基于Wnt/β-catenin信号通路探讨丙泊酚调控miR-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制

目的：探讨丙泊酚调控mi R-219-5p抑制肝癌细胞增殖、侵袭的作用机制。方法：体外培养人肝癌细胞株Huh7,分为空白组、2、5、10μg/ml丙泊酚组和丙泊酚+干扰mi R-219-5p组;PCR检测细胞mi R-219-5p表达;MTT检测丙泊酚对肝癌细胞的增殖抑制作用;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移率;Western blot检测β-catenin、c-Myc蛋白含量。结果：与空白组相比,不同浓度丙泊酚组mi R-219-5p表达升高,细胞增殖被抑制,侵袭能力减弱,迁移率降低,β-catenin、c-Myc蛋白表达降低,且呈浓度依赖性（P<0.05）;与丙泊酚各组比较,丙泊酚+干扰mi R-219-5p组增殖抑制能力减弱,侵袭能力增强,迁移率升高,β-catenin、c-Myc蛋白含量升高（P<0.05）。结论：丙泊酚可通过上调mi R-219-5p表达抑制肝癌细胞增殖和侵袭,其机制可能为调控Wnt/β-catenin信号通路。     

miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌

目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系.方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mtmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评...     

miR-663靶向抑制TGF-β1表达介导抑制增生性瘢痕皮肤成纤维细胞增殖

目的 探讨miR-663调节TGF-β1表达抑制增生性瘢痕皮肤成纤维细胞增殖的作用及机制.方法 RT-PCR检测组织中miR-663和TGF-β 1mRNA的表达;MIRDB软件预测、双荧光素酶报告基因实验分析miR-663对TGF-β 1基因的靶向作用;MTT检测miR-663的差异性表达对成纤维细胞增殖的影响;We...     

转染Lgr5基因对结肠癌细胞株体外生物学特性影响的研究

目的 构建pIRES2-EGFP-Lgr5重组表达载体,获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株,并探讨转染Lgr5基因对结肠癌细胞株生物学特性的影响.方法 运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从结肠癌组织中获得Lgr5全长基因,经双酶切(XhoI和BamHI)连接入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用脂质体法转染SW480细胞,经流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学法检测Lgr5分子的表达;CCK-8法和悬滴实验分析Lgr5对结肠癌细胞增殖率和成球能力的影响,划痕实验分析Lgr5对结肠癌细胞迁移能力的影响.结果 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP/hLgr5,并获得SW480/Lgr5瞬时基因转染细胞株;转染Lgr5基因的结肠癌细胞体外增殖速度加快,形成的细胞球大而紧密但迁移能力下降.结论 Lgr5基因转染促进结肠癌细胞株体外的生长,为进一步研究人Lgr5分子的生物学特性及其在结肠癌中的作用机制奠定了基础.     

抗β-catenin抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在结肠癌诊断中的应用价值。应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Westernblot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达。用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达。结果,用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔7周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1∶204800(A450=1.01)。将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92000的蛋白条带。与文献报道相符。用抗β-catenin血清做Westernblot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体。从人结肠癌细胞株SW48和HCT116提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均可观察到β-catenin蛋白的表达。人结肠组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常结肠组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在结肠癌组织的细胞浆中可见棕黄色颗粒。制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体。用该抗体检测证实,正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中,而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达。提示结肠癌发     

Circ-DDX5靶向miR-3940抑制人乳腺癌细胞系的增殖和侵袭

目的 探讨环状RNA-DDX5(circ-DDX5)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的关系,分析circ-DDX5对人乳腺癌细胞系增殖和侵袭能力的调控机制。方法 通过TCGA数据库分析circ-DDX5在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床分期的相关性。生物信息学分析和双荧光素酶报告实验验证circ-DDX5和miR-3940的靶向关系。通过TCGA数据库分析乳腺癌组织中circ-DDX5与miR-3940表达的相关性。RT-qPCR检测circ-DDX5在乳腺癌细胞系SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549、MCF-7、HCC-1937中表达。将circ-DDX5过表达质粒和阴性对照质粒转染至MDA-MB-231细胞,分别命名为circ-DDX5组和NC组。集落形成实验和Transwell小室法检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭。Western blot检测MDA-MB-231细胞增殖表型蛋白和侵袭表型蛋白表达。RT-qPCR检测circ-DDX5组和NC组MDA-MB-231细胞中miR-3940表达水平。结果 乳腺癌组织中...     

miR-31靶基因的预测及功能富集分析

目的：搜索miRBase数据库获取多个物种的miR-31的序列特征。方法用TargetScan、 PicTar和miRecords 3种在线工具对miR-31靶基因进行预测;搜索文献,查找miRecords获得证实的miR-31的靶基因;对所用靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果 miR-31的靶基因的富集的生物进程和富集的信号通路,多与各种疾病的发生相关,如肿瘤、心脏疾病。结论 miR-31的很多生物功能还未被证实,通过生物信息学方法预测得到的结果可以为后续实验研究提供方向和思路。     

miR-95-5p介导SATB1-Wnt信号通路抑制非小细胞肺癌细胞活力和侵袭能力

目的:研究miR-95-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭的作用及机制.方法:RT-qPCR检测NSCLC组织和细胞中miR-95-5p与SATB1 mRNA的表达,利用Lipofectamine2000将miR-NC、miR-95-5p mimic、pc-NC、pc-SATB1质粒分别或联合转染至H165...     

miR-541-3p靶向SPOCD1基因通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-541-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制.方法:将miR-con、miR-541-3p、anti-miR-con、anti-miR-541-3p、si-con、si-SPOCD1分别转染至MCF-7细胞中,分别记为miR-con组、miR-541-3p组、anti-miR-con组...     

上调SW480结肠癌细胞miR-513b水平抑制HMGB3表达引起癌细胞增殖抑制并促进其凋亡

正结直肠癌为消化系统常见恶性肿瘤之一,致死率高[1-2]。因此,早期诊断可降低其死亡率。分子标志物不仅仅能提供诊断的依据,而且也可能为临床治疗提供治疗的靶点。高迁移率族蛋白3(high mobility group-box 3,HMGB3)属于高迁移率族蛋白家族,在DNA复制、转录等方面起重要作用,是白血病的致病基因[3],是通过调节细胞周期参与肿瘤发生发展的标志物[4]。微小RNA(microRNA,miRNA)     

miR-195靶向FOXK1介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制

目的 探究微小RNA(miR)-195靶向叉头盒蛋白K1(FOXK1)介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制。方法 选择140例胃癌组织和癌旁正常组织,其中男性77例,女性63例;年龄46～73岁,平均年龄55.34岁（标准差3.68岁）。检测其中miR-195、FOXK1和β-catenin的表达水平。通过Pearson检验分析相关性。通过双荧光素酶报告验证miR-195与FOXK1的相关性。将人胃癌细胞分为4组：对照组、miR-195组、FOXK1组和miR-195+FOXK1组。通过转染miR-195类似物和/或FOXK1质粒来提高miR-195和/或FOXK1的水平。检测各组细胞增殖、侵袭能力,以及β-catenin转录和蛋白表达水平。结果 胃癌组织中miR-195水平显著低于正常组织,而FOXK1和β-catenin表达水平显著高于正常组织（P <0.05）。FOXK1与β-catenin正相关,miR-195分别与FOXK1和β-catenin负相关（P <0.05）。验证结果显示miR-195与FOXK1的靶向结合（P <0...     

miR-203靶向PIK3CA对结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的探讨miR-203对结肠癌SW480细胞增殖的影响及可能机制。方法采用脂质体介导的miR-203模拟物转染结肠癌SW480细胞,通过实时定量PCR进行验证,Western blot检测miR-203过表达后SW480细胞中p110α蛋白的表达。采用CCK-8法检测miR-203过表达后,SW480细胞增殖能力的变化,采用生物信息学网站预测PIK3CA是否为miR-203的靶基因,进一步应用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果 miR-203模拟物转染SW480细胞组,miR-203的表达水平显著升高,p110α蛋白表达下调,miR-203过表达能抑制SW480细胞体外增殖,生物信息学分析结果显示PIK3CA是miR-203的靶基因之一,双荧光素酶实验证实PIK3CA为miR-203的下游靶基因。结论 miR-203通过靶向调控PIK3CA抑制结肠癌SW480细胞增殖。     

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的 探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制.方法 采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Weste...     

miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法 采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(...     

PAK5/β-catenin信号通路在乳腺癌细胞多药耐药中的作用及机制

目的 探讨PAK5是否通过β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的耐药.方法 采用药物浓度递增法构建耐药细胞模型.CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力.Western blot法检测PAK5蛋白表达.罗丹明染色观察细胞荧光表达强弱.免疫荧光及免疫共沉淀实验检测PAK5与β-catenin的相互关系.结果 与亲本细...     

miR-203及其靶基因与肿瘤关系的研究进展

miR-203是近年来发现的第一种皮肤特异性miRNA,不但参与构建皮肤保护层、与银屑病和牛皮癣等皮肤性疾病有关,而且作为抑癌或致癌因子与靶基因共同作用参与肿瘤发生、发展。本文从miRNA-203的生成与组织分布、靶基因及相关肿瘤作用机制等方面进行综述。     

八正汤加减通过Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞的增殖与侵袭

目的 探讨八正汤加减对肾癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制。方法 将人肾癌细胞系786-O设为对照组与八正汤加减组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用划痕实验与Transwell侵袭实验测定细胞迁移和侵袭情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、C-caspase-3、E-cadherin、Ncadherin、vimentin、Wnt3a、GSK3β、p-GSK3β、p-β-catenin和β-catenin的表达。结果 八正汤加减能够抑制786-O细胞的增殖、迁移与侵袭,促进786-O细胞的凋亡,上调786-O细胞Bax、C-caspase-3、E-cadherin与p-β-catenin蛋白的表达,下调786-O细胞N-cadherin、vimentin、Wnt3a、p-GSK3β和β-catenin蛋白的表达。结论 八正汤加减通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制786-O细胞增殖、侵袭和转移,促进细胞凋亡。     

miR-320a靶向KLF5抑制结肠癌HCT116细胞增殖和侵袭的分子机制

目的 探讨过表达miR-320a对结肠癌HCT116细胞的生物学行为的影响,并初步分析miR-320a对KLF5的调控机制.方法 将miR-320a模拟物转染结肠癌HCT116细胞,建立过表达miR-320a结肠癌HCT116细胞系,采用CCK-8方法检测转染后HCT116细胞增殖能力,Transwell实验检测转染后...     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

甘草皂苷抑制血管平滑肌细胞增殖与β-catenin信号通路的关系

甘草皂苷是多年草本植物甘草根部提取的药物活性成分,因其具有抗病毒复制的作用,而在病毒感染性疾病中有较为深入的研究,包括流感、病毒性肝炎、获得性免疫缺陷综合征、严重急性呼吸器官综合征等。甘草皂苷及其苷元产物18β-甘草次酸还有调控免疫活性的作用,如18β-甘草次酸可诱导巨噬细胞合成一氧化氮合成酶（NOS）和内皮细胞白介素-8（IL-8）的表达,