重组人EGF包涵体与37×10^3菌体蛋白的稳定性

大肠杆菌BL21（DE3）是最常用的工程菌株之一,许多外源蛋白得已成功表达^[1-6]。以其作为宿主菌进行外源蛋白表达时,往往形成包涵体^[3-5],包涵体结构复杂,一般含有50％以上的目的重组蛋白,其余为核糖体元件、RNA聚合酶、大肠杆菌的外膜蛋白、质粒DNA以及脂体、脂多糖等。包涵体为大小0．5—1 μm的颗粒状,难溶于水,只溶于变性剂如尿素、盐酸胍等^[7]。包涵体的形成可抵抗菌体内蛋白酶的降解,得到较高的表达量,给后续的纯化工作带来方便^[8]。     

RET原癌基因C634R突变合并G691S、R982C多态性致多发内分泌腺瘤病2A型的家系研究并文献复习

目的 对一个多发内分泌腺瘤病2A型(MEN2A)家系患者的临床特点及RET原癌基因突变情况进行分析.方法 收集先证者及其家系成员相关临床资料,提取1名先证者及10名家系成员的外周血基因组DNA,对RET基因所有外显子进行PCR扩增,对扩增产物进行测序分析.结果 家系中3位已发病患者的临床表现不同,但其RET原癌基因均同时存在3个错义突变,分别是位于11号外显子的C634R、G691S和位于18号外显子的R982C,而家系中其他成员则不存在上述突变.结论 当C634R与G691S、R982C多态性同时存在时,临床上主要表现为与单纯C634R突变一致的PET蛋白功能异常激活性疾病.     

Mage-D1的结构与生物学功能

Mage-D1是黑素瘤相关抗原MAGE家族Ⅱ类的一个成员,不仅具有该家族所共有的MAGE保守序列MHD结构域,其N端还包含MHD2结构域和WQXPXX多肽重复结构域.与MAGEⅠ类成员不同的是,Mage-D1的功能并不限于胚胎发育、生殖细胞发育和肿瘤发生上.近年研究表明,Mage-D1是p75NTR,UNC5H1,XIAP,Dlx/Msx,Ror2等分子的相互作用蛋白,它在细胞存活、凋亡以及细胞周期和分化中发挥重要调节功能.更为重要的是,MAGE家族Ⅱ类另一个主要成员源自神经分化EC细胞蛋白necdin促进神经元和肌细胞分化的功能,是通过Mage-D1调节Dlx/Msx家族成员的转录活性实现的.本文主要就近年关于Mage-D1结构和生物学功能的研究进行综述和分析.     

纤连蛋白结合蛋白新功能肽段FnBPA-D1c/D2n的初步研究

金黄色葡萄球菌是引起化脓性感染的主要病原菌,而且能引起多种其他疾病,纤连蛋白结合蛋白(fibronectin-binding protein,FnBP)是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白[1].本研究选定金葡菌FnBP蛋白D结构域的一个非完整重复序列--D1区域的C端与D2区域的N端(FnBPA-D1c/D2n)为研究对象,观察其与纤连蛋白(Fn)的结合活性以及其对金葡菌侵袭细胞的抑制作用,为进一步探讨FlnBP功能区奠定基础.     

基于^18F-APN-1607PET影像的阿尔茨海默病tau蛋白沉积相关疾病模式探究

目的 探究阿尔茨海默病(AD)患者^18F-APN-1607 PET影像脑内tau蛋白沉积相关疾病模式(tauRDP).方法 收集复旦大学附属华山医院17例AD患者[男6例,女11例;年龄(61.7±12.3)岁;简易精神状态检查量表(MMSE)评分(17.6±7.9)分]和10名年龄性别匹配的健康对照(NC)者[男6名,女4名;年龄(61.2±4.7)岁]的^18F-APN-1607脑影像.在体素层面使用基于主成分分析(PCA)的尺度子轮廓模型(SSM)技术构建tauRDP,计算每个样本tauRDP表达值,通过两样本t检验比较tauRDP表达值在AD患者和健康对照者间的差异;使用Pearson相关分析AD患者tauRDP表达值与MMSE评分的相关性.结果 AD患者的tauRDP脑区主要包括:中央前回、背外侧额上回、额中回、岛盖部额下回、三角部额下回、补充运动区、内侧额上回、左侧内侧和旁扣带脑回、右侧楔叶、枕上回、枕中回、中央后回、顶上回、顶下缘角回、缘上回、角回、楔前叶和颞中回.AD患者tauRDP表达值为(12.6±8.0),与NC(0.0±1.0)间差异有统计学意义(t=4.395,P<0.001),且AD组tauRDP表达值与MMSE得分相关(r=-0.566,P=0.018).结论 基于SSM/PCA方法建立的tauRDP可用于定量表达tau蛋白沉积空间分布异常,tauRDP表达值有潜力用于评估AD严重程度.     

Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白在喉复发癌组织芯片中的表达和意义

目的研究Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达与喉癌复发的关系,并评价其对预后评估的作用.方法回顾分析1958～1999年喉癌手术病例574例,术后随访3年,确诊术后复发56例;正常喉对照标本39例.标本制成组织芯片,采用免疫组化SABC法,对芯片标本进行染色.结果 Cyclin D1、PCNA、Ki-67在喉癌组织及正常喉组织中均有表达,且在喉癌组织的表达强于正常喉组织(P<0.01),在喉癌复发组强于未复发组(P<0.01),与喉癌复发呈正相关.结论 Cyclin D1、PCNA、Ki-67细胞周期相关蛋白的表达可作为估计喉癌预后的指标.     

血管内皮细胞生长因子对体外大鼠椎间盘细胞代谢的影响

目的 观察血管内皮细胞生长因子(vasctdar endothelial cell growth factor,VEGF)对体外培养大鼠椎间盘细胞及基质代谢的影响. 方法 建立大鼠椎间盘细胞培养体系,体外单层培养大鼠椎间盘细胞,取生长良好的第2代细胞,使用抗- Fas抗体诱导凋亡,加入不同浓度(10,100,1 000μg/L)的VEGF,影响椎间盘细胞的凋亡及代谢过程.利用流式细胞仪PI标记法检测椎间盘细胞凋亡情况;利用氯胺-T法和DMB比色法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸和蛋白多糖的含量. 结果 (1)加入不同浓度VEGF(10,100,1 000μg/L)后,椎间盘细胞凋亡率为(87.62±11.06)％、(53.30 ±9.23)％和(16.75±4.21)％,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)随着VEGF浓度的增加(10,100,1 000 μg/L),羟脯氨酸含量[(6.71±0.33) μg/L、(9.12±0.41) μg/L、(11.58±0.12)μg/L]、蛋白多糖含量[(23.21±2.87)μg/L、(32.45±5.23) μg/L、(37.18±3.22) μg/L]明显增加.加入不同浓度VEGF后,羟脯氨酸和蛋白多糖的含量与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).羟脯氨酸含量、蛋白多糖含量与VEGF浓度呈正相关( ra=0.972,P＜0.01;rb=0.907,P＜0.01).结论 VEGF可以抑制体外培养的椎间盘细胞凋亡,促进椎间盘细胞基质中胶原及蛋白多糖的合成.     

脊髓感觉神经特异性蛋白质相关EST片段的筛选

我们在寻找感觉、运动神经系统蛋白表达差异的过程中 ,曾发现了感觉神经特异的相对分子质量(Ｍｒ) 2 9× 10 3蛋白 ,但未能获得其全长ｃＤＮＡ[1] 。因此 ,我们试图通过ＳＤＳ ＰＡＧＥ电泳来分析脊髓感觉神经和运动神经蛋白的表达 ,以获得这一感觉神经特异性蛋白并进行测序。根据测得的氨基酸序列设计简并性引物 ,用ＲＡＣＥ方法对与其相关的ｃＤＮＡ序列进行钓取 ,为将来寻找感觉神经特异性蛋白的ｃＤＮＡ序列提供相关的线索。1　材料与方法1.1　材料Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,购自军事医学科学院动物中心。Ｂｉｏ Ｒａｄ公司垂直电泳仪及ＳＤＳ …     

高迁移率族蛋白HMGB2的细胞内定位及移位研究

目的 观察鼠高迁移率族蛋白B2(HMGB2)在真核细胞中的定位和移位情况.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到HMGB2编码序列.然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,构建质粒命名为pcDNA3-HA-HMGB2,随后将其转染NIH 3T3细胞.荧光显微镜观察仅转染质粒的细胞和质粒转染与亚砷酸钠刺激30min和1h后细胞内HA-HMGB2融合蛋白的定位及移位情况.结果 重组质粒经酶切、聚合酶链反应(FCR)和测序鉴定证明构建正确,并在NIH 3T3细胞中得到大量表达.荧光显微镜观察发现,FIA-HMGP2蛋白主要分布于细胞核中,经亚砷酸钠刺激后30min,部分细胞中的蛋白从胞核移位到胞质,刺激1h后蛋白则主要分布于胞质中.结论 成功构建带HA标签的HMGB2真核表达载体.该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位、移位,为下一步深入研究HMGB2作用细胞的信号通路提供了一个重要工具.     

胆囊腺瘤中P53蛋白异常表达的研究

肿瘤的发生发展是个多阶段、多步骤的过程,涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活,而且后者似乎起重要作用[1]。P53基因是重要的肿瘤抑制基因,许多人类肿瘤都伴有不同程度的P53基因突变[2]。本研究用免疫组化方法检测P53蛋白的表达状况及其与腺瘤癌变的关系。     

mTOR介导抗阻运动骨骼肌蛋白质合成机制研究进展

<正>国内外学者普遍认为,长期反复抗阻运动导致骨骼肌肥大。其根源是蛋白质合成率远大于蛋白质分解以致蛋白质积累,导致肌纤维横截面积增大,骨骼肌质量增加[1]。已有研究显示,骨骼肌质量发生微小变化可能对骨骼肌功能起着决定性作用[2]。以往研究显示,抗阻运动导致骨骼肌IGF-1 mRNA和蛋白表达均增加[3]。骨骼肌外源性补给IGF-1,蛋白合成明显增加[4],提示运动促进旁分泌途径     

THAP蛋白家族研究进展

THAP蛋白是新发现的细胞因子家族，其显著特征是蛋白质的N端有进化上保守的THAP结构域，其内部含新型锌指模序，与果蝇P元件转座酶DNA结合结构域高度同源。人的THAP家族有12个成员，来自于人和模式生物中THAP家族成员的功能研究表明，该家族蛋白具有DNA结合活性，很可能广泛参与了细胞增殖、周期、凋亡、转录的调控，以及染色体修饰和重构。其中，不同THAP家族成员的THAP结构域发挥不同的作用。     

重组合异种骨移植局部IL-1α mRNA和蛋白质的表达

骨形成蛋白 (ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＭＰ)可诱导间充质细胞分化成为骨系细胞 ,从而实现异位成骨[1] 。刘玮等[2 ] 将牛骨松质和牛ＢＭＰ复合制备出新材料并命名为重组合异种骨(ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｂｏｎｅｘｅｎｏｇｒａｆｔ,ＲＢＸ)。白细胞介素 - 1(ＩＬ - 1)可调节免疫水平 ,促进骨吸收过程[3 ] 。了解ＩＬ - 1在ＲＢＸ移植局部的表达规律 ,可以充实我们对异种骨移植局部骨代谢和免疫调控环节的认识。笔者将ＲＢＸ植入小鼠肌肉内 ,检测局部ＩＬ - 1αｍＲＮＡ及蛋白的表达与细胞定位。现报告如下…     

ASPP家族成员mRNA在乳腺癌细胞株中的表达及意义

p53凋亡刺激蛋白(apoptosis-stimulating protein of p53,ASPP)家族包括ASPP1、ASPP2和iASPP(inhibitory member of the ASPP family)3个成员[1],它们在结构上极为相似,都具有3个典型的特征性结构:4个锚蛋白重复序列、SH3结构域和富含脯氨酸的结构域.本研究旨在了解ASPP家族成员在乳腺癌细胞株中的表达状况及其对细胞凋亡的影响,为进一步研究乳腺癌的靶向治疗奠定基础.     

氨基酸组成分析直接鉴定SDSPAGE分离的研究简报蛋白质

蛋白质组学是后基因组时代研究的重要领域。蛋白质组研究的基本技术包括双向凝胶电泳分离技术、蛋白质鉴定技术、计算机图像数据处理与蛋白质组数据库构建等。氨基酸组成分析[1,2 ] 作为蛋白质组研究中的鉴定方法之一 ,对质谱鉴定、Ｎ端氨基酸序列鉴定等具有补充及验证作用。蛋白质是由 2 0种氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子 ,测定蛋白质的氨基酸组成可获得蛋白质的基本信息。本研究以马心肌红蛋白和细胞色素Ｃ为样品 ,优化实验条件 ,以此建立一种高灵敏度、高准确度的鉴定双向凝胶电泳分离后的蛋白质点方法。该方法还可用于分析天然蛋…     

TLR5-NF-κB信号通路及其在放射医学领域的应用前景

Toll Like Receptor家族(TLRs)是一类介导微生物先天免疫的受体家族.1996年Lemaitre等[1]首先在果蝇体内发现了Toll蛋白,在果蝇体内研究发现该蛋自在真菌感染引起的免疫反应中发挥重要作用.目前,在哺乳动物细胞中发现了13种与果蝇同源的Toll蛋白,其中,人体存在10种Toll样受体,分别命名为TLR1～TLR10[2].研究表明,TLRs家族成员主要参与微生物引起的机体免疫反应.作为Toll样受体家族成员之一,TLR5能够与细菌鞭毛蛋白结合,参与细菌感染引起的免疫反应.近年来,相继报道鞭毛蛋白能够通过结合TLR5,激活NF-κB信号通路,调节多种细胞因子分泌,对电离辐射及其他刺激引发的细胞凋亡具有保护作用[3-4].本文将对TLRs家族成员结构、分布和信号通路及TLR5在电离辐射损伤中作用的研究进展作一综述.     

Rho家庭蛋白在胃癌细胞系中的表达及意义

为了研究Rho家族 5个重要成员在胃癌细胞中的表达 ,探讨Rho家族在胃癌发生、发展中的意义 ,分别利用半定量RT PCR和Westernblotting检测胃癌细胞系中RhoA、RhoB、RhoC、Rac1和Cdc4 2的mRNA和蛋白表达水平。结果发现 ,与正常对照肠上皮细胞系相比 ,5种胃癌细胞系中的RhoA、Rac1、Cdc4 2的mRNA和蛋白表达均上调 ;在所有细胞系中均无RhoB的表达 ,RhoC仅在胃粘膜组织和有转移潜能的细胞系中有表达 ,而胰岛素可以诱导肠上皮细胞表达RhoB ,进一步证实了RhoB是一个即刻反应蛋白 ;Rho家族中RhoA、Rac1、Cdc4 2在胃癌细胞系中高表达提示Rho家族可能在胃癌的发生过程中有重要的作用     

甲硫腺苷磷酸化酶与肿瘤关系的研究进展

甲硫腺苷磷酸化酶 ( 5’ MethylthioadenoninePhosphorylase ,MTAP) ,EC∶2 4.2 .2 8,最初缩写为MSAP或MTAPase ,是嘌呤和甲硫氨酸合成补救途径中一个关键的酶[1] ,属于嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)家庭 2的成员之一 ,其活性形式是同源三聚体 ,有碱基、甲硫核糖和巯基 /磷酸结合位点。MTAP在正常细胞和组织中表达很丰富 ,但在人或鼠来源的多种恶性细胞系和人类多种肿瘤如乳腺癌[2 ] 、白血病[3 ] 、骨肉瘤[4] 、口腔癌[5] 、子宫癌[6] 和肺癌[7] 等中有较高频率的纯合性缺失现象。利用MTAP在多种肿瘤中表达缺失的特点 ,通过甲硫氨酸饥…     

重组融合蛋白Fab/IFN-αA的表达及其抗乙型肝炎病毒的作用

IFN-αA是治疗乙型病毒性肝炎有效药物,但由于其临床应用的副作用及持久应答率不超过50%,限制了其疗效的发挥[1].作者通过DNA重组技术和PCR技术将抗乙型肝炎表面抗原抗体片段Fab与IFN-αA在分子水平上进行重组,构建了人抗乙肝表面抗原抗体Fab片段/αΑ-干扰素融合蛋白原核表达载体[2].本实验将筛选出阳性克隆的菌种进行诱导表达,测定表达的重组融合蛋白(Fab/IFN-αA)的IFN-αA活性及抗体Fab活性,并应用HBV DNA转染细胞系(HepG2215细胞系)作模型[3],通过检测Fab/IFN-αA作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗HBV作用,并与IFN-αA进行了比较.     

改良明胶酶谱测定明胶酶活性

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是能降解细胞外基质和基底膜成分的酶家族成员之一。这个蛋白家族包括胶原酶、明胶酶、基质素和膜型基质金属蛋白酶 (ＭＴ ＭＭＰ)等 5大类。ＭＭＰｓ家族成员目前已鉴定出 2 8种[1] 。ＭＭＰ的基因表达水平和酶活性的高低与许多生理或病理过程及其恶性程度相关 ,如肿瘤转移、血管浸润、骨质疏松、组织纤维化等 ,尤其是明胶酶Ａ和Ｂ(ＭＭＰ 2 ,9)在肿瘤的转移和血管生成方面起重要的作用[2 ] 。目前 ,测定明胶酶活性的方法多用明胶酶谱法 ( ｇｅｌａｔｉｎｚｙｍｏｇ ｒａｐｈｙ) ,即收集待测样本 ,处理后在含有明…