KGF基因在COS7细胞中的表达及其活性检测

目的：利用COS7细胞表达角质细胞生长因子(KGF)并检测其活性。方法：利用脂质体把KGF基因转入COS7细胞中，再用Western印迹和ELISA方法检测KGF蛋白的表达，然后用MTT法检测其活性。结果：KGF基因在COS7中得到了表达，并对小鼠肠上皮细胞(IEC-6)具有刺激增殖作用。结论：KGF有望成为肠型放射病治疗的新型药物。     

肺癌相关基因及蛋白c-jun、c-fos/Ap -1与KGF的关系

肺癌及早期肺癌组织中 c- Jun、c- Fos的高表达是肺癌频发的早期事件 [1]。c- jun对致癌物 TPA(1 2 -o- tetradecanoylphorbol- 1 3- acetate)不敏感 ,c- Jun表达与基因扩增和突变无关 ,主要受细胞外增殖信号作用的影响 [1-3] 。作为细胞外增殖信号的角化细胞生长因子 (keratinocyte growth factor,KGF) ,主要由纤维母细胞等细胞产生 ,几乎所有上皮细胞及上皮源性肿瘤均有 KGFR(KGF受体 )表达。KGF通过旁分泌 (paracrine)方式 ,作用于上皮细胞。最近 ,胃肠道、口腔粘膜、肾上腺及膀胱肿瘤等与 KGF关系的研究屡见报告 [4 ]。鉴于 c-…     

呼吸道上皮的屏障功能:辐射效应与角质细胞生长因子的防护作用

接受胸部放射治疗的病人,电离辐射可引起其肺内皮细胞和上皮细胞直接损伤。最近已发现角质细胞生长因子(KGF)能防止过氧化氢诱发的人呼吸道上皮细胞渗透性的增加。由于辐射损伤包括氧自由基的生成,因此作者要验证KGF能妨碍辐射诱发渗透性增加这一假设。方法:1两系人呼吸道上皮或与细胞共培养24小时后去除KGF、间隔8或12小时照射,细胞(Calu-3和16HBE14o-,生长在涂胶原聚脂膜上,照射前24小时在其培养液中加入KGF,照后4小时开始测量从顶室至底室流出的示踪剂,评价单层细胞的渗透性。2示踪剂包括异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白(分子量…     

角质细胞生长因子及其受体在葡萄胎恶性变中的作用

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在葡萄胎组织发生、发展及预后中的意义和作用。方法收集葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织,采用免疫组化、原位杂交法分别从蛋白质、mRNA水平检测KGF和KGFR在良恶性葡萄胎组织中的表达,染色强度及阳性细胞数进行统计分析。结果良性葡萄胎组织滋养细胞中KGF和KGFRmRNA、蛋白均有一定程度表达,定位于细胞滋养细胞、合体滋养细胞胞质。恶性葡萄胎组织KGF表达与良性葡萄胎无差异,但KGFR在合体滋养细胞中表达明显高于良性葡萄胎,两者之间有显著性差异(χ2=12·775,P<0·01)。KGFR在侵蚀性葡萄胎及绒癌组织中的表达也明显高于良性葡萄胎(χ2=19·542,χ2=24·723,P<0·001)。结论KGF及KGFR的表达与滋养细胞肿瘤转移密切相关,在葡萄胎恶性变及浸润、转移中起重要作用。     

TGF-β3对辐射致肺上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 探索转化生长因子-β3(TGF-β3)在辐射致肺上皮细胞损伤中的作用及其可能机制,为放射性肺损伤的防治提供实验依据。方法 设计合成并筛选Ⅱ型转化生长因子-β受体(TGFBR2)的小干扰RNA(siRNA),用于细胞TGFBR2干涉;将体外培养的人支气管上皮细胞(Beas-2B细胞)及其TGFBR2干涉细胞随机分为对照组、5 ng/ml TGF-β3处理组(TGF-β3组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射组(6 Gy组)、6 Gy⁶⁰Co-γ射线单次照射+5 ng/ml TGF-β3处理组(6 Gy+TGF-β3组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组胶原蛋白和TGFBR2的表达,RT-qPCR和Western印迹检测上皮间质转化(EMT)相关标志物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期。结果 (1)TGF-β3对辐射诱发的细胞胶原蛋白表达增高有明显抑制作用,并可降低辐射所致细胞EMT相关标志物α-SMA基因和蛋白水平的异常高表达,有效保护辐射所致肺组织细胞纤维化改变;(2)TGF-β3可抑制...     

辐射诱导发育脑细胞凋亡的分子调节

近年来辐射诱导脑细胞损伤研究表明,某些基因如即早基因、Bcl-2家族、P53热休克蛋白、AT(共济失调性毛细管扩张症)基因电脑辐射放育的细胞凋亡中发挥重要的调控作用;而神经生长因子、白细胞介素-l、肿瘤坏死因子、碱性纤维生长因子、转化生长因子等生物因子在抑制辐射诱导细胞凋亡中具有重要的保护作用。     

角质细胞生长因子减轻一次辐射照射引起的口腔粘膜炎

目的 :确定重组人角质细胞生长因子 (rh KGF)对模拟的事故性一次辐射剂量诱发的急性口腔炎的作用。方法 :用 2 5 k V X射线一次照射 C3H/ Neu小鼠舌下端中间表面上皮 (3× 3mm2 )。实验分组 :A,单独给予 KGF连续7d;B,单独一次照射 6～ 15 Gy;C,一次照射 7.5～ 2 6 Gy加KGF处理 ,并按 KGF给予时间不同分为 :1照前 4～ 2 d;2照前 3～ 1d;3照射当天至照后第 2天 ;4照射当天至照后第5天 ;5照前第 3天至照射当天及照后第 1天。每个实验用10只小鼠。KGF:临用前新鲜配制为 1mg/ m L ,每日一次皮下注射 5 mg/ kg体重。观察小鼠舌粘膜溃疡…     

双基因重组腺病毒表达载体pAdxsi—GFP-HIF—KGF的构建及表达

目的：构建同时携带低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和角质细胞生长因子（KGF）的腺病毒载体（pAdxsi—GFP—HIF—KGF）,观察其在A549中的表达。方法：从低氧处理A549细胞中PCR扩增HIF—1αDNA,并连接到载体pShuttle—CMV—EGFP上得到重组质粒pShuttle—GFP—HIF,同时将从质粒pIRES2一EGFP—KGF扩增的KGF基因也克隆其上,获得穿梭重组质粒pShuttle—GFP—HIF—KGF。再将其重组到pAdxsi病毒骨架载体上,构建携带HIF-1仅和KGF双基因的重组腺病毒载体。观察重组腺病毒转染3_549细胞后表达情况。结果：证实携带HIF—1α和KGF双基因的重组腺病毒载体pAdxsi—GFP—HIF—KGF成功构建。其转染A549细胞后可有效表达HIF一1和KGF蛋白,48h时HIF-1蛋白表达水平为（56．36±4．53）ng／ml,KGF蛋白表达水平为（60．20±2．92）ng／ml。结论：成功构建了双基因腺病毒载体pAdxsi—GFP—HIF—KGF,其可有效转染表达,具有进一步在肺损伤防治应用的前景。     

神经上皮细胞转化基因1对细胞辐射敏感性的影响及其机制探讨

目的 探讨神经上皮细胞转化基因1(Net1)对细胞辐射敏感性的影响及相关的分子作用机制.方法 运用实时荧光定量PCR检测辐射后细胞中Net1基因表达水平的变化;采用RNAi干扰技术抑制细胞中Net1的表达,用克隆形成率分析细胞的辐射敏感性;利用免疫共沉淀技术发现Net1的结合蛋白.结果 电离辐射损伤后,细胞中的Net1 mRNA水平显著上升(t=-10.52,P＜0.05);与对照组相比,siRNA沉默细胞中的Net1表达后明显增加了细胞的辐射敏感性(t=15.31、11.65,P＜0.05);无论在正常状态下还是在细胞受到辐照后,Net1都能与非同源末端连接修复蛋白Ku70、Ku80和DNA-PKcs结合.结论 Net1对细胞的辐射防护作用可能是通过与非同源末端连接修复蛋白相互作用来调控辐射损伤修复实现的.     

空军总医院学报2001年主题词索引

A埃希菌属　产超广谱 β-内酰胺酶细菌的耐药性 (焦力群 ) 17(4 ) :2 41癌　　　　肺癌相关基因及蛋白 c- jun、c- fos/Ap- p与 KGF的关系 (刘　领 ) 17(1) :34癌基因产物肺癌相关基因及蛋白 c- jun、c- fos/Ap- p与 KGF的关系 (刘　领 ) 17(1) :34癌 ,鳞状细胞原发性甲状腺鳞状细胞癌 1例 (周晓武 ) 17(2 ) :10 0癌 ,胰岛细胞恶性胰岛 α、β、D细胞混合瘤一例报告 (朱西娥 ) 17(4 ) :199B白内障　　先天性白内障一家系调查报告 (田　青 ) 17(4 ) :2 39白细胞介素 - 18白细胞介素 - 18(IL- 18)的免疫生物学特征及其抗肿瘤作用 (张国…     

Egr-1启动子基因调控FLT3配基基因表达的实验研究

目的　探索辐射诱导基因调控元件启动的造血生长因子表达及其对造血的保护作用。方法　本实验将携带Egr 1调控序列的FLT3配基 (FL)和EGFP基因双顺反子载体 (Egr EF)转染骨髓基质细胞系HFCL ,采用流式细胞仪、RT PCR、ELISA及细胞增殖法等观察细胞受照后Egr 1调控元件诱导的FL表达及促进造血细胞的增殖作用。 结果　在转染细胞HFCL/EF细胞中证实有外源性基因的整合和表达 ,在 2 5Gy辐射后 16h的细胞培养上清液中表明FL含量较照射前明显增高 ((P <0 0 1) ,) ;辐射后 10dHFCL/EF培养上清液对CD34 造血祖细胞的作用较辐射前具有明显的扩增作用 ((P <0 0 1) ,)。结论　在辐射后Egr 1启动子调控的FL基因表达明显增高并具有保护造血作用。     

RB蛋白缺乏与紫外线诱导人乳腺癌细胞凋亡敏感性增高有关

目的 :研究 RB蛋白 (成视网膜细胞瘤蛋白 )在紫外线诱导人乳腺癌细胞凋亡中的作用。方法 :培养人乳腺癌细胞系 MDA- MB- 46 8(无 RB蛋白 )、SUM- 10 2 PT、SU M- 2 2 5 CWN、SU M- 149PT,正常人乳腺上皮细胞 ,前列腺癌细胞系 DU- 145和 MCF10 A。分别用紫外线和 FAS(TNFRSF6 )抗体两种途径诱导凋亡 ,用悬浮细胞测定法、流式细胞仪及隧道染色法 (TU NEL staining)检测细胞凋亡的形成 ,用促克隆形成法检测紫外线诱导所测细胞凋亡的敏感性 ,通过抑制表皮生长因子受体 (EGFR)激酶确定 EGFR是否在 MDA- MB- 46 8细胞对紫…     

bFGF,EGF,TGF-β异构体与其受体在胎儿和成人皮肤中的表达特征

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮细胞生长因子 (EGF)、转化生长因子 β的三种异构体 (TGF β1,β2 和β3 )及它们的受体在不同发育阶段皮肤中的表达特征。方法　用免疫组化方法和病理学技术确定这些细胞因子及其受体在 30例不同胎龄(13～ 31周 )的胎儿皮肤和 5例成人皮肤中的定位和表达量的变化规律。结果　bFGF、EGF、TGF β异构体主要分布于表皮细胞、内皮细胞、毛囊上皮细胞和部分成纤维细胞的胞质和胞外基质中 ,而其受体则主要分布于这些细胞的细胞膜和细胞质内。随着胎儿不断生长发育 ,这些蛋白表达的阳性率逐渐升高 ,在晚期妊娠胎儿(胎龄 2 9～ 31周 )和成人皮肤中 ,蛋白表达进一步升高 ,阳性率明显高于早期妊娠胎儿皮肤。结论　bFGF、EGF、TGF β的异构体及其受体可能对皮肤的发生、结构和功能的维持、损伤后修复具有重要作用 ;在妊娠早期胎儿皮肤中 ,这些蛋白低表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕愈合密切相关。     

人源性角质细胞生长因子(KGF)的克隆及其表达分析

目的：克隆出正确的人源性角质细胞生长因子（KGF）并探讨影响其表达的因素。方法：应用RT－PCR技术克隆出KGF基因，并用pBV220表达质粒对其进行表达，然后用RNAdraw对其RNA进行分析。结果：带有信号肽的KGF基因在pBV220中表达量为10％左右，而去掉信号肽的KGF基因在pBV220中表达量估计只有1％－2％；利用RNAdraw分析的结果表明前者RNA前端没有形成茎环结构，而后者则形成了茎环结构，结论：KGF基因在细菌中表达量较低，信号肽是影响其表达量的重要因素。     

激活素A刺激肾小管上皮细胞转分化的研究

目的研究激活素A对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的影响。方法取人肾小管上皮细胞株进行体外培养,分别向培养液中加入激活素A或激活素A＋卵泡抑素,应用免疫组化法检测培养细胞转化生长因子β蛋白（TGF-β）的表达,以观察肾小管上皮细胞转分化的情况。结果与对照组和卵泡抑素组相比,激活素组肾小管上皮细胞表达的TGF—β蛋白显著增多。结论激活素A能促进肾小管上皮细胞增殖、转分化,提示激活素A可能在肾小管间质纤维化中起重要作用。     

角质细胞生长因子对受照小鼠的遗传保护作用

目的 应用单细胞凝胶电泳（SCGE）和微核实验探讨角质细胞生长因子（KGF）对受照小鼠的遗传保护作用。 方法 将40只C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、照射对照组、KGF低（1 mg/kg）、中（2 mg/kg）、高（4 mg/kg）剂量组5组。KGF的3个给药组于照射前给药,连续3 d分别给予腹腔注射1、2、4 mg/kg的KGF,1次/d。照射对照组腹腔注射磷酸盐缓冲液。给药后,空白对照组给予假照射,其他4组给予7.2 Gy 137Cs γ射线全身一次性照射。应用SCGE和微核实验检测5组小鼠的DNA损伤情况。 结果 与照射对照组相比,KGF低剂量组小鼠的DNA微核率显著降低,中、高剂量组的彗星尾矩、Olive尾矩和微核率均显著降低。 结论 KGF对受照小鼠有显著的遗传保护作用。     

哺乳动物孕体发育中的肽类生长因子和原癌基因

一、胚胎组织诱导 生长因子是早期胚胎形成中胚层和构成特定形态的假定诱导剂(形态原)。已经证明,哺乳动物具有诱导两栖类胚胎中胚层形成特定的肽类包括:转移生长因子β(TGF-β)、P388D_1衍生因子(PIF),碱性成纤维细胞生长因子(FGF)、int-2原癌基因、KFGF原癌基因等。爪蟾属TGF-β蛋白和Vgl也可能是诱导中胚层的因子,因为这种蛋白仅在囊胚期的植物半球中合成,它与胎盘膜有关并可能与动物半球中的细胞相互作用诱导中胚层形成。迄今为止,关于这些生长因子对诱导哺乳动物胚胎中胚层形成有何作用,仍缺乏了解。然而,两栖     

KGF对离体子宫内膜上皮细胞生长与分泌的影响

目的:观察KGF对离体培养的EEC生长和分泌CA125的影响。方法:体外培养增殖期EEC,加入不同浓度KGF作用后,MTT法检测OD值了解细胞生长情况,磁酶免法测定CA125分泌。结果:①不同浓度KGF对EEC的生长、分泌均有刺激作用,以50ng/ml作用最明显;②MTT法所测OD值与CA125浓度有显著的相关性。结论:KGF可促进体外培养的增殖期EEC生长和分泌,EEC分泌CA125的量与细胞生长有关。     

角质细胞生长因子2突变体对小鼠放射性肠黏膜损伤的治疗研究

目的：研究角质细胞生长因子2（keratinocyte growth factor－2,KGF－2）突变体对放射性肠黏膜损伤的治疗作用。方法将无特定病原体（specific pathogen free, SPF）C57BL／6J雌性小鼠随机分为模型组（A组）、静脉注射KGF－2突变体组（ B组）、KGF－2突变体加骨髓移植组（ C组）和单纯骨髓移植组（ D组）,用γ射线放射源60 Co对小鼠进行单次全身照射,总剂量为12 Gy,另设正常对照组（ E组）。通过分析小鼠照射后30 d存活率,照射后72 h小肠组织病理变化、凋亡与自噬情况,阐述KGF－2突变体对放射性肠黏膜损伤的治疗效果。结果 A组照射后9 d内小鼠全部死亡,C组30 d仍有70％存活。 HE染色显示,C组小肠组织各级结构最为完整,免疫组化发现C组小肠隐窝处自噬水平升高,凋亡水平降低。结论 KGF－2突变体对放射性肠黏膜损伤有显著的治疗作用。     

KGF对电离辐射后十二指肠中CTGF和Bcl-2基因表达的影响

目的 观察角质细胞生长因子（KGF）对电离辐射后十二指肠结缔组织生长因子（CTGF）、凋亡相关基因Bcl-2表达的影响,初步探讨KGF在肠道损伤中的分子机制。 方法 将昆明小鼠按随机数表法分为对照组、照射组、治疗组,每组10只。对照组不给予照射,照射组与治疗组给予剂量率为0.678 Gy/min、吸收剂量8 Gy的腹腔γ射线照射;治疗组在照射前2 d及照射后3 d均腹腔注射KGF,给药量为6 mg/kg。照射后第15天处死小鼠,取十二指肠组织做病理切片并观察病理表现;采用荧光定量PCR方法检测十二指肠组织中KGF、CTGF及Bcl-2基因的表达水平。计量资料以x±s表示;两组间差异采用独立样本t检验,P < 0.05表示差异有统计学意义。 结果 对照组十二指肠肠绒毛、隐窝结构完整,排列整齐;照射组十二指肠出现绒毛萎缩、变短或脱落,部分腺窝和绒毛处可见少量凋亡细胞;治疗组肠绒毛组织结构完整,腺窝可见少量凋亡细胞。照射组十二指肠组织中KGF、CTGF、Bcl-2基因表达量上调,与对照组相比差异具有统计学意义（t=-125.55、-6.55、-6.69,均P < 0.05）。与照射组相比,治疗组CTGF基因表达量显著下调、Bcl-2基因表达量显著上调,差异均有统计学意义（t=4.89,-20.96,均P < 0.05）。 结论 KGF可能通过下调CTGF基因修复电离辐射造成的损伤,并且可能通过调节Bcl-2凋亡相关基因的表达水平来降低细胞凋亡。