应用特利加压素和FK-409探究其对受体移植肝的保护作用.方法 使用30%体积供肝行SD大鼠同系肝移植, 监测术后门静脉压力、血谷丙转氨酶 (ALT) 、总胆红素水平和术后生存时间, 构建有效的减体积肝移植模型.利用减体积肝移植模型作为载体, 根据不同的干预手段将受体大鼠分为特利加压素处理组、FK-409处理组、特利加压素处理联合FK-409处理组和对照组, 监测术后各组门静脉压力、血谷丙转氨酶 (ALT) 、总胆红素水平和术后生存时间, 统计并分析特利加压素处理联合FK-409处理对减体积肝移植移植肝的保护作用.结果 在减体积肝移植模型中, 特利加压素联合FK-409处理组与对照组比较, 术后门静脉压力显著小于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 术后血清ALT、总胆红素显著低于对照组, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 术后生存时间较对照组明显延长, 差异有统计学意义 (P<0.05) , 在减体积肝移植模型中联合使用特利加压素、FK-409可有效保护移植肝脏.结论 特利加压素联合FK-409可有效保护大鼠减体积肝移植中移植肝, 特利加压素联合FK-409方案可能成为减体积肝移植术后小肝综合症防治的潜在药物处理方案.     

Reduced-size orthotopic liver transplantation with different grade steatotic grafts in rats

Objective To explore the survival time, pathological change and liver regeneration in different kinds of reduced-size liver transplantation in rats using steatotic grafts. Methods Macrovesicular and microvesicular steatotic rat liver models were established by feeding rats with a diet consisting of 79% standard chow, 20% lard and 1% cholesterol for different time periods. With modified two cuff vascular anastomoses and end-to-end sutures on the bile duct, reduced-size orthotopic rat liver transplantations were performed in an attempt to explore the ratio of graft weight to recipient body weight, recipient original liver weight and histological and electron-microscopic findings in comparison with whole rat liver transplantations. Results A one-week survival rates for the rats undergoing whole liver transplantation, and those in the 70% reduced-size orthotopic liver transplantation (ROLT) group, the 60%ROLT group and the 50%ROLT group (grade Ⅰ macrosteatotic grafts) were 91.67%, 75%, 75% and 25%. A 2-week survival rate was 83.33%, 75%, 58.33% and 0 respectively. And their graft recipient body weight (GRBW) values SD were 3.56%±0.36%, 2.53%±0.15%, 2.28%±0.12% and 1.83%±0.16%, respectively. In grade Ⅱ macrosteatotic grafts, the one-week survival rate for those undergoiong whole liver transplantation and those in the 70% ROLT group was 83.33% and 25%. In the microsteatosis grafts for whole liver transplantation, 70% ROLT, 60% ROLT and 50% ROLT, the one-week survival rate was 83.33%, 75%, 75% and 33.33%; and the 2-week survival rate was 75%, 66.67%, 66.67% and 0, respectively. The survival rate of the 50% ROLT group using grade Ⅰ macrosteatotic grafts or grafts mainly with microsteatosis was significantly different from that of other groups. While using macrosteatotic grafts in grade Ⅱ, the 1-week survival rate of the 70% ROLT group was very poor. Pathological findings after operation included liver regeneration and portal space with mild lymphocyte infiltration. Improvement in steatosis and dilation of the central vein and sinusoids was observed in some rats.Conclusions In the successful and long-term survival of rat reduced-size liver transplantation using grade Ⅰmacrosteatotic grafts or grafts with microsteatosis, the GRBW values should be over 2.28%±0.12%, and the value of graft-recipient liver weight should be over 60%. Steatotic livers in grade Ⅱ should not be used as grafts in ROLT. Steatosis was improved and even totally cured in some long-term survival rats.     

大鼠小体积肝移植肝动脉重建的意义探讨

目的:探讨肝动脉重建在大鼠小体积肝移植中的意义?方法:采用改良二袖套法建立大鼠40%小体积肝移植模型,实验分动脉重建组和动脉未重建组,观察1周生存率,并于术后1?2?4?7天检测肝功能?移植肝组织学变化和免疫组化法检测肝细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)?结果:动脉重建组1周生存率为66.7%,动脉未重建组1周生存率为50.0% (P > 0.05)?丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TB)术后第1天即开始明显增高,第2天达高峰,以后逐渐降低,动脉未重建组和动脉重建组各时间点相比较,TB第2?7天高于动脉重建组,ALT第2?4天高于动脉重建组,差异有显著性(P < 0.05)?动脉重建组术后中央静脉及肝窦扩张程度相对较轻,可见较多二倍体和多倍体肝细胞?PCNA表达于术后第2天最高,动脉重建组术后第1天的移植肝细胞PCNA阳性表达率高于动脉未重建组,而术后第7天移植肝细胞PCNA阳性表达率低于动脉未重建组,差异有显著性(P < 0.05)?结论:肝动脉重建可明显改善大鼠小体积移植肝的功能,促进移植肝的再生,有效地保护移植肝的组织学结构,减轻术后移植肝的组织学改变,动脉化模型术后早期增殖较静脉化模型活跃?     

大鼠原位肝移植模型制作的术后稳定存活率

目的观察改良“二袖套”法大鼠原位肝移植模型制作的术后稳定存活情况。方法50只W istar大鼠和50只雄性SD大鼠分别作为为供体和受体,通过改良“二袖套”法施行大鼠原位肝移植,观察术后24 h存活率和1周存活率,并分析死亡原因。结果肝移植术后24 h存活率为84.0%(42/50),死亡的8例中麻醉控制不当2例,出血4例、血栓形成2例;1周存活率82.0%(41/50),1例于术后第7天死于脓胸,可能为管饲喂养营养剂引起食道穿孔所致。结论固定的配合,术中仔细、轻柔的操作和熟练的显微镜外科技术,以及改善手术环境和术后饲养环境,是大鼠术后稳定存活的关键。     

Modifications of reduced-size hepatic transplantation in rats

To establish a stable reduced-size hepatic transplantation model in rats. Methods: Liver trans-plantation was performed in accordance with Kamada techniques. Many modifications were made including: Surgical manipulative innovation, adjustment of pre-operative drug administration and removed liver volume. Results: Forty-two rats underwent reduced-size hepatic transplantation; of them 33( 84.6% ) survived more than 1 week. The causes of postoperative death were peritonitis, inferior vena eava thrombns and unknown complications. Condlmion: Manipula-tive innovation and proper drug administration can improve the survival rate of rats apparently. Grafts regeneration canbe triggered by the removal of left lateral segment and caudate lobe.     

大鼠“二袖套法”原位肝移植模型的手术体会

目的：建立稳定的大鼠原位肝移植模型。方法：选用健康雄性Wistar大鼠,参考Kamada建立的＂二袖套法＂原位肝移植模型,并加以改良,统计手术各步骤时间以及受体的生存率情况。结果：共进行移植手术86例。供体手术时间为（29.0±0.8）min,受体手术时间为（42.0±0.7）min,无肝期为（15.0±0.3）min。受体术后24h、1周、1个月和3个月的生存率为分别94.2%、91.7%、88.3%、83.7%。结论：改良＂二袖套法＂原位肝移植模型是器官移植基础研究的稳定的动物模型,重视供体的准备是手术成功的关键。     

50例大鼠肝移植模型的体会

目的：研究大鼠原位肝移植模型的手术技巧及术后并发症的预防及处理。方法：50只SD大鼠作供体,50只Wistar大鼠为受体,通过“二袖套法”施行大鼠原位肝移植。结果：24h存活率90％;周存活率82％。结论：熟练的显微外科技术是模型成功与否的关键。     

稳定大鼠肝移植模型的规范及移植肝灌注方式比较

目的总结建立大鼠原位肝移植稳定模型的规范和提高成功率的措施,比较经门静脉灌注和经腹主动脉灌注对移植肝功能的影响。方法手术显微镜下,用改良的二袖套法进行100例大鼠原位肝移植,并依据灌注方式分组:经门静脉灌注和经腹主动脉灌注组(n=50)。检测术后肝功能,观察组织病理学改变、术后生存率以及手术并发症。结果两组组织病理学表现相同。手术成功率分别为98%(49/50)和96%(48/50),3月存活率分别为93.5%(29/31)和93.3%(28/30),术后肝功能、手术成功率和3月存活率差异无显著性(P>0.05)。结论供肝经门静脉灌注和经腹主动脉灌注均可采用,应根据研究目的选择适当肝移植模型。熟练的显微外科技术、规范细致的手术操作、缩短无肝期时间是提高成功率、减少术后并发症的关键。