齐墩果酸和熊果酸的人肝微粒体代谢研究

目的研究齐墩果酸和熊果酸的体外代谢差异,对参与熊果酸代谢的细胞色素P450酶进行鉴定。方法考察齐墩果酸在人肝微粒体孵育体系中的代谢稳定性;采用9种细胞色素P450（CYP）选择性抑制剂和14种人重组CYP单酶分别与熊果酸共孵育,利用高效液相法检测熊果酸及代谢产物的含量,并且测定相关动力学参数Km和Vmax。结果齐墩果酸在人肝微粒体中不代谢,熊果酸在人肝微粒体和人重组CYP单酶中的动力学行为符合米氏动力学行为,CYP3A4和CYP2C9参与了熊果酸的代谢。结论本研究阐述了齐墩果酸和熊果酸的体外代谢规律,尤其是熊果酸的细胞色素P450代谢酶,丰富了五环三萜类化合物的药物代谢研究。     

齐墩果酸和熊果酸的人肝微粒体代谢研究

目的研究齐墩果酸和熊果酸的体外代谢差异,对参与熊果酸代谢的细胞色素P450酶进行鉴定。方法考察齐墩果酸在人肝微粒体孵育体系中的代谢稳定性;采用9种细胞色素P450(CYP)选择性抑制剂和14种人重组CYP单酶分别与熊果酸共孵育,利用高效液相法检测熊果酸及代谢产物的含量,并且测定相关动力学参数Km和Vmax。结果齐墩果酸在人肝微粒体中不代谢,熊果酸在人肝微粒体和人重组CYP单酶中的动力学行为符合米氏动力学行为,CYP3A4和CYP2C9参与了熊果酸的代谢。结论本研究阐述了齐墩果酸和熊果酸的体外代谢规律,尤其是熊果酸的细胞色素P450代谢酶,丰富了五环三萜类化合物的药物代谢研究。     

长效人白细胞介素4拮抗剂的研究

目的：研制保留白细胞介素4受体（IL-4R）结合能力,但不具有激活下游信号活性的人白细胞介素4（IL-4）突变体M5,并通过抗体Fc融合延长其体内半衰期,为变态反应病药物研发提供基础。方法全基因合成人IL-4突变体M5,将其克隆到pBV220表达载体,在大肠杆菌DH5α中表达M5蛋白。同时构建嵌合基因M5-IgG1 Fc,并克隆到pPICZαA载体中,电转化糖基工程毕赤酵母GJK01,经甲醇诱导,分泌表达M5-IgG1 Fc融合蛋白。利用CTLL-2／IL-4R细胞测定纯化所得M5蛋白、M5-IgG1 Fc融合蛋白的IL-4拮抗活性,最后利用ELISA试剂盒检测比较两者在小鼠体内的清除速度。结果由大肠杆菌DH5α表达的M5蛋白和糖基工程酵母GJK01表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白都具有IL-4拮抗活性,它们在CTLL-2／IL-4R细胞上拮抗IL-4（5．6×10-2 nmol／ml）的EC50分别为（0．31±0．05）和（0．77±0．03）nmol／ml。小鼠体内M5蛋白在注射后0．5 h时达峰,其在血液中的含量为5．8×10－2 nmol／ml,而在2 h时血药浓度已下降为峰值的2．8％,在8 h时低于ELISA试剂盒的检测限。 M5-IgG1 Fc融合蛋白在注射后0．5 h时血液中浓度也达到峰值,为4．7×10－2 nmol／ml,120 h时其血药浓度下降为峰值的4．3％,而168 h时低于ELISA试剂盒的检测限。结论 M5蛋白具有IL-4拮抗作用。由糖基工程酵母表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白不仅具有IL-4拮抗活性,而且在小鼠体内具有较长的半衰期,为下一步将其研发为治疗变态反应病的药物提供了理论基础。     

转染B7-H3基因对前列腺癌细胞摄取^18F—FDG和^18F—FLT的影响

目的研究转染B7同系物3（B7-H3）基因对前列腺癌细胞摄取^18F—FDG和^18F-FLT的影响,并探讨抗B7-H3单克隆抗体（简称单抗）对前列腺癌细胞的作用。方法用细胞计数试剂盒（CCK）-8检测鼠源性前列腺癌RM1细胞和转染B7-H3基因RM1的同种细胞（RM1-B7-H3）培养后0．5、1、2、3、4和5d的吸光度（A）值,并用流式细胞仪测定2种细胞的生长周期。在不同糖浓度（0、5．5和11．0mmol／L）、不同细胞数（每孔5×10^4～5×10^6）、不同摄取时间（20～120min）的条件下,测定2种细胞的^18F—FDG摄取率;并在细胞数为1×10^6、反应时间为100min的条件下行^18F-FLT细胞摄取实验。最后测定给予抗B7-H3单抗4H7后RM1-B7-H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率。数据比较行单因素方差分析和两样本t检验。结果RM1-B7-H3细胞培养1、2和3d时的A值分别为1．59±0．23、2．26±0．15和2．01±0．60,较RM1细胞（1．22±0．14、1．10±0．09和1．04±0．15）高（t=3．923、19．228和4．467,均P〈0．01）;其他时间点2组间差异无统计学意义（t=-0．094、0．858、2．000,均P〉0．05）。RM1-B7-H3细胞的G1、S、G2／M期比例分别为（32．96±2．56）％、（39．11±2．57）％和（27．94±0．21）％,S期比例较RM1细胞（32．76±1．90）％高（t=3．442,P〈0．05）。2种细胞^18F—FDG摄取率均随培养基糖浓度的增加而降低,随细胞数和摄取时间的增加而升高。在1．0×10^6细胞、摄取100min时,RM1-B7-H3和RM1细胞的^18F—FDG摄取率分别为（55．07±3．99）％和（44．16±3．60）％,^18F—FLT摄取率分别为（5．25±0．81）％和（3．33±0．64）％,差异均有统计学意义（t=4．977和4．567,均P〈0．01）。给予4H7单抗后RM1-B7。H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率为（45．36±2．92）％,较未加单抗组^18F—FDG细胞摄取率低（F=10．001,P〈0．01）。结论转染B7-H3基因能增强前列腺癌细胞的代谢和增殖活性,并提高细胞对^18F—FDG和^18F-FLT的摄取;给予抗B7-H3单抗4H7后,RM1-B7-H3细胞的^18F—FDG细胞摄取率降低。     

CYP2C9-1061A/C基因多态性对特发性房颤患者华法林用量的影响

目的探讨CYP2C9-1601A/C基因多态性在广东地区特发性房颤患者中的分布及其对华法林用量的影响。方法选择广东地区特发性房颤患者150例为病例组,正常人群120例作为对照组,采用PCR-RFLP方法检测CYP2C9基因,比较两组CYP2C9-1601A/C基因型分布特征,并对不同基因型的特发性房颤患者华法林用量进行对比分析。结果 CYP2C9基因1601位A碱基突变为C后,能够被KpnⅠ内切酶识别,产生134 bp和18 bp两个片段。特发性房颤患者中,CYP2C9-1061 AA型105例（70.0%）,AC型40例（26.7%）,CC型5例（3.3%）。AC型比例显著高于正常人群（χ2=13.3259,P=0.0003）,AA型比例显著低于正常人群（χ2=14.5200,P=0.0000）,CC型发生率两组无显著差异（χ2=0.2218,P=0.6377）。AC型及CC型患者华法林用量（3.62±0.58）mg、（3.12±0.16）mg均显著低于AA型的（4.28±0.63）mg（P〈0.01）;CC型患者低于AC型（P〈0.05）。结论广东地区特发性房颤患者中存在较多的CYP2C9 1061A/C基因多态性,并且CYP2C91061A/C突变使患者的华法林用量减低,可作为临床个体化用药的参考。     

芬太尼和脂多糖迟发预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的诱导大鼠心肌迟发预处理保护作用,测定心肌细胞凋亡率、Caspase、细胞色素C的变化,探讨DPC对心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法健康SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只。芬太尼组（A组）：大鼠腹腔注射芬太尼,24小时后建立缺血再灌注损伤模型;脂多糖组（B组）：腹腔注射脂多糖,24小时后处理同A组。生理盐水组（C组）：腹腔注射生理盐水,24小时后处理同A组。对照组（D组）：不注射任何药物,24小时后处理同A组。TUNEL法检测心肌细胞凋亡;caspase-3试剂盒测定其活性;Westernblot法检测细胞色素C。结果HE染色：损伤重区域的心肌仍保存细胞轮廓,横纹不清或消失,收缩带形成。损伤轻区域细胞轮廓清晰,横纹不消失。TUNEL染色：散在的细胞核呈棕色凋亡细胞。A组和B组心肌细胞凋亡率分别为（9±3）%和（11±3）%低于C组（17±5）%;A组和B组caspase-3活性（分别为0.43±0.11和0.40±0.13）低于C组（0.75±0.23）;A组和B组细胞色素C蛋白表达（分别为0.67±0.11和0.63±0.18）低于C组（0.98±0.19）,均有显著差异（P〈0.05）。结论芬太尼、脂多糖诱导的迟发预处理中存在心肌细胞凋亡,且心肌细胞凋亡率、细胞色素C、Caspase-3降低。     

重组人TSHR片段蛋白建立人TRAb ELISA及临床应用

目的建立2种检测人血清促甲状腺激素受体抗体（TRAb）酶联免疫吸附测定（ELISA）方法,分别以测定刺激性抗体（TSAb）和阻断性抗体（TSBAb）为主,并用于甲状腺疾病检测。方法分别以重组人促甲状腺激素受体（TSHR）膜外区氨基端（N端）蛋白和羧基端（C端）蛋白作为抗原建立N法和C法,各检测健康人229名,初诊Graves病（GD）451例、初诊慢性淋巴细胞性甲状腺炎（HT）伴甲状腺功能减退症（简称甲减）104例、单纯性甲状腺肿35例、非毒性结节性甲状腺肿47例、亚急性甲状腺炎38例。组间比较采用方差（ANOVA）分析,组间阳性率比较用χ^2检验。结果N法：（1）与商品TSAb试剂盒检测法明显相关（r=0．7422,P〈0．05）。（2）批内、批间CV分别为3．96％～4．67％和7．32％～8．33％。（3）健康人405nm处吸光度（A405）值为0．44±0．15,阳性切点（x＋2s）为0．74。（4）初诊GD A405为0．93±0．28,高于健康人（F=2．0341,P=0．001）,阳性率82．8％。（5）初诊HT伴甲减A405,为0．64±0．23,高于健康人（F=1．7822,P=0．003）,阳性率62．1％。C法：（1）批内、批间CV分别为3．24％～4．72％和7．22％-8．55％。（2）健康人A405为0．56±0．11,阳性切点（x＋2s）为0．78。（3）初诊HT伴甲减A405为1．17±0．26,明显高于健康人（F=3．0333,P=0．002）,阳性率93．4％。（4）初诊GD A405;为0．74±0．23,明显高于健康人（F=1．8339,P=0．03）,阳性率66．3％。N法、C法检测单纯性甲状腺肿、非毒性结节性甲状腺肿、亚急性甲状腺炎患者与健康人差异均无统计学意义（N法：F=1．6134,1．5772和1．6208,C法：F=1．5910,1．5369和1．6055,P均〉0．05）。结论N法以检测人血清TSAb为主,C法以检测TSBAb为主;其为临床GD诊断、HT辅助诊断、疗效观察提供了新型、特异、稳定、可靠、操作简便的方法     

以双氯酚酸为探针采用高效液相色谱法快速测定CYP4502C9的酶活性

目的建立一种快速、高效的以双氯酚酸作为探针药物评价细胞色素P4502C9（CYP2C9）酶活性的高效液相色谱．紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB—C18柱（50mm×4．6mmI．D．,5μm）;流动相为乙腈（含0．01％七氟丁酸）-水（含0．01％七氟丁酸）（65：35,V／V）,流速2．0mL/min;检测波长为280nm。双氯酚酸与人CYP2C9酶在37℃温孵适当时间后,加入100μL乙腈-冰乙酸（94：6,V／V）终止反应,10000g离心后取上清液进样分析测定。结果4’-羟基双氯酚酸的保留时间为1．35min,线性范围为1．00—200μmol·L^-1（r=0．9999）,最低定量限为1．00μmol·L^-1,回收率为99．5％-100．8％;双氯酚酸的保留时间为2．25min,线性范围为1．00～200μmol·L^1（r=0．9999）,最低定量限为1．00μmol·L^-1,回收率为99．3％～101．1％。两者的日内、日间RSD均〈15％,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。结论该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外双氯酚酸及其代谢物4’-羟基双氯酚酸的测定,可应用于体外CYP2C9酶活性的评价及酶动力学的研究。     

神经突触结合蛋白Ⅰ-C2A区重组表达及其在心脏缺血-再灌注大鼠模型中的显像研究

目的 利用基因工程方法重组表达神经突触结合蛋白Ⅰ的C2A片段,探讨其在心肌细胞凋亡显像中的应用价值.方法 （1）将C2A基因连接到含有谷胱甘肽转移酶（GST）的重组原核表达载体pGEX-6P-1上,转化感受态细菌BL21,异内基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后纯化.（2）用异硫氰酸荧光素（FITC）标记纯化的蛋白,通过细胞结合实验鉴定蛋白质活性.（3）采用2-亚氨基噻吩方法,进行99TcmO-4标记C2A-GST融合蛋白,标记后的蛋白质用纸层析法测定其放化纯.（4）制备大鼠心肌缺血-再灌注模型,通过尾静脉注射99Tcm-C2A-GST,1 h后用SPECT仪进行显像 显像结束后,处死大鼠,取出心肌,用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,分离缺血心肌和存活心肌,测质量及其放射性计数,比较缺血心肌与正常心肌每克组织百分注射剂量率（%ID/g）值之间差别.采用SPSS12.0软件行统计分析,数据间比较采用t检验.结果 （1）成功表达的C2A-GST蛋白,相对分子质量约为3.8×104.（2）荧光显微镜下观察FITC-C2A-GST具有结合凋亡细胞的功能.（3）标记后的99Tcm-C2A-GST放化纯为（98.90±0.43）%.（4）大鼠显像示缺血损伤心肌显影清晰,体外测定缺血心肌摄取99Tcm-C2A-GST为（2.41±0.32）%ID/g,对照组99Tcm-C2A-GST-N-羟基琥珀酰亚胺（C2A-GST-NHS）的摄取为（0.82±0.24）%ID/g,两者之间差别具有统计学意义（t=10.6,P＜0.01）.结论 通过基因工程方法重组神经突触膜蛋白Ⅰ的C2A区域,重组后其具有监测缺血-再灌注大鼠模型中的心肌凋亡的作用.     

^99Tc^m标记MDM2反义寡核苷酸对人前列腺癌细胞目的基因表达的影响

目的探讨99Tcm标记的小鼠双微体扩增基因2（MDM2）mRNA的ASON和错义寡核苷酸（ASONM）对前列腺癌细胞株LNCaP目的基因表达的影响,为后续的前列腺癌基因显像奠定基础。方法人工合成一段针对MDM2mRNA的ASON和ASONM,以HYNIC为螯合剂,对ASON和ASONM进行99Tcm标记,检测标记率、放化纯、稳定性及分子杂交活性。用脂质体包裹驰TcTM-HYNIC．ASON（0、100和500nmol／L）和99Tcm-HYNIC-ASONM（500nmol／L）,于LNCaP细胞中培养24h,再行RT-PCR和Westernblot实验,观察探针对MDM2、p53mRNA和相应蛋白质表达的影响。各组间计量资料比较采用单因素方差分析和g检验。结果ASON的标记率为（65．15±2．05）％（n=5）,ASONM的标记率为（64．93±2．18）％（n=5）,两者放化纯均达90％以上。99Tcm-HYNIC-ASON稳定性好,保留了与互补链结合的能力。0、100、500nmo]／L99Tcm-HYNIC-ASON组和500nmol／LTcmHYNIC-ASONM组MDM2mRNA含量分别为0．458±0．035、0．250±0．026、0．174±0．032、0．463±0．033。除0nmol／L99Tcm．HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=33．69,q=24．32-91．45,均P〈0．01）;各组MDM2蛋白的平均密度分别为90．712±3．042、71．2184-2．915、32．775±3．062、88．121±2．710,同样除0nmol／L99Tcm．HYNIC．ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=235．93,g：6．43～19．14,均P〈0．01）。4组p53mRNA含量分别为0．185±0．046、0．203±0．040、0．213±0．027、0．163±0．049,差异无统计学意义（F=2．18,P〉0．05）;各组p53蛋白平均密度分别为33．865±2．213、70．445±2．180、99．025±3．012、38．351±3．271,除0nmol／L99Tcm-HYNIC-ASON组与500nmol／L99Tcm-HYNIC-ASONM组间外,余差异均有统计学意义（F=53．98,g=3．32-6．74,均P〈0．01）。结论MDM2反义探针能与MDM2mRNA链上的目的序列特异结合,并抑制目的基因的表达,具备活体内前列腺癌反义显像的实验条件,有望为在基因水平上诊断前列腺癌提供一种新方法。     

DCE-MRI评价恩度联合阿瓦斯汀抗肿瘤血管生成疗效

目的:利用动态增强磁共振成像技术(DCE-MRI)评价恩度单独及恩度联合阿瓦斯汀抑制肿瘤血管生成的疗效。方法:将18只人肺腺癌细胞系A549皮下接种裸鼠,随机分成对照组(n=6)、恩度单独给药组(n=6)和恩度联合阿瓦斯汀给药组(n=6)三组,DCE-MRI结合病理学方法评价肿瘤血管生成及其渗透性。结果:给药7天后,对照组肿瘤体积为(0.85±0.25)cm3,恩度单独给药组为(0.37±0.17)cm3,联合给药组为(0.16±0.03)cm3(F=24.455,P=0.000);对照组血管功能参数Ktrans、Kep、Ve及iAUC分别为(0.11±0.03)min-1、(0.67±0.54)min-1、(0.35±0.12)、(13.28±4.25),恩度单独给药组分别为(0.06±0.01)min-1、(0.40±0.25)min-1、(0.31±0.09)、(7.33±3.93),联合给药组分别为(0.04±0.02)min-1、(0.27±0.12)min-1、(0.36±0.19)、(4.29±3.53),给药组Ktrans及iAUC值较对照组明显减小,差异均具有统计学意义(F=15.257,P=0.000;F=8.197,P=0.004);对照组微血管密度(MVD)为(14.24±3.38)条/高倍视野,恩度给药组为(8.88±1.86)条/高倍视野,联合给药组为(6.47±1.78)条/高倍视野,差异具有统计学意义(F=41.305,P=0.000);免疫组化结果显示给药组VEGF呈低表达,对照组呈高表达。结论:DCE-MRI定量参数对评价肿瘤血管生成与病理学结果具有一致性,DCE-MRI具有实时动态、无创等优点,能早期监测肿瘤生长、评价抗肿瘤血管生成药物的疗效。     

PET／CT显像前不同准备方法对正常Beagle犬心肌^18F—FDG生理性摄取的影响

目的探讨PET／CT显像前不同准备方法对Beagle犬心肌18F—FDG生理性摄取的影响。方法取24只健康1岁龄雄性Beagle犬,按随机数字表法分为短时间（12h）禁食加高糖（按体质量静脉注射质量分数50％葡萄糖1g／kg）（sF-Gs）组、短时间禁食（sF）组、长时间（18h）禁食（PF）组和短时间禁食加高脂餐（SF—HF）组,每组各6只犬,行18F—FDGPET／CT心肌代谢显像。图像质量分为4个等级：0级为不摄取;1级为轻度（或部分心肌）摄取;2级为心肌摄取且显像基本清晰,但不均匀;3级为心肌完全均匀摄取且显像清晰。在PET／CT融合图上选择左心室为ROI并测定SUVmax注射18F—FDG前进行血糖测定。评价心肌18F—FDG摄取程度,比较各组间心肌18F．FDG图像质量、SUVmax及血糖水平（注射显像剂前测定）间的差别。采用单因素方差分析、Kmskal．Walls秩和检验进行统计分析。结果SF—GS组心肌显像完整均匀（2级2只,3级4只）,SF组心肌显像组内差异变化较大,常不均匀（2级4只,1级、3级各1只）;PF组（0级3只,1级2只,2级1只）与SF—HF组（0级4只,1级2只）心肌几乎不显影;各组间心肌18F—FDG显像质量分级差异有统计学意义（日=16．83,P〈0．01）。PF组SUVmax（3．01±0．97）与SF—HF组SUVmax（2．84±1．15）明显低于SF—GS组（14．76±4．72）与sF组（10．91±2．48）（F=69．84,P〈0．01）。PF组血糖水平（4．18±0．27）mmol／L与SF—HF组血糖水平（4．25±0．58）mmol／L也明显低于sF—Gs组（5．80±0．56）mmol／L与sF组（4．91±0．51）mmol／L（F=13．58,P〈0．01）。结论心肌18F—FDG显像前准备方法不同,显像结果也不同：sF—Gs后,犬心肌18F．FDG摄取均匀：而PF及SF．HF后。犬心肌18F—FDG牛理性摄取被抑制。     

18F-FDG-PET／CT 检测实验兔模型主动脉动脉粥样硬化及其炎性状态

目的：动脉粥样硬化在体动态评估可应用于临床预防心血管事件。本实验目的是监测 F‐18‐氟脱氧葡萄糖（18 F‐FDG）在动脉粥样硬化不同阶段的摄取,研究利用正电子发射断层成像／计算机体层摄影技术（PET／CT ）检测易损斑块的可行性。方法22只雄性新西兰白兔随机分为2组：动脉粥样硬化组（A组,n＝11）和动脉粥样硬化＋他汀组（S组, n＝11）。实验兔在第18周通过药物触发以诱导血栓形成。实验过程中的4个阶段分别进行PET／CT扫描：高胆固醇饮食前（基线阶段,n＝6）,第8周时（高胆固醇饮食中期,n＝4）,第18周时（触发实验前,即高胆固醇饮食结束阶段,n＝22）,药物触发实验后（触发实验后,n＝15）。主动脉的18 F‐FDG摄取值用最大标准化摄取值（SUVmax）和平均SUV值（SU‐Vmean）表示。SUV值通过测量一系列7．5mm长度的动脉节段获得。结果 SUVmean 和SUVmax分别为基线阶段0.449±0．108和0．550±0．132,高胆固醇饮食中期0．694±0．117和0．754±0．129,触发实验前（高胆固醇饮食结束阶段）A组0．788±0．121和0．861±0．139,S组0．651±0．194和0．736±0．243。SUVmean 和 SUVmax在触发实验后血栓形成组分别为1．128±0．420和1．302±0．489,在无血栓形成组分别为0．774±0．159和0．859±0．191。22只实验兔中的10只经检测证实有血栓形成（45．5％）：A组11只中的8只血栓形成（72．3％）,S组11只中2只血栓形成（18．2％）（ P ＜0．001）。结论18 F‐FDG摄取值的定量分析可以检测动脉粥样硬化的炎性状态和易损斑块。PET／CT对预测临床中动脉粥样硬化患者的血栓形成事件有潜在应用价值。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注后STATl和STAT3表达的影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后信号转导与转录激活因子（STAT）1、磷酸化STATl（P．STATl）、STAT3、P—STAT3蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法将雄性sD大鼠80只完全随机分为假手术（A）组、单纯脑缺血再灌注（B）组、脑缺血再灌注＋生理盐水（c）组和脑缺血再灌注＋EPO（D）组,每组20只,采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型。各组大鼠均于缺血2h后再灌注24h时,行MRI检查并计算缺血区异常信号相对面积值,Westernblot检测STATl、P—STATl、STAT3、P—STAT3蛋白表达水平的变化并计算相对灰度（rOD）值,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况并计算细胞凋亡指数。应用单因素方差分析和q检验分析数据。结果MRIT,WI示B、C组在左侧大脑半球皮质及皮质下均可见大片脑缺血异常高信号影,D组仅皮质下脑实质内或仅皮质处可见斑片状脑缺血高信号影;与B、C组比较,D组异常高信号区相对面积明显减小[（28．00±4．60）％、（29．70±4．80）％和（21．10±2．40）％;F=11．285,P〈0．01]。STATl、STAT3蛋白在正常脑组织中表达,缺血再灌注及EPO干预对二者表达水平均无明显影响（F=0．806和1．558,均P〉0．05）。P—STATl在A组表达较低,rOD值为0．75±0．13,缺血再灌注后表达显著增加;与B、C组相比,D组P—STATl表达水平有所减少（B～D：2．08±0．15、2．05±0．16、1．92＋0．05;F=3．274,P〉0．05）。P—STAT3在A组表达也较低,rOD值为1．02±0．09,缺血再灌注后表达显著增加;与B、c组相比,D组P—STAT3表达明显增加（B—D：2．22±0．13、2．04±0．14、4．21±0．21;F=40．719,P〈0．01）。B、C组细胞凋亡指数分别为（42．00±1．30）％和（41．20±2．50）％,高于D组[（20．90±1．46）％;F=378．704,JP〈0．01]。结论EPO可增加脑缺血区域P—STAT3表达水平、降低P—STATl表达水平,从而减少脑细胞凋亡的数目、减小脑梗死面积。     

BALB/c小鼠格雷夫斯病模型的构建

目的 通过免疫电穿孔的方法,构建稳定的BALB/c小鼠（简称小鼠）格雷夫斯病（GD）模型.方法 制备重组质粒pcDNA3.1/TSHR268.将50只小鼠按随机数字表法分为实验组（30只）、对照组（10只）和空白组（10只）.分别于实验第1、4、7、10周在实验组小鼠双后肢腓肠肌注射重组质粒,在对照组及空白组小鼠相同位置注射相同体积生理盐水;实验组及对照组小鼠每次注射后在注射区域行电穿孔加强免疫.以放射免疫法检测小鼠血清T4,ELISA法检测小鼠TRAb氨基端（TRAb N）抗体和TRAb羧基端（TRAb C）抗体.对模型小鼠进行甲状腺^99Tc^mO4^-显像及甲状腺形态学、病理学分析.多组间均数比较采用单因素方差分析及最小显著差异t检验.结果 实验组建模成功率为80％（24/30）.24只成功建模的BALB/c小鼠血清T4由第0周的（16.06±5.16） nmol/L升高至第12周的（95.04±68.92） nmol/L（F=18.906,t=-5.598,P＜0.05）,TRAb N抗体由第0周的（0.006±0.002） U/L升高至第12周的（0.251±0.110） U/L（F=47.491,t =-10.869,P＜0.05）,TRAbC抗体由第0周的（11.176±2.635） ×10^3任意单位（AU）/L升高至第12周的（46.395±22.001）×10^3 AU/L（F=14.642,t=-7.787,P＜0.05）.停止免疫后的第18周,小鼠血清T4为（36.64±23.68） nmoL/L、TRAb N抗体为（0.094±0.053） U/L、TRAb C抗体为（24.456±6.725）×10^3 AU/L,均有所下降,但仍明显高于免疫前水平（t=-4.161、-8.085和-9.008,均P＜0.05）.对照组与空白组小鼠T4、TRAb N抗体及TRAb C抗体在免疫前后均未见明显变化.经过4次免疫,实验组小鼠甲状腺对^99Tc^mO4^-的摄取能力较对照组及空白组明显增强.GD模型小鼠甲状腺较正常BALB/c小鼠体积增大,病理学检查可见甲状腺组织淋巴细胞浸润.结论 重组质粒pcDNA3.1/TSHR268＋免疫电穿孔方法可成功构建BALB/c小鼠GD模型.     

依据CYP2C19基因型调整首次PCI术后患者氯吡格雷给药剂量初步研究

目的本研究旨在探讨CYP2C19基因多态性与二磷酸腺苷（ADP）抑制率之间的关系,以期能够早期预测氯吡格雷抵抗,为氯吡格雷的个体化用药提供参考依据。方法选取127例诊断为急性冠脉综合症并首次接受经皮冠状动脉介入治疗术（PCI）的患者为研究对象,采取血标本并提取外周血基因组DNA,将提取后的总DNA进行PCR扩增,扩增产物经纯化后进行双向测序确定基因型,根据不同的基因型对患者进行分组;使用血栓弹力图测定ADP诱导的血小板聚集抑制率;多组均数间比较采用方差分析,多组均数间两两比较采用LSD-t检验,所有数据应用SPSS 13.0软件进行统计学处理。结果 127例患者中各基因型所占比例：CYP2C19＊1/＊1为41.7%,CYP2C19＊1/＊2为35.4%,CYP2C19＊1/＊3为11.8%,CYP2C19＊2/＊2为5.5%,CYP2C19＊2/＊3为5.5%,CYP2C19＊3/＊3为0%。携带正常基因纯合子（CYP2C19＊1/＊1）的A组患者与携带有正常基因与突变基因杂合子（CYP2C19＊1/＊2或CYP2C19＊1/＊3）的B组患者ADP抑制率并无显著性差异,携带突变基因纯合子或杂合子的C组患者与B组和A组均有显著性差异（P〈0.05和P〈0.01）。结论首次PCI术后携带CYP2C19突变基因纯合子或杂合子（CYP2C19＊2/＊2、CYP2C19＊3/＊3或CYP2C19＊2/＊3）的患者建议使用联合抗凝治疗。     

原发性中枢神经系统淋巴瘤的DWI、^1H-MRS表现与病理对照分析

目的探讨原发性中枢神经系统淋巴瘤的DWI和^1H-MRS表现及其病理基础。方法对17例经病理证实的原发性中枢神经系统淋巴瘤的DWI、^1H-MRS与病理资料进行对照分析,比较瘤体与对侧正常脑白质ADC值以及瘤体与正常脑白质^1H-MRS代谢物峰高（Cho、Cr、NAA）和代谢物峰高比值（Cho/Cr、Cho/NAA）。结果原发性中枢神经系统淋巴瘤DWI图均表现为高信号。瘤体ADC值（6554±57．95）低于对侧正常脑白质ADC值（755±86．10）,差异有统计学意义（F=10．139,P〈O．05）。^1H-MRS：①病例组Cho（28．13±6．15）高于对照组（20．87士4．21）,差异有统计学意义（F=9．802,P〈O．05）;②病例组Cr（5．66±2．81）、NAA（8．31±3．26）分别低于对照组Cr（14．80±3．63）、NAA（24．88±7．41）,差异有统计学意义（F=47．645、56．783,P〈0．05）;③病例组Cho/Cr（5．82±2．12）、Cho/NAA（3．74±1．67）分别高于对照组Cho/Cr（1．44±0．25）、Cho/NAA（0．87±0．14）,差异有统计学意义（Z=-4．025、-4．025,P〈0．05）。所有病例均见有Lac和（或）Lip峰。免疫组化：17例均为B细胞型非霍奇金氏淋巴瘤肿瘤,瘤细胞LCA、CD20表达均阳性。结论DWI与^1H-MRS对原发性中枢神经系统淋巴瘤具有重要的诊断价值。     

伏立康唑胶囊在健康人体的生物等效性研究

目的研究伏立康唑胶囊和片剂在健康人体的生物等效性。方法采用随机自身交叉给药方法,24例健康男性志愿者单剂量口服伏立康唑胶囊与片剂。用液质联用方法测定血浆中的伏立康唑浓度,计算药代动力学参数。结果伏立康唑胶囊和片剂的的主要药代动力学参数,Tmax分别为（0．9±0．46）、（0．9±0．54）h;Cmax分别为（2340．83±607．95）、（1950．83±656．25）μg·L^-1;t1／2分别为（8．6±3．53）、（8．8±4．16）h;AUC0-tn分别为（11529．38±6501．42）、（10217．92±5428．32）μg·h·L^-1;AUC0-∞分别为（12779．70±8020．12）、（11404．55±7156．16）μg·h·L^-1。受试制剂与参比制剂比较,受试制剂的相对生物利用度F0-tn、F0-∞分别为（114．08±20．92）％、（113．84±22．50）％。结论伏立康唑胶囊和片剂具有生物等效性。     

继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症^18F-FDG PET/CT显像特点

目的 探讨继发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症（sHLH）的^18 F-FDG PET/CT显像特点.方法 回顾性分析南京医科大学第一附属医院2008年1月至2012年6月初诊的31例（男18例,女13例,平均年龄42岁）sHLH患者临床资料及^18F-FDG PET/CT显像资料,根据病因将患者分为肿瘤相关HLH（MAHLH）组（13例）、感染相关HLH（IAHLH）组（13例）及风湿病相关HLH（RAHLH）组（5例）,分别统计各组病灶FDG摄取情况和SUVmax.采用单因素方差分析及两样本t检验对各组SUV max进行比较.结果 23例患者脾肿大合并^18F-FDG摄取增高,RAHLH组、IAHLH组及MAHLH组对应例数分别为4、9和10例,对应脾脏SUVmax分别为3.16±0.61、5.67±3.37和6.04±3.06,差异无统计学意义（F=1.051,P＞0.05）.15例淋巴结增大合并^18F-FDG摄取增高：其中IAHLH组（8例）与MAHLH组（7例）肿大淋巴结SUVmax分别为5.35±1.69和10.14±5.24,差异有统计学意义（t=-2.456,P＜0.05）.17例骨髓^18F-FDG摄取增高：其中RAHLH组1例,SUVmax为4.6;IAHLH组（7例）与MAHLH组（9例）骨髓SUVmax分别为5.31±2.05和6.36±3.71（t =-0.670,P＞0.05）.10例肝脏体积增大的患者中,4例合并^18F-FDG摄取增高,SUVmax为4.9～10.2.MAHLH组、IAHLH组及RAHLH组SUVmaw分别为8.15±4.38、5.62±2.45和3.02±1.31,MAHLH最高（F=9.123,t=2.562、5.236、3.030,均P＜0.05）.结论 RAHLH多表现为脾脏肿大伴^18F-FDG摄取轻度增高,IAHLH和MAHLH多表现为脾脏肿大,侵犯淋巴结及骨髓;且MAHLH FDG摄取最高.上述^18F-FDG PET/CT显像特点有助于对该病的准确诊断.