胃癌Smad4、CyclinDl和p21~(waf1)表达意义及其与生存的关系

目的研究Smad4、CyclinD1及p21~(waf1)在胃癌组织中的表达状况,分析其与临床病理特征及生存之间的关系。方法应用免疫组化S-P法,采用组织芯片技术,分析200例胃癌、56例癌旁组织中Smad4、CyclinD1和p21~(waf1)蛋白的表达。结果胃癌中Smad4、CyclinD1和p21~(waf1)蛋白的阳性表达率分别为67.0%、56.5%和59.5%。Smad4蛋白阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌降低(P<0.01);CyclinD1的表达水平在有淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌中高于无淋巴结转移、高分化及肠型胃癌者(P<0.05);p21~(waf1)蛋白的阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌者下降(P<0.05)。胃癌中Smad4与p21~(waf1)蛋白表达之间呈正相关性(r=0.179,P<0.05)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,Smad4阳性表达者预后优于阴性表达者。结论胃癌中存在TGF-Smad4信号通路的异常,Smad4蛋白的异常表达可能导致p21~(waf1)蛋白的低表达,进而使p21~(waf1)对细...     

外源性p27kip1基因表达对人肝癌细胞生长抑制作用

目的: 研究p27kip1基因对人肝癌细胞的生长抑制作用. 方法: 采用可诱导性真核表达载体pMD-kip1,脂质体转染法将p27kip1全长cDNA转入肝癌细胞系HCC-9204中,通过外加Zn离子诱导目的基因的表达. 免疫印迹分析及RT-PCR检测p27kip1基因在蛋白质和mRNA水平上的表达;细胞活力实验检测转染p27kip1基因对细胞增殖的作用;并将转染的肝癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况. 结果: 转染p27kip1的HCC-9204细胞在mRNA和蛋白质水平均显p27kip1高表达. 细胞活力检测显示在外加Zn离子48 h后,细胞生长被抑制35%;转染p27kip1的HCC-9204细胞在裸鼠体内的致瘤能力明显下降[(0.62±0.12) vs (1.31±0.17), P<0.01 )]. 结论: 外源性p27kip1基因表达能够抑制人肝癌细胞的恶性增殖和致瘤性.     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。     

外源性P27kip1基因转染诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探索前列腺癌基因治疗的新途径。方法　用脂质体介导 p2 7kip1基因转染前列腺癌 PC- 3 M细胞 ,SABC免疫组化法检测癌细胞外源性 p2 7kip1基因表达 ;MTT比色分析检测癌细胞体外生长活性 ;流式细胞仪 ( FCM)分析细胞周期改变 ;DNA L adder、吖啶橙 -溴化乙啶荧光染色法检测细胞凋亡。结果　发现外源性 p2 7kip1基因转移后 ,前列腺癌细胞 p2 7kip1蛋白水平显著增强 ( P<0 .0 1) ,体外生长抑制 12 .2 4%～ 3 6.5 2 % ( P<0 .0 1) ,出现 G0 / G1 期细胞周期阻滞及凋亡性“亚 G1期”峰 ,电泳可见典型的“梯状”条带 ,凋亡比率为 18.5 % ( P<0 .0 1)。结论　转染外源性p2 7kip1基因能增强对细胞周期的负性调节 ,显著诱导前列腺癌细胞凋亡 ,是前列腺癌基因治疗的潜在途径     

外源性p27Kip1基因转染对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响

目的：探讨外源性p27Kip1基因对人乳腺癌MCF-7细胞株细胞周期和增殖的影响。方法：应用脂质体转染法将含人野生型p27Kip1基因质粒DNA转染乳腺癌MCF-7细胞,免疫细胞荧光化学方法验证p27Kip1基因转染MCF-7细胞后蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,观察外源性p27Kip1对乳腺癌细胞MCF-7生长的影响。结果：免疫细胞荧光化学方法证实p27Kip1基因转染MCF-7细胞后存在蛋白表达;流式细胞仪检测结果提示,细胞周期出现G0/G1期阻滞;细胞计数法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖明显抑制。结论：外源性p27Kip1基因对乳腺癌MCF-7细胞生长和细胞周期有明显抑制作用。     

p15INK4B和p21WAF1基因对人胰腺癌细胞系BxPC3的协同抑制作用

目的 探讨p15INK4B(p15)和p21WAF1 (p21)基因联合转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖和凋亡的影响.方法 脂质体介导将pcDNA3.1(+)-p15和pcDNA3.1(+)-p21转染BxPC3细胞,稳定筛选后用RT-PCR检测转染细胞p15和p21基因mRNA表达,Western blot检测...     

Skp2-p27~(kip1)与恶性肿瘤关系的研究进展

Skp2-p27kip1通路在调控细胞周期由G1~S期中具有十分重要的作用。本文综述了近五年来对Skp2与p27kip1基因的结构与功能,二者编码的蛋白在组织中表达的关系,Skp2基因所编码蛋白的生物学特征以及其与肿瘤分级、分期、预后、治疗之间的关系等方面的研究,并展望了其应用前景。     

乳腺癌细胞中化疗药物对Ser10磷酸化p27^(kip1)表达的影响

目的探讨肿瘤化疗药物对乳腺癌MDA-MB-231细胞中第10位丝氨酸(Ser10)磷酸化的细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27^(kip1)(P-p27Ser10)表达的影响。方法分别用化疗药物多西他赛(DOC)、表柔比星(EPI)及两者联合处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,运用MTT比色法测定化疗药物对乳腺癌细胞活力的影响;采用Western Blot检测化疗药物处理前后P-p27Ser10、Jab1和p27^(kip1)蛋白表达水平。结果化疗药物DOC、EPI及两者联合处理对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖均有抑制作用,且随化疗药物浓度的增加抑制率增强,两药联合处理有更强的抑制作用。化疗药物处理后,P-p27Ser10和Jab1蛋白表达增加,p27^(kip1)蛋白表达降低,与单一用药相比,联合处理组蛋白表达改变更为明显。结论肿瘤化疗药物可能是部分通过p27^(kip1)Ser10的磷酸化变化引起p27^(kip1)及相关分子Jab1的改变,从而介导乳腺癌细胞的周期调控。p27^(kip1)Ser10磷酸化调节作用可能成为治疗乳腺癌的新途径。     

野生型及Thr187突变型p27Kip1 蛋白对HepG2细胞周期的影响

目的p27kip1氨基端第187号位置的苏氨酸(Thr187)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点苏氨酸为丙氨酸(T187A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增殖的影响。方法应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1基因质粒DNA转染HepG2细胞,免疫细胞荧光化学检测p27kip1蛋白的表达,并用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果野生型和突变p27kip1基因转染HepG2细胞后均能在细胞核表达,并且可以明显抑制细胞增殖。p27kip1基因转染的HepG2细胞发生G0期阻滞,且突变型G0期阻滞作用明显强于野生型(P<0.01)。结论转染的p27kip1能够在HepG2细胞过度表达并能抑制HepG2细胞的增殖,Thr187磷酸化位点的人工诱变可能有利于p27kip1蛋白促使细胞G0期阻滞。     

cyclinE、p21waf1蛋白表达与口腔鳞状细胞癌中心体扩增相关性

目的:了解口腔鳞状细胞癌(OSCC) cyclinE及p21waf1蛋白表达与中心体扩增相关性,探讨OSCC中心体扩增的分子机制.方法:8例正常口腔黏膜及27例OSCC石蜡包埋组织,采用流式细胞术对cyclinE和p21 waf1蛋白表达进行定量检测,并分析其与相应组织中心体扩增的相关性.结果:OSCC中心体扩增与cyclinE/p21waf1比值呈正相关(r =0.679,P＜0.01),而与p21waf1蛋白表达量呈负相关(r=-0.472,P＜0.05).结论:cy-clinE/p21waf1比值增高可能是OSCC中心体扩增的原因之一,p21waf1蛋白表达下调在其中可能起主要作用.     

p27~(kip1)表达在食管癌放射抗拒中的意义

目的 探讨p27~(kip1)表达与食管癌放射敏感性变化的关系.方法 通过γ射线反复照射人食管鳞癌细胞EC9706(累计放射剂量6 000 cGy),逐步筛选得到具有放射抗拒性的细胞EC9706R.采用克隆形成实验检测两种细胞的放射敏感性,流式细胞仪分析细胞周期特征,免疫细胞化学检测p27~(kip1)的表达.结果 筛选得到的人食管鳞癌细胞EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,EC9706R细胞SF_2=65.71%,D_0=2.20 Gy,D_q=1.61 Gy,N=2.07;EC9706细胞SF_2=46.72%,D_0=1.61 Gy,D_q=0.99 Gy,N=1.85,EC9706R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于亲本细胞;细胞周期检测显示EC9706R细胞G_1期比例较亲本细胞明显下降,而S期比例明显增加;免疫细胞化学结果 显示具有放射抗性的EC9706R细胞p27~(kip1)表达明显低于亲本细胞.结论 p27~(kip1)表达下调导致细胞周期变化,可能是食管癌细胞产生放射抗拒的机制之一.     

p27^kip1、Skp2在乳腺癌病变中的表达及其意义

①目的 探讨p27^kip1、Skp2蛋白在乳腺癌的发生、增殖厦转移扩散过程中的作用及其相互关系。②方法 用免疫组织化学EnVision法检测100例乳腺癌、30例乳腺增生症厦30例癌旁乳腺组织标本中p27^kip1、Skp2蛋白的表达。③结果 p27^kip1、Skp2蛋白在癌旁组、增生组、乳腺癌组的表达分别为100％、93．33％和56．00％，相互比较均有显著性差异（P〈0.01）。p27^kip1蛋白与Skp2蛋白在乳腺癌组中的表达呈负相关。④结论 在乳腺癌组织中，Skp2常呈高表达。p27^kip1则低表达，说明Skp2与p27^kip1的表达对肿瘤的诊断具有重要意义。     

地塞米松抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖的分子机制:RhoB信号通路的作用

目的 观察地塞米松（Dex）对人卵巢癌细胞HO-8910增殖的影响,探讨小G蛋白RhoB信号通路在其中的作用.方法四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）和软琼脂实验检测细胞的增殖;RT-PCR法检测RhoB mRNA的表达;Western印迹检测RhoB及其上下游信号分子磷酸化Akt（p-Akt）、p21^cip1/waf1和p27蛋白质的表达;报告基因技术检测p21^cip1/waf1基因的转录.结果Dex可以明显抑制HO-8910细胞锚依赖性和非依赖性方式的增殖,100 nM Dex处理细胞6 d,抑制率为31%.100nM Dex处理细胞可以明显上调RhoB mRNA和蛋白质的表达（为对照的2.5倍）;同时伴有p-Akt蛋白质表达的降低（24 h时约为对照的50%）、p27蛋白质表达的增加（36 h时比对照增加了3.3倍）以及p21^cip1/waf1转录和蛋白质表达增多（24h时约为对照的1.7倍）.RhoB过表达可以降低细胞的生长速度,并能增强Dex的增殖抑制作用（100 nM Dex处理6 d,抑制率为44%）;而RhoB表达阻断后可逆转Dex的这一效应（抑制率约为13%）.结论Dex抑制HO-8910细胞增殖的机制可能与抑制PI3K/p-Akt信号,从而上调RhoB蛋白质,使RhoB下游信号分子p21^cip1/waf1和p27蛋白质表达增加有关.     

Ki-67及p27^kip1基因在非小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

目的探讨Ki-67及p27^kip1蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其对预后的影响。方法采用免疫组化二步法检测30例NSCLC、15例正常肺组织中Ki-67及p27^kip1基因的表达。结果①NSCLC中Ki-67阳性表达率明显高于正常肺组织（P〈0.01）。②p27^kip1在NSCLC中阳性表达明显低于正常肺组织,差异有统计学意义。③在NSCLC中Ki-67的表达与病理分型密切相关。④NSCLC组织中Ki-67、p27^kip1蛋白表达与患者预后有关。结论检测NSCLC中Ki-67及p27^kip1的表达对评估其预后有一定意义。     

苦参碱诱导HepG2细胞凋亡与cyclin D1和p27kip1关系的实验观察

目的研究苦参碱抗肿瘤机制，初步探讨其与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1是否有关。方法苦参碱诱导后运用电镜、流式细胞仪方法检测HepG2细胞形态及细胞周期分布，并用免疫细胞化学法检测细胞内cyclin D1和p27^kip1蛋白表达变化。结果发现苦参碱诱导HepG2细胞凋亡，使细胞周期停滞于G1期。随着干预的苦参碱浓度增加cyclin D1下调，而p27^kip1蛋白上调，有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱抗肿瘤机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡，与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1有关。     

Thr187磷酸化p27kip1与人乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性的关系

目的探讨人乳腺癌MCF-7细胞中第187位苏氨酸（Thr187）磷酸化的细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27kip1（P-p27Thr187）与化疗药物敏感性的关系。方法人乳腺癌MCF-7细胞常规培养,采用MTT法测定其对5种常用化疗药物[表柔比星（EPI）、多西他赛（DOC）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（CDDP）]的敏感性;采用Westernblot检测经化疗药物作用后P-p27Thr187、p27kip1表达水平;采用免疫共沉淀方法检测P-p27Thr187与S期激酶相关蛋白2（Skp2）相互结合情况。结果5种常用化疗药物对人乳腺癌MCF-7细胞均有抑制作用,5-Fu的抑制率随浓度增加而增高,而其他4种化疗药物的抑制率开始随浓度增加而增高,但达到理论最高药物浓度（PPC）后降低（均P＜0.01）;在PPC下作用48h,抑制率从大到小的化疗药物依次为EPI、DOC、5-Fu、CTX、CDDP。Westernblot结果显示化疗药物作用48h后,P-p27Thr187表达水平明显增加,以EPI、DOC增加最为明显（均P＜0.01）;p27kip1表达水平明显降低（均P＜0.01）。免疫共沉淀结果显示,经EPI0.25滋g/ml、DOC6.80滋g/ml作用48h后,P-p27Thr187与Skp2结合明显增加。结论P-p27Thr187与人乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性有关,可作为预测化疗敏感性及选择药物的一项新指标。     

p33^ING1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的：探讨生长抑制基因（inhibitor of growth,p33^ING1）在结直肠癌中的表达意义,以及p33^ING1与结直肠癌临床病理特征的关系及其可能的作用机制。方法：对60例结直肠癌组织及20例癌旁非肿瘤组织标本,应用免疫组化检测肿瘤组织和正常组织的p33^ING1、p21^WAF1的表达。结果：p33^ING1在结直肠癌组织中的表达阳性率为43.3%,在正常组织中为90.0%,显著低于正常组织（P〈0.005）;p33^ING1减低与结直肠癌的Dukes分期及淋巴结转移有一定关系（P〈0.005和P〈0.01）,而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤部位及浸润深度无明显关系（P〉0.05）。p33^ING1与p21^WAF1表达呈正相关关系（P〈0.05）。结论：p33^ING1在结直肠癌组织中低表达,对结直肠癌的发生、发展可能起着重要的作用;p33^ING1、p21^WAF1表达可作为判断结直肠癌恶性程度的重要指标之一。