晚期糖基化终末产物在纤维化中的作用机制

晚期糖基化终末产物AGEs是指体内的糖类通过非酶促糖化途径与蛋白质、核酸或脂质等大分子氨基之间形成的不可逆聚合物。目前的研究表明，晚期糖基化终末产物与肾脏、肝脏、肺脏、血管、腹膜等纤维化发生密切相关，其促纤维化作用机制涉及到纤维化发生的多个环节，包括细胞外基质、纤维性细胞以及纤维性细胞因子等。本文将从上述三个方面对近几年来的相关研究结果进行综述。     

晚期糖基化终末产物在糖尿病大鼠骨质疏松发病中的作用及胰岛素潜在的防护机制

目的探讨循环中晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）在糖尿病大鼠骨质疏松发病中的作用及胰岛素潜在的防护机制。方法将3月龄雄性SD大鼠用链脲佐菌素（streptozotocin STZ）诱导成速发型糖尿病大鼠模型,随机分为胰岛素治疗组（n=10）和模型组（n=10）并以正常大鼠作对照组（n=10）。20周后下腔静脉采血处死大鼠,用Hitachi-850型荧光分光光度计测定血清中AGEs含量的变化,取一侧股骨和胫骨行X线拍片和骨密度测量,对侧胫骨近端制作病理标本,股骨行RT-PCR测定RAGE的含量。结果20周后,模型组与对照组相比,骨质疏松明显,股骨BMD、血清中AGEs、骨组织中RAGE的表达与对照组比均有统计学意义(P＜0．01)。胰岛素治疗组与模型组相比,股骨BMD明显升高 (P＜0．01),血清中AGEs减少(P＜0．01),骨组织中晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)的表达下降。结论骨组织中AGEs和RAGE相互作用是糖尿病骨质疏松的重要致病机制之一,胰岛素对糖尿病大鼠骨质疏松具有防护作用,其作用机制可能与严格控制血糖、抑制AGEs的合成、阻断骨组织中AGEs和RAGE相互作用有关,从而提高大鼠骨密度,改善骨质量。     

晚期糖基化终末产物受体在鳞状细胞癌中的研究进展

晚期糖基化终末产物受体（RAGE）是一种具有多配体的跨膜信号转导受体。研究表明，RAGE在许多鳞状细胞癌中异常表达，与鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭、迁移和预后等密切相关。本文就目前RAGE在鳞状细胞癌中的研究进展作一综述。     

晚期糖基化终末产物在骨关节炎中的研究进展

晚期糖基化终末产物(AGEs)是蛋白质、脂质等大分子与还原糖通过一系列非酶促反应而生成的一组稳定的共价化合物,它通过激活细胞表面的受体(receptor of AGEs,RAGE)引起广泛的病理生理反应,并在动脉粥样硬化、糖尿病、中枢神经系统退变等多种疾病的发病机制中起着重要作用。随着年龄的增长,AGEs在人体内多种组织中不断积聚,是机体衰老的一项重要指标,在骨性关节炎的病理生理过程中起重要作用。作者就AGEs对软骨生物力学性能的影响、软骨代谢失衡的机制以及基于AGEs的靶向治疗等方面作一综述。     

晚期糖基化终末产物与糖尿病慢性并发症的关系

糖尿病是世界各国关注的公众健康问题，随着人类社会文明的发展，其患病率明显增加。糖尿病慢性并发症几乎累及全身各器官组织，起病隐匿，早期不易被发现，呈渐进性发展，当发展到一定阶段后治疗效果不佳，是造成患者致残致死的重要原因。近年的大量研究证据表明，持续高血糖引起体内多种蛋白质非酶糖基化及由此形成的晚期糖基化终末产物（Advanced glycation endproducts，AGEs）在糖尿病慢性并发症的发病机制中起重要作用.     

晚期糖基化终末产物受体在2型糖尿病大鼠种植体骨结合中的表达

目的 探讨晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）及其受体影响种植体骨结合的可能机制。方法建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病对照组、正常种植组、糖尿病种植组,分别于正常种植组和糖尿病种植组胫骨近骺端植入纯钛种植体,于植入8周后下腔静脉采血处死大鼠,用Hitachi2850型荧光分光光度计测定血清中AGEs含量的变化,取种植侧胫骨拍X线片和骨密度测量,并制作病理标本,采用免疫组化检测种植体周围晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的表达并作图像分析。结果4周后,糖尿病种植组和糖尿病对照组与正常对照组和正常种植组比较,骨质疏松明显,胫骨BMD明显下降,血清中AGEs含量增多;糖尿病对照组和正常对照组骨组织RAGE蛋白的阳性表达强度分别低于前两组。图像分析阳性细胞率和阳性细胞平均光密度值结果,糖尿病种植组明显高于正常种植组,糖尿病对照组明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;糖尿病种植组高于糖尿病组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AGEs—RAGE途径是2型DM影响种植体骨结合的机制之一。     

免疫化学方法测定晚期肾炎病人血中糖基化终末产物

目的　研究人血清中糖基化终末产物 (AGE)水平与肾功能异常的关系。方法　用晶状体蛋白与葡萄糖保温合成晶状体蛋白AGE并免疫家兔获得抗血清 ,通过竞争性ELISA测定正常对照组与晚期肾炎组血清中AGE。结果　正常对照组血清AGE水平为 (2 5 0± 15 ) μg/L ,晚期肾炎组血清中AGE浓度明显升高为 (10 0 0± 38)μg/L ,是正常对照组的 4倍。 结论　肾功能损伤可能引起AGE在血液中蓄积     

关于晚期糖基化终末产物的研究进展

1984年Vlassara等人首次提出晚期糖基化终末产物(AGE)这一概念,近年来对于AGE的研究备受关注.研究发现AGE参与了氧化应激、炎症反应等病理变化,同时,AGE还参与了慢性肾脏病、糖尿病肾病、动脉粥样硬化等疾病的发生及进展过程.本文就AGE的结构、与疾病的关系、药物干预等方面作一综述.     

晚期糖基化终末产物受体在胰腺癌细胞增殖及 成瘤过程中的作用

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products, RAGE）对胰腺癌PANC-1细胞增殖及转染后接种裸鼠在成瘤过程中的作用。方法 构建RAGE 短发夹RNA （shRNA),即shRNA RAGE -1、-2、-3质粒,转染胰腺癌PANC-1细胞后,采用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测shRNA RAGE 对细胞增殖、RAGE表达的影响,筛选干扰效果最好的shRNA RAGE 质粒;将转染了shRNA RAGE 质粒的PANC-1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤时间,并测量计算肿瘤体积;采用RT-PCR和Western blot检测shRNA RAGE 对RAGE、基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase, MMP)2和9（MMP-2和MMP-9）、核因子-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, NF-κB）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF ）的mRNA及蛋白表达的影响,并采用免疫组化方法对肿瘤进行微血管计数,计算微血管密度。结果 转染shRNA RAGE 24 h后CCK-8检测细胞的吸光度（A）值低于对照组（ P<0.05）,且在转染48 h时最明显。RT-PCR和Western blot检测显示,shRNA RAGE -2质粒转染后下调RAGE表达效果最好。转染shRNA RAGE -2质粒的PANC-1细胞接种于裸鼠后,裸鼠成瘤时间、肿瘤体积低于shRNA RAGE -1,-3,裸鼠肿瘤组织RAGE 、MMP-2、 NF-κB、 MMP-9、 VEGF mRNA及蛋白表达低于shRNA RAGE -1,-3（ P<0.05）,其微血管密度也低于shRNA RAGE -1,-3（ P<0.001）。结论 RAGE参与了胰腺癌的发生发展过程。RAGE可影响胰腺癌肿瘤生长及微血管形成。     

Effect of advanced glycosylation end products on activity of protein kinase C in human peripheral blood mononuclear cells

Objectives To investigate the effect of advanced glycosylation end products (AGEs) on the a ctivity of protein kinase C (PKC) in human peripheral blood mononuclear cells (P BMC) and to observe whether aminoguanidine (AG) can influence the effect of AGEs .Methods After PBMC were isolated from human peripheral blood and incubated with differen t concentrations of AGEs-BSA for various periods, total PKC activity in PBMC wa s determined by measuring the incorporation of (32)P from ［γ-(32) P］ ATP into a special substrate using Promega PKC assay kit.Results AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC from 83.43±6.57 pmol/min/ mg protein to 116.8±13.82 pmol/min/mg protein with a peak at 15 min. AGEs -BSA also increased the total PKC activity in a concentration-dependent manner fro m 83.1±6.4 pmol/min/mg protein (control) to 119.1±13.3 pmol/min/mg prote in (control vs AGEs-BSA 400 mg/L, P&lt;0.01).Furthermore, AGEs-BSA induc ed an elevation of PKC activity in a glycosylating time-related manner, from 80 .9±8.2 (control) to 118.3±11.5 pmol/min/mg protein (glycosylation for 12 wk, P&lt;0.01).The total PKC activity stimulated by AGEs-BSA pretreated wi th AG (100, 200 mg/L) was markedly lower than that of AGEs-BSA group not pretr eated with AG (P&lt;0.05, P&lt;0.01).Conclusions AGEs-BSA increased the total PKC activity in PBMC in a concentration and incuba tion time dependent manner. The ability of AGEs-BSA to stimulate PKC activity was markedly decreased by pretreatment of AGEs-BSA with AG.     

晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸对内皮细胞的协同损伤作用

目的探讨两种尿毒症毒素晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGE）和同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）在致血管内皮细胞损伤的过程中是否具有协同作用。方法不同浓度的AGE修饰牛血清白蛋白（AGE-BSA）和Hcy单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞，检测各组上清液NO浓度和脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）含量及细胞凋亡百分率。结果AGE＋Hcy联合干预组的细胞凋亡率明显高于单独AGE和Hcy干预组（P〈0．01），MDA含量也显著高于AGE干预组（P〈0．05）和Hcy干预组（P〈0．01），联合组干预组NO浓度则明显低于单独干预组（P〈0．01）。结论AGE和Hey均参与了血管内皮细胞的损伤，两者具有协同效应，上述效应可能与氧化应激有关。推测终末期肾病（ESRD）患者AGE和Hcy的升高可能是加速该人群动脉粥样硬化发生发展的重要因素。     

皮肤晚期糖基化终末产物与2型糖尿病周围神经病变的相关性研究

目的分析2型糖尿病（T2DM）伴周围神经病变（DPN）患者皮肤晚期糖基化终末产物（AGEs）水平变化及其临床意义。方法选择99例 T2DM 患者,依据神经缺陷评分（NDS）将其分为 DPN 组和非 DPN 组,同时选取正常对照组（NC 组）35例,测定各组皮肤 AGEs 和糖化血红蛋白（HbA1c）水平并进行比较。结果与 NC 组相比,T2DM 患者皮肤 AGEs 水平明显升高（P ＜0.05）;与非 DPN 组相比,DPN 组患者皮肤 AGEs 水平明显增（P ＜0.05）,两组 HbA1c 水平差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论T2DM 患者皮肤 AGEs 水平升高可能参与糖尿病周围神经病变的发生。     

晚期糖基化终产物通过氧化应激加速动脉粥样硬化斑块形成

目的探讨晚期糖基化终产物(AGE)对动脉粥样斑块形成的影响及机制.方法 50只新西兰白兔随机分为5组,A组喂饲高胆固醇饲料加注射AGE修饰的兔血清白蛋白(AGE-RSA,5 mg/kg,1次/隔天);B组喂饲高胆固醇饲料加注射未加修饰的兔血清白蛋白(RSA,5 mg/kg,1次/隔天);C组单纯喂饲高胆固醇饲料;D组喂饲普通饲料;E组喂饲普通饲料加注射AGE-RSA(5 mg/kg,1次/隔天).10周后取主动脉全段,苏丹Ⅳ染色,PHOTOSHOP系统测定粥样斑块面积占内膜面积的百分比,免疫组化法观察主动脉AGE、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、丙二醛修饰低密度脂蛋白(MDA-LDL)的沉积及AGE受体 (RAGE)的表达.同时检测循环AGE、血脂、血清硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHPx)活性、丙二醛(MDA)及氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)水平.结果 (1) 喂饲高胆固醇饲料各组动物主动脉均见粥样硬化斑块形成,但A组动脉粥样斑块面积/内膜面积百分比(50%±8%)明显高于B组(21%±7%)和C组(29%±6%)(P均<0.05),A组粥样斑块病变部位 MDA-LDL、ox-LDL、AGE的沉积面积较B、C组明显增大,内皮细胞RAGE表达上调;而D组和E组主动脉未见粥样斑块病变.(2)喂饲高胆固醇饲料各组动物的血清甘油三酯及胆固醇水平明显增高,但各组间差异无显著意义. A组循环AGE、MDA、ox-LDL水平明显高于B、C、E组, SeGSHPx活性显著低于B、C、E组. (3) 血清AGE水平与血清ox-LDL(r=0.459,P<0.01)及血清MDA( r=0.423,P<0.05)呈正相关,与血清SeGSHPx呈负相关(r=-0.448,P<0.01);血清AGE水平与主动脉RAGE表达面积(r=0.384,P<0.05)及AGE沉积面积(r=0.468,P<0.05)呈正相关.结论 AGE加速实验性高脂血症动物动脉粥样斑块形成,其机制可能与增加氧化应激、促进脂蛋白氧化及上调RAGE表达有关.     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞eNOS活性和表达的影响

目的　研究糖基化终产物 (AGEs)对内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的活性及蛋白表达的影响。方法　用糖孵育法制备糖基化修饰的牛血清白蛋白 (AGE BSA) ,用胶原酶法分离培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。将内皮细胞与不同浓度的AGE BSA在体外分别培养 3 ,6,12 ,2 4,48h ,用同位素二步色谱法检测基础状态下与组胺刺激后的eNOS活性 ,用蛋白免疫印迹法 (Western blotting)检测eNOS蛋白表达水平。结果　基础状态下 ,HUVECs的eNOS有部分激活 ,组胺刺激后eNOS活性明显增加 (P <0 .0 0 1)。AGE BSA明显抑制基础状态下的eNOS活性和组胺刺激后的eNOS活性增高(P <0 .0 0 1) ,这种抑制作用呈时间、浓度依赖性。AGE BSA与HUVECs共同孵育 2 4h后的eNOS表达水平明显降低 (P <0 .0 0 1) ,且随着孵育时间的延长 ,eNOS表达水平进一步降低 (P <0 .0 5 ,48hvs 2 4h) ,这种抑制作用与AGE BSA的浓度有关。结论　AGE BSA明显抑制eNOS基础状态和组胺刺激后的活性增高 ,AGE BSA明显抑制HUVECs的eNOS表达 ,AGE BSA对eNOS活性的抑制作用可能与降低eNOS表达有关。     

罗格列酮改善晚期糖基化终产物导致的皮祖细胞功能损伤

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂能否改善由于晚期糖基化终产物(AGEs)导致的内皮祖细胞(EPCs)功能损伤.方法 将培养的健康成人外周血EPCs置于含有不同质量浓度的糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA)的培养基中培养,分别为人血清白蛋白(HSA,对照组),AGE-HSA 50 mg/L(AGE-HSA 50 mg/L组)、AGE-HSA 100 mg/L(AGE-HSA 100 mg/L组),AGE-HSA 200 mg/L(AGE-HSA 200 mg/L组),AGE-HSA 200 mg/L+罗格列酮10 nmol/L(AGE-HSA+罗格列酮组),AGE-HSA 200 mg/L+抗AGEs受体(RAGE)抗体50 mg/L(AGE-HsA+RAGE组).另设立一个空白对照组.检测EPCs的增殖、黏附、迁移、NO分泌能力、凋亡和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的分泌情况.结果 AGE-HSA 200 mg/L组的EPCs增殖率较空白对照组显著下降(37.7±6.3)%(P<0.05),显著低于AGE-HSA+罗格列酮组的(89.3±5.9)%(P<0.05).AGE-HSA 200 mg/L的黏附细胞数、迁移细胞数分别为(20.2±1.3)、(15.0±2.1)个/高倍视野,均显著低于空白对照组的(35.6±1.5)、(28.6±2.8)个/高倍视野(P值均<0.05).AGE-HSA 200 mg/L组的凋亡率为(15.2±1.0)%,显著高于空白对照组的(4.6±0.8)%(P<0.05).AGE-HSA+罗格列酮组的黏附细胞数为(31.2±2.6)个/高倍视野,迁移细胞数为(21.6±3.1)个/高倍视野,凋亡率为(6.1±0.9)%,与AGE-HSA 200 mg/L组的差异均有统计学意义(P值均<0.05).AGE-HSA+罗格列酮组的EPCs培养上清液中的NO含量为(16.2±1.0)μmol/L,显著高于AGE-HSA 200 mg/L组的(10.2±0.5)μmol/L(P<0.05),VCAM-1为(5.2±0.04)μg/L,显著低于AGE-HSA 200 mg/L组的(6.2±0.1)μg/L(P<0.05).结论 PPARγ激动剂罗格列酮能够改善AGEs导致的EPCs功能损伤.     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠肾脏晚期糖基化终产物及其受体表达的影响

目的观察厄贝沙坦对糖尿病肾病（DN）大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGEs）表达的影响,探讨其对DN的肾保护作用机制。方法应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组：DN模型对照组、厄贝沙坦组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察24h尿蛋白定量、血清和肾组织AGEs含量变化,免疫组化法检测肾组织RAGEs的表达,RT-PCR法检测肾组织RAGEs mRNA的表达,光镜观察肾脏病理改变。结果应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量、血清及肾组织AGEs含量明显减少,肾组织RAGEs含量及其mRNA表达水平明显降低,肾脏病理改变显著减轻。结论厄贝沙坦对DN的肾保护作用机制与降低血清、肾组织AGEs水平以及肾组织RAGEs含量,抑制肾组织RAGEs mRNA表达有关。     

糖化终末产物对内皮细胞氧化应激的影响

目的研究糖化终末产物(AGEs)对猪髂动脉内皮细胞(PIEC)氧化应激的影响。方法不同浓度AGEs干预PIEC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力变化。运用活性氧(ROS)捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平。结果随着AGEs浓度的增加和作用时间的延长,PIEC活力明显下降(P<0.05);细胞活力下降与作用浓度及时间呈显著正相关(r=0.927,P<0.01)。经DCFH-DA孵育后流式细胞仪检测显示,AGEs处理组细胞内DCF平均荧光强度较空白对照组明显升高。结论AGEs抑制内皮细胞活力,使细胞内ROS生成明显增加,直接诱导内皮细胞的氧化应激。     

可溶性晚期糖基化终末产物受体及其基因多态性与2型糖尿病的易感性分析

目的 探讨可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)水平及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)基因单核苷酸位点多态性与2型糖尿病的关联。方法 选择184例2型糖尿病患者作为糖尿病组,190例健康体检者作为正常对照组。ELISA方法检测sRAGE水平,PCR-TaqMan-MGB探针检测rs2070600、rs1800624、rs1800625及rs184003基因分型。结果 糖尿病组sRAGE水平[M(P₂₅,P₇₅)]为1087.4(713.5,1213.4)pg/mL,正常对照组sRAGE为908.2(674.6,1107.1)pg/mL,两组差异有统计学意义(P<0.001)。糖尿病组与正常对照组间4个位点的最小等位基因频率分布均无统计学差异,且在基因型分析中也无阳性发现。线性相关分析表明,4个位点与sRAGE水平均无明显关联性。结论 sRAGE水平与2型糖尿病的发病相关,但RAGE位点多态性与糖尿病无明显关联。RAGE位点多态性与sRAGE水平无关联。     

内源性可溶性糖化终末产物受体和内源性分泌型糖化终末产物受体水平对糖尿病性骨质疏松症的诊断价值

目的探讨内源性可溶性糖化终末产物受体(sRAGE)和内源性分泌型糖化终末产物受体(esRAGE)对糖尿病性骨质疏松症的诊断价值。方法 59例≥50岁髋部骨折住院患者分为非糖尿病组(Ⅰ组,20例)、糖尿病非骨质疏松症组(Ⅱ组,21例)及糖尿病合并骨质疏松症组(Ⅲ组,18例),用双能X线骨密度仪检测骨密度(BMD),酶联免疫吸附测定法检测血浆sRAGE、esRAGE水平,并检测空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、碱性磷酸酶(AKP)、钙(Ca)等生物化学指标及体质量指数(BMI)。结果 3组患者的BMI、Cr、TG、TC、AKP水平差异均无统计学意义(P>0.05),Ⅰ组和Ⅱ组患者血浆Ca水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但与Ⅲ组Ca水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);3组间血浆FBG、HbA1c、BMD、sRAGE、esRAGE水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);sRAGE、esRAGE水平与FBG、HbA1c呈负相关(P<0.01),与BMD呈正相关(P<0.01)。结论血浆sRAGE、esRAGE可能成为糖尿病性骨质疏松症的诊断指标。