SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因克隆和变异分析

目的:获得SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因的克隆.方法:将SARS病毒RNA基因组逆转录合成cDNA,PCR得到阳性条带,将其亚克隆到pUCm-T载体中进行酶切及测序分析,并与Genbank中核苷酸序列进行同源性分析.结果:阳性克隆经酶切鉴定,目的基因片段长度为1905 bp,与Genbank中另外45株的SARS病毒株的S蛋白S1片段基因比较,共有13个位点发生突变,其中有8处为同义突变,5处为错义突变.结论:成功克隆SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因,为该基因的表达及功能研究奠定了基础.     

2株SARS相关冠状病毒主要结构蛋白基因的多态性分析

目的:分析2株SARS相关冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus,SARS-CoV)HK21378和BJi04的主要结构蛋白基因序列的多态性以及蛋白质结构变化与功能的关系.方法:提取组织培养物中的SARS-CoV基因组RNA,对RT-PCR产物进行测序;以GZ02为参照序列,对蛋白质编码序列进行基因多态性分析和蛋白质结构与功能关系分析.结果:①与SARS-CoV GZ02株相比较,HK21378和BJi04主要结构蛋白编码序列共有14个变异位点,其中9个变异位点为两者共有,3个变异位点见于HK21378,2个变异位点见于BJ104;与GenBank数据库已发表的103株SARS-CoV基因组数据比较,变异位点22901(T→G)为BJ104特有,未见于已发表的其他SARS-CoV基因组中;在14个多态位点中,有5个多态位点为同义突变,其余9个为非同义突变.②14个变异位点中有11个变异发生在S蛋白编码区,其碱基变异频率为3.7/kb;2个见于M蛋白编码区,其碱基变异频率为3.0/kb;1个见于N蛋白编码区,碱基变异频率为0.8/kb;而E蛋白编码区未见变异位点.结论:SARS-CoV的主要结构蛋白编码区容易发生变异,尤其是膜表面S蛋白和M蛋白编码区.     

SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确.将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coli M15诱导表达His-S1m蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2.Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型.经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应.结论: 成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础.     

重组pCMV-N-Tudor-SN点突变质粒的构建及表达

?目的: 构建Tudor-SN蛋白的Serine426 (S426)、Serine781 (S781)、Threonine240 (T240) 和Threonine429 (T429)的点突变质粒,并使该重组质粒能够在HeLa细胞中融合表达。 方法:利用定点突变技术,对Tudor-SN蛋白进行S426A、S781A、T240A、T429A点突变,通过双酶切的方法获得Tudor- SN.Mutants 片段,最后将其连入到pCMV-N-Flag载体中。在HeLa细胞中转染该质粒,利用Western blot技术检测质粒表达效率。 结果:（1）重组质粒经双酶切鉴定,可以观察到载体与Tudor-SN.Mutants的条带。 （2）转染突变质粒后可看出HeLa细胞中有Flag蛋白表达。结论:质粒构建成功,可以用于下一步科学研究使用。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白启动急性肺损伤的可能机制

目的:研究严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(CoV)S蛋白作用于呼吸道上皮及免疫细胞后对趋化因子IP-10和其他细胞因子生成的影响。方法:通过昆虫-杆状病毒表达系统表达SARS-CoV的S蛋白,并经镍亲和磁珠纯化,将重组的S蛋白分别作用于人支气管上皮细胞16HBE、外周血单个核细胞和单核细胞、肺泡单核-巨噬细胞,观察其形态学变化,并检测IP-10和其他细胞因子的变化。结果:基础状态下16HBE并不生成IP-10,S蛋白作用于人支气管上皮细胞16HBE,引起部分细胞变圆、空泡形成并裂解,12h后即可见IP-10生成达(79.97±13.81)pg/ml,呈显著量效关系。但对其他参与免疫反应的Th1/Th2细胞因子及趋化因子影响不明显。S蛋白并不诱导外周血单核细胞和单个核细胞(主要为淋巴细胞)合成释放IP-10。比较而言,干扰素-γ(IFN-γ)不仅能诱导16HBE,而能诱导免疫细胞生成IP-10。结论:①SARS-CoV可通过其S蛋白早期诱导肺上皮细胞合成释放IP-10,从而启动免疫病理过程。②SARS-CoVS蛋白诱导IP-10在宿主细胞的生成不依赖IFN-γ。     

新型四环素药物Eravacycline体外诱导金黄色葡萄球菌耐药16S rRNA基因突变位点分析

目的:研究Eravacycline体外诱导金黄色葡萄球菌耐药菌株的核糖体30S亚基16S rRNA基因和核糖体蛋白变异特点,阐明金黄色葡萄球菌Eravacycline耐药机制。方法:选择3株金黄色葡萄球菌株,采用Eravacycline不同压力浓度下逐渐诱导Eravacycline耐药金黄色葡萄球菌耐药菌株,挑取诱导菌株单克隆,采用琼脂平板稀释法测定母株及诱导系列的Tigecycline和Eravacycline的MIC值;通过PCR扩增其5个拷贝的16S rRNA基因(RR1-RR5)和30S核糖体蛋白基因,将诱导的Eravacycline耐药株扩增产物测序后与母株序列比较,获得该基因片段突变位点。结果:经过体外Eravacycline不同浓度梯度多步诱导共挑取6株Eravacycline耐药菌株,这些菌株的Tigecycline和Eravacycline的MIC值范围分别为8～16μg/mL和32～64μg/mL。16S rRNA基因PCR测序分析提示该基因的主要突变位点分别为RR1(T170G)、RR2(A1124G,G77A)、RR3(C810T)、RR4(G185A,G1036A),30S亚基核糖体蛋白S3蛋白没有突变,30S亚基核糖体蛋白S10基因多个位点突变。结论:金黄色葡萄球菌Eravacycline诱导耐药后可导致Tigecycline和Eravacycline的交叉耐药及16S rRNA基因和30S亚基核糖体蛋白S10位点突变。     

SARS冠状病毒S2蛋白胞外段的原核表达及其细胞膜融合效应研究

目的 构建SARS冠状病毒S2蛋白胞外段( S2ED)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白表达质粒,获得在原核细胞中表达的目的 蛋白.方法 在生物信息学预测基础上,利用PCR方法 扩增S2ED和EGFP的编码序列,插入到质粒pET-14b中构建融合表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白His-S2ED-EGFP.采用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白可溶部分,利用SDS-PAGE和免疫印迹的方法 鉴定纯化后的蛋白,通过荧光显微镜考察S2ED与Hela细胞胞膜能否发生融合效应.结果 重组质粒pET-14b-S2ED- EGFP的构建正确无误,并能够在BL21(DE3)中高效表达.纯化后的蛋白与Hela细胞孵育后,未观察到蛋白通过膜融合的过程内化进入细胞.结论 S2ED的绿色荧光蛋白融合表达载体构建成功,并在原核细胞中获得了部分可溶的表达和有效的纯化.虽然原核表达的重组蛋白未能在Hela细胞上发挥预期的生物学效应,但是该工作将为加深S2蛋白介导的胞膜融合过程的认识以及未来进行以特异性细胞结合肽为基础的定向靶细胞转运系统研究奠定重要的基础.     

2019-nCoV入胞机制及其抑制剂的研究进展

新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)与急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromes coronavirus,SARS-Co V)的核酸和编码的病毒蛋白高度同源,预示其生物学功能也可能非常相似。2019-nCoV利用其刺突蛋白(spike protein,S)的S1亚基与宿主细胞表面的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)受体结合,同时利用宿主蛋白酶切割S蛋白促进发生膜融合,进而内吞入胞。阻断2019-nCoV入胞过程的抑制剂主要可分为中和抗体/受体抑制剂、蛋白酶抑制剂和内吞调节因子抑制剂。目前,对2019-nCoV的认识仍然非常有限。相信随着研究的不断推进,能够更加深刻地认识病毒的致病机制,开发出更高效的抗病毒药物。     

期刊文摘

乙型肝炎病毒RNA上La蛋白结合位点缺失对S基因mRNA稳定性的影响[林园园,林菊生,谢娜等.中华肝脏病杂志,2006,14(7):517~520]为探讨乙型肝炎病毒(HBV)RNA上La蛋白结合位点的缺失对S基因mRNA在细胞内稳定性的影响,评价HBV RNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。构建HBV突变载体,使其转录出来的HBV RNA缺失La蛋白结合位点;计算机预测突变后这个位点所在的HBV RNA片段的二级结构,将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染HepG2细胞;半定量逆转录聚合酶链反应法检测HBV S基因的mRNA,酶联免疫…     

挪威人葡糖脑苷脂酶基因突变与帕金森病之间的关系

最近,对阿肯纳西犹太人中葡糖脑苷脂酶(GBA)基因突变与帕金森病(PD)之间的关系进行了报道。作者对311例挪威PD患者和474例对照者GBA蛋白的2种常见功能性突变进行筛查:N370S和L444P。7例患者(2.3%)和8例对照者(1.7%)携带GBA等位基因突变(P=0.58)。本研究未表明挪威GBA突变携带者     

丹酚酸B及其镁盐通过阻止病毒融合抑制SARS-CoV-2感染靶细胞

目的 探究中药单体丹酚酸B（Sal-B）及其镁盐体外抑制SARS-CoV-2感染靶细胞的效果及作用机制。方法 利用感染性SARS-CoV-2及SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型,检测Sal-B及其镁盐制剂注射用丹参多酚酸盐（ZDDY）的抗SARS-CoV-2活性;利用分子对接技术与分子动力学模拟技术,寻找Sal-B的抗病毒作用靶点;利用圆二色谱技术,检测六螺旋束（6-HB）的α-螺旋构象;利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系,检测Sal-B是否作用于新冠病毒入侵宿主的膜融合过程;利用流式细胞术,检测Sal-B是否作用于新冠病毒受体结合区RBD蛋白。结果 Sal-B与ZDDY在非洲绿猴肾细胞（Vero-E6）感染模型上抑制SARS-CoV-2的半数有效浓度EC50分为55.47 μmol/L,36.07 μg/mL;Sal-B与ZDDY抑制SARS-CoV-2的进入阶段,抑制SARS-CoV-2假病毒活性的IC50 分别为1.69 μmol/L,24.81 μg/mL;Sal-B可与SARS-CoV-2 S2亚基的8个氨基酸位点结合,亲和力为-8.2 kcal/moL,Sal-B在分子对接预测位点与 SARS-CoV-2 S2亚基稳定结合;Sal-B干扰SARS-CoV-2 HR1与HR2形成6-HB,显著降低6-HB的α-螺旋百分比（P<0.05）;Sal-B浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合,IC50为3.33 μmol/L;Sal-B不影响SARS-CoV-2 RBD蛋白与受体ACE2结合。结论 Sal-B及其镁盐制剂ZDDY体外可有效抑制SARS-CoV-2感染靶细胞,Sal-B通过抑制病毒膜融合过程发挥抗SARS-CoV-2活性。     

两种严重急性呼吸综合征冠状病毒S蛋白结构特征及抗原表位比较

目的: 通过严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV）-2与SARS-CoV S蛋白结构特征及抗原表位的比较分析,从分子水平为SARS-CoV-2致病机制研究提供数据支持,并为疫苗、抗体及药物研发寻找合适的候选靶点。方法: 利用生物信息学方法和工具,基于S蛋白参考序列进行理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、结构域、二级结构、三级结构分析及抗原表位预测,同时对受体血管紧张素转换酶2（ACE2）、C型凝集素（CLEC4M）的组织表达及关联通路、途径进行分析。结果: SARS-CoV-2、SARS-CoV S蛋白氨基酸序列一致性为75.80%,两者结构特征具有较高一致性,但SARS-CoV-2高级结构特征不如SARS-CoV明显。受体ACE2、CLEC4M在消化系统及心脏、肾脏、肺、胎盘中均有表达,主要关联的肾素-血管紧张素系统、蛋白质消化吸收通路及血管紧张素前体转化、G蛋白偶联受体（GPCR）配体结合途径与2019冠状病毒病典型症状相关。分析获得S蛋白三对高度或完全同源的抗原表位,即SARS-CoV-2 S蛋白第600~605位氨基酸残基与SARS-CoV第586~591位高度一致,SARS-CoV-2 S蛋白第695~703位、第888~896位氨基酸残基分别与SARS-CoV第677~685位、第870~878位高度或完全一致。结论: SARS-CoV-2与SARS-CoV S蛋白结构上的相似性决定了两者具有相近的感染模式和临床表现。筛选获得的高可信度的SARS-CoV-2候选抗原表位可为病毒诊断和疫苗研制提供参考。     

基于网络药理学和分子对接技术分析清肺排毒汤治疗COVID-19的机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术分析清肺排毒汤治疗COVID-19的作用靶点、信号通路和生物学功能。方法 利用TCMSP、SwissTarget Prediction、CooLGeN、GeneCards、DAVID等数据库,分析清肺排毒汤中麻黄、半夏等21味药所含的活性成分及其靶点蛋白,筛选与COVID-19疾病共有的靶点蛋白及其信号通路与生物学功能,采用Gephi软件构建清肺排毒汤药味-活性成分-作用靶点-生物学功能网络图。结果 清肺排毒汤中麻黄、半夏、甘草、冬花、紫菀、枳实等18味药的MOL000519、MOL000554、MOL004798、MOL004824、MOL010428、MOL013443等163个活性成分通过调控ACE、ACE2、AGTR1、FURIN、TNF、CASP3、CASP6、DPP4、MCL1、POLD1等10个蛋白靶点激活肾素-血管紧张素系统信号通路和细胞凋亡信号通路,发挥肾素-血管紧张素对血容量的调节、肾素-血管紧张素对全身动脉血压的调节等42种生物学功能治疗COVID-19。初步分子对接结果显示,核心活性成分MOL000519（来自半夏）、MOL000554（来自冬花）、MOL004798（来自麻黄）、MOL004824（来自甘草）、MOL010428（来自紫菀）、MOL013443（来自枳实）等与SARS-CoV-2 3CL水解酶有较好的亲合力,可形成稳定构象,具有较好结合活性（结合能≤-5 kJ/mol）。结论 清肺排毒汤以多药味、多靶点、多信号通道和多生物学功能发挥治疗COVID-19作用,该研 究可为深入阐释清肺排毒汤治疗COVID-19的药理作用及机制提供参考。     

新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒的制备及应用

目的 开发一种新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒,分析新型冠状病毒中和抗体在新冠疫苗效果监测中的临床应用价值。方法 表达纯化SARS-CoV-2病毒S蛋白RBD结构域和人ACE2蛋白,将RBD蛋白偶联HRP、ACE2蛋白偶联生物素(Bio),制备新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒;收集15例注射新冠疫苗志愿者血清,检测新冠疫苗注射前后机体中和抗体水平。结果 注射新冠疫苗前SARS-CoV-2中和抗体阳性率为0.00%,第1、2、3针新冠疫苗注射后11～15 d,阳性率分别为13.33%、93.33%、100.00%,第2针注射后第180～190 d,阳性率降低到33.33%;性能检测分析显示,最低检出限为0.06μg/mL,批内CV<5%,批间CV<10%,线性检测范围为0.030～3.125μg/mL,分析灵敏度验证值为0.040μg/mL,与微量细胞中和试验进行对比,确认与其具有高度一致性。结论 新型冠状病毒中和抗体酶联免疫检测试剂盒性能评价良好,检测方法具有快速、方便、易操作等特点,可以用于评估新冠疫苗的保护效果。     

基于网络药理学和分子对接探讨六神胶囊治疗COVID-19的物质基础及作用机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术探寻六神胶囊治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的潜在物质基础和分子机制。方法 借助常用的网络药理学数据库检索六神胶囊中雄黄、人工牛黄、冰片、蟾酥和麝香等的有效活性成分和作用靶点。通过UniProt数据库查询靶点对应的基因,Cytoscape 3.6.1软件构建中药-有效活性成分-有效靶点网络,通过Metascape平台进行GO富集分析、KEGG和Reactome信号通路分析,将中药有效活性成分-有效靶点网络中排名前20的单体与新型冠状病毒（SARS-CoV-2）3CL水解酶、血管紧张素转化酶Ⅱ（ACE2）以及SARS-CoV-2 RNA依赖性RNA聚合酶（RNA dependent RNA polymerase, RdRp）进行分子对接。结果 中药-有效活性成分-有效靶点网络包含药材5个、化合物132个、靶点2 082个,关键靶点涉及PTGS2、ESR1、PLA2G1B、PTGS1等。GO功能富集分析得到GO条目495个（P<0.05）,其中生物过程（BP）条目287个,细胞组成（CC）条目96个,分子功能（MF）条目112个。KEGG通路富集筛选得到107条信号通路（P<0.05）,主要涉及免疫和炎症通路,细胞生长、代谢、凋亡相关通路,癌症通路,神经活性配体-受体相互作用等。Reactome通路富集筛选得到85条信号通路（P<0.05）,主要涉及G蛋白偶联、白细胞介素信号、受体酪氨酸激酶信号、神经系统、基因转录等通路。分子对接结果显示六神胶囊中麦角胺、熊果酸、鹅去氧胆酸等核心活性化合物与SARS-CoV-2 3CL水解酶、ACE2以及SARS-CoV-2 RdRp的亲和力与临床推荐化学药相似。结论 六神胶囊中的活性成分麦角胺、熊果酸、鹅去氧胆酸等可能通过与ACE2结合并作用于PTGS2、ESR1、PLA2G1B和PTGS1等靶点调节多条信号通路,从而起到抑制SARS-CoV-2的作用。      

Angiotensin-converting enzyme 2 as a potential therapeutic target for COVID-19: A review

As of August 16, 2021, there have been 207,173,086 confirmed cases and 4,361,996 deaths due to the coronavirus disease (COVID-19), and the pandemic remains a global challenge. To date, no effective and approved drugs are available for the treatment of COVID-19. Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) plays a crucial role in the invasion into host cells by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2), the etiological agent of COVID-19. Notably, ACE2 density is influenced by medical conditions, such as hypertension, or by drugs, including angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEIs) and angiotensin receptor blockers (ARBs), which can change the fate of SARS-CoV-2 infectivity. ACE2 is a target for these drugs and can be manipulated to limit the viral entry and replication within the cells. Different strategies aimed at blocking ACE2 with small molecules, peptides, and antibodies, or by neutralizing the virus through its competitive binding with human recombinant soluble ACE2 (hrsACE2) are currently under investigation. In this article, we review the current state of knowledge that emphasizes the need to find effective therapeutic agents against COVID-19 by exploiting ACE2 as a potential target. The increased soluble ACE2 levels and the application of hrsACE2 in patients with COVID-19 can be implemented to control the disease. It has not yet been established whether hypertension and other comorbidities, independent of age, have a direct role in COVID-19. Therefore, the use of renin-angiotensin system inhibitors, ACEIs and ARBs, should not be discontinued during COVID-19 treatment.     

Assessment of the binding interactions of SARS-CoV-2 spike glycoprotein variants

Severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus 2 is a major global health issue and is driving the need for new therapeutics. The surface spike protein, which plays a central role in virus infection, is currently the target for vaccines and neutralizing treatments. The emergence of novel variants with multiple mutations in the spike protein may reduce the effectiveness of neutralizing antibodies by altering the binding activity of the protein with angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2). To understand the impact of spike protein mutations on the binding interactions required for virus infection and the effectiveness of neutralizing monoclonal antibody (mAb) therapies, the binding activities of the original spike protein receptor binding domain (RBD) sequence and the reported spike protein variants were investigated using surface plasmon resonance. In addition, the interactions of the ACE2 receptor, an anti-spike mAb (mAb1), a neutralizing mAb (mAb2), the original spike RBD sequence, and mutants D614G, N501Y, N439K, Y453F, and E484K were assessed. Compared to the original RBD, the Y453F and N501Y mutants displayed a significant increase in ACE2 binding affinity, whereas D614G had a substantial reduction in binding affinity. All mAb-RBD mutant proteins displayed a reduction in binding affinities relative to the original RBD, except for the E484K-mAb1 interaction. The potential neutralizing capability of mAb1 and mAb2 was investigated. Accordingly, mAb1 failed to inhibit the ACE2-RBD interaction while mAb2 inhibited the ACE2-RBD interactions for all RBD mutants, except mutant E484K, which only displayed partial blocking.     

ACE、APN及baPWV预测糖尿病合并高血压发生心脑血管事件的价值

目的 探讨血管紧张素转换酶(ACE)、脂联素(APN)及肱踝脉搏波传导速度(baPWV)预测糖尿病合并高血压发生心脑血管事件的价值。方法 选取2019年1月—2022年2月在我院治疗的糖尿病合并高血压患者138例,随访患者发生心脑血管事件情况,分析比较发生和未发生心脑血管事件患者ACE、APN、baPWV等临床资料差异。结果 发生心血管事件患者BMI、收缩压、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、ACE和baPWV明显高于未发生心血管事件患者,而APN明显低于未发生心血管事件(均P<0.05)。Logistic回归分析显示：BMI、收缩压、ACE、APN和baPWV是患者发生心血管事件的影响因素(P<0.05)。发生冠心病、缺血性脑卒中、心源性猝死和脑出血患者性别、年龄、ACE、APN、baPWV等临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。ACE、APN和baPWV预测心血管事件发生的ROC曲线下面积比较,其中baPWV预测价值明显高于ACE和APN(P<0.05)。结论 ACE、APN及baPWV预测糖尿病合并高血压发生心脑血管事件有较好的应用价值...     

Possible therapeutic targets and promising drugs based on unsymmetrical hetaryl-substituted porphyrins to combat SARS-CoV-2

Coronavirus disease 2019 is a serious disease that causes acute respiratory syndrome and negatively affects the central nervous system. Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) crosses the blood-brain barrier due to the spike (S) protein on the surface of the viral particles. Thus, it is important to develop compounds that not only have an inhibitory effect but are also capable of completely deactivating the S protein function. This study describes the purposeful modification of porphyrins and proposes compounds, asymmetrically hetaryl-substituted porphyrins with benzothiazole, benzoxazole, and N-methylbenzimidazole residues, to deactivate the S protein functions. Molecular docking of SARS-CoV-2 proteins with hetaryl-substituted porphyrins showed that the viral S protein, nucleocapsid (N) protein, and non-structural protein 13 (nsp13) exhibited the highest binding affinity.Hetaryl-substituted porphyrins form strong complexes (13–14 kcal/mol) with the receptor-binding domain of the S protein, while the distance from the porphyrins to the receptor-binding motif (RBM) does not exceed 20 Å; therefore, RBM can be oxidized by ¹O₂, which is generated by porphyrin. Hetaryl-substituted porphyrins interact with the N protein in the serine/arginine-rich region, and a number of vulnerable amino acid residues are located in the photooxidation zone. This damage complicates the packaging of viral RNA into new virions. High-energy binding of hetaryl-substituted porphyrins with the N- and C-terminal domains of nsp13 was observed. This binding blocks the action of nsp13 as an enzyme of exoribonuclease and methyltransferase, thereby preventing RNA replication and processing. A procedure for the synthesis of hetaryl-substituted porphyrins was developed, new compounds were obtained, their structures were identified, and their photocatalytic properties were studied.     

上海2株严重急性呼吸综合征冠状病毒2的分离与鉴定

目的 从新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。方法 将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸,并用反转录PCR扩增病毒受体结合区（RBD）基因片段;将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞,观察细胞病变效应,并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应,细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸,扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致;病毒感染的Vero E6细胞病变迅速,并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白（N蛋白）单克隆抗体、刺突蛋白（S蛋白）单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论 从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2,为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了基础。