siRNA表达框架对TNF-α和IL-1的特异性抑制

[目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL—1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞，构建针对小鼠TNF—α和IL-1的siRNA表达框架，转染细胞，用ELISA方法检测TNF-α和IL-1分泌情况。[结果]TNF-α干扰组TNF-α分泌量（21．87±1．20）pg／mL较IL-1干扰组（28．02±1．03）pg／mL及对照组（27．64±1．92）pg／mL均明显降低，差异有显著性意义（P〈0．05）。IL-1干扰组IL-1分泌量（40．37±4．02）pg／mL较TNF—α干扰组（57．86±3．91）pg／mL及对照组（59．55±3．57）pg／mL均明显降低，差异有显著性意义（P〈0．05）。[结论]构建的针对TNF-α和IL-1的siRNA表达框架能够明显抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1，且干扰作用具有序列特异性。     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

手足口病患儿治疗前后血清白介素-10、12和肿瘤坏死因子-α水平的变化简

目的 探讨手足口病患儿治疗前后血清白介素（IL）-10、12和肿瘤坏死因子（TNF）-α水平变化.方法 选择2012年1～12月浙江省三门人民医院收治的,手足口病患儿40例（病例组）,予以抗病毒、退热、营养支持及维持水电解质酸碱平衡等常规治疗,连用3d.观察患者治疗前和治疗3d后血清IL-10、12和TNF-α水平的变化.另选择同期体检中心的30例正常健康儿童作对照组.比较两组IL-10、12和TNF-α水平的差异.结果 病例组患者治疗前血清IL-10、12和TNF-α水平[（48.23±12.41）μg/L、（28.22±8.27） pg/mL、（2.91±0.47） pg/mL]明显高于对照组[（31.52±9.12）μg/L、（10.02±2.89） pg/mL、（1.04±0.27） pg/mL]（t=2.89、3.21、3.37,P＜ 0.01）.治疗3d后,患者血清IL-10、12和TNF-α水平[（39.15±8.62） μg/L、（17.72±3.14） pg/mL、（1.72±0.39） pg/mL]较治疗前[（48.23±12.41）μg/L、（28.22±8.27） pg/mL、（2.91±0.47） pg/mL]明显下降（t=2.39、2.89、3.02,P＜0.05或P＜0.01）.结论 手足口病患儿存在血清IL-10、12和TNF-α水平的异常升高.IL-10、12和TNF-α水平的变化可作为手足口病患儿疗效随访的指标.     

穿心莲内酯对活化巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路的抑制作用

目的：观察穿心莲内酯对脂多糖激活的小鼠腹腔巨噬细胞细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignal-regulated kinase1/2,ERK1/2）信号转导通路及肿瘤坏死因子α（tumor necrosisfactor-α,TNF-α）的影响。方法：以穿心莲内酯作用于脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞后,细胞计数试剂盒8测定穿心莲内酯对巨噬细胞的细胞毒作用,蛋白质印迹法检测巨噬细胞ERK1/2、p38和JNK蛋白磷酸化水平以及IκBα蛋白表达水平,逆转录聚合酶链反应法检测巨噬细胞TNF-αmRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达水平。结果：1~100μg/mL穿心莲内酯对脂多糖活化的小鼠腹腔巨噬细胞无细胞毒作用;穿心莲内酯能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的ERK1/2磷酸化,随着穿心莲内酯浓度增加,抑制作用增强（P〈0.01）;1~25μg/mL穿心莲内酯不能抑制脂多糖活化小鼠腹腔巨噬细胞的p38和JNK磷酸化,对脂多糖引起的IκBα降解也无影响。12μg/mL穿心莲内酯和20μmol/LPD98059（ERK1/2信号转导通路抑制剂）能降低巨噬细胞TNF-αmRNA的表达和其上清液中TNF-α的分泌水平（P〈0.01）。结论：穿心莲内酯能阻断ERK1/2信号转导通路,并在抑制TNF-α的表达中可能起作用。     

RNA干扰对活化的小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的：观察靶向小鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因的小干扰RNA（siRNA）在体外对小鼠巨噬细胞系RAW264．7表达TNF-α的抑制作用。方法：采用化学法合成针对TNF-α mRNA不同位点设计的3条siRNA序列（siRNA1～3）和1条带有荧光标记的BLOCK—IT^TM荧光Oligo（修饰的荧光标记的dsRNA,siRNA4）通过脂质体包裹后将其分别转染至小鼠巨噬细胞系RAW264．7,同时设立1个无任何靶基因的siRNA作为阴性对照（siRNA4）。荧光显微镜下观察siRNA的转染效率;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附实验（ELISA）法分别检测siRNA对TNF-α的mRNA和蛋白表达的抑制作用。结果：内毒素刺激后6h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成分泌的TNF-α量均增加,于9～12h达高峰。利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达72％～80％。siRNA1～4转染巨噬细胞后,siRNA2、3可见内毒素刺激的TNF-α mRNA（0．158±0．030、0．114±0．028）和TNF-α蛋白表达[（1355±348）pg／ml、（817±138）pg／m1]均明显少于未转染组[TNF-α mRNA0．294±0．147,蛋白（2104±32）pg／ml,均P〈0．05],其中siRNA3的抑制率非常显著,达61．2％（P〈0．01）。阴性对照siRNA4对细胞基因及蛋白表达无影响。结论：内毒素可刺激小鼠巨噬细胞TNF-α的合成。化学合成siRNA转染小鼠巨噬细胞能有效抑制TNF-α mRNA及蛋白的表达。     

妊娠期糖尿病患者血清细胞因子的水平及临床意义

目的探讨血清细胞因子水平与妊娠期糖尿病（GDM）的相关性及其临床意义。方法选择54例GDM患者作为研究对象,选择同期体检的健康妊娠妇女60例作为对照组,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平,同时采用稳态模型评估法（HOMA）评估胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果与对照组比较,GDM组患者血清TNF-α[（82.53±21.85）pg/ml vs（45.27±12.53）pg/ml]、IL-6水平[（98.43±28.73）pg/ml vs（59.34±17.28）pg/ml]和HOMA-IR[（2.13±0.69）vs（1.36±0.32）]均明显增高,差异有统计学意义（P均〈0.01）;GDM患者血清TNF-α和IL-6与HOMA-IR分别呈正相关（r=0.784,0.725）,差异有统计学意义（P均〈0.05）。结论 GDM患者血清细胞因子TNF-α和IL-6水平明显增高,与GDM发生密切相关。     

RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞分泌TNF-α的影响

目的：探讨小干扰RNA（siRNA）对小鼠脾淋巴细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）的抑制效果。方法：体外PCR扩增合成针对TNF-α靶位点的DNA表达盒，转染经脂多糖（LPS）激活的小鼠脾淋巴细胞，在细胞内源性RNA聚合酶III作用下转录形成siRNA，诱发目标mRNA的降解。于转染后48h收集细胞培养上清。TNF-α浓度用ELISA方法测定。结果：与空白对照组和无关干扰组相比，干扰组TNF-α分泌量明显降低（P〈0．05），抑制率约为16％。结论：RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用，产生抑制TNF-α分泌的效果，为TNF-α的基因治疗开拓新途径。     

重症肺炎患者血浆可溶性髓系细胞触发受体1、肿瘤坏死因子α和白细胞介素10水平变化的研究

目的观察重症肺炎患者血浆可溶性髓系细胞触发受体1（sTREM-1）及炎症因子水平变化,探讨重症肺炎患者的全身炎症反应状态。方法测定40例重症肺炎患者、25例普通肺炎患者、15例正常对照组入组当天血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）及sTREM-1水平。观察重症肺炎患者中存活组、死亡组入组第1、4和7 d,出院或死亡当天血浆TNF-α、IL-10及sTREM-1水平变化趋势。结果重症肺炎患者入组后第1 d血浆TNF-α、IL-10及sTREM-1水平[分别为（44.25±10.81）pg/mL、（58.21±16.41）pg/mL及（51.75±18.51）pg/mL]均高于普通肺炎患者[分别为（24.36±6.45）pg/mL、（24.56±7.10）pg/mL及（25.55±7.72）pg/mL]及正常对照组水平[分别为（13.82±4.04）pg/mL、（15.30±4.45）pg/mL及（14.37±4.82）pg/mL]（P均〈0.001）。存活组血浆sTREM-1、TNF-α及IL-10水平随时间延长均呈下降趋势,而死亡组血浆sTREM-1、TNF-α及IL-10保持较高水平甚至不断升高,各时间点的指标水平均高于存活组。入组当天血浆TNF-α/IL-10比值重症肺炎患者为1.286±0.177,高于普通肺炎组（1.077±0.410）及正常对照组（0.932±0.154）。死亡组各观察点血浆TNF-α/IL-10比值均高于存活组。第1 d血浆sTREM-1与TNF-α水平呈负相关（r=-0.479,P=0.002）;第1 d血浆sTREM-1与IL-10水平呈正相关（r=0.326,P=0.04）。结论重症肺炎患者存在全身促炎与抗炎介质过度释放及炎症反应失衡,尤以死亡组明显;sTREM-1、TNF-α及IL-10参与重症肺炎的炎症反应过程,其水平变化能反映患者预后。     

复方地龙胶囊对急性脑梗死患者血IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平的影响

目的：观察急性脑梗死患者应用复方地龙胶囊对血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α的影响。方法：将80例急性脑梗死患者随机分为治疗组（复方地龙胶囊＋常规治疗）和对照组（常规治疗）,于治疗前和治疗后10 d检测血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平,并对治疗前、后的数据进行比较。结果：两组急性脑梗死患者血清IL-6[治疗组和对照组分别为（75.62±3.02）pg/ml,（73.95±4.31）pg/ml]、IL-8[治疗组和对照组分别为（1.58±0.21）ng/ml,（1.61±0.33）ng/ml]、IL-10[治疗组和对照组分别为（53.69±5.63）pg/ml,（57.34±4.34）pg/ml]及TNF-α[治疗组和对照组分别（3.65±0.62）pg/ml,（3.83±0.74）pg/ml]水平在治疗前均高于正常组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而两组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。治疗后两组患者血清IL-6[治疗组和对照组分别为（25.78±5.35）pg/ml,（38.49±5.25）pg/ml]、IL-8[治疗组和对照组分别为（0.78±0.25）ng/ml,（1.31±0.24）ng/ml]、IL-10[治疗组和对照组分别为（5.78±4.85）pg/ml,（16.76±5.57）pg/ml]及TNF-α[治疗组和对照组分别为（1.45±0.35）pg/ml,（2.65±0.56）pg/ml]水平均下降,治疗组均下降明显,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：监测血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平有助于判断脑梗死的预后;应用复方地龙胶囊治疗可以显著降低患者血清IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平,从而减轻脑组织损伤,有利于脑梗死患者的转归。     

X盒结合蛋白1在低浓度皮质酮对巨噬细胞免疫功能调控中的作用

目的 探讨X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)在低浓度皮质酮对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能调控中的作用.方法 分离培养成年健康雄性C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,应用XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,采用荧光显微镜观察感染效率,感染3、5 d后收集巨噬细胞提取总RNA,应用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞XBP1 mRNA表达水平和干扰效率.XBP1-RNAi慢病毒或阴性对照慢病毒感染离体培养的小鼠腹腔巨噬细胞3 d后,再应用低浓度皮质酮(50 ng/ml)处理小鼠腹腔巨噬细胞1 h,分别应用ELISA法及激光共聚焦显微镜检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α生成及其吞噬功能变化.结果 当复感染指数(multiplicity of infection,MOI)值≥6时,XBP1-RNAi慢病毒能有效地感染小鼠腹腔巨噬细胞,感染效率＞75%.应用RT-PCR检测发现XBP1-RNAi能有效地抑制小鼠腹腔巨噬细胞XBP1基因表达.通过选择性地沉默XBP1基因表达,低浓度皮质酮(50 ng/ml)对巨噬细胞吞噬功能增强的作用受到抑制,巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数均显著下降(P＜0.01),而且对TNF-α分泌增强的作用也受到抑制,显著低于阴性对照慢病毒组(P＜0.01).结论 采用RNA干扰选择性地沉默XBP1,能有效地抑制低浓度皮质酮对巨噬细胞吞噬和TNF-α生成增强的作用.     

小鼠腹腔巨噬细胞不同分离方法的比较

[摘要]　目的　比较不同方法分离的小鼠腹腔巨噬细胞的生物学特性并找出最优方法。　方法　采用3种方法分离小鼠腹腔巨噬细胞：5%淀粉肉汤小鼠腹腔注射3 d后灌洗（5%淀粉肉汤组）;直接DMEM液腹腔灌洗（无血清DMEM组）;含75%血清DMEM液腹腔注射30 min后灌洗（75%血清DMEM组）,每组6只小鼠。观察各组巨噬细胞形态、计数细胞数量、流式细胞仪测细胞纯度、台盼蓝染色测细胞存活率、划痕实验测迁移能力及ELISA检测脂多糖（LPS）刺激后巨噬细胞分泌TNFα、IL-6及IL-1β的水平。　结果　3组巨噬细胞的形态、纯度、存活率相似,75%血清DMEM组巨噬细胞数量为（80.47±0.82）×105个,明显多于5%淀粉肉汤组（5.64±0.31）×105个及无血清DMEM组（2.63±0.42）×105个（P<0.05）;75%血清DMEM组巨噬细胞迁移能力明显高于其他两组（P<0.05）;75%血清DMEM组巨噬细胞分泌TNFα(15.51±0.51)ng/mL、IL-6(415.33±1.55)pg/mL、IL-1β(421.01±2.64)pg/mL,均多于5%淀粉肉汤组TNFα(10.50±0.50)ng/mL、IL-6(386.33±1.52)pg/mL、IL-1β(375.33±2.51)pg/mL（P<0.05）,也多于无血清DMEM组TNFα(9.56±0.25)ng/mL、IL-6(384.66±1.15)pg/mL、IL-1β(393.34±2.62)pg/mL（P<0.05）。　结论　75%血清DMEM液腹腔注射30 min后灌洗是一个比较好的分离小鼠腹腔巨噬细胞的方法。     

RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞TNF-α表达的影响

目的:触发哺乳动物细胞内RNA干扰,研究肿瘤坏死因子(TNF-α)特异性小片断双链RNA对活化的小鼠淋巴细胞TNF-α表达的影响。方法:原代培养小鼠脾淋巴细胞并用脂多糖激活,确立细胞分泌TNF-α的峰值,将针对TNF-α靶序列的干扰片断经PCR扩增后转染入细胞,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-αmRNA的表达。结果:终止刺激后48h淋巴细胞分泌TNF-α达高峰,TNF-α特异RNA干扰组与阴性对照组比较TNF-α浓度降低近30%,TNF-αmRNA表达抑制率达54.5%。结论:TNF-α小片断双链RNA可特异性抑制哺乳动物淋巴细胞TNF-α的表达;RNA干扰具有严格的序列特异性,只特异的沉默靶基因而不影响其他基因的表达。     

子宫内膜异位症患者腹腔液中IL-8与TNF-α的水平变化及其临床意义

目的 探讨子宫内膜异位症(EM)患者腹腔液白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平变化及临床意义.方法 应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定40例EM患者(Ⅰ～Ⅱ期19例、Ⅲ～Ⅳ期21例)及38例非内异症患者(对照组)患者腹腔液中IL-8及TNF-α的水平.结果 EM组患者腹腔液IL-8、TNF-α的水平[(75.81±65.92)、(51.46±24.77)pg/ml]均高于对照组[(30.58±19.94)、(26.82±17.34)pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05);EM组Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IL-8、TNF-α水平[(117.41±87.92)、(70.35±29.14)pg/ml]高于Ⅰ～Ⅱ期患者[(48.02±19.11)、(32.68±13.26)pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组增生期和分泌期腹腔液中IL-8、TNF-α差异无统计学意义(P＞0.05);EM组腹腔液中IL-8、TNF-α的水平无明显相关性.结论 EM患者腹腔液中IL-8、TNF-α水平增高,且Ⅲ～Ⅳ期浓度高于Ⅰ～Ⅱ期,提示腹腔巨噬细胞产生的细胞因子在子宫内膜异位症的发生发展中有一定意义.     

柚皮素对自身免疫性肝炎模型小鼠保护作用及TRAF6/JNK信号通路的影响

目的探讨柚皮素对自身免疫性肝炎(AIH)模型小鼠保护作用及肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法将72只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为阴性对照组,模型组,柚皮素低(30mg/kg)、中(60mg/kg)、高(120mg/kg)剂量组和阳性对照组(2mg/kg),每组12只。阴性对照组尾静脉注射等量生理盐水,其余各组小鼠一次性尾静脉注射刀豆球蛋白A(ConA)(12mg/kg)制备AIH模型。注射完毕之后,柚皮素低、中、高剂量组和阳性对照组分别灌胃相应药物,阴性对照组和模型组灌胃等量生理盐水,每天1次,持续给予5天。末次灌胃24h后,采用全自动生化分析仪检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝组织病理学改变,酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠肝组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝组织TRAF6、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果阴性对照组小鼠肝脏结构未见明显异常;模型组小鼠见大片肝细胞坏死区域,肝索排列紊乱,同时伴有炎性细胞浸润;柚皮素各剂量组和阳性对照组病理改变较模型组减轻,且柚皮素高剂量组与阳性对照组只存在轻度肝细胞坏死。与阴性对照组比较,模型组小鼠血清ALT[(134.82±13.60)U/L比(27.16±4.81)U/L,P0.05]、AST[(156.07±19.81)U/L比(20.49±3.62)U/L,P0.05],肝组织IL-6[(417.26±59.48)pg/mL比(102.18±18.62)pg/mL,P0.05]、TNF-α[(355.22±50.12)pg/mL比(62.17±6.07)pg/mL,P0.05]、TRAF6[(1.08±0.28)比(0.36±0.02),P0.05]、p-JNK[(0.94±0.14)比(0.38±0.02),P0.05]和Bax[(1.24±0.25)比(0.30±0.05),P0.05]蛋白水平增加,Bcl-2[(0.43±0.04)比(1.05±0.21),P0.05]和Bcl-2/Bax[(0.35±0.07)比(3.50±0.45),P0.05]水平降低;与模型组比较,柚皮素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠血清ALT[(119.45±11.72)U/L、(83.29±9.53)U/L、(52.13±9.14)U/L、(54.65±10.63)U/L比(134.82±13.60)U/L,P均0.05]、AST [(122.82±16.53)U/L、(86.51±9.48)U/L、(42.64±7.35)U/L、(46.82±8.27)U/L比(156.07±19.81)U/L,P均0.05],肝组织IL-6[(364.34±41.77)pg/mL、(307.13±37.43)pg/mL、(248.29±32.18)pg/mL、(253.17±34.90)pg/mL比(417.26±59.48)pg/mL,P均0.05]、TNF-α[(293.57±37.68)pg/mL、(240.94±27.49)pg/mL、(153.82±19.92)pg/mL、(149.56±18.08)pg/mL比(355.22±50.12)pg/mL,P均0.05]、TRAF6[(0.86±0.13)、(0.71±0.10)、(0.52±0.07)、(0.49±0.06)比(1.08±0.28),P均0.05]、p-JNK[(0.78±0.11)、(0.64±0.09)、(0.50±0.08)、(0.46±0.07)比(0.94±0.14),P均0.05]和Bax[(1.10±0.19)、(0.95±0.18)、(0.43±0.05)、(0.40±0.12)比(1.24±0.25),P均0.05]蛋白水平降低,Bcl-2[(0.52±0.07)、(0.60±0.10)、(0.73±0.13)、(0.71±0.15)比(0.43±0.04),P均0.05]和Bcl-2/Bax[(0.47±0.04)、(0.63±0.08)、(1.70±0.21)、(1.78±0.38)比(0.35±0.07),P均0.05]水平增加,柚皮素各剂量组之间呈剂量效应关系(P0.05);各组小鼠肝组织JNK蛋白水平变化不显著(P0.05);柚皮素高剂量组与阳性对照组作用相似(P0.05)。结论柚皮素可能通过抑制TRAF6/JNK信号通路,减轻AIH模型小鼠肝脏炎症反应,对AIH模型小鼠肝脏具有保护作用。     

半夏泻心汤通过介导MAPK信号通路抑制巨噬细胞炎症因子的分泌

目的:观察半夏泻心汤体外抑制巨噬细胞分泌炎症因子的作用及对MAPK炎症信号通路的影响,以探讨其治疗胃炎的可能机制。方法:取小鼠8只,提取小鼠腹腔巨噬细胞,原代培养;用家兔制备半夏泻心汤含药血清和对照血清。小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、地塞米松组及半夏泻心汤5%含药血清组、10%含药血清组和20%含药血清组,各组分别给予对照血清、LPS、地塞米松和各浓度含药血清。作用6 h后收集细胞,用qRT-PCR方法检测细胞内IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量;作用24 h后,用ELISA方法检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的蛋白含量。收集20%含药血清作用30 min、60 min和2 h后的细胞,用Western blot方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和P38的磷酸化水平。结果:qRTPCR结果显示,与不含药血清对照组比较,LPS能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);与LPS组比较,地塞米松能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);5%含药血清能明显抑制巨噬细胞TNF-α的mRNA表达(P0.01),10%和20%含药血清均能明显抑制IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01)。ELISA结果显示,5%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌(P0.01),10%、20%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的分泌(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,半夏泻心汤含药血清作用30 min、60 min均能抑制小鼠腹腔巨噬细胞MAPK信号通路中P38磷酸化水平(P0.05、P0.01);含药血清作用2 h能抑制巨噬细胞的ERK和P38的磷酸化水平(P0.01)。结论:半夏泻心汤可能通过调节巨噬细胞内MAPK炎症信号通路中ERK、P38的磷酸化水平,抑制巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α而起到治疗胃炎的作用。     

铜绿假单胞菌肺炎大鼠血浆内毒素与肺组织白细胞介素1和肿瘤坏死因子的关系

目的探讨铜绿假单胞菌肺炎中内毒素血症与白介素1（IL-1）和肿瘤坏死因子（TNF）的关系。方法 21只BALB/c小鼠随机分成3组,建立小鼠铜绿假单胞菌感染模型,以小剂量多黏菌素B拮抗内毒素活性,观察各组小鼠血浆内毒素水平、肺组织中IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平。结果铜绿假单胞菌感染组小鼠24 h后血浆内毒素水平[（71.2±9.9）EU/mL]明显高于铜绿假单胞菌感染＋多黏菌素B组[（50.5±10.8）EU/mL]（P〈0.01）;铜绿假单胞菌感染组小鼠24 h后肺组织中IL-1βmRNA水平[（0.89±0.06）]明显高于铜绿假单胞菌感染＋多黏菌素B组[（0.64±0.07）]（P〈0.01）;TNFαmRNA水平[（0.61±0.07）]也明显高于铜绿假单胞菌感染＋多黏菌素B组[（0.43±0.06）]（P〈0.01）。小鼠血浆内毒素水平与肺组织中IL-1β、TNFα含量有显著的相关性（r=0.98,P〈0.01;r=0.97,P〈0.01）。结论小鼠铜绿假单胞菌肺部感染内毒素血症与IL-1β、TNF-α显著相关。     

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1调节脓毒症患者炎症反应的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)对脓毒症炎症反应的调节作用及分子机制。方法选取2018年1月—2018年12月浙江省温州市人民医院收治的脓毒症患者(脓毒症组)30例,及同期健康志愿者(健康对照组)30名,实时定量PCR检测血清lncRNA TUG1和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测炎症因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)浓度。过表达TUG1慢病毒感染细菌脂多糖(LPS)处理的单核巨噬细胞THP-1,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力改变,免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HMGB1蛋白表达变化,ELISA检测巨噬细胞炎性因子浓度改变。结果与健康对照组比较,脓毒症组患者外周血lncRNA TUG1水平显著降低[(0.49±0.02)比(1.01±0.02),P0.01],HMGB1水平升高[(1.62±0.03)比(0.98±0.02),P0.01],两者呈负相关;促炎因子浓度显著升高[IFN-γ(33.91±5.81)pg/mL比(26.26±4.22)pg/mL、TNF-α(18.51±2.29)pg/mL比(13.89±2.12)pg/mL、IL-6(37.42±5.22)pg/mL比(19.12±3.34)pg/mL,P均0.05],抗炎因子水平明显下降[IL-10(8.71±1.59)pg/mL比(17.63±2.73)pg/mL,P0.05];LPS处理的THP-1细胞过表达TUG1,细胞活力显著增强[(84.17±4.32)%比(49.18±3.28)%,P0.01];lncRNA TUG1靶向抑制HMGB1表达,促炎因子水平降低[IL-6(211.38±7.87)pg/mL比(602.21±10.08)pg/mL、TNF-α(206.75±8.39)pg/mL比(483.13±13.48)pg/mL,P0.01]。结论 lncRNA TUG1抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎因子分泌及HMGB1表达,调控脓毒症炎症反应。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF—αmRNA、iNOSmRNA的表达

目的观察脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α以及诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响。方法按常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成两组：空白对照组及LPS组（分别含LPSO．01,0．1,1．0,10rag／L）。采用荧光定量PCR方法测定肿瘤坏死因子-α及诱导型一氧化氮合酶的基因表达情况。结果经0．01μg／mL LPS刺激后细胞TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异（P〈0．01）,并且在一定范围内呈剂量一效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。     

IL-13在盆腔子宫内膜异位症患者血清和腹腔液中的表达及意义

目的 通过检测及探讨子宫内膜异位症（EMs）患者血清及腹腔液中IL-13水平的变化,初步推测其在EMS发病中的作用.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,检测EMs组32例患者和对照组20例非EMs患者腹腔液及血清中IL-13的水平,比较两组之间的差异;并将EMs组血清及腹水IL-13水平分别与EMs R-AFS评分进行相关性分析.结果 EMs组血清IL-13水平[（6.95±2.74）pg/ml]明显低于对照组[（12.87±9.70） pg/ml]（P＜0.01）;EMs组腹腔液IL-13水平[（3.26±1.81）pg/ml]明显低于对照组[（8.49±6.65）pg/ml]（P＜0.01）.根据期别将EMs组分为轻度亚组（Ⅰ、Ⅱ期）和重度亚组（Ⅲ、Ⅳ期）,血清IL-13水平轻度亚组[（7.85±2.09）pg/ml]与对照组[（12.87±9.70） pg/ml]及轻度亚组[（7.85±2.09 ）pg/ml]与重度亚组[（6.34±3.00） pg/ml]均无统计学差异,重度亚组[（6.34±3.00）pg/ml]明显低于对照组[（12.87±9.70）pg/ml]（P＜0.05）;腹腔液IL-13水平重度亚组[（2.43±1.43）pg/ml]明显低于轻度组[（4.48±1.63）pg/ml]（P＜0.01）,后者又显著低于对照组[（8.49±6.65）pg/ml]（P＜0.05）.EMs组腹腔液IL-13表达水平与其R-AFS评分呈负相关（r=-0.52,P＜0.05）.结论 EMs患者腹腔液中IL-13的水平显著降低,且与疾病的严重程度成负相关,推测IL-13在EMs的发病中起重要的作用.     

牛磺酸对大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平的影响

目的观察牛磺酸对大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平的影响。方法采用给予乙醇灌胃制造酒精性脑损伤模型的方法,40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牛磺酸组两组。对照组仅给予500ml/L的乙醇灌胃8周,牛磺酸组给予同等量乙醇灌胃,同时给予牛磺酸8周。研究结束后,抽取大鼠腹主动脉血液,断头取脑,检测各组血浆及脑组织中内皮素（ET）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平。结果牛磺酸组血浆ET（[168.59±3.08）pg/mlvs（200.57±4.42）pg/ml]、脑组织匀浆TNF-α（[12.03±0.26）ng/gvs（19.06±0.31）ng/g]均明显低于对照组（P〈0.01）。结论牛磺酸可降低大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α水平。