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1.
目的 克隆H-2K^bcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 RT-PCR法扩增H-2K^bcDNA,克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN,PA317包装出重组病毒后,分别感染NIH3T3、COS7及MM45T.Li,PCR和RT-PCR分析目的基因表达,FACS分析H-2K^b在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导,分别建立了H-2K^b基因转导细胞:NIH3T 相似文献
2.
构建逆转录病毒载体介导的人白细胞介素-2(IL-2)基因真核细胞表达载体。方法:合成带有和表达载体克隆位点相匹配酶切位点的聚合酶链式反应(PCR)引物,用PCR方法从质粒pHIG53中扩增出人的IL-2cDNA,将其定向克隆入表达载体pDOR-neo。结果:PCR扩增出的IL-2cDNA片段约475bp,酶切鉴定该片段已被克隆入pDOR-neo的多克隆位点,构建成人IL-2基因真核表达载体pDOR 相似文献
3.
目的:构建逆转录病毒载体介导的人白细胞介素-2(IL-2)基因真核细胞表达载体.方法:合成带有和表达载体克隆位点相匹配酶切位点的聚合酶链式反应(PCR)引物,用PCR方法从质粒pHIG53中扩增出人的IL-2cDNA,将其定向克隆人表达载体pDOR-neo.结果:PCR扩增出的IL-2cDNA片段约475bp,酶切鉴定该片段已被克隆人pDOR-neo的多克隆位点,构建成人IL-2基因真核表达载体pDORIL-2.结论:用PCR扩增目的基因片断,有快速、获得量大、可改变酶切位点等优点;pDORIL-2的构建成功,为开展基因治疗的研究打下了基础。 相似文献
4.
抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系HO-8910中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建多肿瘤抑制基因1(MTS1)的真核表达载体,将其转入人源性卵巢癌细胞株HO-8910中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础.方法:利用BamHⅠ与EcoRⅠ从pUC19-p16质粒上切下MTS1cDNA片段并克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建成MTS1真核表达载体pcDNA3-p16;利用脂质体(Fu-GENETM6)介导的基因导入法将pcDNA3-p16导入人源性卵巢癌细胞株HO-8910中;采用ABC法对转染后的不同代数细胞进行免疫细胞化学检测,观察p16蛋白的表达.结果:成功构建了MTS1真核表达载体pcDNA3-p16,并进行酶切鉴定;转染后经G418筛选2wk出现阳性克隆8910-p16,并检测到其中有p16蛋白的稳定表达.结论:成功构建MTS1真核表达载体pcDNA3-p16,并可在人源性卵巢癌细胞株HO-8910中得到稳定表达. 相似文献
5.
目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增入淋巴毒素cDNA并定向克隆于pUC18,pUC19质粒载体Sanger双脱氧链终止法测序,结果:RT-PCR扩增出一个541bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示。该541bp片段为编码人淋巴毒素成熟肽的cDNA,与公布的人淋巴毒素cDNA序列完全一致,结论; 相似文献
6.
建立人多肿瘤抑制基因第二外显子cDNA的表达克隆。方法 用反转录-PCR取得MTS1第二外显cDNA,并将春直接联接入质粒pGEM-T中,构建为重组质粒pGEM-p16。结果 重组质粒的酶谱分析表明其酶切位点与原设计相符,插入cDNA-PCR片段大小为307bp,与引物区间大小一致。 相似文献
7.
尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体(uPAR)反义RNA的表达质粒pURAS。方法 采用RT-PCR方法扩增并克隆尿激酶受体(uPAR)cDNA5’端-46 ̄454bp一段为500bp的顺序,利用DNA重组技术将该片段反向插入表达载体pcDNA3的CMV启动子下游。结果 限制性内切酶分析和DNA顺序分析证实RT-PCR获得uPAR cDNA片段与文献报道相吻合;重组质粒pURAS转染肺癌细 相似文献
8.
采用热酚法从登革2型病毒43株(D2-43)感染的C6/36细胞中提取了病毒RNA,以病毒RNA为模板,进行D2-43株NS3基因cDNA片段的反转录-PCR扩增,片段长度为1176bp。将扩增的cDNA片段克隆到T载体pBluescript-ksⅡ中。通过双脱氧法测定了cDNA片段序列,与国际标准株NGC株序列一致。 相似文献
9.
用已构建的不同载体乙型肝炎。基因疫苗(PCR3.1-S,pcDNA3-S)和乙型肝炎C基因疫苗(PCR3.1-C0分别给Balb/c小鼠多点肌肉注射,2周后追加免疫一次,用ELISA法及MTTI地分别检测小鼠血清抗-HBs、抗-HBC抗体及地HBsAg或HBcAg的特异性增殖反应。结果:免疫接种2周后小鼠血清抗-HBS及抗-HBC抗体OD值分别为0.8373和0.7961均明显高于对照组(0.12 相似文献
10.
目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的人T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增人淋巴毒素cDNA,并定向克隆于pUC18、pUC19质粒载体,Sanger双脱氧链终止法测序。结果:RT-PCR扩增出一个541bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示,该541bp片段为编码人淋巴毒素成熟肽的cDNA,与公布的人淋巴毒素cDNA序列完全一致。结论:本实验成功地克隆了人淋巴毒素cDNA,为在大肠杆菌表达人淋巴毒素并进一步研究其功能,以及淋巴毒素的开发与临床应用奠定了基础。 相似文献
11.
12.
白细胞介素-2的基因克隆及其在啤酒酵母细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
用PCR方法从白细胞介素素-2(IL-2)cDNA全序列中扩增成熟肽基因片段,与酵母中间载体pSK43SB融合后,重组于酵母游离型表达载体YEpHc8,获得了高效表达,并对其糖基化进行了研究。 相似文献
13.
日本血吸虫混合DNA疫苗的构建 总被引:6,自引:0,他引:6
构建「日本血吸虫混合DNA疫苗,为今后多抗原特异DNA轩的研究打下基础。在克隆pBlueseript-Sj23,pBlueseript Sj26,pBluescript-32的基础上,亚克隆构建了真核表达载体pBK-2J23,pBK-Sj26,pBK-Sj32。经过酶切鉴定,PCR扩增鉴定及测序后,将此三种不同抗原质粒经不同组合后经肌肉注射免疫小鼠。3周后提取小凤四头肌DNA,特异性引物扩增获得目 相似文献
14.
目的 克隆人IL-12(hIL-12)p40和p35亚单位cDNA,构建人单链IL-2(rhscIL-2)融合基因,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法从经PDBu刺激的EBV转化的人B淋巴细胞株NC37中提取mRNA,经RT-PCR分别获得hIL-12p40和p35亚单位编码序列的cDNA,运用重组PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列进行体外基因重组,构建rhscI 相似文献
15.
小鼠造血干细胞因子基因克隆及在CHO细胞中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
克隆造血干细胞因子并在CHO细胞中表达。方法:采用PCR方法从pRC/CMV(含SCFcDNA)中钓取SCFcDNA膜外段活性区,克隆入真核表达载体pcDNA3,转染入CHO细胞;用RT-PCR方法检测mRNA水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。 相似文献
16.
构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体(uPAR)反义RNA的表达质粒pURAS。方法采用RT-PCR方法扩增并克隆尿激酶受体(uPAR)cDNA5’端-46~454bp一段长500bp的顺序,利用DNA重组技术将该片段反向插入表达载体pcDNA3的CMV启动子下游。结果限制性内切酶分析和DNA顺序分析证实RT-PCR获得的uPARcDNA片段与文献报道相吻合;重组质粒pURAS转染肺癌细胞株95D,NorthernBlot证实转染细胞克隆有uPAR反义RNA的表达。结论重组质粒pURAS能在肺癌细胞株95D中表达尿激酶受体反义RNA,尿激酶受体(uPAR)反义RNA表达质粒的构建获得成功。 相似文献
17.
将克隆的HCV5’NCR序列反向插入pSP72的EcoRV切点,构建一种能转录HCV-RNA的质粒pSnc-2。以RT-PCR从抗HEVIgM阳性病人血浆中扩增一段238bp的HCV-cDNA,反向插入pSnc-2中克隆的5’NCR序列的NcoⅠ切点,构建插入突变型HCV-cDNA重组体pSnc-e。应用限制性酶切和PCR对这两种重组质粒进行了鉴定,为HCV-RNA的定量PCR提供有用的内参照模板。 相似文献
18.
抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在卵巢癌细胞系 … 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:构建多肿瘤抑制基因1(MTS1)的真核表达载体的构将其转入人源性卵巢癌细胞株HO-8910中,并得到稳定表达,为进一步研究其对卵巢癌细胞的影响奠定实验基础。方法:利用BamHⅠ与EcoRⅠ从pUC19-p16质粒上下MTS1 cDNA片段并克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建成MTS1真核表达载体pcDNA3-p16导入人源性卵巢癌细胞株HO-8910中;采用ABC法对转染后的不同代数细胞 相似文献
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目的:构建带有内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的重组腺病毒载体。方法:将eNOS cDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pCA14,得到重组质粒pCA14-CMV-eNOS。采用磷酸钙DNA沉淀法将质粒pCA14-CMV-eNOS与腺病毒拯救质粒pBHG10共转染293细胞,通过同源重组,生成带有eNOS基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMVeNOS)。eNOScDNA重组进入腺病毒E1区并受CMV启动子控制。结果:经形态学、病毒DNA酶切、PCR和RT-PCR等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性。结论:带有eNOS基因的重组腺病毒载体的成功构建,为心血管等疾病的基因治疗打下了基础。 相似文献
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将克隆的HCV5‘NCR序列反向插入pSP72的Eco RV切点,构建一种能转录HCV-RNA的质粒pSnc-2。以RT-PCR从抗HEV IgM阳性病人血浆中扩增一段238bp的HCV-cDNA反向插入pSnc-2中克隆的5’NCR序列的NcoI切点,构建插入突变型HCV-cDNA重组体pSnc-e。 相似文献