miR-19a和miR-92a在多发性骨髓瘤中的功能及其信号通路分析

目的:利用微小RNA(microR,miRNA)种子序列的反义寡核苷酸研究miR-19a和miR-92a簇在多发性骨髓瘤中的功能及其信号通路分析。方法:实验分为miR-19a种子序列反义寡核苷酸(t-antimiR-19a)组、miR-92a种子序列反义寡核苷酸(t-antimiR-92a)组、随机对照组和空白对照组,通过MTT法检测细胞活力;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;Transwell小室法检测反义寡核苷酸转染细胞的侵袭能力;生物信息学软件miRFocus用来分析miR-19a和miR-92a的靶基因和其参与的信号通路。结果:MTT结果表明t-antimiR-19a和t-antimiR-92a显著抑制RPMI-8266细胞的生长,t-antimiR-19a和t-antimiR-92a的最佳浓度是0.5μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。细胞集落形成实验显示,相比于随机对照组,t-antimiR-19a组和t-antimiR-92a组的细胞形成集落的能力减弱,集落形成抑制率显著降低。Transwell小室实验显示,相比于随机对照组,t-antimiR-19a组和t-antimiR-92a组的侵袭能力减弱,具有侵袭能力的细胞数显著降低。miRFocus软件分析miR-19a和miR-92a参与多条与肿瘤有关的重要的信号通路。结论:miR-19a和miR-92a有可能作为治疗多发性骨髓瘤的潜在靶点。     

miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖-凋亡的影响

目的探讨miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。方法RT-qPCR检测21例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织中miR-146a表达;将miR-146a模拟物和miR-146a阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞中,RT-qPCR检测转染后SKOV3细胞中miR-146a的表达;CCK8检测转染后miR-146a对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染后miR-146a对细胞凋亡的影响;Western blot检测SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的表达。结果 miR-146a在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织;转染miR-146a模拟物能显著提高SKOV3细胞miR-146a的表达量,显著降低SKOV3细胞的增殖能力,提高SKOV3细胞的凋亡率,抑制SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的蛋白表达(P0.01)。结论 miR-146a在卵巢癌癌组织低表达,转染miR-146a模拟物能抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

miR-146a介导PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞诱导的肝纤维化

目的探讨微小RNA(miR)-146a在转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化中的作用,并通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路观察其对肝纤维化的影响。方法采用四氯化碳(CC1_4)建立肝纤维化大鼠模型,检测大鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅰ型胶原(Ⅰ-C)水平,Masson染色观察肝组织病变,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织miR-146a表达,蛋白免疫印迹实验(Westem blot)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PI3K和磷酸化(P)-Akt蛋白表达。HSC (肝星状细胞)-T6细胞分为Normal组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组。TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组分别转染miR-146a mimics阴性对照物和miR-146a mimics,然后除Normal组外,其余各组采用TGF-β1诱导HSC-T6细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖情况,Real-time PCR法检测miR-146a表达,Western blot法检测α-SMA、Ⅲ-C、Ⅰ-C、PI3K和p-Akt蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原沉积明显增加,纤维增生显著;血清HA、LN、PCⅢ和Ⅳ-C水平显著升高;肝组织miR-146a表达明显降低;而PI3K和P-Akt蛋白表达明显增加。TGF-β1组和TGF-β1+miR-NC组HSC-T6细胞各指标差异均无统计学意义。与TGF-β1+miR-NC组比较,TGF-β1+miR-M组miR-14表达明显增加,细胞活性、α-SMA表达、Ⅲ-C和Ⅰ-C均明显降低,PI3K和P-Akt蛋白表达明显下调。结论 miR-146a能够抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化,其抗肝纤维化机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)通过激活mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号途径对人卵巢癌细胞HO8910增殖的影响。方法应用AM及mTOR拮抗剂(雷帕霉素)诱导卵巢癌细胞,CCK8法检测AM及雷帕霉素对卵巢癌细胞增殖的影响,进一步采用Western印迹法,测定AM对mTOR磷酸化的激活作用结果 AM可促进卵巢癌细胞的增殖,并呈剂量依赖关系及受体依赖关系,而这种促增殖作用可被mTOR信号通路的拮抗剂雷帕霉素所抑制;随着AM浓度的增加,卵巢癌细胞mTOR磷酸化水平随之升高。结论AM介导的mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的分子靶向治疗提供新的思路。     

microRNA-29a通过PI3K/AKT/mTOR信号途径抑制子宫内膜癌的发生

目的:探讨microRNA-29a(miR-29a)在子宫内膜癌细胞中的表达及意义.方法:应用基因芯片技术检测并分析在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中差异性表达的miRNA;RT-PCR检测子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miR-29a的表达水平;采用脂质体瞬时转染法将miR-29a mimic/inhibitor...     

miR-130a靶向调节SMAD4基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-130a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-130a抑制剂组、miR-130a模拟物组和对照组,分别将miR-130a抑制剂或miR-130a模拟物转染至miR-130a抑制剂组或miR-130a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-130a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞SMAD4 mRNA和蛋白表达水平。结果转染miR-130a模拟物后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著升高,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著降低,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著降低(P0.01);转染miR-130a抑制剂后,SKOV3细胞miR-130a的表达水平显著降低,SKOV3细胞的增殖与侵袭能力显著升高,SMAD4 mRNA及蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。结论 miR-130a抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调SMAD4的表达相关。     

基于PTEN/PI3K/AKT通路探讨miR-29a对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 基于第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)通路探讨微小RNA-29a(miR-29a)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 体外培养人卵巢癌细胞A2780细胞,分为对照组(不转染)、siRNA NC组(转染nonsense siRNA)、miR-29...     

miR-26a靶向调节GSK-3β基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-26a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-26a抑制剂组、miR-26a模拟物组和对照组,分别将miR-26a抑制剂或miR-26a模拟物转染至miR-26a抑制剂组或miR-26a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-26a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞GSK-3βm RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞miR-26a表达水平显著降低,miR-26a模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著降低,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著升高,miR-26a模拟物组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-26a促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调GSK-3β的表达相关。     

PI3K/Akt信号通路及其抑制剂的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸-苏氨酸激酶（Akt）信号通路在信号转导的调控中扮演着重要角色,能调节细胞增殖、凋亡、代谢、运动、血管生成等生物过程。与其他信号通路相比,PI3K/Akt信号通路的组成部分更庞大,在肿瘤中更多见。目前已证实多种肿瘤中存在PI3K/Akt信号通路的超活化,对肿瘤细胞的存活、生长、运动、血管生成和代谢意义重大。因此,抑制PI3K和与通路相关的成分可能会使肿瘤生长受抑,使患者预后改善。PI3K/Akt信号通路抑制剂包括针对单一成分的抑制剂和双重抑制剂。目前大量的PI3K抑制剂已在临床前期研究中取得良好结果,有些已经在血液恶性肿瘤和实体肿瘤中进行了临床试验。在此综述中,我们简单的总结了PI3K-AKt通路的研究成果,讨论了PI3K抑制剂从临床前研究到临床研究的发展前景。     

miR-198在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖作用的机制研究

目的 研究微小RNA-198 (microRNA-198,miR-198)在卵巢癌中的表达水平及对卵巢癌细胞增殖的影响,并探讨其发挥作用的分子机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平;t检验分析卵巢癌中miR-198的表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-198的表达对癌患者预后的影响;qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达;选择低表达miR-198的卵巢癌细胞系,转染miR-198模拟物(mimic),分为对照组NC和实验组miR-198 mimic,qRT-PCR检测各组细胞中miR-198的表达水平;MTS实验检测各组细胞的增殖活性;平板克隆检测各组细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测各组细胞的周期比率;Western blotting检测miR-198对增殖周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclinD1和p21表达的影响.结果 qRT-PCR结果显示miR-198在卵巢癌中的表达低于正常卵巢组织(t=6.55,P＜0.001),且miR-198的表达与患者淋巴结转移和FIGO分期相关(P ＜0.05);miR-198低表达的卵巢癌患者预后较差(x2=4.14,P=0.035).与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1中的表达降低,在SKOV3细胞系中的表达最低(F=59.07,P＜0.001).与对照组NC相比,实验组miR-198 mimic细胞中miR-198的表达增加(t=16.50,P＜0.001),miR-198 mimic组细胞增殖活性和克隆形成能力降低及诱导细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.05);与对照组NC相比,miR-198 mimic组细胞中CDK4、CDK6和cyclinD1蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P＜0.05).结论 miR-198可能通过调控细胞周期抑制卵巢癌细胞的增殖.miR-198可能是治疗卵巢癌的潜在靶点.     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Suppression of PI3K/Akt/mTOR Signaling Pathway and Antioxidant System and Reversal of Cancer Cells Resistance to Cisplatin under the Effect of Curcumin

Bulletin of Experimental Biology and Medicine - The effect of curcumin on the resistance of SKOV-3 human ovarian adenocarcinoma cells to cisplatin was studied. It was found that curcumin induced...     

蛋白磷酸酯酶2A通过MAPK信号通路抑制宫颈癌细胞侵袭

目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌细胞侵袭中的作用及其可能机制。方法:常规培养Hela细胞,通过药物或基因调节PP2A水平,药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6)、DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染组中将Hela细胞分为对照组(DsRed组,n=6)、wtPP2A组(n=6)和siPP2A组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用小室穿孔实验观察其对Hela细胞侵袭的影响;蛋白免疫印迹实验(Western Blot)观察其对MAPK信号通路的作用。结果:研究发现上调PP2A可显著抑制Hela细胞侵袭,而下调PP2A则显著促进Hela细胞侵袭;激活PP2A可去磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶家族(p-JNK, p-p38和p-ERK MAPK)及金属蛋白酶9(MMP-9)。结论:PP2A可能通过去磷酸化MAPK信号通路下调MMP-9起调节宫颈癌细胞侵袭的作用。     

Lipopolysaccharide Affects the Proliferation and Glucose Metabolism of Cervical Cancer Cells Through the FRA1/MDM2/p53 Pathway

Previous studies have found that LPS and FRA1 play opposite roles in cervical cancer. In addition, LPS functions by regulating the expression of FRA1 in many disease models, but there is currently no study of their relationship in the energy metabolism of tumor cells. This study, therefore, investigates the effects of LPS on FRA1-mediated glucose metabolism and the possible mechanisms it may have in cervical cancer cells. We constructed FRA1 stable overexpressing/ empty vector cervical cancer cell lines, where glucose consumption, the level of lactic acid production and the expression of energy metabolism related molecules were detected under the stimulation of LPS. At the same time, the changes in proliferation ability of cervical cancer cells were detected. We discovered that LPS promotes glucose consumption, lactic acid production, pentose phosphate bypass, and inhibits aerobic oxidation, by inhibiting the expression of FRA1; and that LPS promotes the growth of cervical cancer cells. Our results indicate that LPS affects the proliferation and glucose metabolism of cervical cancer cells through the FRA1/MDM2/p53 pathway.     

Glioma Formation, Cancer Stem Cells, and Akt Signaling

Several recent reports have provided evidence that cancer is initiated by a rare fraction of cells called “cancer stem cells” which are multipotent, self-renewing subset of the tumor. However, several issues regarding the biology and techniques of isolating these cells from solid tumors remain to be clarified. In addition, experimental data supports two possibilities for glioma cell of origin. First, that stem cells or early progenitors are transformed and show variable differentiation of their progeny during tumor development. Second, that more differentiated glia are transformed by genetic events that lead to a loss of differentiation maintenance. In human gliomas, these two theories are not mutually exclusive. In this review we will summarize both theories, and highlight outstanding issues that remain to be resolved.