高质量人体基因组DNA的提取

高质量人体基因组ＤＮＡ的提取周建中＊王申五（北京医科大学血研所，北京１０００４４）关键词脱氧核糖核酸；基因组；人类使用质量不高的ＤＮＡ进行ＰＣＲ以扩增目的基因片段较易成功；相反，用Ｓｏｕｔｈ－ｅｒｎ杂交检测单拷贝基因有否重排时，要求提取高质量的ＤＮＡ...     

PCR技术检测生殖器疣标本中人乳头状瘤病毒DNA的研究（摘要）

ＰＣＲ技术检测生殖器疣标本中人乳头状瘤病毒ＤＮＡ的研究（摘要）王桂珍，董占双，刘凤芝，常玲（中国医科大学基础医学院微生物学教研室）（中国医科大学第二临床学院妇产科）李鲁平（沈阳市性病防治所）关键词人乳头状瘤病毒；ＰＣＲ；ＤＮＡ本研究用ＰＣＲ技术对１９...     

PCR法区别HBV RC—和CCC—DNA

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和基因组为一松驰环状、部分双链ＤＮＡ（ＲＣ－ＤＮＡ）。在其负链的５与３端之间存在一缺口。当ＨＢＶ进入宿主细胞后，基因组转变为共价闭合环状ＤＮＡ（ＣＣＣ－ＤＮＡ）。我们根据ＨＢＶ－ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ的结构特点，设计了ＰＣＲ区别ＲＣ－和ＣＣＣ－ＤＮＡ。实验表明，该方法可有效地区别两种形式的ＨＢＶＤＮＡ》     

PCR检测HBV－DNA及对乙肝免疫学标志意义的再评价

ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ及对乙肝免疫学标志意义的再评价姚志伟，阮月芹，任全珺，高乐俊，彭新国（附属医院检验科，２５６６０３）关键词聚合酶链反应（ＰＣＲ）；ＨＢＶ－ＤＮＡ；乙肝免疫学标志（ＨＢＶＭ）ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ...     

丝状真菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡土从菌菌丝体中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电泳等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法均可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．８３ｍｇ），方法简便，对人体无毒害，是较理想的提取真菌ＤＮＡ的方法     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

糖还原酶基因（AC）n二核苷酸串联重复序列不同等位基因的筛选

研究了醛糖还原酶基因转当起始点上游－２．１ｋｂ处的微卫星ＤＮＡ标记－（ＡＣ）ｎ二核苷酸串联重复序列７种等位基因（Ｚ＋６，Ｚ＋４，Ｚ＋２，Ｚ，Ｘ－２，Ｚ－４和 Ｚ－６）的筛选方法。首先自人外周血提取基因组ＤＮＡ后设计一对引物进行ＰＣＲ扩增，获得长度为１３２－１４４ｂｐ的ＤＮＡ片段。选取等位基因为纯合子的个体ＤＮＡ标本的ＰＣＲ扩增产物，经纯化后直接测序以确定等位基因的种类；并以确定的等位基因为标准，用     

反转录病毒介导基因转移治疗脑肿瘤的安全性研究：Ⅰ.具有？…

目的：检测反转录病毒介导的脑肿瘤基因治疗中具有复制能力野生型反转录病毒（ＲＣＲ）。方法．；ＲＣＲ检测主要方法有：ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ），反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｏ基因和ｌａｃＺ基因的补救分析。结果：建立了ＰＣＲ的检测系统，从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对产ＨＳＶ＿ＴＫ病毒我装细胞（ＴＫ／ＶＰＣ），Ｃ６转ＴＫ基因细胞和实验动物血液可能存在的ＲＣＲ野生型     

应用PCR技术进行常染色体显性遗传多囊肾病家系的基因诊断

目的：用ＰＣＲ方法对中国的常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）家系进行基因诊断。方法：提取基因组ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增与ＰＫＤ１位点连锁的高度多态性的微小卫星体ＤＮＡ（ＳＭ７，ＡＣ２．５，ＳＭ６，ＫＧ８）为遗传标记，进行家系分析。对２２个ＡＤＰＫＤ家系的１５６个成员（包括６８个患者）找出染色体上与疾病连锁的单体型，进行了连锁分析。结果：２１个被测家系提供了基因诊断信息；另一个家系显示重组或不连锁。结论：能够采用ＰＣＲ方法对中国的ＡＤＰＫＤ家系进行基因诊断。     

应用国产石蜡进行热启动PCR研究

应用国产石蜡进行热启动ＰＣＲ研究湖南医科大学肿瘤研究所（４１００７８）易红，胡维新，姚开泰本文报道了使用国产切片石蜡进行热启动ＰＬＲ研究，对人基因组中Ｐ５３抑瘤基因ＤＮＡ进行扩增，并与常规ＰＣＲ进行了比较，从而显示热启动ＰＣＲ的优点。材料与方法１Ｔａ...     

PCR检测肺结核病人外周血中结核分枝杆菌

为了解ＰＣＲ检测外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ对肺结核诊断的价值，采用ＰＣＲ检测了１９０例可疑肺结核病人外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并用涂片镜检和培养法检测了这些病人痰中结核分枝杆菌。结果肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率（４４％）明显低于培养法（８０．０％），与涂片法相当（４６．８％）；非肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率为１６．２％（５／３）。ＰＣＲ检测外周血结核分枝杆菌ＤＮＡ诊断肺结核的应用价值有限，对急性     

用聚合酶链反应检测乙肝患者血清中的HBV－DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了１１４例传染科门诊病人血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，并与ＨＢＶ有关的血清学标志（ＨＢＶＭ）进行了比较。结果表明：在９２和ＪＨＢｓＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者５０例，占５４．３４％；在２８例ＨＢｅＡｇ（＋）病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者２６例，占９２．８６％；在２０例ＨＢＶＭ均为阴性的病例中，ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者有６例，占３０．００％。证明ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ较用ＥＬＩＳＡ法检测抗原一抗体更加灵敏、可靠。     

丝誊具菌高分子量DNA的提取研究

为寻求一种简便高效的提取真菌基因组ＤＮＡ的方法，采用经改良的液氮研磨饱和酚抽提法及高盐沉淀法，从液体培养的鸡从菌菌丝本中提取了高分子量的基因组ＤＮＡ。用紫外吸收光谱、限制酶切、ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应及琼脂糖凝胶电脉等方法进行了鉴定。结果显示，两种方法匀可以获得分子量大、样品较纯的基因组ＤＮＡ，用限制酶均能有效地消化，并可有效地用于ＰＣＲ扩增。其中高盐沉淀法提取的ＤＮＡ产量高（每克菌丝体可获ＤＮＡ０．     

Wistar雄性大鼠DNA基因组的多态性分析

使用一种随机引物“Ｐ２（ＣＧＧＣＣＧＧＴＡ）对正常Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠ＤＮＡ基因组进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ分析，扩增产物呈现出多态性ＤＮＡ图谱，其中ＤＮＡ片段分子大小依次为：１４３９、１３３４、１１２２、７０８、５７５、５３７、４７９、３１６ｂｐ。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术简便、快速。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析对孕早期孕妇巨细胞病毒感染的研究

在人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）－ＡＤ１６９株直接早期基因的ＥｃｏＲＩＪ片段内，自行设计二对引物，建立套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）加限制酶分析检测ＨＣＭＶＤＮＡ，经实验证明有高度的特异性与敏感性，对其它疱疹类病毒及正常人基因组ＤＮＡ无交叉反应，一次性ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株基因组的最小检出量为１００ｆｇ，而套式ＰＣＲ可达１０ｆｇ，经ＰｓｔＩ酶切后，得到的片段与设计相符，对５８名孕早期孕妇外周静脉血     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

原位PCR—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内HBV－DNA

原位ＰＣＲ—杂交—步法检测胆管细胞癌组织内ＨＢＶ－ＤＮＡ顾广玉，王文亮（病理学教研室西安７１００３３）关键词原位ＰＣＲ；ＨＢＶ；胆管细胞癌中图号Ｒ７３５．８近年来原位ＰＣＲ方法在病毒感染的诊断中逐步得到应用．目前，用原位杂交与免疫组化方法检测组织中的...     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

PCR法测定HBV—DNA的临床意义

ＰＣＲ法测定ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义杨蓉芳刁端勤胡林华上海梅山集团公司医院免疫室（２１００３９聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种体外由引物介导的特异基因组或克隆序列的酶促扩增技术，具有极高的特异性和灵敏度。我科于１９９６年用ＰＣＲ法测定２３７例乙肝患者血清...     

双温聚合酶链反应检测EB病毒

本文应用双温循环聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测鼻咽癌石蜡包埋组织、活检或冰冻组织、患者鼻咽拭子或血液中的ＥＢ（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）病毒ＤＮＡ。模板ＤＮＡ制备方法简单，毋需酚提取步骤；双温ＰＣＲ快速（约需１．５ｈ）、灵敏。目前已初步用于临床检验