2011年龙岩市手足口病例肠道病毒通用引物核酸阳性未分型样本病原分析

目的 了解龙岩市大量判定为其他肠道病毒（EV）感染的手足口病（HFMD）样本的病原组成。方法 对龙岩市2011年经Real-time RT-PCR检测判为未分型EV感染的104份HFMD咽拭子样本经RD细胞分离培养后以RT-PCR法检测EV、EV71、CoxA16,对仍不能分型的样本以187/222引物进行扩增,对扩增产物进行纯化回收、克隆、测序,并用Blast程序在线比对判定型别。同时对培养物进行Real-time RT-PCR检测EV、EV71、CoxA16。任一法检出培养物阳性即判为阳性。结果 104份样本中检出EV阳性88份（84.62%）,包括29份EV71,4份EV71＋CoxA16,3份CoxB5,2份CoxA10,50份仍未能分型。结论 Real-time RT-PCR检测未能分型的HFMD病例中,相当部分（37.18%）还是由EV71所致,临床不应该随意排除该类病例EV71感染的可能,同时还包含CoxB5和CoxA10病毒。     

浅析支原体污染对非脊髓灰质炎肠道病毒分离率的影响

为探讨脊髓灰质炎 (脊灰 )实验室网络中非脊灰肠道病毒 (NPEV)分离率下降的原因 ,采用套式聚合酶链反应(PCR)法对 2 4个省 (自治区、直辖市 )的 4 0份脊灰病毒 (PV)分离物 ,用国家脊灰实验室的RD、HEp 2、L2 0B细胞及3个不同厂家生产的牛血清进行了支原体检测。结果显示 :4 0份PV分离物中 ,37份检测到支原体 ,阳性率为92 5 %,其中 9份PV分离物感染了 2种支原体 ;3种细胞悬液均被同种支原体污染 ;3份牛血清中未检出支原体。经核苷酸序列测定证明 ,污染的 2种支原体为猪鼻支原体 (M hyorhinis)和精氨酸支原体 (M arginini)。该实验表明 ,脊灰实验室网络中普遍存在支原体污染 ,这也许是导致近年来NPEV分离率普遍下降的原因之一。NPEV分离率是评价脊灰实验室监测敏感性的重要指标之一。我国正处于消灭脊灰后期的一个关键时期 ,除了有来自邻国脊灰野病毒输入的危险外 ,因为我国是使用减毒活疫苗预防脊灰的国家 ,还有发生疫苗相关麻痹型脊灰或由疫苗衍生脊灰病毒引起病例的危险。实验室监测敏感性下降会导致这些病毒的漏检 ,从而增加其向外扩散的危险。因此必须彻底消除支原体污染 ,以提高脊灰实验室网络的敏感性 ,保证网络监测的质量。     

2011-2013年龙岩市手足口病流行病学 及病原学特征分析

摘要:目的　分析2011-2013年龙岩市手足口病（HFMD）流行病学和病原学特征。方法　运用描述流行病学方法对龙岩市2011-2013年HFMD资料进行分析。选取部分经实时荧光RT-PCR法检测,其他肠道病毒（Enterovirus,EV）阳性咽拭标本,用人横纹肌肉瘤（RD）细胞进行病毒分离,用RT-PCR法进行检测、序列测定和同源性分析,对分离到的病毒进行分析鉴定。结果　2011-2013年龙岩市HFMD发病率均处于较高水平。发病高峰出现在5-7月,男性多于女性。＜5岁儿童病例占报告总病例的93.6%,散居儿童占75.4%。104份其他EV阳性标本病毒分离培养物,经RT-PCR法检测EV阳性88份（84.6%）,其中29份肠道病毒71型（EV71）阳性,4份EV71和柯萨奇病毒A16型（CVA16）同时阳性,3份柯萨奇病毒B5型（CVB5）阳性,2份柯萨奇病毒A10型（CVA10）阳性,50份EV阳性培养物仍未能分型。分离到的EV71型属于C4a基因亚型。CVA16型属于B1b基因型。结论　龙岩市HFMD 疫情处于高流行态势,＜5岁散居儿童是主要发病人群,病原仍以EV71和CVA16为主,同时发现了CVB5和CVA10病毒。     

2009年山东省手足口病病例的病原学检测分析

目的了解2009年引起山东省手足口病（HFMD）的病原体型别及分布特征。方法采集HFMD临床诊断病例的粪便、咽拭子、疱疹液等标本,应用肠道通用引物和EV71、CoxA16特异性引物对其进行RT-PCR鉴定;使用RD、Hep-2细胞对部分肠道通用引物阳性的粪便标本进行病毒分离。结果共收集1604份HFMD临床诊断病例标本,实验室检测阳性标本990份,其中EV71阳性标本589份,CoxA16阳性标本29份,EV71和CoxA16同为阳性标本2份,EV71和CoxA16的检出率分别为36.72%和1.81%。从80份肠道通用引物阳性的粪便标本中分离出肠道病毒32株,其中EV71型病毒23株,CoxA16型病毒4株。结论引起山东省HFMD的病原体主要为EV71型肠道病毒,EV71感染占EV阳性标本数的59.50%。全省17个地市均有EV71感染的HFMD病例检出。     

314例手足口病患者病原体检测结果报告

目的了解长沙市HFMD流行的时间分布和年龄分布特征、不同标本对手足口病实验室诊断的影响,为防治HFMD提供依据。方法用RT-PCR检测EV、CA16和EV71核酸,并应用SPSS16.0统计软件包对数据进行分析。结果 314例病例中男180例、女134例,平均年龄（3.04岁±2.72）岁。共检出EV核酸阳性236例,阳性率75.2%（236/314）;CA16阳性73例、EV71阳性88例,占EV阳性的30.9%（73/236）和37.2%（88/236）;非EV71和CA16感染的其他肠道病毒感染75例,占EV阳性的31.8%（75/236）。2009年4月-2010年2月HFMD疑似病例和EV感染处于较低而平缓的流行趋势,且CA16和EV71感染水平相当并处于交替上升状态,但在2010年3-4月间HFMD疑似病例、EV、CA16、EV71均较前几个月有约十倍的增长,且EV71的罹患率明显高于CA16（χ^2=14.36,P〈0.01）。结论 HFMD感染多以婴幼儿为主,尤其以6岁以下多见占95.9%,但成人也可罹患HFMD。不同标本对HFMD病原体EV71和CA16的实验室核酸检测有一定的影响,采样以粪便为主,有利于提高HFMD实验室诊断效率。     

河北省2006年脊髓灰质炎实验室监测与质量评价

目的：评估脊髓灰质炎（脊灰）实验室的监测状况及我省脊灰病毒（PV）核苷酸序列变异情况。方法：分析11个市急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测系统经计算机联网上报的AFP病例个案调查表录入的数据库、国家及我省脊灰实验室监测的数据。结果：2006年AFP病例监测系统共报告AFP病例481例,省脊灰实验室共收集粪便标本950份,所有粪便标本用L20B（转人脊灰病毒受体的小鼠肺细胞系）、RD（人横纹肌肉瘤细胞系）同时进行肠道病毒（EV）分离。从31例AFP病例粪便标本中分离到PV,分离率为6.5%,并对所有PV进行了血清定型。从71例AFP病例粪便标本中分离到NPEV,分离率为14.9%。将PV混合株进行单型分离后,共计38株。经国家脊灰实验室对38株PV重新进行血清中和试验复核,结果符合率为100%。同时国家脊灰实验室还使用酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链反应-限制性酶切片断长度多态性分析（PCR-RFLP）两种方法进行型内鉴定,并对其中27株进行了VP1编码区全基因的序列测定和分析,未检出疫苗衍生脊灰病毒（VDPV）或野毒株,全部为脊灰疫苗株。结论：河北省2006年继续维持无脊灰状态,脊灰实验室各项监测指标均达到世界卫生组织的要求,细胞系敏感性没有降低,脊灰实验室质量控制良好,继续为维持无脊灰提供了完整、可靠的实验室依据。     

衡阳市2010年手足口病实验室检测结果分析

目的对衡阳市2010年4-12月手足口病（HFMD）实验室检测结果进行分析,了解衡阳市HFMD流行特征,为今后制定或调整HFMD防治措施提供参考。方法对2010年4-12月衡阳市各县区疾病预防控制中心（CDC）及各类医疗机构送检的625例临床诊断为HFMD患者标本,应用实时荧光（Real-time）RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒（HEV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CVA16）特异性核酸。结果 625例HFMD患者标本中,EV71阳性率为26.08%（163/625）,CVA16阳性率为8.80%（55/625）,其它HEV阳性率为19.84%（124/625）;95例HFMD重症病例中,EV71阳性率（67.80%,40/95）最高,并且男性阳性率（50.85%）略高于女性（27.78%）,未检出CVA16型;9例HFMD重症死亡病例中,6例为EV71型,阳性率为66.67%。4-7月为HFMD高发期,3岁以下为高风险年龄组,重症病例及重症死亡病例比其它年龄组高。结论衡阳市2010年HFMD发病率较高,EV71型是引起重症及重症死亡病例的优势病毒型,应加强监测,特别是3岁以下婴幼儿的监测。     

北京市西城区手足口病患儿肠道病毒71型VP1区基因进化分析

目的了解北京市西城区2015年手足口病（HFMD）患儿肠道病毒71型（EV 71）分离株VP1区基因特征,分析其变异情况。方法收集北京市西城区2015年HFMD病原学检测分型鉴定为EV 71的阳性标本,对部分标本进行病毒分离、培养,并通过实时荧光PCR鉴定阳性培养物。EV 71阳性培养物提取病毒核酸,对其VP1区全长序列进行PCR扩增和测序。从Genbank中选取EV 71不同基因型别参考序列,利用生物信息学软件进行同源性和系统进化分析。结果共分离到6株EV 71（Genbank登录号为KU376383-KU376388）,其VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.00%~99.00%和98.00%~100.00%,与参考序列VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.00%~97.00%和93.00%~100.00%。进化分析显示,6株EV 71均为C4a基因亚型。结论 2015年北京市西城区EV 71流行株属于C4a亚型,未出现明显变异。     

509例手足口病患儿肠道病毒EV71型抗体检测分析

目的 了解福建省妇幼保健院2012年住院的手足口病（HFMD）患儿肠道病毒EV71型（EV71）感染情况，为制订防控策略提供依据。方法 采集住院患儿血标本共509份（普通病例445份，重症病例64份）进行EV71 IgM检测。结果 EV71 IgM阳性率50.5%（257/509），其中男性49.0%（166/339），女性53.5%（91/170），男女检出率类似。EV71检出率以5～6岁组最高（69.2%），其次2、3岁组（55.0%、61.0%），＜1岁最低（37.7%）。全年均有病例发生，2月份检出率最高 （85.7%），9月份最低（14.3%）。重症患儿EV71型检出率95.0%，普通病例仅44.0%。结论 2012年住院的HFMD患儿以EV71型感染为主（50.5%），分布具有明显季节和年龄分布特征，应结合季节变化特点加强重点人群的防控。     

2008-2010年湖南省哨点医院手足口病病原学检测结果及基因特征分析

目的针对2008-2010年湖南省哨点医院手足口病实验室检测结果及其基因特征进行分析,为湖南省手足口病的综合防治提供参考资料。方法收集湖南省哨点医院2008-2010年手足口病病例送检的咽拭子、粪便等标本,用RD、Hep-2细胞对标本进行病毒分离,应用RT-PCR及Real ti me-PCR技术检测原始样本和分离阳性毒株中的肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CVA16）、非EV71和CVA16的其它肠道病毒（EV）,将分离到的EV71采用RT-PCR方法进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行序列测定和分析。结果 2008-2010年湖南省哨点医院HFMD患者2 448例的各类标本中检测到EV71病毒阳性1 228份,CVA16病毒阳性169份,EV71和CVA16病毒核酸同时阳性12份,非EV71和CVA16的其它肠道病毒（以下简称为EV）阳性518份,病原谱构成以EV71型为主,其构成比为63.73%（1 228/1 927）,其次EV占26.88%（518/1 927）、CVA16占8.77%（169/1 927）、EV71＋CVA16混合感染占0.62%。三种不同型别肠道病毒在每月中均有报告,EV71为优势病原体,4-7月达到峰值,其次为EV型,CVA16型每月维持在低水平的感染。HFMD病例人群男性高于女性（1.95：1）,1~3岁儿童是重症病例数及死亡病例数最多年龄段;湖南省14个地市（州）HFMD的病原谱均以EV71型为主。对845份阳性标本进行病毒分离,共获得肠道病毒211株,其中EV71型131株,CVA16病毒19株,非EV71和CVA16的其它EV型49株,混合感染12株。13株EV71 VP1编码区全长序列之间核苷酸同源性为97.35%~100%,氨基酸同源性为98.2%~100%,基因型为C4a亚型。结论 EV71型是2008-2010年湖南省手足口病流行的主要病原,也是引起手足口重症病例和死亡病例的主要毒株类型,属于C4a亚型。     

2007-2010年上海市静安区儿童手足口病情况分析和病原学研究

目的 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病发病情况,并分析2009-2010年静安区监测点儿童手足口病病原型别及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71) VP1区基因特征.方法 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病流行概况;收集2009年4月～2010年12月辖区内儿童医院、幼托机构手足口病患儿咽拭标本,并进行实时荧光RT-PCR检测,确定手足口病病原型别.选择2010年不同月份共19份(含1份重症病例)EV71 PCR阳性标本,接种Vero细胞进行病毒分离培养,并设计特异引物对EV71 VP1全序列进行核苷酸序列测定、比对,构建系统发生树.结果 2008年静安区手足口病发病率明显增高,2009年发病数稳中略降,病例以发生在幼托机构为主.2009年病例咽拭标本实时荧光RT-PCR检测结果显示,柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxA16)阳性率为51.0％ (52/102),EV71阳性率为15.7％ (16/102),其他肠道病毒属阳性率2.9％ (3/102);2010年CoxA16和EV71阳性率均为31.3％ (36/115),其他肠道病毒属阳性率10.4％( 12/115).19株EV71分离株与2008年安徽阜阳EV71分离株同属C基因型中的C4a亚型,核苷酸同源性达95.0％ ～97.1％,氨基酸同源性为95.1％ ～98.3％.结论 静安区手足口病发病率2008年明显增高,2009年发病数稳中略降.2009-2010年静安区手足口病主要病原体为EV71和CoxA16,其他肠道病毒属引起的手足口病有所增加,需加强对其他肠道病毒属的鉴定.     

Identification of mycoplasma by the growth inhibition of samples isolated from cell cultures]

Cell cultures must be continuously screened for the presence of mycoplasma because, although these microorganisms sometimes pass unnoticed, they may cause chromosomic alterations and interfere with viral replication, antibody and interferon production etc. The International Organization for Mycoplasmology (IOM) recommends the isolation and identification of mycoplasma with a view to the detection of the origin of the infection and the improvement of the quality of the cultures. In this paper, 37 samples belonging to 27 cell lines contaminated with mycoplasma were assayed by the growth inhibition test. It is known that Mycoplasma orale is the most common human mycoplasma contaminant of cell cultures, the major vehicle of contamination being mouth pippeting, while commercial bovine serum in the main source for Mycoplasma arginini and Acholeplasma laidlawii. M. arginini was found in 18 (48.65%) of the cell samples tested, A. laidlawii in 15 (40.55%), and M. orale in two (5.40%). Two other samples could not be identified by the antisera used (antisera against M. arginini, M. orale, Mycoplasma hyorhinis and A. laidlawii) their characteristics being "fried egg" colonies, digitonine sensitivity, Dienes stained, positive glucose catabolism, negative arginini hydrolysis, and negative tetrazolium reduction. No more than one type of mycoplasma was found in each cell culture.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

19份手足口病临床标本的病原学分离与鉴定

目的：为探索手足口病的病原并为该病的防治提供科学依据,对本省徐州地区采集的19份手足口病临床标本进行病原学分离与鉴定。方法：采集的患者咽拭子（6份）和肛拭子（13份）标本,接种Hep-2细胞进行病毒分离,经培养3代,对有明显致细胞病变效应并能连续传代的毒株,用肠道病毒通用引物real-time-RT-PCR方法鉴定确认为肠道病毒后,用肠道病毒分子分型引物（E187/E222）对肠道病毒VP1区进行扩增,将扩增产物测序获得的序列与GeneBank中肠道病毒核苷酸序列进行比对,确定毒株血清型别。结果：19份标本中分离到9株病毒,均为肠道病毒。对其VP1区部分核苷酸序列测定和比较分析后,鉴定出其中有6株为CoxB5,1株为CoxB3,2株为Echo6。结论：虽然肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）是引起手足口病暴发流行的主要病原,但引起手足口病的肠道病毒存在多种血清型,CoxB5、CoxB3和Echo6等均能引起手足口病。因此,对手足口病的病原学检测,除EV71和CoxA16外,不能忽视对其他肠道病毒的病原学检测和鉴定。     

六安市2012年手足口病病原学监测结果分析

目的分析2012年六安市手足口病的病原构成情况,为科学防治手足口病提供实验室依据。方法对2012年六安市各县区疾控中心送检的271份手足口病病例的咽拭子标本,用RT-PCR进行肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）、柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）和其它及肠道病毒核酸检测。结果 2012年全年共检测手足口病病例标本271份,检出人肠道病毒核酸阳性132份,总阳性率为48.71%。其中EV71核酸阳性82份,占62.12%;Cox A16核酸阳性28份,占21.21%;非EV71、非Cox A16的其他肠道病毒核酸阳性22份,占16.67%。132份阳性标本中4岁以下113份,占85.61%。病原检测阳性率在1月、5月和9月出现3次高峰。结论 2012年六安市手足口病最主要病原为EV71,4岁以下儿童为主要易感人群,应加强对4岁以下儿童手足口病的病原学监测。     

2008-2012年河南省手足口病流行特征分析

目的了解掌握河南省手足口病流行特征和病原种类,为制定防控策略提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法描述2008-2012年河南省手足口病流行特征,采用分析性统计学方法分析病原检测结果。结果 2008-2012年全省共报告手足口病病例338 792例,各年的发病率分别为12.63/10万、107.82/10万、101.97/10万、63.44/10万和73.28/10万;3～6月发病数占总发病例数的68.27%;3岁及以下年龄组病例占发病总数的87.61%;23 213例实验室诊断病例中,EV71阳性占62.43%,CA16阳性占12.97%,其他肠道病毒占24.60%。不同年份EV71、CA16、其他肠道病毒阳性构成差异有统计学意义(x2=819.68,P<0.05)。结论 2008-2012年河南省手足口病报告发病率逐年下降,发病有明显的季节性,散居儿童是主要发病人群;主要病原是EV71和CA16,EV71为优势流行株。     

2010年济南地区手足口病病原及流行特征

目的 探讨2010年济南地区手足口病的病原及流行特征,为手足口病防控提供科学依据.方法 选取济南地区3家代表性医院临床诊断为手足口病的病例为对象,采集患者(包括40例重症病例)发病1周内的粪便、咽拭子等标本共计808例,采用肠道病毒( enterovirus,EV)通用和肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型( coxsackievirus A16,CoxA16)特异性引物进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定;选取7例病例标本进行EV7I-VP1区基因的扩增和核苷酸序列测定.结果 808例患者标本中,581例检测结果为阳性(71.91％),其中190例为EV71阳性(32.70％),267例为CoxA16阳性(45.96％),124例检测到其他肠道病毒(21.34％);40例重症患者的感染病原主要为EV71(75.00％).阳性病例中男女性别比为1.42∶1,发病年龄主要集中在4岁以下儿童(85.15％),尤其是2～3岁年龄段(28.34％);全年均有发病,但发病高峰主要集中于4～5月份(36.14％).7株EV71经基因测序,证实均为C4b基因亚型.结论 济南地区手足口病病原以CoxA16和EV71为主,病例多为4岁以下儿童,重症患者主要由EV71感染引起.     

2010--2012年东莞市手足口病病原学监测结果分析

目的分析东莞市2010--2012年手足口病病原学特征和流行病学特征,为适时调整手足口病的防治方案提供参考资料。方法收集2010--2012年东莞市手足口病病原学监测标本、重症病例和聚集性疫情作为研究对象,用RealtimeRT—PCR法对患者标本进行肠道病毒通用型、肠道病毒7l型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）的特异性核酸检测。结果共检测手足口病病例各类标本2282份,肠道病毒通用型核酸阳性2026份,检出率88．78％（2026／2282）,其中,EV71、CoxA16、EV71和CoxA16混合感染、未分型类（即其他肠道病毒）的阳性病例分别占肠道病毒感染阳性的46．25％（937／2026）、18．36％（372／2026）、0．10％（2／2026）和35．29％（715／2026）。2010年东莞市HFMD病原以EV71为主,构成比为60．63％（516／851）,而2011和2012年HFMD病原主体是其他肠道病毒,其构成比为39．29％（211／537）和44．67％（285／638）。东莞市HFMD全年均有发病,高峰期主要为每年的4-6月（41．24％,941／2282）;男性发病例数（1483例）多于女性（799例）;病例以5岁以下儿童为主（92．73％,2116／2282）。分析2026例肠道病毒阳性病例,其中轻、重症病例分别占所有病例的70．53％（1429／2026）、28．97％（587／2026）,死亡病例10例。重症病例以EV71为主．其构成比为81．43％（478／587）,死亡病例均为EV71核酸阳性。结论2010年东莞市手足口病病原体以EV71为主,2011年和2012年其他肠道病毒已经成为东莞市手足口病最主要的病原体。EV71仍然是引起手足口重症和死亡病例的优势流行型别。     

2012年云南省及缅甸籍入境健康儿童肠道病毒的分子生物学检测

目的了解2012年云南省和缅甸籍入境健康儿童肠道病毒（Enterovirus,EV）带毒情况及病毒型别。方法采集6个边境设区的市（州、地区,下同）10个县和7个非边境市10个县〈15岁健康儿童粪便标本600份（单份粪便标本,其中缅甸籍入境儿童100份）,进行病毒分离和基因测序定型。结果600份粪便标本共检测到EV53株,带毒率为8．83％。其中脊髓灰质炎病毒5株,阳性率0．83％,均为疫苗株,未发现脊灰野病毒。检测到非脊灰肠道病毒（Non．polioEV,NPEV）48株,阳性率8．00％,其中人类肠道病毒（HumanEV,HEV）A组5株（3个血清型,占10．42％）,HEVB组（GroupB）（HEV．B）42株（14个血清型,占87．50％）,HEVC组6株（4个血清型,占11．32％）,未分离到HEVD组。结论2012年600份健康儿童粪便标本中,从中国籍儿童分离到EV48株,分离率8．00％,缅甸籍儿童中分离到EV5株,分离率0．83％,中国籍儿童EV携带率较高,并以HEV．B组为主。     

2009—2012年保定市手足口病病原学分析

目的了解保定市2009-2012年手足病（HFMD）病原学变化,为HFMD防控提供实验室依据。方法采用荧光定量RT—PCR方法对HFMD病例咽拭子标本进行肠道病毒通用型、EV71型以及CoxA16型核酸检测,应用Excel和SPSS11．5对结果进行统计分析。结果2577例临床诊断HFMD病例中,检出肠道病毒阳性病例1140例,其中EV71阳性构成比为52．37％,CoxA16阳性构成比为25．88％,其他肠道病毒阳性构成比为21．75％。2009-2011年病原以EV71为主,2012年EV71和CoxA16构成比相当,同时成为主要病原。全年均有阳性病例检出,4—8月为其高峰,阳性病例集中于5岁以下儿童,男性多于女性;但在病原构成上,女性EV71阳性构成比高于男性;CoxA16和其他肠道病毒阳性构成比无性别差异。结论2009-2012年保定市HFMD主要病原是EV71和CoxA16,发病高峰在4—8月,5岁以下儿童为主要防护对象。