日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用--HGPRT是否是主要的靶抗原

目的观察日本血吸虫SIEA26—28kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA26—28kDa成分。并以此纯化产物免疫BALB／c小鼠。将小鼠分为三组，分别用SIEA、SIEA26—28kDa和免疫佐剂免疫动物，然后进行尾蚴攻击感染。46天后剖杀动物，冲虫，然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果SIEA26—28kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为54．8％。与对照组比较有极显著性差异；该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了48.07％和77.41％，且以成熟虫卵数的下降较为显著，分别降低了83．6％和93．3％；粪卵数的下降幅度最为显著，达87．26％。结论SIEA26—28kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。     

日本血吸虫31/32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与现场应用

目的基于纯化的日本血吸虫31／32kDa分子抗原,建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法采用Chappell方法分离纯化Sj31／32kDa抗原并建立快速ELISA,检测急、慢性血吸虫病人,并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果血吸虫病人457例,阳性检出率为94．3％,67例肺吸虫病人及76例肝吸虫病人血清均未出现明显交叉反应,正常人群假阳性率为1％。结论提示采用纯化的优势诊断抗原分子建立的快速诊断试剂盒有较好的现场应用潜能,且具有简便、快速、无需特殊设备等优点,值得推广应用。     

日本血吸虫32kDa重组抗原的进一步研究

用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以βgill构建的日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA表达库，获得一阳性克隆Sjgt4，将其插入片段经聚合酶链反应（PCR）法扩增后亚克隆入表达载体pTrcHisB并进行表达，获37kDa融合蛋白，它可溶于8M尿素，并可被日本血吸虫病病人血清中特异抗体所识别。以此37kDa融合蛋白免疫家免所得的抗血清，可特异地识别日本血吸虫成虫抗原的67kDa分子。     

抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。     

日本血吸虫SIEA66-68kDa抗原的分离、纯化及免疫保护性研究

目的研究日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原66-68kDa（SIEA66-68kDa）的动物免疫保护力,并对其作为天然分子疫苗的可行性进行评估。方法采用电泳切胶、电洗脱、超滤离心等技术,分离纯化SIEA66-68kDa天然分子抗原,免疫小鼠,待其产生抗体后进行尾蚴攻击感染（40尾/只）,计算减虫率和减卵率。结果 SIEA66-68kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用,其减虫率为41.70%,每克肝脏减卵率为51.23%,雌虫子宫减卵率为29.30%,每克大肠减卵率为59.26%,每克粪便减卵率为45.17%,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SIEA66-68kDa天然分子抗原具有刺激小鼠产生较好的抗日本血吸虫感染的免疫保护作用,可作为抗日本血吸虫感染候选分子疫苗的靶标。     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa重组抗原的免疫原性研究

用日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa重组抗原（rSj22．6）免疫一批昆明小鼠，获得特异性免疫血清，其与22．6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验（Westernblot），结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22．6kDa分子，而正常鼠血清则不能识别。实验中，血清经去除抗大肠杆菌抗体的处理后，其与大肠杆菌的非特异性反应条带被去除，特异性反应的条带则增强。     

日本血吸虫成虫呕吐物的生化及免疫学特性分析

目的：分析日本血吸虫成虫呕吐物与感染血清的免疫反应性，寻找特异性的血吸虫病诊断抗原。方法：采用SDS-PAGE和免疫印迹分析呕吐物的免疫反应性，过碘酸钠氧化处理以鉴定呕吐物的抗原决定簇的性质。结果：日本血吸虫成虫呕吐物中存在能被血吸虫感染血清识别的特异抗原子1/32、47、60/62kDa蛋白及67kDa蛋白；31/32kDa蛋白和67kDa蛋白的抗原表位为蛋白，而47kDa蛋白和60/62kDa蛋白的抗原表位为糖基。结论：日本血吸虫成虫呕吐物中存在血吸虫感染血清识别的特异抗原，其中31/32kDa蛋白已报告可用于血吸虫病诊断，47kDa蛋白和60/62kDa蛋白含糖基表位并具有潜在的诊断价值。     

日本血吸虫未成熟虫卵糖蛋白抗原生物学特性的初步分析

目的 分析日本血吸虫未成熟卵糖蛋白抗原的生物学特性。方法 利用SDS－PAEG、银染色、PAS及脂类染色对SIEA组分进行分析，并根据标准分子量迁移率Rf值，用半对数坐标纸绘图，测算各区带的分子量。结果 SIEA有10种糖蛋白分子，其分子量为101、97、91、87、77、74、66、62、56、50kDa；1条37kDa脂蛋白区带。结论 SIEA含有蛋白、糖蛋白、脂蛋白等抗原分子，可能在宿主的免疫应答中发挥不同的作用。     

日本血吸虫未成熟虫卵26-28kDa抗原的分离与纯化

本文采用超凝胶AcA柱层析方法和SDS-PAGE结合凝胶洗脱方法等,分离纯化了日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)26-28kDa组分.SDS-PAGE、免疫印迹分析(EITB)和银染色等证明,采用该方法分离纯化的26-28kDa抗原纯度高,有较强的免疫活性,并证明该抗原组分在SIEA中含量丰富.纯化的SIEA26-28kDa可作为抗日本血吸虫生殖产卵和抗卵胚发育侯选抗原,用于抗病保护性免疫的研究.     

日本血吸虫病人治疗前后对虫卵抗原的抗体应答

目的寻找具有特异性诊断和疗效考核价值的蛋白分子。方法应用酶联免疫印迹法（EITB）对9例日本血吸虫慢性病人治疗前及治疗后3、9、12个月虫卵抗原的抗体及抗体亚型应答变化进行分析。结果9例病人血清特异性IgG识别的反应带中,治后12个月,7例病人血清11kDa、13kDa反应带变淡。2例治疗前后变化不明显。检测特异性IgG4识别的反应带,治疗后12个月,8例病人血清的IgG识别的13kDa及11kDa抗原反应带明显变淡或消失,尤以IgG识别的13kDa抗原反应带消失明显,显示较强的特异性。1例治前反应很弱,因而难以判断治疗前后的变化。结论慢性血吸虫病人血清对虫卵相关抗原识别带的消失似可作为化疗效果的考核指标。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 ,具有诊断潜能     

日本血吸虫SIEA28kDa分子抗原的二维凝胶电泳分析

目的分析鉴定日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)28kDa抗原组分.方法用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化,对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原组分进行二维凝胶电泳分析.结果SIEA经双向凝胶电泳分离、银染后获得的SIEA-2D图谱蛋白斑点以pI 3～7和Mw14～66 kDa范围最多.进一步经图象采集、PDQuest 2D软件分析SIEA双向电泳图谱,计算在相同的设定值条件下获取的蛋白质斑点数,测得SIEA-2D电泳图谱平均为(948±89)个蛋白质斑点数.电泳纯SIEA28kDa抗原组分用高效液相离子交换法纯化后,280、220 nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线.二维凝胶电泳银染色可见一个显色饱和度高的蛋白质圆斑,免疫印迹分析为一个显色饱和度高的单一圆斑.结论色谱纯SIEA28kDa抗原组分为单一分子,其等电点为5.7.     

金黄色葡萄球菌A蛋白协同凝集试验检测慢性血吸虫病患者循环抗原的研究

目的：探讨金黄色葡萄球菌Ａ蛋白协同凝集试验的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法：检测用吡喹酮治疗前后７２例慢性血吸虫病患者和对照组的血清。结果：慢性血吸虫病患者血清阳性率９３．１％（６７／７２），血清循环抗原水平与每克粪便内虫卵数（ＥＰＧ）无明显相关，正常人血清假阳性率３．２％（３／９５），１０例华支睾吸虫病患者血清中有１例阳性，其他病患者１１例血清均阴性。血吸虫病患者治疗后３个月，粪检阴转者中８０．７％（４６／５７）血清抗原亦转为阴性，粪检阳性者血清抗原检测仍为阳性，所有阳性血清抗原滴度均较治疗前明显下降。结论：金黄色葡萄球菌Ａ蛋白协同凝集试验能用于血吸虫病诊断和疗效考核，并有简易、快速和费用低廉的优点。     

日本血吸虫未成熟虫卵26/28kDa抗原诱导抗雌虫生殖和抗卵胚发育免疫的研究

目的 :探讨日本血吸虫未成熟虫卵的 2 6/ 2 8k Da抗原 ( SIEA2 6/ 2 8k Da)诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法 :采用纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原以及 SIEA- I抗原 ,分别免疫BAL B/ c小鼠 ,于攻击感染后 4 6d进行粪卵、组织内虫卵定量。结果 :证明 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较 ,SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫鼠减虫虽不明显 ,但肝组织内总卵数、成熟卵数和粪卵数 ( EPG)分别减少 4 8.1%、83.6%、87.3% ,死亡卵数明显增加 ( P<0 .0 0 1)。此外 ,未纯化的 SIEA和纯化的 SIEA2 6/ 2 8k Da抗原免疫组均见雌虫子宫内虫卵数下降 ,分别达 4 0 .9%、54.8% ,而 SEA和 SIEA- I抗原免疫未见上述效应。结论 :提示抗雌虫生殖免疫和抗卵胚发育的效应 ,主要与 SIEA2 6/ 2 8k Da蛋白组分有关。     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。