超声空化效应对肿瘤细胞迁移运动影响的实验研究

目的 探讨高机械指数的超声造影空化效应对肿瘤细胞迁移运动的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞).分为对照组、微泡 超声组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,超声探头频率1.5MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,采用Millicell-PCF培养小室法,观察超声造影空化效应对肿瘤细胞迁移运动的影响.结果 对照组、单纯辐照组及单纯微泡组之间的迁移能力无明显差异(P>0.05),而微泡 超声组与对照组之间比较,肿瘤细胞的迁移能力明显低于对照组(P<0.01).结论 高机械指数超声造影增强超声的空化效应,对肿瘤细胞的迁移能力有明显抑制作用.     

高机械指数超声辐照微泡对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨高机械指数超声造影对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞).分为对照组、微泡+超声组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,探头频率1.5 MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,采用MTT法、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡指数.结果 对照组、单纯辐照组及单纯微泡组的增殖能力、细胞周期与凋亡指数无明显差异(P>0.05);微泡+超声组与对照组比较,其增殖能力明显低于对照组(P<0.01),而凋亡指数明显高于对照组(P<0.01).结论 高机械指数超声辐照微泡击破效应对结肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,而对结肠癌细胞的凋亡有明显促进作用.     

高机械指数超声辐照微泡对结肠癌细胞骨架的影响

目的 探讨高机械指数超声辐照微泡对结肠癌细胞骨架的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞),分为对照组、微泡+超声辐照组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,探头频率1.5 MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,激光共聚焦显微镜观察结肠癌Lovo细胞微丝、微管变化.结果 对照组微管染色表现为细胞致密的丝状网络结构,向细胞边缘呈放射性延伸;微泡+超声组微管表达较对照组减弱、稀疏,网络样结构主要沿细胞长轴排列.对照组细胞微丝染色表现为细胞致密网络状细丝样结构,向四周伸出许多细短的毛刺状突起,有明显的拉丝状感觉和方向性;微泡+超声组Lovo细胞胞质中部的网络状细丝明显减少,荧光暗淡,细短的毛刺状突起明显减少.单纯超声组与单纯超声微泡组微丝、微管均与对照组无明显差别.结论 高机械指数超声造影增强其空化效应能改变微丝、微管的组装和分布,对肿瘤细胞的侵袭、转移有一定的抑制作用.     

诊断超声联合微泡对肿瘤微循环的作用

目的 探讨高机械指数诊断超声联合微泡对大鼠Walker-256肿瘤微循环的作用。 方法 将29只皮下荷Walker-256肿瘤SD大鼠随机分为超声微泡组(n=15)、单纯超声组(n=7)和假照组(n=7):对超声微泡组采用声辐射力脉冲(ARFI)成像模式下诊断超声连续激励20次辐照肿瘤,同时经尾静脉推注微泡0.04 ml;对单纯超声组在行超声辐照的同时以等量生理盐水代替微泡;对假照组则采用假照方式,仅推注等量微泡溶液,但不发射超声能量。对所有动物于辐照前、辐照后即刻、10、20 min行CEUS检查。最后每组随机选取3只动物获取肿瘤组织标本,行病理学检查。 结果 辐照后即刻,超声微泡组辐照区几乎无造影剂充填,呈负性显影,肿瘤区平均造影峰值强度(PI)由25.17%减低到12.01%(P<0.01);单纯超声组及假照组辐照后即刻可见造影剂快速充填,灌注良好(P>0.05)。10 min后,超声微泡组造影可见血流逐渐恢复,但PI仍降低;20 min后肿瘤血流基本完全恢复,呈高灌注(P>0.05)。 结论 高机械指数诊断超声联合微泡能特异性地暂时降低大鼠Walker-256皮下移植瘤的微循环。     

诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性影响的实验研究

目的 研究诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性的影响.方法 将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为4组:空白对照(A)组、单纯微泡剂(B)组、单纯超声(C)组和超声联合微泡(D)组.以伊文思蓝(Evens blue,EB)为指示剂,选择频率为1.75 MHz、机械指数为1.4的诊断超声持续照射肿瘤区5 min,经大鼠尾静脉注射/不注射微泡造影剂.使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化,激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况.结果 超声联合微泡可增加肿瘤组织微血管通透性.D组瘤内EB含量较A、B、C组明显增加(P＜0.05),血管周围EB外溢明显.A、B、C组EB含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),血管周围均未见明显EB渗出.结论 在一定条件下,诊断超声联合微泡可明显提高辐照肿瘤组织血管通透性,这对临床肿瘤化疗患者具有潜在的应用意义.     

超声造影评价载血管内皮细胞生长因子抑制剂微泡结合超声辐照对裸鼠皮下结肠癌移植瘤治疗效果的初步研究

目的 应用超声造影评价超声介导的载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)微泡对实验裸鼠结肠癌的治疗效果.方法 18只皮下种植结肠癌肿瘤的Balb/c裸鼠模型随机分为三组:A组(6只)为对照组,接受裸脂质微泡超声造影检查及假照;B组(6只),裸脂质微泡超声造影检查及超声辐照;C组(6只),载VEGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前、辐照后1d、辐照后1周分别进行实时超声造影检查,存储图像进行声学定量脱机分析,获取峰值强度(PI)、局部血容量(RBV)、局部血流量(RBF)等造影参数并加以比较.结果 辐照前三组PI、RBV、RBF差异无统计学意义(P＞0.05);A组假照后1 dPI、RBV、RBF高于假照前,但差异无统计学意义(P＞0.05),1周后PI、RBV、RBF明显高于假照前,差异有统计学意义(P＜0.05);B组辐照后1 dPI、RBF、RBV较辐照前减小,差异有统计学意义(P＜0.05),而1周后PI、RBF、RBV又上升,与辐照前比较差异无统计学意义(P＞0.05);C组辐照后1d、辐照后1周PI、RBV、RBF均较辐照前减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对实验裸鼠结肠癌的治疗效果.     

超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂脂质微泡对皮下结肠癌移植瘤治疗效果的研究

目的 评价超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)脂质微泡对结肠癌的治疗效果.方法 将稳定表达绿色荧光蛋白的结肠癌细胞系接种于Balb/c裸鼠皮下,建立结肠癌移植瘤模型.将48只皮下种植结肠癌移植瘤的Balb/c裸鼠随机分为4组:A组(12只),空白对照组,不接受超声造影及辐照;B组(12只),接受裸脂质微泡超声造影及假照;C组(12只),裸脂质微泡超声造影及超声辐照;D组(12只),载VFGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前和3次辐照后第1d、第3d、第7d、第11d、第16d分别对各组裸鼠测量体质量和荧光摄片,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线及裸鼠体质量生长曲线.16d后处死裸鼠,切除并分离肿瘤组织,测量各组肿瘤质量.结果 辐照前各组裸鼠体质量和肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05);随访期间,A组与B组肿瘤体积持续增大,两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);辐照后第7d,C组及D组肿瘤体积均小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),C组与D组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7d后C组肿瘤体积变化不明显,到第16d肿瘤体积仍然小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),而D组肿瘤体积进一步缩小,与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).切除肿瘤组织,D组肿瘤质量低于C组(P＜0.05),C组低于A组(P＜0.05),而A、B组之间肿瘤质量差异无统计学意义(P＞0.05).观察期间各组裸鼠体质量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对结肠癌的治疗效果.     

微泡双重击破效应对裸鼠HepG2肿瘤微血管的损伤作用

目的 研究微泡双重击破效应对裸鼠HepG2移植肿瘤微血管的损伤作用以及对血流灌注的阻断作用.方法 28只皮下荷人类肝癌HepG2肿瘤的裸鼠随机分为3组,超声微泡组经静脉推注脂质微泡0.1 ml并联合空化治疗仪辐照肿瘤3 min,单纯超声组以等量生理盐水代替微泡,单纯微泡组推注微泡时进行超声假照.各组肿瘤治疗前后行超声造影检查,分析肿瘤造影的峰值强度及曲线下面积,最后获取肿瘤标本行光镜观察.结果 超声微泡组肿瘤造影的峰值强度百分比由(26.9±10.9)％下降至(8.2±5.8)％,曲线下面积由1210.4±823.1下降至291.6±255.2,差异有统计学意义(P＜0.05);但两对照组肿瘤治疗前后造影峰值强度及曲线下面积变化均无显著差异.病理观察发现超声微泡组肿瘤血管内皮细胞肿胀、血管断裂,组织间隙内出血、水肿.结论 微泡双重击破效应可造成裸鼠HepG2肿瘤微血管物理损伤和血流灌注显著下降.     

微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的初步研究

目的研究微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的可行性。方法 26只皮下VX_2肿瘤荷瘤兔随机分为超声微泡组、单纯超声组及假照组。超声微泡组经耳缘静脉推注微泡联合超声辐照肿瘤,单纯超声组以生理盐水代替微泡,假照组超声假照。各组治疗前、治疗后0、30和60min时间点对肿瘤进行超声造影,分析各时间点造影灌注峰值灰阶变化。结果超声微泡组肿瘤造影灰阶值(级)从治疗前的(67.8±13.3)级降至(29.7±20.1)级(P0.01),维持超过60min仍无明显再通;而单纯超声组、假照组肿瘤造影灰阶值无明显变化(P0.05)。结论微泡增强的超声空化能够有效阻断兔VX_2皮下肿瘤的微循环,其发生机制尚不清楚。     

超声破坏靶向VEGFR2微泡治疗皮下结肠癌移植瘤的实验研究

目的 探讨靶向VEGFR2微泡结合超声辐照治疗结肠癌的效果.方法 将17只VEFGR2高表达的结肠癌皮下种植瘤Balb/C裸鼠模型分为三组:A组5只,为对照组,仅接受超声造影检查和假照;B组6只,空白脂质微泡结合超声辐照;C组6只,载靶向VEGFR2单抗的脂质微泡结合超声辐照,所有模型均用红色荧光蛋白标记.空化治疗前和空化后1周分别行超声造影和荧光摄片检查,测量肿块大小、荧光面积、荧光强度及血管密度,并进行比较.结果 治疗前裸鼠肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度在各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);A组假照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度均比假照前增加,差异有统计学意义(P＜0.05);B组辐照后荧光强度及血管密度均较空化前减小,差异有统计学意义(P＜0.05),而肿瘤长径和荧光面积差异不显著(P＞0.05);C组辐照后肿瘤长径、荧光面积、荧光强度及血管密度与辐照前比较均明显减小,差异有统计学意义(P＜0.01);治疗后A、B、C三组各参数两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 靶向VEGFR2脂质微泡能增强超声空化对结肠癌的治疗效果.     

超声空化微气泡造影剂对人乳腺癌细胞影响的实验研究

目的观察不同浓度脂质体微气泡造影剂在超声照射下对体外培养的人乳腺癌细胞的影响。 方法12孔板培养人乳腺癌细胞并分为：（1）对照组；（2）单纯超声照射组；（3）单纯造影剂组；（4）造影剂＋超声照射组。不同造影剂浓度下，声波发射强度一3dB，照射时间60s。给予实验刺激后，原子力显微镜动态观察细胞膜形态的改变，PI染色后观察细胞的活性。 结果单纯超声照射组及造影剂组细胞膜形态与对照组比较无明显改变。造影剂＋超声照射组细胞膜出现大小不等的微孔，提高造影剂浓度，孔径增大，但细胞活性显著下降。 结论微气泡造影剂显著增强超声的空化效应，提高细胞的通透性，对细胞形态及细胞活性的影响与造影剂浓度有关。     

超声造影剂及超声辐照对TIMP-1 siRNA在肝纤维化大鼠肝组织中表达的影响

目的观测超声造影剂及超声辐照对TIMP-1 siRNA质粒转染肝纤维化大鼠肝组织内TIMP-1基因表达的影响。 方法采用二甲基亚硝胺（DMN）方法建立大鼠肝纤维化模型，72只造模大鼠在第6周随机均分成3组，质粒组（P组）、质粒＋造影剂及超声照射组（P＋U组）、对照组。2d、6d及12d后各组分别随机取8只处死、取肝、肾、肺、脑、心肌组织快速冷冻切片，荧光显微镜下观察各组织内TIMP-1 siRNA荧光表达；FQ—PCR测定肝组织TIMP-1 mRNA表达。 结果2d后，P组肝、肾、肺、脑、心肌组织内均有少量TIMP-1 siRNA绿色荧光表达，组间无显著差异，P＞0．05；P＋U组肝组织内TIMP-1 siRNA荧光表达明显增强，较其它组织差异显著，P＜0．001。P组及P＋U组肝组织TIMP-1 mRNA表达量均较对照组明显降低，P＜0．001；P＋U组降低较P组显著，P＜0．001；P＋U组6d时TIMP-1 mRNA表达量最低，后依次为48h、12d。 结论TIMP-1 siRNA对肝纤维化大鼠TIMP-1基因表达抑制作用明显；超声造影剂及超声辐照能够明显增高基因转染效率，并有将基因载体靶向定位于肝组织释放的作用。     

结直肠癌中可溶性CD54、CD44的表达与临床意义

目的通过检测结直肠癌患者血清中sCD54、sCD44浓度的变化,了解其与肿瘤分期、预后以及肿瘤转移间的关系.方法应用夹心ELISA和一步ELISA法对己确诊的32例结直肠癌患者血清中sCD54、sCD44的浓度进行测定,A期6例,B、C期18例,8例术后发现广泛转移,其余8例为D期.另设青年组和老年组作为对照,男女各半.结果两者在男性和女性中水平是基本稳定的,性别不是分析血清中sCD54、sCD44水平的因素(均P＞0.05),16例广泛转移者和10例B、C期患者、6例A期患者以及对照组sCD54、sCD44的浓度相比差异均显著(P＜0.01),sCD54、sCD44间存在正相关关系,提示sCD54、sCD44水平与结直肠癌的转移密切相关.结论结直肠癌转移的多个环节存在相关性,sCD54、sCD44可作为结直肠癌转移的标志,对预后预测有帮助,同时有助于术前手术范围的确定,为术后的综合治疗提供了理论依据.     

雌激素对结肠癌肝转移细胞增殖与凋亡及MMP-9表达的影响

目的 研究雌二醇（E2）对结肠癌肝转移肿瘤细胞增殖与凋亡及MMP-9表达的影响.方法 实验动物选用裸鼠,随机分为四组（n=6）：雄性组、雌性组、卵巢切除组、卵巢切除并雌激素注射组.培养MCA-38细胞至对数生长期,制成单细胞悬液,采用门静脉注射法构建裸鼠结肠癌肝转移模型.应用免疫组化SP法检测转移灶中PCNA和Caspase-3表达,计算肿瘤细胞增殖率（CPI）和凋亡率（CAI）,Western blot 法检测转移灶中MMP-9表达量.结果 （1）雄性组细胞的CPI最高（0.912±0.023）,其次为卵巢切除组（0.876±0.031）.雄性组与雌性组之间的CPI差异（=7.30,P＜0.05）以及卵巢切除组与卵巢切除注射雌激素组之间的CPI差异（t=2.74,P＜0.05）有统计学意义.（2）雌性组肿瘤细胞的CAI最高（0.064±0.010）,其他各组依次为卵巢切除注射雌激素组（0.049 ±0.007）、雄性组（0.038 ±0.003）和卵巢切除组（0.023±0.011）.雄性组与雌性组之间的CAI差异（t=4.72,P＜0.05）以及卵巢切除组与卵巢切除注射雌激素组之间的CAI差异（t=5.872,P＜0.05）有统计学意义.（3）雄性组肝转移灶MMP-9表达量最高（0.62±0.05）,其他各组依次为卵巢切除组（0.49±0.03）、雌性组（0.36±0.03）和卵巢切除注射雌激素组（0.28±0.04）.雄性组与雌性组之间的MMP-9表达量差异（t=8.462,P＜0.05）、卵巢切除组与卵巢切除注射E2组之间的MMP-9表达量差异（t=7.620,P＜0.05）以及雌性组与卵巢切除组之间的MMP-9表达量差异（t=5.324,P＜0.05）有统计学意义.结论 结直肠癌肝转移灶细胞凋亡与体内雌激素水平增加有关,转移灶细胞增殖与体内雌激素水平减低有关,MMP-9可能参与其调控机制.     

微泡造影剂联合超声辐照介导的绿色荧光蛋白质粒转染小鼠肝癌的实验研究

目的探讨微泡造影剂SonoVue联合超声辐照在介导体内基因转染中的作用。方法建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，尾静脉注入绿色荧光蛋白质粒（pEGFP），添加或不添加SonoVue，脉冲多普勒超声辐照（1MHz，2W／cm^2）瘤组织。持续时间1、5、10min，7d后流式细胞仪、荧光显微镜评价pEGFP转染率。HE染色行肿瘤病理学检查。结果SonoVue联合超声辐照组pEGFP的转染率显著高于单纯超声辐照组（P〈0．01）；仅SonoVue与单纯pEGFP2组间转染率无显著差异（P〉0．05）；辐照时间5、10min时pEGFP表达明显高于1min（P〈0．05）。5与10min组间pEGFP表达无显著差异（P〉0．05）。HE染色肿瘤组织无坏死灶出现。结论微泡造影剂联合超声辐照可明显提高基因转染率，且对组织无损害。     

超声微气泡介导cy5ODN转染大鼠肾的研究

目的：探讨超声联合脂质体微气泡介导寡核苷酸cy5ODN靶向转染肾的有效性和安全性。方法：健康雄性Wistar大鼠30只，分为对照组、单纯cy5ODN组、造影剂＋cy5ODN组、超声＋cy5ODN组和超声＋造影剂＋cy5ODN组。予以实验刺激后，7d取肾组织检测荧光表达，光镜下观察肾组织病理改变，以评价该方法的副作用。结果：超声＋造影剂＋cy5ODN组cy5ODN基因转染率显著高于其余各组，实验各组均未见到明显肾小球损害。结论：超声联合类脂质体微泡能显著增强基因在肾组织的转染效率，可望为肾疾病的基因治疗提供一种新的安全、有效的转导方法。     

肝血管平滑肌脂肪瘤的超声造影与增强螺旋CT对比研究

目的 探讨实时超声造影对肝血管平滑肌脂肪瘤的术前诊断意义.方法 19例入组患者共计21个手术切除病理学确诊的肝血管平滑肌脂肪瘤,5例采用脉冲反向谐波造影技术,14例采用对比脉冲序列造影技术,机械指数＜0.2,2.4 ml造影剂SonoVue团注.将超声造影与增强螺旋CT的术前诊断与手术后病理结果进行比较分析.结果 超声造影15个肿瘤诊断为血管平滑肌脂肪瘤,误诊为肝癌1个、肝腺瘤2个、肝血管瘤1个,2个考虑良性肿瘤但不能进一步分型,超声造影术前诊断准确率为71.4%.增强CT检查8个肿瘤诊断为血管平滑肌脂肪瘤,误诊为肝癌7个、脂肪肉瘤1个、脂肪瘤2个、肝腺瘤1个、血管瘤2个.增强CT的术前诊断准确率为38.1%,低于实时超声造影(P＜0.05).结论 实时超声造影能够准确反映大多数肝血管平滑肌脂肪瘤的血管分布和血流灌注特点,对肝血管平滑肌脂肪瘤的术前诊断准确率高于增强CT.     

超声辐照携TIMP-1siRNA微泡对大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨携TIMP-1 siRNA的造影剂微泡在超声辐照条件下对肝纤维化大鼠组织学改变的影响。方法二甲基亚硝胺建立肝纤维化模型，6周后分组并静脉质粒注射，2天后观察肝、肾、肺、脑、心肌组织内基因荧光表达；12天后检测肝组织内TIMP-1 mRNA、蛋白表达及胶原纤维变化。结果2天后，超声照射微泡组基因荧光表达明显增强，较其他组织差异显著，P〈0．001；12天后，其TIMP-1 mRNA及蛋白表达、胶原含量均较单质粒组及对照组减低，P〈0．001。结论超声辐照携TIMP-1 siRNA超声微泡有将目的基因定位释放作用，TIMP-1 siRNA转染肝纤维化大鼠可改善肝纤维化结构，为肝纤维化的基因治疗提供了新的思路及方法。