抗DEN-2基因核酶的克隆及其体外切割活性的研究

目的：探讨核酶抗登革病毒活性。方法：根据DEN－2基因结构的特点，按照锤头状核酶的结构模型和作用模式，设计，合成针对172－174GUC位点的核酶基因；定向插入质粒pGEM-3Zf( )的Sac I和Sal I位点之间；核酶基因克隆和DEN－2靶基因克隆分别进行体外转录，生成核酶的靶RNA，体外进行切割反应。结果：核酶与登革病毒靶序列体外产物电泳 见预期切割条带。结论：该核酶具有切割相应靶RNA的活性，可进一步用于细胞内核酶抗登革病毒的研究。     

RNase P对人巨细胞病毒mRNA的体外靶定切割研究

目的探讨棱酶P对HCMV UL97 mRNA的体外切割能力.方法以人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)磷酸转移酶mRNA序列为靶设计extemal guide sequences(EGS),共价结合到大肠杆菌来源M1 RNA中,构建成M1GS-T5核酶.对其进行UL97基因亚克隆片段转录产物的体外切割实验.结果该核酶在一定离子浓度下具对UL 97mRNA片段产生特异切割能力.结论新构建得到的核酶MIGS-T5具特异性切割活性,可发展为一种抗病毒试剂.     

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发生中的调控机制

目的 探讨在单纯性马蹄内翻足发生过程中GLI3基因的凋控机制.方法 构建荧光素酶报告基因表达载体,分析大鼠Gli3基因5′侧翼启动子区域的活性.用P-Match软件预测Gli3基因上游序列中转录因子的结合位点,并通过染色质免疫沉淀实验、凝胶迁移实验验证.用RNA干扰实验以及构建Hoxd13表达载体,观察其在L6细胞中对Gli3基因表达的影响.结果 在大鼠Gli3基因序列的启动子区域发现2个Hoxd13的结合位点,染色质免疫沉淀和凝胶迁移实验证实Hoxd13结合于结合位点2上.Hoxd13表达下调时,Gli3基因表达明显上调.Hoxd13基因表达上调时,Gli3基因则表达下调.结论 在大鼠胚胎肢体发育中,Hoxd13蛋白可能与Gli3基因启动子区的Hoxd13结合位点2结合,调控Gli3的表达.     

一种HCV靶向性M1GS核酶的构建及其体外活性

目的构建对HCV基因组具有特异切割作用的新型靶向性核酶-M1GS。方法针对HCV基因组的保守区(5′UTR)设计并合成一段引导序列,通过PCR扩增直接将该引导序列连接于大肠杆菌核糖核酸酶P的催化亚基(M1 RNA)的3′末端,从而构建一类靶向性M1GS核酶。结果体外切割实验表明,所构建的核酶(M1GS-HCV/C67)对HCV5′UTR具有明显的切割作用,切割的位点在靶序列67~68 nt之间,属于特异性切割。结论构建了一种对HCV5′UTR具有靶向切割活性的M1GS核酶,为胞内反义效应及动物模型内抗病毒效应的评价提供了实验材料,为新型抗HCV药物的研究奠定了基础。     

M1RNA在基因治疗中的研究进展

E.coli RNase P复合体的 M1RNA亚单位是一类具有催化活性的核酶 ,它切割 t RNA前体分子 (pre-t RNA)的 5′端前导序列 ,产生成熟的 t RNA分子。M1RNA主要通过结构特异性识别底物 ,不需要底物有特定的序列 ,从而可设计修饰过的核酶来抑制靶基因的表达。在消除染色体易位产生的肿瘤相关畸形染色体上 ,M1RNA是一种理想的工具。研究表明 M1RNA作为一种新型核酶有着广阔的应用前景和极大的临床价值     

抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展

乙型肝炎病毒(HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒,特别是在我国约有1.2亿人为HBV携事业者,占世界的1/3.对已感染HBV者,常用的化学及免疫疗法通常无效.今年来,研究者试图利用反义技术,通过在基轩表达水平上抑制HBV的复制,来达到治疗HBV感染的目的.核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子,能特异地结合并切割靶RNA分子.HDV核酶唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型,研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势.本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述.     

一个RNA剪接调控元件分类方法的研究

序列分类方法被广泛应用于各种生物信息学问题,例如转录调控元件识别和蛋白结构预测。本研究设计了一个新的基于序列特征的分类方法,并将其用于RNA剪接调控元件的研究。该方法从已知剪接元件中抽取序列特征,构建一个打分算法,由此预测未知元件RNA剪接调控功能。作为应用实例,采用已知外显子剪接增强子和沉默子(ESE和ESS)八联体作为实验数据,对本方法和若干已知常用方法的预测结果进行比较,3类计算验证实验中的平均预测精度为93%,表现出良好预测精度,且其透明的预测结构可帮助进行生物解释。该研究提供了一种可用于分析生物序列数据的新方法,给出了一个从生物信息学角度来研究基因调控问题的新途径。     

小鼠心脏发育中RNA编辑的动态变化及影响

目的 探讨RNA编辑在小鼠心脏发育过程中的动态变化并对其功能影响进行分析预测.方法 从ArrayExpress数据库获取小鼠心脏发育的转录组数据(E-MTAB-6798),使用SPRINT和ANNOVAR工具识别和注释RNA编辑位点,从编辑酶表达水平、编辑位点数、样本编辑水平和编辑指数方面描述RNA编辑的动态变化,并通...     

核酶抑制乙型肝炎病毒的研究进展

核酶是一种有自动切割作用的RNA分子,不仅能够与双链DNA或者是RNA分子结合从而抑制他们的转录或翻译,而且由于它的自动切割作用能够在相应的位点切割核酸序列,具有酶的活性,因而其在HBV的基因治疗中的前景比较看好。本文针对乙型病毒性肝炎核酶的设计、构建、靶向性导入和稳定表达等问题进行了综述。