髓样分化因子88与人卵巢癌紫杉醇耐药细胞系A2780/Taxol耐药性相关

目的 本研究希望通过外源改变MyD88的表达,明确其与紫杉醇耐药的相关性,检测MyD88对细胞生物学活性的影响.方法 通过在A2780/Taxol细胞中敲低和过表达MyD88后,利用real-time PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测MyD88的表达变化;CCK-8法检测细胞转染前后对紫杉醇耐药性的变化,流式技术检测MyD88对细胞周期和凋亡的影响.结果 敲低MyD88表达水平,耐药细胞系A2780/Taxol对紫杉醇的耐药性明显降低(P＜0.01),抗凋亡能力减弱(P＜0.01);过表达MyD88后,细胞对紫杉醇耐药性增加(P＜0.05).结论 抑制卵巢癌细胞中MyD88的表达,能促进耐药细胞系对紫杉醇的敏感性,为临床卵巢癌耐药患者以MyD88为靶向的基因治疗提供了新思路和手段.     

p53依赖的X-连锁凋亡抑制蛋白调节与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的本研究旨在探讨X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在卵巢癌顺铂耐药中的作用。方法应用RT—PCR、Western Blot、流式细胞仪等检测卵巢癌顺铂敏感细胞株0V2008、A2780s和耐药株C13＊、A2780cp中XIAP表达和卵巢癌细胞的凋亡率,并将反义XIAP寡核苷酸（XIAPAs—ODN）、正义XIAP寡核苷酸（XIAPs—ODN）和随机对照链导入顺铂耐药细胞C13＊（p53野生型）和A2780cp（p53突变型）中,比较转染前、后耐药细胞Caspase-3活性和顺铂耐药性的改变。结果卵巢癌顺铂敏感细胞和耐药细胞中XIAP在mRNA水平的表达无明显差异（P〉0．05）。顺铂可以引起OV2008和A2780s中XIAP蛋白表达明显下降（P〈0．05）,而对C13＊和A2780cp的XIAP蛋白含量无明显影响（P〉0．05）。转染XIAPAs—ODN可降调p53野生型耐药细胞C13＊中XIAP的表达,并显著增加Caspase-3活性和对顺铂敏感性（P〈0．05）,而XIAP As—ODN对p53突变型耐药细胞A2780cp无此作用。结论卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与XIAP蛋白相对高表达有关,反义XIAP可在一定程度上逆转卵巢癌顺铂耐药,该作用与卵巢癌细胞的p53表型有关。     

卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及耐药相关基因和凋亡抑制基因表达关系的初步探讨

目的 分析比较4种常见的人E皮性卵巢癌细胞系IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及部分耐药相关基因和凋亡抑制基因表达的关系,为今后研究IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药的机制奠定基础.方法 IL-6、IL-8及其受体的表达采用RT-PCR、ELISA及免疫印迹技术进行检测,卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性采用M1Tr试验进行分析,耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达则采用RT-PCR进行测定.结果 1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致.2)4种卵巢癌细胞均表达IL-6受体和IL-8受体.3)4种卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,ES-2细胞次之,CAOV-3和SKOV-3细胞则有不同程度的耐药性.4)部分耐药相关基因和凋亡抑制基因在A2780和ES-2细胞中的表达水平均较低,而在CAOV-3和SKOV-3细胞中的表达水平均较高.结论 卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平(尤其是IL-6的水平)与其对顺铂和紫杉醇的敏感性基本呈负相关趋势,与其部分耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达水平相一致.     

内源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂与紫杉醇产生耐药的机制研究

目的探讨内源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原有工作基础上,以2种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,分别将正义(sense,ss)IL-8基因或反义(antisense,as)IL-8基因稳定转染至A2780细胞或SKOV3细胞,应用MTT法、Caspase-3活性测定、RT-PCR及Western blot技术等观察内源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号传导通路进行研究。结果 1)内源性过表达IL-8可诱导A2780细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药,而抑制IL-8表达可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,IL-8诱导的卵巢癌细胞化疗耐药是通过降低Caspase-3活性来实现的;2)内源性过表达IL-8可上调A2780细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达,而抑制IL-8表达可使上述基因的表达明显降低;3)Wortmannin(PI3K抑制剂)和PD98059(MEK1/2抑制剂)能分别阻断IL-8诱导下卵巢癌细胞的Akt和ERK活化及化疗耐药作用。结论 IL-8诱导的卵巢癌细胞化疗耐药可能与其上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达以及活化Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路相关,提示调节IL-8表达或其相关信号通路可能是治疗耐药性卵巢癌的一种良好策略。     

外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路的初步探讨

目的探讨外源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原工作基础上,以两种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,观察外源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号转导通路进行研究。结果①体外经IL-8处理的A2780细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性均明显降低即产生部分耐药(耐药倍数分别为6.07和7.23),其耐药程度均低于IL-8高表达的SKOV-3细胞(耐药倍数分别为8.22和9.03)。②IL-8可以剂量依赖的方式上调A2780和SKOV-3细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达。③MEK1/2抑制剂和PI3K抑制剂均能阻断IL-8诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药。结论IL-8-很可能通过上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达而致卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药。IL-8的上述作用是由Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt信号通路介导的。     

卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与他莫西芬敏感性及MAPK、Akt活性和ER特异性位点磷酸化水平的关系

目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与他莫西芬(TAM)敏感性及MAPK、Akt活性和雌激素受体(ER)特异性位点磷酸化水平的关系,探讨IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制。方法:RT-PCR及ELISA法检测IL-6、IL-8的表达,MTT法分析卵巢癌细胞对TAM的敏感性,免疫印迹法测定MAPK、Akt活性及ER特异性位点的磷酸化水平。结果:(1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致;(2)4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性,其耐药倍数分别为4.99、3.76和2.66;(3)4种卵巢癌细胞的MAPK、Akt活性存在差异,CAOV-3细胞的二者活性最强,SKOV-3细胞的MAPK活性弱于ES-2细胞,而其Akt活性则强于ES-2细胞,A2780细胞未检测到二者有活性;(4)ER的第167位丝氨酸(Ser167)在四种卵巢癌细胞中均存在不同程度的磷酸化,ER的第118位丝氨酸(Ser118)除A2780细胞外亦存在不同程度的磷酸化。结论:卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其MAPK、Akt活性和ER特异性位点(Ser167、Ser118)的磷酸化水平相一致。     

纳秒电脉冲致人卵巢癌细胞DNA损伤的时间效应

本研究旨在探讨纳秒电脉冲(nsEP)对人卵巢癌细胞铂敏感株A2780及铂耐药株C30的DNA损伤效应。将A2780和C30分别作用于场强为6kV/cm,脉宽为24ns的脉冲电场处理60s。假处理组予假脉冲处理。nsEP处理后0h、4h、8h、12h和24h采用CCK-8法检测细胞生存率;采用碱性单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测细胞DNA损伤,测定彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)的75th百分位数。结果显示随着时间增加,A2780和C30细胞的生存率和彗星形成率均先降低后增加,8h时最低(P0.05);C30细胞的生存率高于A2780细胞(P0.05),彗星形成率低于A2780细胞(P0.05);C30细胞的TL、TM和OTM均低于A2780细胞(P0.05);细胞死亡率和彗星形成率呈正相关(r=0.997,P0.05;r=0.998,P0.05)。结果表明,nsEP对人卵巢癌铂敏感细胞株和铂耐药细胞株的DNA损伤效应存在差异;nsEP致细胞死亡与DNA损伤相关。     

IL-6经MEK/ERK途径促进ERα-Ser118磷酸化影响卵巢癌细胞他莫昔芬耐药

目的研究IL-6信号通路对ERα的Ser118位点磷酸化影响、对ERα转录活性的影响及IL-6诱导卵巢癌TAM耐药的机制。方法脂质体转染法获得内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞株和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌CAOV3细胞株,Western blot法检测内源性和外源性IL-6对ERK和ERα的Ser118位点磷酸化影响,MTT法检测IL-6的MEK/ERK信号通路对A2780细胞TAM耐药性的影响,荧光素酶活性检测IL-6的MEK/ERK信号通路对ERα转录活性的影响。结果过表达IL-6能上调A2780细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平,而抑制IL-6表达下调CAOV3细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平;外源性IL-6上调A2780细胞中ERK的磷酸化水平,而MEK1/2特异性抑制剂PD98059则可以逆转IL-6介导的ERK及ERα-Ser118的磷酸化;PD98059可明显降低IL-6导致的A2890细胞对TAM的耐药性;IL-6明显促进ERα转录活性,而PD98059可逆转这一作用。结论 IL-6经MEK/ERK通路磷酸化ERα的Ser118位点促进ERα转录活性而激活ER途径,诱导OVCA细胞对TAM的耐药性。     

叠氮胸苷对人胶质母细胞瘤细胞株端粒酶活性、增殖和凋亡的影响

目的 探讨叠氮胸苷(AZT)对TJ905 人胶质母细胞瘤细胞株端粒酶活性、增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养TJ905细胞分别经50、100及200 μmol/L叠氮胸苷处理24 h后,用端粒重复扩增法检测端粒酶活性及集落形成效率;继续培养并维持相应叠氮胸苷浓度,取第1、3和6代细胞,利用Western blot检测cyclin A表达水平,用流式细胞术检测细胞周期分布并结合单细胞凝胶电泳检测细胞凋亡,用Ki-67免疫细胞化学染色检测细胞增殖活性.结果 叠氮胸苷可抑制TJ905细胞的端粒酶活性.50和100 μmol/L组cyclin A表达水平均显著低于对照组(P<0.01),并均呈时间和剂量依赖性降低.三个用药组的Go/G1期细胞均显著少于对照组(P<0.05～0.01),S期细胞均显著多于对照组(P<0.05～0.01);在各用药组第1代GO/G1期细胞减少和S期细胞增加均呈剂量依赖性;各用药组S期细胞增加均呈显著的时间依赖性,而Go/G1期细胞减少仅在50 μmol/L组呈时间依赖性.各用药组第1和6代的凋亡细胞数均显著多于对照组(P<0.05～0.01);各用药组第6代的凋亡细胞数随用药浓度升高而相应增加(P<0.05～0.01),且均多于同浓度组的第1和第3代(P<0.05～0.01).各用药组集落形成效率及Ki-67阳性细胞数均显著低于对照组(P<0.01),二者还随用药浓度增加和(或)作用时间延长相应减少.对照组各代间以上各指标的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 叠氮胸苷可通过抑制端粒酶活性抑制TJ905细胞cyclin A表达,阻止该细胞从S期向G2期过渡,发挥其抑制增殖和诱导凋亡的作用.     

磷酸化修饰对p53线粒体作用的影响以及与卵巢癌顺铂耐药的关系

目的探讨磷酸化修饰对p53直接线粒体转移的影响以及在顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡中的作用以及与卵巢癌顺铂耐药的关系。方法应用Western Blot检测顺铂作用前后卵巢癌顺铂敏感细胞OV2008、A2780s和顺铂耐药细胞C13＊、A2780cp的线粒体和细胞浆中Smac蛋白含量以及线粒体和全细胞中磷酸化p53（P-p53）的含量,并应用Hoechst染色法检测卵巢癌细胞的凋亡率。结果顺铂能引起卵巢癌敏感细胞OV2008、A2780s线粒体释放Smac至胞浆并引起细胞凋亡,但在C13＊和A2780cp中无此反应。顺铂处理后进入卵巢癌敏感细胞线粒体中的p53蛋白为磷酸化的p53。结论顺铂能引起p53转移至线粒体并导致卵巢癌敏感细胞线粒体释放Smac至胞浆,促进卵巢癌细胞的凋亡,并且磷酸化修饰作用可以影响p53的直接线粒体功能,与卵巢癌化疗耐药有关。