恒河猴睾丸内激素调控的离体研究 Ⅱ.恒河猴睾丸Sertoli细胞的离体培养及激素分泌的研究

本文采用胶原酶消化和BSA密度梯度沉降的方法，建立了恒河猴睾丸Steroli细胞的无血清培养技术，研究了人促滤泡激素（hFSH）、羊促滤泡激素（oFSH）、双链环-磷酸腺苷（db-cAMP）、磷酸二酯酶的抑制剂（MIX）、霍乱毒素（Choleratixon）和Forskolin对恒河猴睾丸Steroli细胞雌二醇分泌的影响。结果表明：Steroli细胞对hFSH和oFSH的作用无明显的反应，而在同样的条件下，db-cAMP、MIX、Choleratixon和Forskolin明显地刺激Steroli细胞将雄烯二酮转化为雌二醇。     

恒河猴睾丸内激素调控的离体研究Ⅲ--雌激素对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的采用体外无血清培养方法,研究雌激素(E2)对恒河猴睾丸Leydig细胞睾酮分泌的影响.方法恒河猴睾丸活体组织,经胶原酶消化,BSA密度梯度重力沉降分离细胞,得到的Leydig细胞置二氧化碳培养箱培养,收集培养液,应用放射免疫测定法测定培养液中的睾酮含量.结果不同剂量的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮都能促进睾酮的含量升高,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著;当孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮分别与E2合并应用时,有明显地抑制作用,同样以17α-羟孕烯醇酮的抑制作用最为显著.结论E2抑制恒河猴Leydig细胞睾酮的分泌是由于影响了3β-羟类固醇脱氢酶、17α-羟化酶以及17,20-碳裂酶的活性所致.     

恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的研究

目的研究恒河猴睾丸支持细胞对间质细胞分泌睾酮的调节作用。方法采用无血清培养的方法,分析了促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)、表皮生长因子(EGF)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1(IL-1)对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平的影响。结果 GnRH、FSH、EGF和ET-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平具有促进作用,并且这种影响与共培养的支持细胞数量呈线性关系,即共培养的支持细胞数量增加,睾酮分泌水平亦明显上升;而IL-1对原代共培养恒河猴睾丸支持细胞与间质细胞睾酮分泌水平没有产生影响。结论支持细胞对间质细胞分泌睾酮具有重要的调节作用。     

hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性

目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0．1、1、10、100ng／mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng／mLhCG剂量组相比较,0．1,1,10,100ng／mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大（P〈0．01）。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加（0．1ng／mLhCG组P〈0．05,其余剂量组P〈0．01）。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量（r=0．987,P〈0．01）和AtrnmRNA表达量（r=0．982,P〈0．01）呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。     

低温灌注冷存离体睾丸的组织学及组织化学观察

利用组织学及组织化学的方法来观察不同时期低温灌注保存处理的12只狗的睾丸和18只人的睾丸结果表明:狗睾经上述处理后24h正常。人睾在48h仍呈现正常形态和结构,72h则出现部分生精上皮细胞变性,间质细胞SDH、附睾管ALPase下降。提示用低温灌注冷存的睾丸可以考虑作为睾丸移植的供睾。     

枸杞多糖对模拟隐睾温度培养的离体小鼠睾丸组织形态学影响的研究

目的：观察研究枸杞多糖（ＬｙｃｉｕｍＢａｒｂａｒｕｍＰｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅｓ,ＬＢＰ）对３７℃体外培养的小鼠睾丸组织形态结构有无保护作用。方法：未加ＬＢＰ的培养组为对照组,添加５００μｇ／ｍｌＬＢＰ的培养组为实验组。昆明种小白鼠睾丸组织在３２℃和３７℃ＣＯ２培养箱中分别培养２４、４８和７２ｈ后制成石蜡切片,ＨＥ染色,光镜下观察分析。结果：３２℃培养的小鼠睾丸组织对照组与实验组在各时间内曲精小管结构变化无显著差异。而３７℃培养的小鼠睾丸组织曲精小管结构４８ｈ之内两组间亦无明显差异。但７２ｈ时,对照组显示曲精小管上皮结构紊乱严重,大量细胞脱落退化;而实验组曲精小管上皮结构变化与３２℃培养７２ｈ的组织结构相似,生精上皮仍为复层,管腔脱落细胞明显少于对照组。结论：ＬＢＰ可减弱由于培养温度过高所致的曲精小管结构损伤。     

人参皂甙对大鼠离体腺垂体细胞促性腺激素分泌功能影响的研究

应用人参有效成份二醇组甙和三醇组甙及其单体Rb_1和Rg_1作用于预培养3天后的大鼠腺垂体细胞,观察其对促性腺激素分泌的影响。两种组甙在10~(-1)～10~(-10)mg/ml浓度作用下,对LH分泌均有促进作用,其相应单体也呈现相似效应,表现出双相特点,即在低浓度出现第二个效应峰。同时观察了对FSH分泌功能的影响,其效应基本与LH分泌变化趋势相一致。     

恒河猴精索内注射长效普鲁卡因后对睾丸和附睾影响的实验研究

在13只恒河猴精索内注射长效普鲁卡因后睾丸发生明显变化,给药剂量不同,睾丸曲精小管生精细胞改变的程度和恢复正常的时间亦不同。睾丸间质细胞无明显变化,睾酮分泌不减少,无毒性反应。对临床节育应用及生殖理论研究均具有重要价值。     

邻苯二甲酸二丁酯对成年大鼠睾丸Leydig细胞中Cx43蛋白表达及睾酮分泌的影响

目的:观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对成年大鼠睾丸Leydig细胞中连接蛋白43(Cx43)的表达及睾酮分泌的影响,探讨DBP对睾酮的调节是否与Cx43有关联。方法:将SD大鼠无菌脱臼处死,原代培养纯化Leydig细胞,将细胞分为溶剂对照组(0.1%DMSO)、DBP组(50 mg·L^-1 DBP)、Cx43增强剂组(50 mg·L^-1 DBP+10 μmol·L^-1 PGE2)和特异睾酮阻断剂组(40 μmol·L^-1氟他胺),分别处理细胞24 h;放射免疫法测定Leydig细胞睾酮水平;细胞免疫荧光和Western blotting法检测细胞中Cx43蛋白表达。结果:细胞染毒24 h后,与DMSO组比较,DBP组Leydig细胞中Cx43蛋白表达水平和睾酮水平均降低(P<0.05);与DBP组比较,DBP+PGE2组Leydig细胞中Cx43表达水平升高(P<0.05),但睾酮水平变化不明显(P>0.05);与DMSO组比较,氟他胺组Leydig细胞中睾酮水平和Cx43蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:DBP对睾酮分泌及Cx43表达均有影响,Cx43对睾酮合成无抑制作用,而睾酮可反向调节Cx43表达;DBP对Leydig细胞睾酮合成抑制作用并不一定以Cx43为靶点。     

促性腺激素释放激素、雌三醇及孕酮对离体培养人早孕胎盘滋养细胞人绒毛膜促性腺激素分泌的影响

取妊娠早期绒毛组织分离滋养层细胞,制成细胞悬液,离体培养。加入促性腺激素释放激素（ Ｇｎ Ｒ Ｈ）、人绒毛膜促性腺激素（ｈ Ｃ Ｇ）的分泌增加,单独加入雌三醇及孕酮,对 ｈ Ｃ Ｇ 的分泌无明显影响,若将 Ｇｎ Ｒ Ｈ 与雌三醇或与孕酮合用,则 Ｇｎ Ｒ Ｈ 所刺激的 ｈ Ｃ Ｇ 分泌明显被抑制。     

饮食限制联合静脉营养支持治疗小儿急性腹泻临床疗效观察

目的:观察饮食限制联合静脉营养支持治疗小儿急性腹泻的疗效。方法:105例腹泻病住院患儿在口服用药基础上,观察组给予静脉营养支持治疗,同时限制经肠道进食。对照组仍为常规补液治疗及照常进食。比较两组有效率、止泻时间及出院后3个月内感染性疾病的发生率。结果:观察组与对照组有效率及止泻时间比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组出院后3个月内感染性疾病的发病例率与对照组比较差异有统计学意义。结论:饮食限制联合静脉营养支持治疗小儿急性腹泻疗显著且可降低腹泻患儿出院后短期内感染性疾病的发生。     

番茄水溶性膳食纤维对糖尿病小鼠降血糖作用的研究

目的:观察番茄水溶性纤维(SDC)降糖作用.方法:腹腔注射链脲佐菌素(STZ)导致糖尿病小鼠模型,实验随机分为5组,每组15只,即正常对照组、模型对照组、正常实验组SDC(5g/kg)、番茄SDC组(5g/kg)、番茄粗纤维组(10g/kg), 连续灌胃.在第14天和第28天以葡萄糖氧化酶法测定小鼠空腹血糖,在第28天同时进行糖耐量实验.结果:与粗纤维组相比,番茄SDC实验组能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖值.与模型组相比,番茄SDC实验组对糖尿病小鼠的糖耐量具有显著的增强作用( P<0.01).结论:番茄SDC对糖尿病模型小鼠降血糖作用强于番茄粗纤维,具有较好的辅助降糖作用.     

缺氧后小鼠大脑组织结构观察

目的：通过观测缺氧后小鼠脑组织中神经元的形态结构及小胶质细胞的数量，探讨不同缺氧状态下小鼠脑组织结构的变化。方法：用间歇性重复缺氧模型和持续性缺氧模型小鼠，取脑组织作HE染色和镀银法染色，观察神经元结构，计数小胶质细胞。结果：①间歇性缺氧小鼠脑神经元的缺氧变化比持续性缺氧小鼠轻；②缺氧脑组织中小胶质细胞数量增加。结论：间歇性低氧可提高脑神经元对缺氧的耐受性；脑组织缺氧损伤时小胶质细胞数量增多。     

亲代三丁基锡暴露对F1代KM小鼠血常规的影响

目的 探讨亲代三丁基锡暴露对F1昆明小鼠血常规的影响。方法 将雌、雄各40只小鼠随机分别分为空、低、中、高浓度组(0、0.2、2和20 μg/kg), 每天进行染毒, 持续45 d。在第60天时, 将同浓度组的雌:雄鼠按1:1进行同笼配种。仔鼠出生60 d后取血, 进行血常规的检测。结果 与对照组相比, F1代雄性低浓度和高浓度组的红细胞数量和血红蛋白量显著增加(P < 0.01);F1代雄性低浓度组红细胞体积、平均血红蛋白含量(P < 0.01)和淋巴细胞绝对值(P < 0.05)显著降低;F1代雌性高浓度组的红细胞数量显著增加(P < 0.01), F1代雌性小鼠的血红蛋白量、红细胞压积、血小板量三项指标随着TBT浓度的增加呈剂量依赖性。结论 亲代TBT暴露影响F1代小鼠的血常规, 且低浓度时对F1代雄性小鼠的影响最大, 高浓度时对F1代雌性小鼠的影响最大。     

阿维菌素原药对昆明小鼠体液免疫功能的影响

目的探讨阿维菌素原药对小鼠体液免疫功能的影响。方法阿维菌素设3个剂量组20、10、5mg/kg和阴性对照组,连续给昆明小鼠染毒28d,进行抗体生成细胞(PFC)和半数溶血值(HC50)测定来评价对体液免疫功能的影响;小鼠取血测WBC、TP、白蛋白(又称清蛋白,album in,A lb)、IgG、IgM。结果 20mg/kg组抗体生成细胞数(PFC)和半数溶血值(HC50)均明显降低,和阴性对照组差异有统计学意义(P<0.01);20mg/kg组WBC、TP、ALB、IgG、IgM均比阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿维菌素原药对昆明小鼠的体液免疫功能有一定的抑制作用。     

昆明小鼠生长发育指标及繁殖性能测定

目的 作为我国昆明小鼠生物学特性标准化研究工作的一部分,我们承担了兰州生物制品所昆明小鼠生长发育指标及繁殖性能测定工作。方法 从生产大群中选取了170只怀孕母鼠,用其所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其3、7、10、14日龄窝重和3、4、5、6、8、10、12、14周龄体重。用育成雄、雌仔鼠各140只,饲养至70～75日龄配种,共配136盒,作繁殖性能测定。测初配后30d产仔率、各胎平均窝产仔数、离乳成活率和胎间隔。结果 兰生所昆明小鼠平均初生窝重为20g,反映小鼠哺乳情况的14日龄平均窝重为67．4g。公鼠10周龄时体重已达体成熟,母鼠10周龄时体重也达体成熟的90％以上。初配后30d产仔率81．6％。1～5胎平均产仔数10只以上,6～10胎平均产仔数约7只,平均离乳率84％。结论 上述结果为中国昆明小鼠标准化提供可靠数据。     

芪参复康胶囊抗疲劳作用的研究

目的：研究芪参复康胶囊的抗疲劳作用。方法：以芪参复康胶囊内容物给小鼠灌胃，给药剂量为0．3、0.6、1．2g／（kg·d），连续给药15d，并设参芪片[0．8g/（kg·d）]对照组和空白对照组；分别对小鼠进行耐高温试验，取血和肝组织，测定血乳酸和肝糖原的含量。结果：各芪参复康胶囊剂量组与参芪片组小鼠在高温条件下的生存时间均较空白对照组延长，血中乳酸含量降低，肝糖原含量明显升高。结论：芪参复康胶囊具有抗疲劳的作用，并能提高小鼠对高温的耐受力。     

红景天功能饮料对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响

目的探讨红景天功能饮料对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响。方法分别以160、80、40 ml/kg剂量的红景天功能饮料给小鼠连续灌胃30 d,通过负重游泳试验及检测血尿素、肝糖原和血乳酸水平评价各组小鼠的抗疲劳功能;通过常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒实验和急性脑缺血（断头）实验评价各组小鼠耐缺氧功能。结果与给予纯水灌胃的对照组相比,高、中剂量组小鼠负重游泳时间明显延长（P〈0.05）;高剂量组小鼠的血清尿素含量显著降低（P〈0.05）,肝糖原含量增高（P〈0.05）;3个剂量组小鼠的血乳酸曲线下面积均减小（P〈0.05）;高、中剂量组小鼠的缺氧死亡时间、中毒后存活时间明显延长（P〈0.05）;高剂量组小鼠的断头后张口喘气时间明显延长（P〈0.01）。结论红景天功能饮料可以提高小鼠的抗疲劳能力和耐缺氧能力。     

不同低剂量辐射对粒单白血病小鼠骨髓的影响

目的探讨低剂量辐射（LDR）对急性粒单核细胞性（粒单）白血病小鼠骨髓的影响，为LDR的临床应用提供理论依据。方法将小鼠粒单白血病细胞系WEHI-3尾静脉接种于BALB／c小鼠建立动物模型。接种后第28乏对其行LDR，于照射后第1天处死所有小鼠，通过光镜、荧光显微镜、电镜观测骨髓多项指标。结果BALB／c小鼠在接种WEHI-3细胞后第14～28天能成功诱导移植性粒单白血病的发生。小鼠骨髓涂片的光镜观测显示50mGy，75mGy和120mGy组其原始粒单核细胞百分率降低，与对照组相比P〈0．05。小鼠骨髓涂片的荧光显微镜观察显示50mGy，75mGy和120mGy组其骨髓白血病细胞凋亡率升高，且随着时间的延长小鼠骨髓凋亡细胞百分率有降低的趋势，与对照组相比P〈0．05．结论LDR对粒单白血病小鼠有治疗作用。     

异基因骨髓移植存活小鼠发生"特异性"免疫耐受的研究

目的通过对异基因骨髓移植（ＡＬＬＯ－ＢＭＴ）存活小鼠及其皮片移植的观察,以判断ＡＬＬＯ－ＢＭＴ小鼠是否建立了特异性的兔疫耐受机制。方法（１）给Ａ组受者ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠注射生理盐水,给Ｂ组受者ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠移植供者Ｃ５７ＢＬ／６ｊ（Ｈ－２ｂ）小鼠的骨髓细胞;（２）将供者Ｃ５７ＢＬ／６ｊ（Ｈ－２ｂ）和ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ－２ｄ）小鼠的尾部皮片原位移植给ＡＬＬＯ—ＢＭＴ后存活６０ ｄ以上的受者ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠和未经任何处理的ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠,观察１００ ｄ。结果（１）Ａ组受者ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠平均存活时间（１０．６土１．３）ｄ显著短于Ｂ组的受者ＣＢ６Ｆ１（Ｈ－２ｂｄ）小鼠平均存活时间（３６．９±１０．８）ｄ（ｐ＜０．０１）。（２）ＩＩ组中进行ＡＬＬＯ－ＢＭＴ后存活６０ ｄ以上的受者ＣＢ６Ｆ１只接受来自Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠的皮片而排斥来自ＢＡＬＢ／ｃ／小鼠的皮片,而Ｉ组中未经任何处理的 ＣＢ６Ｆ１小鼠排斥来自 Ｃ５７ＢＬ／６ｊ和 ＢＡＬＢ／Ｃ ／ｃ小鼠的皮片。结论经 γ射线照射并移植有Ｃ５７ＢＬ／６ｊ 小鼠异基因骨髓且能长期存活的ＣＢ６Ｆ１小鼠建立了较完全的供者型免疫耐