细菌内毒素对枯否细胞丝裂原活化蛋白激酶家族的影响

为阐明LPS诱导全身炎症反应失控的信号转导机制，采用Western blot检测LPS刺激对枯否细胞ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达及磷酸化水平的影响。结果显示，LPS刺激后，枯否细胞内ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达无明显变化，但其磷酸化水平均发生了显著变化，刺激后5min即明显升高，并分别于30、45、20min达到高峰，然后逐渐下降，2h后基本恢复至正常水平，其中以p38MAPK变化最快且变化幅度最大。LPS浓度在10pg/ml-100ng/ml范围内时，ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平与LPS刺激浓度呈明显的剂量依赖性。提示ERK、JNK、p38MAPK均是LPS信号转导途径中的重要信号分子，其中p38MAPK在LPS所介导的枯否细胞早期反应中可能较ERK和JNK有着更为重要的作用。     

晚期糖基化终产物促进血管外膜成纤维细胞迁移机制及坎地沙坦的干预作用研究

目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的影响及坎地沙坦的干预作用.方法 组织贴块法培养SD大鼠的AF细胞,用Transwell小室检测AGEs对AF迁移的影响.RT-PCR及免疫印迹技术观察AGEs对AF晚期糖基化终产物受体(RAGE)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路磷酸化的影响.结果 不同浓度的AGE(50、100、150、200、300mg/L)均可从基因和蛋白水平上调RAGE的表达,且均在200mg/L时达到峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂、坎地沙坦可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)刺激引起的RAGE表达(P<0.05).AGEs可促进p38、ERK1/2、JNK的磷酸化,JNK在20min,p38、ERK1/2在30min时磷酸化达峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂可分别抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化,RAGE中和抗体、坎地沙坦可抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化.不同浓度AGE(50、100、150、200、300mg/L)可促进AF细胞的迁移,该作用于200mg/L时达到峰值(P<0.05).RAGE中和抗体、p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、坎地沙坦均可抑制AGE所致成纤维细胞的迁移(P<0.01).结论 AGEs经由RAGE影响MAPK通路而促进AF细胞迁移,坎地沙坦可通过阻断此途径抑制AF细胞迁移,这可能是其血管保护作用的机制之一.     

鸢尾苷元抗血管平滑肌细胞增殖及抗动脉粥样硬化机制的研究

目的观察鸢尾苷元对氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖及其单核细胞趋化蛋白-1和细胞间黏附因子-1表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法采用体外培养大鼠血管平滑肌细胞,加入氧化低密度脂蛋白100μg/ml建立血管平滑肌细胞增殖模型,加入不同剂量的鸢尾苷元,通过噻唑蓝比色法观察血管平滑肌细胞增殖率,并采用逆转录-聚合酶链反应方法检测血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1和细胞间黏附因子-1mRNA的表达情况。结果鸢尾苷元对氧化低密度脂蛋白所致的血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用,并显著抑制氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1和细胞间黏附因子-1mRNA的过度表达。结论鸢尾苷元抗血管平滑肌细胞增殖和抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1和细胞间黏附因子-1的过度表达,可能是其抗动脉粥样硬化的重要作用机制之一。     

芍药苷对辐射内皮细胞起保护作用的机制

目的观察芍药苷对辐射损伤内皮细胞保护作用的分子机制。方法 10Gy60Coγ照射前1h给予内皮细胞芍药苷,采用逆转录聚合酶链反应、免疫组化以及免疫印迹等方法检测细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1的表达。结果人脐静脉内皮细胞经10Gy60Coγ照射后与正常组细胞相比,活性氧,丙二醛水平明显上升,谷胱甘肽,超氧化物歧化酶水平明显降低,黏附分子mRNA与蛋白的表达明显升高;随着芍药苷给药浓度的变化,加药组细胞中活性氧,丙二醛水平逐渐降低,谷胱甘肽,超氧化物歧化酶水平逐渐升高;免疫组化的结果显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的表达,逆转录聚合酶链式反应检测显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的mRNA的表达,Westernblot检测显示芍药苷可降低辐射引起的黏附分子的蛋白表达水平。分子信号通路的研究表明,芍药苷通过影响JNK通路进一步抑制激活物蛋白1与目的基因的结合。结论芍药苷通过抑制JNK细胞核激酶-激活物蛋白通路进而抑制黏附分子表达,这可能是芍药苷对辐射损伤内皮细胞保护作用的分子机制。     

恒磁场对脂多糖诱导内皮细胞与中性粒细胞黏附及细胞间黏附分子表达影响的研究

目的研究恒磁场对脂多糖(LPS)诱导中性粒细胞与内皮细胞黏附及内皮细胞表达细胞间黏附分子的影响。方法人脐静脉内皮细胞于0·05、0·1、1mT的磁场中曝磁,用LPS刺激内皮细胞,内皮细胞与中性粒细胞黏附用细胞计数法评估,内皮细胞表面细胞间黏附分子表达用流式细胞仪及酶联免疫吸附法测定。结果LPS刺激后,中性粒细胞的黏附率为58%;0·05、0·1mT磁场条件下中性粒细胞黏附率下降为40%及38%,与单纯LPS组比较明显下降(P<0·05),而1mT组中性粒细胞黏附率为65%,与单纯LPS组相近。单纯LPS组细胞间黏附分子表达为10·34±0·33/0·89±0·16;0·05、0·1mT磁场条件下细胞黏附分子表达为6·61±0·17/0·53±0·18、6·98±0·15/0·46±0·10,与单纯LPS组比较明显下降(P<0·05);1mT组为10·99±0·41/0·78±0·15,与单纯LPS组比较无明显差异。结论0·05、0·1mT可以抑制LPS刺激下内皮细胞与中性粒细胞的黏附及内皮细胞表面细胞间黏附分子的表达。     

高糖状态下内脂素对血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1及细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨内脂素在高糖状态下对血管内皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达的影响及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为3组:空白对照组(0mmol/L葡萄糖处理)、生理葡萄糖组(5.5mmol/L葡萄糖处理)、高糖组(25mmol/L葡萄糖处理),分别用不同浓度内脂素(0、10、50、100ng/ml)培养24h。另取HUVEC,在p38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理30min后,加入内脂素(100ng/ml)及葡萄糖(0、5.5、25mmol/L)培养24h。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC中p38MAPKmRNA表达量,采用Westernblotting检测HUVEC中磷酸化p38MAPK蛋白表达水平,并用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中的MCP-1、ICAM-1蛋白表达量。结果空白对照组、生理葡萄糖组中,内脂素促进HUVEC中p38MAPKmRNA转录、p38MAPK蛋白磷酸化以及MCP-1、ICAM-1蛋白的表达,并呈浓度依赖性(P<0.01);与空白对照组和生理葡萄糖组相比,高糖组内...     

RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路在高磷环境调节内皮细胞凋亡的机制

目的 研究高磷环境下内皮细胞凋亡的可能调控机制和信号通路。方法 人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）在正常磷（1.0 mmol/L）、高磷（3.0 mmol/L）、正常磷+辛伐他汀（simvastatin,SV,1.0 mmol /L+SV）及高磷+SV (3.0 mmol /L+SV）培养基中培养24 h,Western Blot评价Ras同源物基因家族成员A（ Ras homolog gene family, member A, RhoA）,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1/2 ( rho-associated coiled coil forming protein kinase 1/2, ROCK1/2 ),细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase-mitogen activated protein kinase, ERK-MAPK）、磷酸化细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（ phosphorylated-ERK-MAPK, p-ERK-MAPK）、p38丝裂原活化蛋白激酶 ( p38-Mitogen Activated Protein Kinase , p38-MAPK)、磷酸化 p38-丝裂原活化蛋白激酶 （phosphorylated-p38-MAPK, p-p38-MAPK ）、以及精氨酸酶1（arginase1,ARG1）和一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）蛋白的表达,比色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染法 ( Annexin V-FITC/ propidium iodide, Annexin V-FITC/PI ) 检测ARG活性和细胞凋亡率。结果 高磷组RhoA,ROCK1/2,p-ERK MAPK,ARG1表达均上调, ARG活性升高,NOS表达下调,细胞凋亡增加;RhoA抑制剂SV能抑制高磷环境下p-ERK MAPK的活化和ARG1 的表达,降低ARG1活性,促进NOS表达,减少内皮细胞凋亡。结论 高磷环境HUVECs可通过RhoA/ROCK途径激活p-ERK MAPK的表达, 增加ARG活性,抑制NOS表达,引起内皮细胞凋亡;SV可以通过抑制RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路,改善内皮细胞凋亡。     

银杏叶提取物抑制人冠状动脉内皮细胞中NF-κB表达及VAP-1、IL-6生成的研究

目的：检测银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract,EGb）能否抑制由活化血小板刺激引起的人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery ebditgekuak cells,HCAECs）中NF-κB的表达,并降低炎症因子血管黏附蛋白-1（vascalur adhesion protein l,VAP-1）,白细胞介素6（interlenkin-6,IL-6）的生成。方法活化血小板刺激HCAECs建立氧化应激模型,使用银杏叶提取物（4、40、400μg/ml）进行干预后,通过Western Blot检测NF-κB（p65、PP65）的表达量,酶联免疫吸附试验检测VAP-1,IL-6的生成量。结果活化血小板刺激HCAECs可引起目的分子表达量的增加,检测结果显示治疗量的EGb能显著抑制p65,PP65的表达及VAP-1、IL-6的生成,并成剂量依赖性。结论银杏叶提取物能显著抑制活化血小板刺激的人冠状动脉内皮细胞中p65,PP65的表达,并降低VAP-1及IL-6的生成。     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

目的探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子kB(NF-κ B)的影响.方法100ng/ml LPS刺激PMVEC 0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h或10ngg/ml、50ng/ml、100ng/mlLPS刺激1h,凝胶电泳迁移率试验检测NF-κ B的活化,免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位.并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF-κ B活化的影响.结果LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位,活化NF-κ B,1h达到高峰,且呈剂量依赖关系,后逐渐下降.PDTC能显著抑制其活化,P＜0.01.结论LPS的直接刺激诱导NF-κ B的活化,这可能是IPS诱导炎症反应的一个重要环节.     

MAPKs信号通路及其与疾病关联性的研究现状

丝裂原活化蛋白激酶 (MAPKs)是一种胞浆内广泛分布的含有丝氨酸和 (或 )苏氨酸残基的蛋白激酶 ,在真核细胞中 ,有 4条信号转导通路 ,即细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)p42 / p44通路、c Jun氨基末端激酶 (JNK)和 (或 )应激活化蛋白激酶 (SAPK)通路、p3 8通路和ERK5 /大丝裂原活化蛋白激酶 1(BMK1)通路 ,它们通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平 ,可介导细胞生长、增殖、分化、死亡及细胞间的功能同步等多种生理病理过程