犬细小病毒核酸诊断方法的建立和应用

目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法（PCR方法）并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物，以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板，犬细小病毒扩增出221bp的特异带，将PCR产物连接到pMD18-T Vecter，转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较，与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测，并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100％，粪便检测均无犬细小病毒的特异带，从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带，经测序比较，同源率为100％。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法，并能应用于临床诊断。     

犬细小病毒的诊断与治疗

犬细小病毒是七十年代束传入我国的犬科动物一种急性，烈性传染病，临床主要表现为严重的出血性肠炎或心肌炎。幼犬(尤其是离乳l.5-3个月的仔犬)多发，平均发病率65．4％，有时高达100%。     

犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定

目的从犬粪便病料中分离和鉴定犬细小病毒（canine parvovirus，CPV）抗原变异株CPV-2a和CPV-2b。方法将疑似犬细小病毒感染的病犬粪便接种猫肾细胞，进行病毒分离、常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定。结果常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定表明，分离得到5株犬细小病毒抗原变异株，其中2株为CPV-2a，3株为CPV-2b。结论本研究分离的5株犬细小病毒为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂奠定基础。     

犬细小病毒单克隆抗体在治疗上的应用研究

用犬细小病毒单克隆抗体对287例患细小病毒性肠炎病上进行治疗，结果治愈279只，(治愈率达97．21%)，显著高于其他治疗方法的治疗效果。治疗机理主要是对体内病毒的中和作用和促进机体的主动免疫反应。此次研究可为动物乃至人类病毒性疾病的临床治疗开辟一条新的途径。     

犬三种病毒疫苗对实验犬的保护效价的测定

用ELISA检测试剂盒和检测方法对上海某犬场的100份接种五联疫苗的实验犬血清进行犬传染性肝炎病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒病毒抗体的检测，以了解该病毒抗体是否达到保护效价，分析国内实验犬的疫苗使用情况。结果：接种一周后，97％实验犬的抗体则达到保护效价，一直到1年后仍有99％的实验犬的抗体有保护能力。     

犬细小病毒弱毒株的分离及疫苗应用

目的 从犬四联弱毒样品中分离获得一株细小病毒（ＣＰＶ）弱毒株,用于投疫苗制备。方法 根据犬副流感的血球吸附特性,细胞培养特性以及异种病, 清阻断法分离病毒,该病毒简称为ＣＰＶ－ＸＮ１株,并对犬细小病毒疫苗的免疫性和动物安全性进行了研究。结果病毒分离后共血疚效坐（ＨＶ）值为１：１０２４～、：４０９６或１０＾７．６ＴＣＩＤ６０;在电镜下可见较典型的犬细小病毒形态结构特征,免疫电镜下见到抗体分子已被吸     

犬瘟热病毒当前研究进展

犬瘟热（Canine Distemper）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）引起的多种动物共患的传染病。在自然条件下，CDV能够感染犬科、鼬科、浣熊科、大熊猫科、猫科等多种动物，对我国养犬业、经济动物养殖业、动物园观赏业、野生动物保护业以及实验动物等危害极大。近几年来，在患Paget’s疾病的病人组织中检出了CDV核酸，因此，其潜在的公共卫生学意义也已受到广大国内外学者的关注，开展的研究涉及病毒的病理学、免疫学、分子流行病学、检测等方面。     

PCR方法检测犬细小病毒生长动态及与其它方法的比较

将可疑犬细小病毒（CPV）粪样分别接种于KF81、MDCK、BHK21、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中，用PCR、HA、ELISA三种方法检测在上面5种细胞中CPV的生长动态，结果表明：PCR方法能在第1、2、3代FK81细胞中检出CPV的生长，而HA、ELISA则只在第3代FK81细胞中才能检出CPV的生长；PCR方法能在MDCK、BHK21、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中检CPV生长，而HA、ELISA则均不能。因此，PCR方法可作为培养细胞中检测病毒生长动态的一种灵敏、快速的方法。     

犬细小病毒血凝的检测和血凝抑制试验方法的优化

目的 优化血凝和血凝抑制(nmm)试验条件,提高HA/HI试验的稳定性和准确性.方法 在不同的缓冲液、pH值、猪红细胞浓度、BSA浓度下进行HM/HI试验,选择合适的HM/HI条件.结果pH7.0、0.1%BSA、0.2 mol/L PBS、1%猪红细胞可作为HA/HI试验合适的反应条件,猪血球可保存12 d不影响试验结果.结论 方法 优化后稳定性增强、检测时间缩短、准确性提高.     

五种中草药提取物及其复方对犬细小病毒的影响

目的对山茶叶、轮叶党参、卵叶芍药、苦味西葫芦、狼毒大戟5种中草药的提取物进行了体外抗犬细小病毒（CPV）筛选，筛选出抗病毒效果较好的山茶叶，并由山茶叶、黄芪等组成复方，并对该复方进行了抗病毒效果评价与药理作用研究。方法采用体外细胞培养和整体实验。结果研究表明山茶叶抗CPV作用较强，其对CPV的抑制率为55．24％，由山茶叶组成复方对CPV的抑制率为63．04％，抗病毒效果明显优于单方的山茶叶和药物对照黄连，对CPV50％抑制浓度（IC50）为1：587．5。并对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用，可增强机体免疫力。结论提示本复方有较强抗病毒作用。     

犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用

目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测.     

犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZαA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下表达CPV VP2,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。结果成功扩增了CPV VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZαA-VP2在毕赤酵母菌中表达出约64.35 kD蛋白。Western blotting鉴定表明,表达VP2蛋白与犬细小病毒阳性血清有反应性。结论在毕赤酵母中成功地表达了CPV VP2蛋白,能被犬细小病毒阳性血清识别。     

犬瘟热病毒流行株的驯化与鉴定

目的 驯化并鉴定犬温热病毒苗修选毒株。方法 犬瘟热流行毒株经鸡胚绒毛尿贵膜→ＭＡ１０４→Ｖｅｒｏ→ＭＤＣＫ→ＭＡ１０４上依次连续传１１２代,传代过程中进行蚀斑克隆、扩增以及每代ＴＣＩＤ５０效价测定,驯化获得１株弱毒株（简称ＣＤＶ－ＸＮ１１２）,然后进行电镜观察及抗生、遗传稳定性、神经毒力特试验。结果 分离到地犬瘟热流行毒株,经到９０代时失对犬的致病性,ＴＯＩＤ５０效价达１０＾５．５．ｍｌ＾－１,电     

犬细小病毒性肠炎的诊断与控制

犬细小病毒性肠炎的诊断与控制周宗清许日龙刘晨（上海市农业科学院畜牧兽医研究所动物门诊部，上海２０００３０）１９９５年１１月，上海市某毕格（Ｂｅａｇｌｅ）犬繁殖场的犬群发生一起以呕吐、腹泻为主的肠炎综合征，经我部及时快速的诊断，确诊为犬细小病毒性肠炎。...     

以CpG为佐剂的犬细小病毒基因疫苗的初步研究

目的研制犬细小病毒(CPV)基因疫苗。方法以CPV VP2基因为基因免疫的目的基因,以pcDNA3和pcDNAK质粒为基因免疫的载体,以非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)为核心的免疫刺激序列为免疫佐剂,构建重组质粒并免疫BALB/c小鼠和毕格犬。结果经pcDNA3-VP2C1(含1个拷贝CpG基序)基因免疫的BALB/c小鼠能产生抗CPV血凝抑制抗体;对于经CPV灭活苗初次免疫的毕格犬,用pcDNAK-VP2C2(含2个拷贝CpG基序)质粒免疫产生的再次免疫应答优于pcDNA3-VP2C1。结论VP2基因、pcDNAK和犬源CpG可用于CPV基因疫苗的进一步研究。     

免疫血清制备及应用

我们用鸡蛋的卵白作为抗原，定期免疫家兔，获得抗卵白血清，为免疫学中的双向琼脂扩散实验、单向琼脂扩散实验、对流免疫电泳等实验提供材料，节省了大量资金。     

一起犬细小病毒性肠炎的诊治

20 0 1年 12月 ,滨州医学院某研究室饲养的一只雄性、体重 4 .7kg、约 70日龄的 Beagle犬 ,突发以呕吐、腹泻、高热、排西红柿汁状便为主征的疾病。经流性病学调查和实验室诊断 ,确诊为犬细小病毒性肠炎。经采取综合措施治疗后 ,病犬很快康复一起犬细小病毒性肠炎的诊治@徐铭$山东滨州医学院实验动物中心!滨州256603犬细小病毒;;肠炎     

犬细小病毒性肠炎实验室诊断技术简介

犬细小病毒性肠炎实验室诊断技术简介郑学引，谢三星（安徽农业大学）犬细小病毒性肠炎是由犬细小病毒（ＣＰＶ）引起的一种急性、高度致死性的传染病。临床上以呕吐、出血性肠炎或心肌炎为主要特征［１］。该病于１９７８年首次发生于美国和加拿大，然后相继出现于世界各...     

水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用

目的水貂阿留申病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病,拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物,对貂阿留申病毒(ADV)和水貂肠炎病毒(MEV)的DNA模板和犬瘟热病毒(CDV)的RNA模板进行了多重PCR扩增和扩增条件优化。结果 PCR可同时扩增出601 bp(ADV)、205 bp(MEV)和451 bp(CDV)的特异性目的条带,敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67×10~4拷贝、MEV每微升3.02×10~4拷贝和CDV每微升1.72×10~5拷贝。临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品。