外周动脉闭塞患者的交感神经皮肤反应

目的：描述胚胎种植前遗传诊断在1例携带Ⅰ型白细胞黏附缺陷病（LAD-1）携带者并完成健康妊娠夫妇中的应用。设计：病例报道。机构：大学医院生殖中心。患者：1例男女双方都是LAD-1携带者的夫妇，女方CD18基因的外显子4携带有G400A置换，男方的外显子5携带有C562T置换。干预：标准体外受精（IVF）后第3天行卵裂期活检和分裂球遗传分析以检测2处突变以及21号染色体标记物。主要观察指标：1个未罹患LAD-1婴儿的出生。结果：得到15个卵母细胞，其中10个受精。8个胚胎适宜胚胎活组织检查。     

胚胎血红蛋白基因变异与自然流产的相关性研究

目的:胚胎发育不全是导致自然流产的主要因素之一。通过检测胚胎血红蛋白α-珠蛋白基因突变情况,探讨血红蛋白基因变异与自然流产的关系。方法:无菌收集自然流产妇女绒毛组织,提取DNA,扩增目的片段,测序,通过序列比对找出突变基因。结果:在胚胎血红蛋白α-珠蛋白的外显子1上检测到点突变HbA1:c.17 C>A,HbA1:c.46 G>T,在外显子2上检测到点突变:HbA1:c.223 G>C。其中,自然流产组的第46个核苷酸的点突变频率与人工流产组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胚胎血红蛋白α-珠蛋白的外显子1上的点突变可能为致死突变,与自然流产存在一定相关性。     

食管癌高发区p53基因第五外显子突变分析

目的 :探讨高发区食管癌标本中p5 3基因的突变状况及其与危险因素的关系 .方法 :采用PCR扩增产物纯化后直接DNA序列测定技术对河南省林州市 4 0例食管癌标本p5 3基因第五外显子突变情况进行检测 .结果 :4 0例食管癌标本中 ,有 8例标本 10个位点发生突变 ,突变率为 2 0 % (8/4 0 ) .10个突变中 9个为点突变 ,1个为插入突变 .突变大多发生在G :C碱基对 ,G :C→A :T的置换最多 ,占 5 / 9,A :T→T :A的颠换占 3/ 9,G :C→C :G的颠换占 1/ 9.p5 3基因第五外显子突变与性别、年龄、食管癌家族史和吸烟无显著联系 (P >0 .0 5 ) ,但与食用酸菜有密切联系 (P <0 .0 5 ) ,其OR值为 5 .95(1.13～ 31.2 6 ) .结论 :高发区食管癌标本中 p5 3基因第五外显子突变位点较为分散 ,经常食用酸菜可引起 p5 3基因突变     

喉鳞癌蛋白酪氨酸磷酸酶基因突变及甲基化研究

目的研究喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)基因突变和启动子甲基化状况。方法应用聚合酶链反应-单链构像多态性方法(PCR-SSCP)分析银染系统,检测喉鳞状细胞癌新鲜或冰冻组织中PTEN基因第5、第8外显子的突变,采用甲基化敏感聚合酶链反应方法(MSP)分析喉癌及正常喉组织PTEN基因启动子过甲基化。结果PTEN基因突变均发生在喉鳞癌中,占17.5%(7/40),其中第5外显子有6例发生突变,突变率15.0%(6/40),这6例中有低分化3例,中分化3例,无高分化;淋巴结转移占83.3%(5/6)。第8外显子仅有1例发生突变,突变率为2.5%(1/40),该病例虽无淋巴结转移,但病理为低分化。40例喉鳞癌组织中,有40.0%(16/40)例PTEN基因启动子区甲基化,9例喉正常组织中未发现甲基化,喉癌中有2例既有第5外显子突变发生,又有启动子甲基化,占5.0%;有1例既有第8外显子突变,又有启动子甲基化,占2.5%。结论PTEN基因启动子甲基化及基因突变是其在喉鳞癌中失活的原因,并且该基因失活可能与喉鳞癌演进有关。     

男性染色体复杂平衡易位携带者助孕2例并文献复习

目的 探讨男性染色体复杂平衡易位(CCRs)携带者的适宜助孕手段。方法 2例男性CCRs携带者通过胚胎植入前染色体重排检测(PGT-SR)助孕,其中1例夫妇同时行携带者筛查。结果 2例CCRs携带者夫妇均获得可移植胚胎并生育健康子代。其中1例患者联合携带者筛查技术,移植1枚非携带型胚胎,确保生育携带正常核型的后代。2例携带者夫妇的胚胎整倍体率为8.82%(3/34)。结论 PGT-SR可有效帮助CCRs携带者筛选可移植胚胎。携带者筛查技术可进一步筛选非携带型整倍体胚胎,阻断亲代染色体异常向子代的传递。     

定点突变小鼠凝血因子胚胎干细胞基因打靶载体的构建

目的 :构建定点突变的小鼠凝血因子 胚胎干 (ES)细胞基因打靶载体。方法 :在小鼠 因子基因第 8外显子中分别引入三个定点突变 ,构建置换型打靶载体转染胚胎干细胞 ,经药物筛选后挑取抗性细胞。结果 :成功引入点突变并构建置换型打靶载体 ,转染 ES细胞后经药物筛选得到抗性细胞克隆。结论 :体外定点突变系统可以对基因进行精细的修饰 ,为建立更精确地模拟人类疾病的动物模型打下基础。定点突变小鼠凝血因子胚胎干细胞基因打靶载体的构建@李坚     

MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

目的 :研究p5 3基因突变及p5 3,MDM2蛋白表达在原发性肝细胞癌 (HCC)发生中的作用。方法 :应用免疫组织化学SP法检测 6 1例原发性肝细胞癌及 5 9例相应癌旁肝组织中p5 3蛋白和MDM2蛋白的表达 ;用PCR -SSCP-银染技术对其中 2 1例HCC的p5 3基因第 5～ 8外显子的突变情况进行研究。结果 :p5 3和MDM2蛋白在HCC中的表达明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 1)。HCC中p5 3与MDM2蛋白表达无明显相关性 (P >0 .0 5 )。新鲜HCC组织中p5 3基因第 5～ 8外显子的突变率为 42 .86 % (9/ 2 1) ,且均位于第 7外显子 ,癌旁组织中未发现p5 3基因突变。突变病例中 6 6 .6 7% (6 / 9)有p5 3蛋白高表达 ,11.11% (1/ 9)有p5 3及MDM2蛋白的过度表达 ,无突变病例中MDM2过度表达率为 2 5 % (3/ 12 )。结论 :p5 3基因突变及由MDM2过度表达导致的p5 3功能失活在HCC发生中起重要作用。p5 3基因突变和其它机制引起的MDM2蛋白高表达可能在HCC中共同发挥致癌作用。     

利用PCR-SSCP技术检测中国汉族人PKD2基因的突变

目的:检测中国汉族人Ⅱ型多囊肾病基因PKD2的突变.方法:筛选临床确诊的26个中国汉族家系中31例常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)患者,提取外周血白细胞DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),取异常条带标本进行核苷酸序列测定,判别PKD2外显子突变位置及类型.结果:以20例健康志愿者为对照,从31例患者中成功检测出2种突变.1种为无义突变,系PKD2外显子13的第2407位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,形成1个终止密码子;另1种为错义突变,系PKD2外显子4的第964位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,使编码氨基酸由精氨酸变为色氨酸.结论:本研究建立了PCR-SSCP直接检测我国汉族人PKD2突变方法,检测出2种基因突变,为今后开展ADPKD患者囊肿前诊断提供了实验基础.     

胃癌组织中p16基因突变分析

目的 :探讨胃癌组织p16基因纯合缺失与突变的发生率及其临床意义。方法 :PCR方法扩增p16基因外显子 1(E1)及外显子 2 (E2 ) ,检测等位基因纯合子缺失 ;应用单链构象多态性 (SSCP)方法分析基因突变情况。结果 :2 0例胃癌组织中E1、E2纯合性缺失分别为 4例 (2 0 % )及 2例 (10 % ) ;SSCP未检出E1突变 ,E2有 2例出现泳动易位的异常单链 ,其中 1例 (Ⅲa期 ,低分化腺癌 )癌与癌旁组织均出现异常 ,2例异常标本均为进展期 ,LOH(+)胃癌。结论 :p16基因异常是胃癌发生发展中一重要事件 ,突变多见于外显子 2 ,可能与癌肿进展有关     

原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

甲状腺癌p53基因外显子5～8序列分析

目的 :了解甲状腺癌与 p5 3基因突变的关系。方法 :用聚合酶链式反应 -双链DNA直接测序方法对甲状腺癌标本进行 p5 3基因外显子 5 ,6 ,7,8序列分析 ,共检测甲状腺癌活检组织标本 2 5例 ,石蜡包埋组织标本 16例 ,正常人外周血标本 31例。结果 :正常人外周血标本未发现 p5 3基因突变 ,43例甲状腺癌标本发现p5 3基因外显子 8点突变 11例 ,外显子 7点突变 2例 ,缺失 3个bp1例。总阳性率达 34 15 %。其中位于外显子 8上的第 2 73位密码子突变 7例 ,占突变的 5 0 % ,最多见。结论 :p5 3基因外显子 7和 8突变在甲状腺癌组织细胞中较常见 ,特异性好 ,提示p5 3基因外显子 7,8测序对甲状腺癌的诊断有一定的参考价值     

中国人Wilson病患者ATP7B基因外显子突变研究

目的 对Wilson病(WD)患者ATP7B基因外显子进行PCR扩增测序,研究其突变的特点。方法 对41例患者(WD组)、10例健康者(对照组)以及1个WD家系(先证者女儿及其父母3人)提取基因组DNA,PCR扩增外显子相关片段,并对扩增产物进行直接测序。结果 健康对照组未见异常,WD组发现11例患者存在外显子8点突变,其中6例患者呈Arg778Leu的复合杂合突变;4例患者存在外显子12点突变,其中2例存在Arg952Lys突变。在Wilson病家系中,先证者女儿携带2种杂合性突变,分别是父源的外显子8中Arg778Leu杂合性突变和母源的外显子13中Pro992Leu杂合性突变,其父母均为表型正常的杂合子携带者。结论 中国人WD患者中ATP7B基因外显子8、12为突变的热点区,但也存在其他外显子的突变,如外显子13。     

2个先天性肾上腺发育不良家系中DAX-1基因的新突变

目的:探讨2个X-连锁先天性肾上腺发育不良家系的临床特征,检测患者及其家属中是否存在DAX-1基因突变。方法:对2个家系中4例患者分别进行相关医学检查获取临床资料,并取得所有患者及其家系成员的外周血标本;提取全血基因组DNA,PCR扩增DAX-1基因的2个外显子,包括外显子和内含子边界,扩增产物经纯化后直接测序进行基因检测。测序结果在核苷酸序列数据库进行比较分析。结果:1个家系中的3例患者(均为青春期前发病)DAX-1基因第1外显子处均存在119-120insT半合子移码突变,家系中有2例女性为此突变的杂合子;另1个家系中的1例患者(青春期发病)DAX-1基因第1外显子处存在993delC半合子移码突变,家系中有3例女性为此突变的杂合子。结论:在2个中国先天性肾上腺发育不良家系中发现DAX-1新的移码突变119-120insT和993delC。     

高分辨率熔解曲线检测大肠癌KRAS基因突变

目的研究高分辨率熔解曲线(HR M)检测大肠癌KR AS突变的准确性及敏感性。方法采用HR M检测大肠癌KR AS基因外显子2和3突变情况并与直接测序比较,研究HR M准确性。用KR AS野生型样本系列稀释KR AS外显子2第12个密码子突变型(0,1%,5%,10%,15%),采用HR M检测,评价其灵敏度。结果81例大肠癌肿瘤组织石蜡标本,检测到11例KR AS外显子2突变(13.58%),外显子3无突变。162例正常组织标本未检测到突变。HRM检测与测序结果一致率100%。HRM可检测到1%KRAS外显子2第12个密码子突变型。结论 HRM可以准确定性的检测KRAS基因突变分型,灵敏度达1%。     

胰腺癌相关新抑癌基因DPC4的初探

目的：通过对良恶性胰腺组织、胰腺癌细胞的DPC4(Delected in Pancreatic Cancer，Locus4)基因的9个外显子变化的检测，以探索胰腺癌早期诊断的新途径。方法：应用聚合酶链反应(PCR)、复合PCR(Multiplex PCR)、直接基因测序的方法，检测19例胰腺良、恶性组织物、2例正常胰腺组织、3个胰腺癌细胞株DPCA基因的纯合缺失及突变。结果：13例胰腺癌中11例DPCA的9个外显子PCR成功。2例未扩增出产物。经复合PCR证实为DPCA的纯合缺失，缺失率为15．4％(2／13)；3个胰腺癌细胞株中有1例纯合缺失(1／3)。PCR产物直接基因测序示：11例胰腺癌组织中有2例DPCA的第5／6外显子有1个碱基突变(A→T)，突变率18．2％(2／11)，2个胰腺癌细胞株中有1个在同样部位发生碱基突变(1／2)，2例胰岛细胞瘤、2例慢性胰腺炎、2例正常胰腺组织既无DPCA纯合缺失、也未检测到基因突变。结论：DPC4基因可能是胰腺癌候选抑癌基因之一。分析DPCA的变化有助于胰腺癌的诊断。     

散发皮肤疣状黄瘤的3β羟基类固醇脱氢酶基因的1个新的体细胞突变

目的:分析疣状黄瘤(V X)的3β羟基类固醇脱氢酶基因(NSDH L),以阐明其在该皮损组织学发生上的潜在作用。设计:从石蜡包埋的组织中提取DN A,采用PCR扩增NSD H L基因的第4和第6外显子。然后对反应产物直接测序并分析体细胞突变的情况。患者:评估了来自8例患者的9处VX皮损和3例无关正常对照者。结论:9处V X皮损中有2处(22%)证实在NSD H L基因第6外显子存在1个新的体细胞错义突变。其余7处V X皮损、非皮损内对照及3例无关正常对照者未发现该突变。所有病例未发现有第4外显子突变。之前在CH ILD综合征发现的第4和第6外显子的突变未…     

胰腺上皮内瘤变和胰腺癌中TGF-β/Smads信号通路相关基因的突变分析

目的:探讨TGF-β/Smads信号通路相关基因在胰腺上皮内瘤变和胰腺癌中的变化规律.方法:采用组织芯片、激光显微切割、PCR-SSCP和直接测序技术,检测各级别胰腺上皮内瘤变和胰腺癌组织中TGF-β/Smads信号通路相关基因突变.结果:23例胰腺癌中有2例分别存在Smad4基因(DPC4)第8和第11外显子的纯合性缺失;2例PanIN-3病灶和5例胰腺癌中分别存在 Smad4基因第8外显子、第11外显子,TβR-Ⅱ基因第3外显子和Smad2基因第1外显子的突变.突变类型包括错义突变、移码突变和多聚腺苷酸A的缺失,且基因改变者的免疫组化结果与之完全一致.结论:TGF-β/Smads信号通路中Smad4基因(DPC4)改变在胰腺癌形成和发展过程中起主导作用.     

中国南方汉族人种微粒体环氧化物酶基因多态性与吸烟者慢性阻塞性肺疾病易感性的相关性

目的　探讨中国南方汉族人的微粒体环氧化物酶 (mEPHX)基因多态性与吸烟者慢性阻塞性肺疾病 (COPD)易感性的关系。方法　将吸烟者分为 3组 :正常对照组 1秒钟用力呼气量占用力肺活量的百分率(FEV1/FVC % )≥ 70 % ,轻度COPD组FEV1/FVC %为≥ 5 0 %～ <70 % ,中、重度COPD组FEV1/FVC % <5 0 %。采集吸烟者的外周血或肺手术标本 ,常规抽提DNA ;采用PCR技术扩增mEPHX外显子 3和 4 ;分别以限制性内切酶EcoRV或RsaⅠ酶切外显子 3和外显子 4 ;以非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测酶切片产物片段 ,观察mEPHX外显子 3和 4的基因多态性。结果　检测 5 1例吸烟者的mEPHX外显子 3和 74例吸烟者的mEPHX外显子 4的基因多态性 ,其中有 4 3例测定 2个外显子的基因多态性。COPD组外显子 3的等位基因突变纯合子检出率和突变检出率分别为 2 4 .14 % (7/ 2 9例 )和 86 .2 1% (2 5 / 2 9例 ) ,明显高于正常对照组的 9.0 9% (2 / 2 2例 )和 6 3.6 4 % (14 / 2 2例 ) ;3组间外显子 3等位基因多态性分布的差异有显著性 (P <0 .0 1)。COPD组外显子 4等位基因突变杂合子的检出率为 2 8.95 % (11/ 38例 ) ,低于正常对照组的 4 1.6 7% (15 / 36例 ) ,且 3组间外显子 4的突变杂合子分布的差异有显著性 (P <0 .0 0 5 )。 3组中外显子 3的     

p16基因的表达和突变与卵巢恶性肿瘤的发展

分别应用免疫组织化学和PCRSSCP方法检测14 例卵巢恶性肿瘤中p16 蛋白的表达及p16 基因外显子1 和外显子2 基因突变,其中5 例还同时检测转移灶癌组织。结果示7 例卵巢恶性肿瘤组织为p16 蛋白表达阴性;无一例有p16 基因外显子1 突变;4 例有p16 基因外显子2 突变,其中2 例无p16 蛋白表达;5 例转移灶癌组织的基因突变和蛋白质表达与原发灶一致。提示部分卵巢恶性肿瘤的发生和发展与p16 基因的失活有关,基因突变是其中一种失活方式;卵巢恶性肿瘤中p16 基因突变发生在转移前,而非转移后     

运用ARMS法检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变

目的探讨应用突变特异性扩增系统法(ARMS)检测非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变.方法收集20例芜湖中医院2014年1月至12月NSCLC患者肿瘤样本,采用ARMS法检测EGFR基因18、19、20、21号外显子突变情况.结果在20例NSCLC患者中,18例ARMS法检测成功;ARMS法检测本群患者EGFR突变率为44.4％(8/18).在所有突变类型中,19外显子缺失突变3例,20外显子1例插入突变(S768I),20号外显子T790M错义突变2例,21号外显子错义突变(L858R)3例,其中1例同时出现20号外显子T790M突变及21号外显子(L858R)突变.结论ARMS法检测EGFR基因突变敏感,整个实验过程小于3h,操作简单,能够满足临床快速检测的要求,易于普及,而且ARMS可以检测到1％含量的突变DNA,敏感性高.特别是对于小标本及肿瘤组织含量少的标本有明显的优势.