蛋白质组学方法鉴定喉鳞状细胞癌中的肿瘤相关蛋白

目的利用蛋白质组学方法，建立人喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）组织及其癌旁正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱，并识别鉴定其差异表达的蛋白质。方法利用固相pH梯度分离人喉鳞癌组织及癌旁正常黏膜组织的总蛋白质，用图像分析软件比较，以识别差异表达的蛋白质；应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱，’然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱，并鉴定出可能与喉癌发生密切相关的13种蛋白质。其中有10种蛋白质在喉癌组织中上调，分别是切丝蛋白1（cofilin-1），核体蛋白SP140（nuclear body protein SP140），内质网素，热休克蛋白90（heatshockprotein90，HSP90），谷胱甘肽S转移酶P（glutathioneS-transferase，GSTP1—1），锰-超氧化歧化酶（superoxidedismutase[Mn]），亲环素A（cyclophilinA），蛋白酶活性复合体2（proteasome activator complex subunit2），载脂蛋白A-I前体（apolipoproteinA．Iprecursor），钙调素（CaM—like protein）。3种蛋白质在喉癌组织中下调，分别是银屑病相关脂肪酸结合蛋白（fatty acidbinding protein，epidermal，E—FABP），钙粒蛋白A（calgranulin A），钙粒蛋白B（calgranulin B）。结论本研究鉴定出了可能与喉癌的发生密切相关的13种蛋白质，提示多种蛋白分子可能同时成为应对这种疾病的有效策略的靶分子，为理解喉癌的癌变机制和改善临床诊治方法提供理论基础。     

喉癌及喉正常黏膜组织的差异蛋白质组学分析

目的 建立喉癌与喉正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,筛选喉癌异常表达的蛋白质.方法 应用双向凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析和生物信息学等技术对9例喉癌和喉正常黏膜组织进行差异蛋白质组学分析.结果 ①获得了重复性较好的喉癌及喉正常黏膜组织的双向凝胶电泳(2-DE)图谱.②PDquest 2-DE图像分析软件对同一病例的癌组织和喉正常黏膜上皮组织各3块凝胶分析,蛋白质斑点数分别为1504±122和1235±164,平均匹配点数分别为1398±143和1136±82,匹配率分别为93%和92%.③从差异蛋白质斑点中取34个进行MS分析,获30个蛋白的肽质量指纹图.④查询数据库鉴定了30个差异蛋白质点,其中一些蛋白质与细胞代谢、信息转导格细胞增生等有关.结论 鉴定了30个喉癌异常表达的蛋白质,为筛选喉癌标志物以及揭示喉癌发病机制提供理论依据.     

成纤维细胞生长因子2型受体在喉癌中的表达及临床意义

目的　探讨成纤维细胞生长因子2型受体（fibroblast growth factor 2,FGFR2）在喉癌中的表达及临床意义。方法　应用免疫组织化学（SP法）检测FGFR2蛋 白在40例喉癌组织、15例癌旁组织和8例正常喉黏膜中的表达情况。应用流式细胞术的方法定量检测40例喉癌组织、13例癌旁组织和5例正常喉黏膜组织中FGFR2的含量。结果　喉癌组织、癌旁组织及正常喉黏膜中FGFR2蛋白的表达强度呈下降趋势,差异有统计学意义（H =11.4573,P <0.01）。FGFR2蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常黏膜中的表达量分别为1.8776±0.1683、1.1815±0.2710和1.0100±0.1341,差异有统计学意义（F =93.1797,P =0.0000）。喉癌组织中FGFR2蛋白的表达量明显高于癌旁组织及正常喉黏膜组织,而癌旁组织与正常喉黏膜相比无显著性差异。喉癌组织中FGFR2蛋白表达与病理分级有关,而与其临床分期、淋巴结转移、临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别均无关。结论　FGFR2蛋白在喉癌中的发生、发展有一定的相关性。     

CD137L在喉癌中的表达及其临床病理学意义

目的:检测CD137L在喉癌中的表达,探讨其在喉癌发生和发展中的作用。方法:应用免疫组织化学染色法检测50例喉癌肿瘤组织和9例癌旁正常喉黏膜CD137L的表达。结果:CD137L在50例喉癌中阳性表达率为100%,而在9例癌旁正常喉黏膜组织中CD137L蛋白表达为阴性,与癌旁正常喉黏膜组织比较,喉癌CD137L阳性表达率明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。CD137L表达与患者年龄、性别和肿瘤生长部位无相关性,而与病理学分级、肿瘤T分期和有无淋巴结转移相关。结论:CD137L在喉癌组织的表达在喉癌发展过程中发挥重要作用。     

水通道蛋白1在喉癌组织中的表达及分布

目的：明确水通道蛋白1（AQP1）在喉癌组织中的表达和分布,并探讨其在喉癌发病中可能的作用机制及意义。方法：取喉癌组织20例及癌旁正常组织15例,应用RT-PCR,Western blot,免疫组织化学技术检测AQP1蛋白在喉癌和正常对照组织中的表达及分布。结果：AQP1表达于正常喉黏膜固有层的血管内皮细胞及喉黏膜腺体上。在喉癌组中主要表达于肿瘤的血管内皮细胞,在肿瘤上皮细胞和癌巢中亦有表达。喉癌中AQP1 mRNA及蛋白表达水平较癌旁正常组织增多,二者之间差异有统计学意义。结论：AQP1在喉癌组织中表达增高,在癌旁正常组织中较低,提示AQP1在喉癌发病中的重要作用有待深入研究。     

S0X2蛋白在喉癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨SOX2在喉癌组织中的表达及与各临床病理因素的关系。方法:采用流式细胞术检测45例喉癌组织和45例相应癌旁组织中SOX2的表达,并以20例非喉癌患者喉部正常黏膜组织作为对照。结果:喉癌组织中SOX2蛋白的表达量及阳性表达率均明显高于癌旁组织及正常喉黏膜组织(P<0.05),癌旁组织与正常喉黏膜组织间的SOX2表达差异无统计学意义(P>0.05)。SOX2蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期和分化程度差异有统计学意义(P<0.05);与临床分型、肿瘤大小、年龄和性别差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SOX2蛋白的高表达可促进喉癌的发生和发展,其蛋白检测亦可作为判断喉癌浸润、转移以及预后的重要指标。     

T-淋巴细胞成熟相关性蛋白基因在正常喉黏膜和喉良性病变及喉癌中的表达和意义

目的：研究MAL在正常喉黏膜组织、声带息肉、喉不典型增生组织及喉癌中表达进而分析其不同分布的意义。方法：运用免疫组织化学的方法检测MAL在正常喉黏膜组织、声带息肉、喉不典型增生组织及喉癌中分布情况。结果：MAL在正常喉黏膜组织中存在表达。比较正常喉黏膜组织和声带息肉组织,MAL表达情况无明显差异。比较正常喉黏膜组织、喉不典型增生及喉癌,MAL在喉不典型增生和喉癌中均表达下调,MAL在喉鳞状细胞癌中表达较喉不典型增生中明显下调。结论：MAL存在正常喉黏膜组织中,在癌变早期时因细胞功能变化而发生表达改变。可作为喉鳞状细胞癌早期诊断的指标之一。     

喉癌喉咽癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达及临床意义

目的 :探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在喉癌喉咽癌组织中的表达及其临床意义。方法 :采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 4 0例喉癌及 12例喉咽癌 (喉癌喉咽癌组 )、5 0例癌旁组织 (癌旁组 )、12例良性肿瘤 (良性肿瘤组 )及 7例正常喉黏膜 (正常喉黏膜组 )组织中iNOSmRNA的表达。结果 :喉癌喉咽癌组阳性表达率为 78.85 % ,与正常喉黏膜组 (0 % )和癌旁组 (2 0 .0 0 % )比较 ,差异有极显著性意义 (P <0 .0 1) ;与良性肿瘤组 (4 1.6 7% )比较 ,差异亦有显著性意义 (P <0 .0 5 )。有局部淋巴结转移组 (95 .2 4 % )显著高于无局部淋巴结转移组 (6 7.74 % ) (P <0 .0 5 ) ;iNOSmRNA阳性表达与T分级呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,与细胞分化程度呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论 :喉癌喉咽癌组织中iNOSmRNA呈高表达 ,提示iNOS可能通过合成NO在分子水平参与了喉癌喉咽癌的发生、发展 ;NO供体药物和iNOS特异性抑制剂的开发 ,必将为肿瘤治疗带来可喜的前景。     

c-Cbl在喉癌中的表达及临床意义CSCD

目的探讨c-Cbl在喉癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化(SP)法检测40例喉癌组织、15例癌旁组织和8例喉正常黏膜组织中c-Cbl蛋白的表达情况。应用流式细胞术定量检测40例喉癌组织、13例癌旁组织和5例喉正常黏膜组织中c-Cbl的含量。结果免疫组化示喉癌组织、癌旁组织及喉正常黏膜组织中c-Cbl的表达强度呈下降趋势,3组相比有显著性差异。应用流式细胞术检测c-Cbl蛋白在喉癌组织、癌旁组织及喉正常黏膜组织中的表达量分别为1.8424±0.1814、1.6350±0.3889、1.1026±0.0181,3组相比有显著性差异。在喉癌组织中c-Cbl蛋白表达与其病理分级有关。结论 c-Cbl蛋白与喉癌的发生发展有关。     

MMP-7和MMP-14在喉癌中的表达及临床意义

目的 研究基质金属蛋白酶7(matrix metallo-proteinase-7,MMP-7)及MMP-14在喉癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化方法检测60例喉癌组织、34例癌旁组织、22例正常喉黏膜组织中MMP-7和MMP-14的表达,统计分析其在标本中的表达及相关性.结果 ①MMP-7和MMP-14在喉癌组织、癌旁组织及正常喉黏膜组织中阳性和强阳性表达率3组间两两比较,喉癌组织与癌旁组织、正常喉黏膜组织差异均具有统计学意义(P均<0.01);癌旁组织与正常喉黏膜组织差异无统计学意义(P>0.05);②MMP-7和MMP-14强阳性表达与颈淋巴结转移、临床分期及组织病理学分级具有显著相关性(P均<0.05);⑨MMP-7和MMP-14在喉癌组织中的阳性表达率呈正相关(r=0.969,P<0.05).结论 ①MMP-7和MMP-14的高表达与喉癌的发病、浸润、转移有关;②MMP-7和MMP-14两者在喉癌组织中的阳性率呈显著正相关,联合检测对喉癌的治疗和预后判断具有临床意义.     

鼻息肉病与正常鼻黏膜组织的蛋白质组差异分析

目的:建立分辨率高和重复性好的鼻息肉病及对照鼻黏膜双向凝胶电泳(2DE)图谱,筛选鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉病(鼻息肉病组)及对照鼻黏膜标本(对照组)各7例,固相pH梯度2DE、凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2DEElite4.01软件分析,识别差异表达蛋白质,质谱仪得到相应肽质指纹图谱(PMF),PeptIdent软件查询SwissProtandTreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:①鼻息肉病组和对照组各自随机挑选的1个样本3次重复2DE,平均蛋白质点数分别为891±67和936±62;匹配点数为767±83和821±78,平均匹配百分率为86.1%和87.7%;同一鼻息肉病的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦电泳(IEF)方向偏差为(1.13±0.16)mm,在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)方向偏差为(1.45±0.21)mm。分析2种组织各7例样本的2DE图谱的平均凝胶图谱,鼻息肉病组和对照组蛋白质点数为1532和1617,匹配点数为1065个。②质谱分析差异蛋白质点20个,获取16张PMF,查询数据库鉴定出差异蛋白质11个。结论:本研究建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉病及鼻黏膜的2DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的差异表达蛋白质。     

Proteomic signatures in laryngeal squamous cell carcinoma

Laryngeal cancer remains a worldwide health problem. The identification of biomarkers unique to laryngeal cancer may provide new insights into its pathogenesis, as well as provide potential targets for novel therapies and early detection. In order to identify potential biomarkers, we performed a proteomic analysis of laryngeal cancer specimens. Using two-dimensional differential in-gel electrophoresis and mass spectroscopy, protein expression profiles from two laryngeal carcinoma specimens and corresponding adjacent normal tissue were analyzed. The results of our analysis showed that the expression of a number of proteins was significantly altered in the tumor specimens when compared to matched normal controls. The differentially expressed proteins were identified, and they included stratifin, S100 calcium-binding protein A9, p21-ARC, stathmin, and enolase. With these findings, we have identified potential biomarkers which may contribute to the pathogenesis of laryngeal carcinoma, and which may be suitable as targets for novel therapeutic and/or diagnostic modalities.     

甲状腺乳头状癌与转移淋巴结组织蛋白质组学差异表达分析

目的 比较甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)与转移淋巴结(lymph node,LN)组织差异表达的蛋白质,筛选与PTC淋巴结转移的相关蛋白并初步探讨其转移机制.方法 利用固相PH梯度双相凝胶电泳技术,分离PTC以及LN组织的总蛋白,建立PTC与LN组织的蛋白表达谱.用Image...     

人甲状腺乳头状癌与正常腺体组织蛋白质组差异表达分析

目的 比较人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)与正常腺体组织差异表达的蛋白质,筛选PTC特异的肿瘤标志物并初步探讨其发病机制.方法 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离PTC以及正常腺体组织的总蛋白,建立PTC与正常腺体组织的蛋白表达谱;用Image Master 2D Elite5.0图像分析软件,比较两种组织间蛋白表达差异,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白进行鉴定和Swiss-port数据库搜索.结果 建立了人PTC与正常腺体组织的蛋白表达谱,通过图像分析发现60个差异蛋白点,经质谱鉴定出17种PTC表达失调蛋白,其中G1/S特异性周期蛋白-D2、锰-超氧化物歧化酶、半乳糖凝集素3等11种蛋白在PTC中过表达,过氧化还原酶-2、热休克蛋白5、热休克蛋白27等6种蛋白在PTC中低表达.结论 PTC与正常腺体组织间存在多种差异表达的蛋白质,其可能通过影响细胞周期调控、细胞代谢及参与肿瘤的侵袭与转移等机制参与PTC的发生和发展.     

鼻内翻性乳头状瘤与鼻息肉和对照组鼻黏膜组织差异蛋白分析

目的 应用蛋白质组学技术,分析比较鼻内翻性乳头状瘤(nasal inverted papilloma,NIP)与鼻息肉、对照组鼻黏膜组织的差异蛋白质,筛选具有特异性表达的蛋白.方法 分别采集3例NIP组织、3例鼻息肉组织以及3例单纯鼻中隔偏曲患者(对照组)的中鼻甲黏膜组织标本,应用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术分离各组织的总蛋白质,利用GS-800Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,识别差异表达蛋白质点,查询数据库,鉴定差异表达蛋白质.结果 鉴定了6个NIP与鼻息肉组织有明显差异表达的蛋白质点,分别是半乳糖凝集素1、锰-超氧化物歧化酶、半乳糖凝集素7、曲古抑菌素A、抑制素、转铁蛋白.这6个蛋白质点在NIP中的表达均明显增强.结论 应用蛋白质组学研究方法可以对鼻黏膜组织进行差异蛋白分析,鉴定出6个差异表达蛋白质可能与NIP的发病相关.     

喉鳞状细胞癌中hMLH1和hMSH2的表达及与细胞凋亡的相关性

目的检测人类错配修复基因hMLH1（human mutl homolog 1）和hMSH2（human muts homolog 2）蛋白在喉鳞状细胞癌（简称喉癌）组织中的表达及与细胞凋亡的相关性,从而探讨其与喉癌发生发展的关系。方法应用免疫组织化学方法检测40例喉癌组织、19例癌旁组织和12例非癌喉黏膜组织（声带息肉、乳头状瘤患者喉黏膜）中hMLH1和hMSH2的表达情况。应用流式细胞术的方法定量检测40例喉癌组织、40例癌旁组织和15例非癌喉黏膜组织中hMLH1和hMSH2的含量并检测其凋亡率。结果 hMLH1和hMSH2蛋白在喉癌组织中的定量及定性表达均明显低于癌旁组织及非癌喉黏膜组织,两者在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期、病理分级有相关性,喉癌组织细胞凋亡率与hMLH1和hMSH2蛋白表达均呈直线正相关。结论 hMLH1和hMSH2蛋白可能与喉癌的发生、发展及转移有关,可能通过促进细胞凋亡而与抑制肿瘤发生发展有关。     

Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义

目的:探讨Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测50例喉鳞状细胞癌组织和10例癌旁正常组织中Jab1和p27kip1的表达。采用人工合成Jab1siRNAⅡ用脂质体2000包裹后转染Hep-2细胞,用RT-PCR方法分析转染后喉癌细胞中Jab1和p27kip1基因的表达情况。结果:Jab1和p27kip1蛋白的阳性表达定位为细胞核中,Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中高表达,正常喉黏膜中不表达或弱表达;p27kip1在人喉癌组织中弱表达,正常喉黏膜中强表达;两者呈负相关。Jab1siRNAⅡ可降低Jab1mRNA表达,并且随着时间的延长,Jab1mRNAⅡ在Hep-2细胞中的表达逐渐减弱,而p27kip1 mRNA的表达则无明显变化。结论:Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中表达增强,正常喉黏膜中不表达或弱表达;p27kip1则正好相反。两者在喉癌中的表达呈负相关。Jab1siRNAⅡ可以特异性降低Jab1mRNA在喉癌Hep-2细胞中的表达,为进一步研究Jab1基因在喉癌中的作用奠定了基础。     

喉癌发生发展过程中TRAIL和Survivin蛋白的表达研究

目的：探讨喉癌发生发展过程中TRAIL、Survivin蛋白的表达及与喉癌病理特征的关系。方法：采用免疫组化SP法对48例喉癌患者手术后大体标本中喉正常黏膜、不典型增生及浸润癌组织进行检测及分析。结果：TRAIL蛋白从正常黏膜-不典型增生-浸润癌呈渐进性低表达,而Survivin蛋白则呈渐进性高表达。喉浸润癌组织中TRAIL蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关(r=-0.510, P<0.01)。结论：TRAIL和Survivin两种蛋白参与了喉癌的发生发展,两者的表达失调与喉癌发生密切相关。