单克隆抗体能鉴别有活性与无活性的白细胞干扰素

单克隆抗体对干扰素的特异性很高,本文报道用单克隆抗体鉴别有活性与无活性的干扰素的研究结果。实验采用重组人白细胞干扰素A(IFLγA)和抗人白细胞干扰素单克隆抗体LI-1～LI-12。抗病毒活性测定采用细胞病变抑制法。干扰素的放射免疫测定(RIA)采用双抗     

单克隆抗体用于肿瘤化疗的前景

单克隆抗体的发展和纯抗体大量生产的能力,重新引起了人们对恶性肿瘤治疗的关注。已得到针对许多肿瘤(乳腺癌、肺癌等)的肿瘤相关抗原的单克隆抗体。用单克隆抗体作为强细胞毒素和生物活性物质的载体破坏肿瘤细胞,已作了很大的努力。本文拟对未结合的或结合于放射性同位素、化疗药物以及毒素的单克隆抗体的治疗应用作一评价。未结合的单克隆抗体 Sears等在Ⅱ期临床中对20例晚期结直肠癌病人用抗胃肠道转移性腺癌的鼠17-1A     

简讯

单克隆抗体有希望治疗骨髓移植排斥反应美国Xoma公司发展了一种单克隆抗体疗法,能有效地治疗骨髓移植的移植物抗宿主病。该疗法由抗全T淋巴细胞单克隆抗体与蓖麻蛋白A链结合所组成,可攻击引起疾病的成熟T细胞。此疗法已用于1名患急性排斥反应的10岁儿童。结果提     

抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用

目的获得抗HBsAg单链抗体(HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用。方法利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定。结果建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株,其细胞上清效价为1∶160~1∶12 800,腹水效价为1∶50 000~1∶400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a。初步应用结果表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定。结论成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株。     

蛋白A亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体

建立从小鼠腹水中纯化抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体的一步层析法。将含抗HBcAg单克隆抗体的腹水经离心、过滤和缓冲溶液变换预处理后,采用HiTrap rProtein A FF亲和层析柱纯化,并探讨了上样缓冲液的pH值和NaCl浓度,洗脱液的种类、pH值以及体积流量对抗体纯度及回收率的影响,纯化后的单克隆抗体的生物学活性用间接ELISA法测定。结果显示,以pH7.0,20mmol/LPB+3.0mol/LNaCl为上样缓冲液,0.1mol/LGly-HCl为洗脱液,体积流量为5.0ml/min时,抗HBcAg单抗的纯度大于95%,回收率达75%,纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降。本研究建立了蛋白A亲和层析法纯化抗HBcAg单克隆抗体的方法,其操作简便、快速而且效果良好。     

IgA类和IgM类单克隆抗体血型定型试剂的比较研究

自从单克隆抗体技术建立以来，发达国家的血型定型试剂大多采用抗血型单克隆抗体取代传统的标准血清。以往的人ABO血型定型试剂，无论是传统的标准血清，还是动物免疫血清或单克隆抗体，都是IgM类抗体。本科建立了IgA类抗人A和B血型物质单克隆抗体，已获得国家新药证书，并被批准为国家定点生产的血型定型试剂。     

1例Rh(D)阴性的家系结果分析

笔者就1例Rh(D)阴性的家系结果分析:先证者,女,50岁,汉族,住院号20041730,骡沟乡正坝人,B型血Rh(D)阴性,子宫黏膜下肌瘤患者。1材料与方法ABO血定型均采用试管法,正反定型。抗A/B单克隆抗体标准血清来源于南京华欣药业生物工程有限公司,批号20040408,有效期200504,抗A、抗B效价     

Bm亚型1例

<正>本例献血员在检定血型时发现正定型为O型,反定型为B型,因正反定型结果不一致,对该献血员标本进一步做血型血清学检查。血型血清学检查：①试剂：抗A抗B为上海血液制品研究所购买的单克隆抗体；抗H,抗AB为苏格兰诊断试剂公司购买的单克隆抗体；抗人球蛋白为苏格兰诊断试剂公司购买的多特异性抗人球蛋白；A细胞、B细胞、O细胞为本实验室采用5份相应血型健康红细胞混合制备而成；②血型血清学检查：该献血员血型鉴定结果表明患者红细胞上无A、B     

AIB1蛋白双单克隆抗体夹心ELISA检测法的建立及初步应用

目的 建立双单克隆抗体夹心ELISA方法检测血清中AIB1的水平,探讨其在AIB1蛋白检测中的应用价值.方法 应用抗AIB1-C单克隆抗体4B9F12作为固相抗体,Biotin-1A2E1作为标记抗体,ELISA双抗体夹心法检测AIB1.构建及优化的内容包括:最适包被浓度、最适包被缓冲液、生物素标记抗体工作的浓度;鉴定的指标包括:敏感性、特异性、稳定性等.结果 使用0.05 mo·L-1碳酸盐缓冲液(pH9.6)为包被缓冲液,包被抗体4B9F12工作浓度为10μg·mL-1,Biotin-1A2E1工作浓度选择1∶500;采用双抗体夹心法检测外周血中AIB1的特异性和敏感性均较高.结论 抗AIB1双抗体夹心ELISA方案的构建、鉴定达到了预期目的 ,为临床研究奠定了基础.     

注射乙型肝炎疫苗后产生的抗-HBs应答与周围淋巴细胞亚群间关系

作者利用特异性单克隆抗体通过间接免疫荧光法测定14名乙型肝炎疫苗接受者(8名男性,6名女性,年龄为24～69岁)的周围淋巴细胞亚群.用单克隆抗体T-11、T-4、T_(8A)和B-1分别测定乙型肝炎疫苗接受者的总T细胞、辅助-诱导T细胞(T_4细胞)、抑制-细胞毒T细胞(T_8细胞)及B细胞;用单克隆抗体HNK-1测定自然杀伤(NK)细胞/杀伤(K)细胞.每人肌注乙型肝炎疫苗两次,每次20μg,间隔一个月.结果在第1次肌注后1个月,7人抗-HBs阳转,第2次肌注后12人抗-HBs阳转,     

抗伤寒沙门菌鞭毛蛋白特异单克隆抗体的制备及其对伤寒免疫诊断应用的可能性

按Ibrahim等的方法自伤寒菌提取纯鞭毛蛋白,分别免疫新西兰白兔及BALB/c小鼠,并从兔抗伤寒鞭毛蛋白多克隆血清中提取IgG抗体。将免疫的小鼠脾细胞与P3-X63/Ag8鼠骨髓瘤细胞融合,经克隆选择获得4株稳定分泌抗伤寒菌鞭毛蛋白的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,即A1、C4、     

鱼藤素对食管癌EC-109细胞增殖的抑制作用及部分机制

<正>氧化和抗氧化失衡在肿瘤发生发展过程中的作用被越来越多的学者所关注~([1-2])。本实验拟通过安全有效的体外实验来观察鱼藤素在食管癌细胞中的作用效果,同时观察慢性氧化应激相关通路在其中的作用机制。1材料与方法1.1药物与试剂鱼藤素(deguelin)购自Sigma公司,p-Akt兔抗人单克隆抗体、Nrf2兔抗人单克隆抗体、HO-1鼠抗人单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司。     

抗程序性死亡受体1单克隆抗体体外细胞因子释放综合征风险评估

目的 选择合适的方法评价抗程序性死亡受体1（PD-1）单克隆抗体在体外引起细胞因子释放的风险。方法 通过抗体与人PBMC细胞共培养6、24 h,并用流式技术评估重组人源化抗PD-1单克隆抗体（F520）和已上市抗PD-1单克隆抗体Opdivo、Keytruda是否存在引起细胞因子释放综合征（cytokine release syndrome,CRS）的风险。结果 成功建立了采用人PBMC细胞在体外进行抗PD-1单克隆抗体细胞因子释放的评价技术。结论 与人PBMC细胞的共培养6、24 h,F520、Opdivo和Keytruda在体外均不存在引起CRS的风险。     

超抗原介导细胞的细胞毒作用依赖于抗原的表达,与P—糖蛋白多药耐药表型无关

超抗原活化T细胞能被单克隆抗体导向溶解某些肿瘤细胞，这种方法被称为超抗原依赖细胞的细胞毒作用（SDCC），可能是一种有潜力的抗肿瘤疗法。作者研究T淋巴母细胞白血病细胞株CCRF－CEM及其多药耐药亚株CCRFVcR100、CCRFVcR100和CCRFADR5000对SDCC的敏感性。用蛋白A和超抗原葡萄球菌肠毒素A（SEA）的重组融合蛋白联合单克隆抗体抗CDT、抗CD38、抗CD45RA和4E3（抗P—糖蛋白抗体）以确定白血病细胞对SDCC敏感性和多药耐药基因（MDRI）产物表达之间的关系。结果表明：MDRI基因表达很少或不影响CCRF一CEM及其多药…     

Alzheimer病疫苗接种后自身抗体的产生

近年的研究表明 ,针对 Alzheimerβ淀粉样蛋白肽 ( AβP) N末端区的定位单克隆抗体与β淀粉样蛋白原纤维结合 ,可使β淀粉样蛋白原纤维解聚并抑制其神经毒性作用。这些抗体在体内外都能防止 β淀粉样斑块的形成。作者报告了一种诱生高滴度特异性Alzheimer AβP抗体的新免疫程序。　　抗原由丝状噬菌体展示的 EFRH表位构成 ,经皮下、腹腔或鼻内途径用每次剂量为 1 0 1 1 噬菌体、间隔 1 4天免疫豚鼠 4次 ,以无佐剂的噬菌体进行攻击。于第 3、第 4次注射后 7天采血 ,以 ELISA测定抗 -噬菌体和自身 AβP免疫反应性及抗噬菌体和抗EFRH…     

抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。     

抗delta-like-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗delta-like-1的单克隆抗体并鉴定其特异性.方法 用delta-like-1多肽-BSA蛋白复合物作为免疫原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗delta-like-1单抗的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、细胞免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗delta-like-1单抗的细胞株3H11C11A9E3和2D5D11F8F1,亚类鉴定两株均为IgG1,轻链为kappa链;ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1∶4.096×105和1∶1.024×105,抗体亲和常数分别为3.98×107、3.28 × 107L·mol-1;Western blot显示此单抗能特异性识别神经胶质瘤细胞株U251中的天然delta-like-1蛋白;细胞免疫组化进一步显示delta-like-1分布于细胞核中.结论 成功制备了抗delta-like-1单克隆抗体,可为研究delta-like-1与脑胶质瘤等神经系统疾病的关系奠定基础.     

分泌抗α_2-巨球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系建立

用亲和层析法从人血清中纯化α_2-M抗原,免疫BaLB/c小鼠后取其脾细胞制成悬液,与无分泌型SP_2/o-Ag14细胞系融合、培养,定期用微量间接血凝法测定抗α_2-M抗体,其滴度≥1:8为阳性,再行杂交瘤细胞克隆化。将其中A91-3-5、A91-3-6等6个亚系继续传代半年,并不断检测α_2-M抗体滴度,建立分泌抗α_2-M单克隆抗体的杂交瘤细胞系。     

用鼠单克隆抗体McAbl7-1A治疗转移性结肠直肠癌

肿瘤细胞可表达肿瘤相关抗原(TAA)，该抗原能开发用于诊断，也可作为免疫治疗的靶子。几乎每例结肠直肠癌的大部分肿癌细胞表达有TAACO17—1A。该抗原为非茹泌的糖蛋白MW37KD。曾将鼠抗该抗原的单克隆抗体(McAb，IgG2A)用于治疗。     

对体内使用单克隆抗体的免疫应答

体内使用单克隆抗体可产生抗同型和抗独特型抗体反应。处理这些反应的策略主要有两种:(1)改选单克隆抗体蛋白使它成为无免疫原性;(2)应用免疫抑制剂。本文介绍了各种处理方法及其利弊。