血小板活化与磷脂酰肌醇3激酶信号通路

<正> 血小板活化是复杂的过程。多种黏附蛋白和受体及血小板聚集激动剂参与其中,并在血小板活化、聚集反应扩大和血栓形成过程中起着重要作用。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路是体内重要的细胞信号通路,在细胞的动员、迁移、分化和抗凋亡中具有重要的作用。近年的研究发现,PI3K/Akt信号通路与血小板活化     

脂联素及其受体信号通路在肢体缺血预适应对心肌保护中的作用

目的 探讨心肌脂联素(ADP)及其受体(ADPR1)的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3k)/磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)通路是否介导了肢体缺血预适应对心肌的保护作用. 方法 30只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、心肌缺血-再灌注损伤组(MIRI组)、肢体缺血预适应(LIPC)组、PI3k特异性抑制剂(LY294002)预处理组和LIPC+ LY294002预处理组.分别采用RT-PCR法和Western blot法检测心肌组织中ADP和ADPR1的mRNA及PI3k和p-Akt蛋白的表达水平. 结果 与假手术组相比,MIRI组ADP (0.53±0.07比0.74±0.08)和ADPR1 (0.52±0.02比0.72±0.04)的mRNA值明显减少(P＜0.05);与MIRI组相比,LIPC组上调ADP(0.72±0.21)和ADPR1(0.80±0.02)的mRNA值(P＜0.05),LY294002则下调ADP (0.49±0.07)和ADPR1(0.52±0.02)的mRNA值(P＜0.05); LY294002+ LIPC组ADP和ADPR1的mRNA值,与MIRI组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与假手术组相比,MIRI组PI3k(3.85±0.23)和p-Akt( 3.77±0.32)蛋白水平表达降低(P＜0.05),LIPC组PI3k(2.65±0.32)和p-Akt(2.26±0.27)蛋白水平较MIRI组表达增加(P＜0.05),LY294002组的PI3k和p-Akt蛋白几乎不表达(P＜0.05); LIPC+LY294002组大鼠心肌组织PI3k和p-Akt蛋白表达与LY90024预处理组相比差异无统计学意义(P＞0.05).心肌ADP水平与ADPR1 mRNA、PI3K和P-Akt蛋白水平呈正相关(r=0.886、0.756、0.745,P＜0.05). 结论 肢体缺血预适应通过激活ADP/PI3k/Akt信号通路发挥对心肌再灌注损伤的保护性作用.     

心力衰竭患者心肌细胞外信号调节激酶及磷脂酰肌醇3激酶通路的信号蛋白表达

目的观察充血性心力衰竭(CHF)患者心肌组织细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路的信号蛋白表达.方法通过手术取材,选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的CHF患者40例,对照组38例(其中8例为意外伤亡的器官损献者).免疫沉淀法检测心肌组织ERK、PI3K蛋白表达及磷酸化, α-骨骼肌蛋白表达.结果CHF患者心肌组织呈典型的重构心肌的病理改变,心肌组织ERK蛋白表达光密度值(A)比值(ERK1/β-actin)、(ERK2/β-actin)、PI3K磷酸化比值(p-PI3K/β-actin)、α-骨骼肌蛋白表达A比值(α-skeletal-actin/β-actin)逐渐增强,且随心功能恶化逐渐增强, CHF组中不同心功能级别者与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05 或P＜0.01).结论ERK及PI3K通路共同参与调节CHF患者心肌重构的病理生理过程.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路与高血压

综述磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的构成、转导途径及其在高血压及相关靶器官损害中的作用机制,并阐述基于PI3K/Akt信号通路高血压的中医药治疗进展,旨在为高血压的临床诊疗提供新的思路和治疗靶点。     

运动预适应激活磷脂酰肌醇 3‐激酶／蛋白激酶 B信号通路的心脏保护作用机制

力竭运动可引起运动性心脏损伤,而运动预适应产生运动性心脏保护作用。在运动预适应对心脏的保护机制中,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的激活在抑制心肌细胞凋亡的过程中发挥重要作用。通过干预激活PI3K-Akt信号通路,研究其对心肌细胞的影响,可为运动预适应的心脏保护作用提供理论依据。     

整合素连接激酶经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移

目的探讨整合素连接激酶(ILK)对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法利用基因转染建立过表达ILK基因的HGC-27及KATOⅢ胃癌细胞株;细胞计数试剂(CCK)8和Transwell实验研究上调ILK基因表达对HGC-27及KATOⅢ细胞增殖和迁移能力的作用;Western印迹实验检测上调ILK基因表达是否可影响HGC-27及KATOⅢ细胞Akt及p-Akt蛋白的表达。结果上调ILK基因表达可显著促进HGC-27及KATOⅢ细胞的增殖和迁移能力;上调ILK基因表达可明显上调HGC-27及KATOⅢ细胞p-Akt蛋白水平。结论 ILK经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路参与及影响胃癌细胞的致癌潜能。     

白花丹醌对肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路的影响

目的 研究白花丹醌对四氯化碳所致肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)信号转导通路的影响.方法 40只雄性SD大鼠分成对照组、模型组、2mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组,每组10只.对照组予0.9％氯化钠溶液2 mL/kg腹腔注射,其余3组均予60％四氯化碳花生油溶液2 mL/kg腹腔注射,均每周3次,共6周.造模后第3周开始,白花丹醌处理组分别给予2 mg/kg和3 mg/kg白花丹醌花生油剂腹腔注射,每周2次,共4周.常规检测大鼠血清ALT、AST、Alb,放射免疫法测定HA和LN,Western印迹检测肝组织中PI3K、Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达量,免疫组织化学法检测p-Akt表达.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 6周后成功建立肝纤维化大鼠模型.模型组大鼠ALT、AST、HA和LN均高于对照组,2mg/kg白花丹醌处理组和3 mg/kg白花丹醌处理组中的ALT、AST、HA和LN水平较模型组下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各组PI3K、Akt蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05);p-Akt蛋白表达主要集中在肝细胞核;对照组、模型组、2 mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组大鼠p-Akt蛋白分别为0.0821±0.0003、0.7374±0.0037、0.3679±0.0332和0.1327±0.0561,模型组表达高于对照组(t=851.302,P＜0.05),白花丹醌处理后下降(t值分别=71.858和28.363,均P＜0.05).结论 白花丹醌具有抗肝纤维化作用.白花丹醌可下调肝纤维化过程中p-Akt的表达,这可能是其抗肝纤维化的机制之一.     

磷脂酰肌醇3激酶／丝氨酸-苏氨酸激酶信号通路与肾脏疾病

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kimase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog,Akt)通路是真核细胞关键的信号转导通路,在细胞凋亡、代谢、增殖及分化等生命活动中发挥着重要功能.近年来发现此通路与肾脏疾病关系密切,它在糖尿病肾病(DN)、狼疮性肾炎、多囊肾、肾脏缺血再灌注损伤等疾病的发病机制、诊断及治疗等方面的作用日益受到重视.     

磷脂酰肌醇3激酶信号转导途径及在支气管哮喘中的作用

磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信号转导通路是参与支气管哮喘（哮喘）发病机制的一条重要受体信号转导途径。在哮喘患者体内，通过这一途径影响气道平滑肌的增殖并对T细胞受体和协同刺激因子受体CD28介导的T细胞的分化、生存、活化和细胞因子的产生起了关键性的作用。这一机制的研究旨在阐明PI3K信号转导通路在哮喘气道重构中的作用，以及相应的拮抗剂的研究，为哮喘的治疗提供了新方向。     

磷脂酰肌醇3激酶与2型糖尿病

磷脂酰肌醇 3激酶 (PI 3K)作为胰岛素信号转导中的关键酶 ,在调节糖代谢中起重要作用。 2型糖尿病和胰岛素抵抗 (IR)患者中 ,PI 3K的含量和活性均降低 ,并存在对胰岛素刺激的反应缺陷。研究表明 ,PI 3K及其相关物质的基因变异是其mRNA表达和激酶活性降低的主要原因。此外 ,多种致IR物质 ,如游离脂肪酸、肿瘤坏死因子 α等也可影响PI 3K活性 ,说明PI 3K是这些物质导致IR的中介分子之一     

PI3K/Akt信号转导通路与脑缺血后细胞凋亡

细胞凋亡为脑缺血时细胞死亡的重要形式之一.磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)为重要的细胞存活信号通路,c-Jun氨基端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)为重要的促进细胞凋亡信号通路.这两大通路转导信号的动态平衡维持着生理状态下的细胞生存与凋亡.脑缺血刺激打破了这一生理平衡,导致大量神经细胞凋亡.多种确切的神经保护因素都与增强细胞存活信号的放大或抑制凋亡信号的放大有关,从而维持这2个通路信号的平衡.     

体外研究胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶途径对一氧化氮生成的影响

目的探讨胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)途径对NO生成的影响。方法检测胰岛素、葡萄糖以及PI3-K活性不可逆的抑制剂(Wortmannin)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PI3-K表达以及NO、超氧阴离子(O_2~-)产生和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。实验分为对照组、10 mU/L胰岛素组、100 mU/L胰岛素组、甘露醇组、5 mmol/L葡萄糖+10 mU/L胰岛素组(5 mmol/L G1组)、25 mmol/L葡萄糖+100 mU/L胰岛素组(25 mmol/L G2组)、50 nmol/L Wortmannin组(50 nmol/L W组)、50 nmol/L Wortmannin+10 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W1组)和50 nmol/L Wortmannin+100 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W2组)。结果与对照组比较,不同浓度胰岛素组eNOS活性及NO水平显著升高(P<0.01);25 mmol/L G2组、50 nmol/L W组、50 nmol/LW1组和50 nmol/L W2组eNOS活性及NO水平均显著降低,O_2~-生成明显增加(P<0.01);与对照组比较,不同浓度胰岛组、50 nmol/L W组、50 nmol/L W1组和50 nmol/L W2组PI3-K蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论 PI3-K信号途径对于促进NO产生、维持血管内皮细胞的正常功能具有重要作用,在高糖、高胰岛素状态下该条途径受损并由此引发内皮功能障碍。     

缺血后适应对急性心肌梗死患者临床及预后的影响

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者施行缺血后适应能否有效地降低缺血再灌注损伤,从而对心脏产生保护作用。方法选取AMI患者42例,随机分为对照组22例和缺血后适应组20例。监测2组患者PCI术前、术后2h、1、2、3d内肌酸激酶同工酶(CK-MB)值,并测定CK-MB峰值及各时间点下CK-MB平均值曲线下面积;监测PCI术前及术后2h血清C反应蛋白(CRP)、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)水平;比较2组患者PCI术前及术后24h内心电图ST段回落情况。结果缺血后适应组CK-MB峰值明显低于对照组[(570.61±41.27)U/L vs(661.80±58.55)U/L,P<0.01];CK-MB平均值曲线下面积明显低于对照组[(5821.19±2912.07)%vs(9843.12±3578.02)%,P<0.01];缺血后适应组术后2hCRP下降幅度明显低于对照组(P<0.05);缺血后适应组术后丙二醛下降较对照组明显(P<0.05);缺血后适应组术后SOD升高较对照组明显(P<0.01);缺血后适应组ST段回落情况较对照组高(60.0%vs 45.5%,P<0.05),对照组中有2例患者因发生恶性心律失常死亡。结论AMI患者施行缺血后适应处理能够降低CK-MB的释放,降低氧自由基含量,减轻炎性反应,使冠状动脉恢复血流情况占有明显优势,能够明显降低再灌注损伤,发挥心脏保护作用。     

缺血后适应对老年急性心肌梗死患者的影响

目的观察缺血后适应(IPO)对急性心肌梗死(AMI)患者PCI后心肌灌注和临床事件的影响。方法选取12h内接受急诊PCI的老年AMI患者122例,分为对照组87例和IPO组35例。对照组梗死相关血管再通后,不施加干预;IPO组梗死相关血管再通后1 min内应用低气压充盈和回撤球囊,每一过程各30s,术后测定血肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛,观察ST段回落,冠状动脉血流速度、住院期间临床事件发生情况。结果 IPO组CK、CK-MB和丙二醛峰值明显低于对照组(P<0.05);IPO组冠状动脉血流速度明显快于对照组(P<0.05),术后ST段回落>50%者明显高于对照组(74.3%vs 54.0%,P<0.05),再灌注心律失常发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论 IPO可以缩小心肌梗死面积、减少自由基的生成,改善PCI后冠状动脉血流速度,改善心肌灌注,减少再灌注心律失常的发生。     

Impaired PI3K/Akt signal pathway and hepatocellular injury in high-fat fed rats

AIM:To determine whether mitochondrial dysfunction resulting from high-fat diet is related to impairment of the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/protein kinase B (Akt,also known as PKB) pathway. METHODS:Rat models of nonalcoholic fatty liver were established by high-fat diet feeding. The expression of total and phosphorylated P13K and Akt proteins in hepatocytes was determined by Western blotting. Degree of fat accumulation in liver was measured by hepatic triglyceride. Mitochondrial number and size were determined using quantitative morphometric analysis under transmission electron microscope. The permeability of the outer mitochondrial membrane was assessed by determining the potential gradient across this membrane.RESULTS:After Wistar rats were fed with high-fat diet for 16 wk,their hepatocytes displayed an accumulation of fat (103.1 ± 12.6 vs 421.5 ± 19.7,P < 0.01),deformed mitochondria (9.0% ± 4.3% vs 83.0% ± 10.9%,P < 0.05),and a reduction in the mitochondrial membrane potential (389.385% ± 18.612% vs 249.121% ± 13.526%,P < 0.05). In addition,the expression of the phosphorylated P13K and Akt proteins in hepatocytes was reduced,as was the expression of the anti-apoptotic protein Bcl-2,while expression of the pro-apoptotic protein caspase-3 was increased. When animals were treated with pharmacological inhibitors of P13K or Akt,instead of high-fat diet,a similar pattern of hepatocellular fat accumulation,mitochondrial impairment,and change in the levels of PI3K,Akt,Bcl-2 was observed. CONCLUSION:High-fat diet appears to inhibit the PI3K/Akt signaling pathway,which may lead to hepa-tocellular injury through activation of the mitochondrial membrane pathway of apoptosis.     

牛磺酸通过激活PI3K/Akt信号通路抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡

目的 探讨牛磺酸对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及其信号途径.方法 取健康产妇分娩后12h内的脐带分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC),进行细胞培养并分为5组:正常葡萄糖组(5 mmol/LD-葡萄糖,NG组);高糖组(30 mmol/LD-葡萄糖,HG组);NG+TAU组(5mmol/LD-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸);HG+TAU组(30 mmol/L D-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸);HG+TAU+Wo组(30 mmol/LD-葡萄糖+5 mmol/L牛磺酸+50 nmol/L wortmannin).干预48 h后应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western印迹检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平,2,7-二氯二氢荧光素二乙酯(H2DCF-DA)探针技术及荧光倒置显微镜检测活性氧簇的相对含量.结果 与NG组相比,HG组细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05).与HG组相比,HG+TAU组的凋亡率下降(P＜0.05).与HG+TAU组相比,HG+TAU+Wo组的凋亡率较高(P＜0.05).与NG组相比,HG组磷酸化-Akt蛋白表达下降(P＜0.05).与HG组比较,HG+TAU组磷酸化-Akt蛋白表达增加(P＜0.05).与HG+TAU组相比,HG+TAU+Wo组磷酸化-Akt蛋白表达下降(P＜0.05).牛磺酸可降低高糖诱导的活性氧簇生成(P＜0.05),这一作用亦可被wortmannine所阻断(P＜0.05).结论 牛磺酸通过PI3K/Akt信号途径调节细胞内活性氧簇生成,进而在高糖环境下发挥其抗凋亡作用.     

Y-box binding protein 1 augments sorafenib resistance via the PI3K/Akt signaling pathway in hepatocellular carcinoma

BACKGROUNDSorafenib is the first-line treatment for patients with advanced hepatocellular carcinoma (HCC). Y-box binding protein 1 (YB-1) is closely correlated with tumors and drug resistance. However, the relationship between YB-1 and sorafenib resistance and the underlying mechanism in HCC remain unknown.AIMTo explore the role and related mechanisms of YB-1 in mediating sorafenib resistance in HCC.METHODSThe protein expression levels of YB-1 were assessed in human HCC tissues and adjacent nontumor tissues. Next, we constructed YB-1 overexpression and knockdown hepatocarcinoma cell lines with lentiviruses and stimulated these cell lines with different concentrations of sorafenib. Then, we detected the proliferation and apoptosis in these cells by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling, flow cytometry and Western blotting assays. We also constructed a xenograft tumor model to explore the effect of YB-1 on the efficacy of sorafenib in vivo. Moreover, we studied and verified the specific molecular mechanism of YB-1 mediating sorafenib resistance in hepatoma cells by digital gene expression sequencing (DGE-seq).RESULTSYB-1 protein levels were found to be higher in HCC tissues than in corresponding nontumor tissues. YB-1 suppressed the effect of sorafenib on cell proliferation and apoptosis. Consistently, the efficacy of sorafenib in vivo was enhanced after YB-1 was knocked down. Furthermore, KEGG pathway enrichment analysis of DGE-seq demonstrated that the phosphoinositide-3-kinase (PI3K)/protein kinase B (Akt) signaling pathway was essential for the sorafenib resistance induced by YB-1. Subsequently, YB-1 interacted with two key proteins of the PI3K/Akt signaling pathway (Akt1 and PIK3R1) as shown by searching the BioGRID and HitPredict websites. Finally, YB-1 suppressed the inactivation of the PI3K/Akt signaling pathway induced by sorafenib, and the blockade of the PI3K/Akt signaling pathway by LY294002 mitigated YB-1-induced sorafenib resistance.CONCLUSIONOverall, we concluded that YB-1 augments sorafenib resistance through the PI3K/Akt signaling pathway in HCC and suggest that YB-1 is a key drug resistance-related gene, which is of great significance for the application of sorafenib in advanced-stage HCC.     

粒细胞集落刺激因子通过PI3K-Akt通路抑制缺血再灌注损伤

目的:研究经冠状动脉(冠脉)内注入粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用,及其与PI3K-Akt信号转导途径的关系。方法:制备大鼠心肌缺血再灌注模型。再灌注同时经冠脉内给予G-CSF或G-CSF+PI3K激酶抑制剂(LY294002),灌注120min后应用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法观察凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2及caspase-3表达情况,免疫印迹检测总-Akt(t-Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)表达。结果:缺血再灌注同时给予冠脉内G-CSF治疗能够显著减轻缺血区心肌细胞凋亡,降低Bax、caspase-3的表达,增高心肌细胞内Bcl-2表达,同时p-Akt的蛋白水平显著增高(P<0.01)。LY294002阻断Akt活化后,抑制了G-CSF诱导的抗心肌细胞凋亡作用。结论:缺血再灌注同时冠脉内给予G-CSF可保护梗死区残存的心肌细胞,减少缺血再灌注所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制与PI3K-Akt信号通路有关。     

线粒体通透性转换孔介导的胀亡和凋亡对七氟醚后处理保护大鼠心肌缺血再灌注的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔介导的胀亡和凋亡在七氟醚后处理保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用和七氟醚后处理心肌保护的机制。方法选择雄性SD大鼠105只,随机分为5组,每组21只:假手术组、缺血再灌注组、七氟醚后处理组、苍术苷+七氟醚后处理组(联合组)和苍术苷组。连续监测并记录大鼠血流动力学变化;于再灌注2h末取心肌组织,测定心肌梗死范围;电镜观察心肌线粒体超微结构;采用Western blot法检测前胀亡受体、细胞色素C和活化的Caspase-3表达水平;采用分光光度法测定心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)含量。结果与假手术组比较,其余4组大鼠再灌注1h和2h时平均动脉压和心率-收缩压乘积明显降低,心肌梗死范围扩大,心肌细胞损伤增加,前胀亡受体、细胞色素C和Caspase-3表达上调,NAD+含量明显降低(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,七氟醚后处理组心肌梗死范围缩小,心肌细胞损伤减少,前胀亡受体、细胞色素C和Caspase-3表达下调,NAD+含量明显升高(P<0.05)。结论七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。