aFGF和Genistein对AGZY-83A细胞内PKC活性及[Ca~(2 )]i的影响

目的 :探讨 a FGF及 TPK抑制剂 Genistein对 AGZY- 83A细胞内 PKC活性及游离 Ca2 浓度的影响。方法 :用不同浓度的 a FGF和 Genistein诱导 AGZY- 83A细胞 ,(γ- P32 ) - ATP标记的 Histone 为底物 ,液体闪烁测定PKC活性 ;Fura- 2 / AM负载荧光光度法测定细胞内游离 Ca2 浓度。结果 :a FGF诱导后 ,细胞内 PKC活性及 Ca2 浓度升高 ,且与 a FGF呈剂量依赖效应。Genistein抑制细胞内 PKC活性及 Ca2 浓度 ,也呈剂量依赖效应。Genistein对 a FGF诱导的 PKC活性抑制更显著。结论 :进一步证明 PKC和 Ca2 确是 TPK的下游信号分子。     

aFGF和Genistein对AGZY—83A细胞内PKC活性及[Ca^2＋]i的影响

目的：探讨ａＦＧＦ及ＴＰＫ抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞内ＰＫＣ活性游离Ｃａ＾２＋浓度的影响。方法：用不同浓度的ａＦＧＦ和Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ诱导ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,（γ－Ｐ＾３２）－ＡＴＰ标记的Ｈｉｓｔｏｎｅ Ⅰ为底物,液体闪烁测定ＰＫＣ活性;Ｆｕｒａ－２／ＡＭ负载荧光光度法测定细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度。结果：ａＦＧＦ诱导后,细胞内ＰＫＣ活性及Ｃａ＾２＋浓度升高,且与ａＦＧＦ呈剂     

首乌复方对兔红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATPase活性的影响

研究首乌复方对高血脂兔红细胞膜 Ca2 ,Mg2 - ATPase活性的影响。实验结果表明 ,高脂饲料能显著地引起兔血浆中总胆固醇积累 ;也使兔血红细胞膜 Ca2 ,Mg2 - ATPase的基础活性降低近 2 0 % ;而依赖钙调素(Ca M)激活的 Ca2 ,Mg2 - ATPase的活性则是正常兔的 144 %。首乌复方不但能有效地阻止血液中胆固醇的积累 ;而且还能使 Ca2 ,Mg2 - ATPase的基础活性基本恢复正常水平     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

外源性神经节苷脂GM_3对Ca~（2＋）－ATP酶及红细胞胞浆Ca~（2＋）－浓度的影响

研究神经节苷脂ＧＭ３（简称ＧＭ３）对部分纯化的人红细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用和对完整兔红细胞浆［Ｃａ２＋］的影响。结果表明：外源性ＧＭ３对Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用呈浓度依赖性双相调节即浓度为１～６．５μｍｏｌ／Ｌ时抑制酶活性，浓度大于６．５μｍｏｌ／Ｌ时激活酶活性；ＧＭ３不影响钙调素（ＣａＭ）对酶的激活；ＣＭ３对兔红细胞浆［Ｃａ２＋］也呈浓度依赖性双相调节即在ＧＭ３浓度低于６９μｍｏｌ／Ｌ时［Ｃａ２＋］有不同程度升高，浓度大于６０μｍｏｌ／Ｌ时则降低［Ｃａ２＋］。     

电针对家兔高血压及心肌细胞游离钙镁浓度的影响

利用AR-CM-COM阳离子测定系统和离子探针Fura-2-AM及Furaptra-A从观察了电针在治疗家兔实验性高血压时心肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）和游离镁离子浓度（[Mg2＋]i）的变化情况。静脉滴注去甲肾上腺素（NE）造成家兔实验性高血压,心肌细胞[Ca2＋]。随血压升高而增大,[Mg2＋]i则降低,[Ca2＋]i／[Mg＋]i比值升高;电针两侧“足三里”穴位后治疗组家兔血压明显降低,[Ca2＋]i明显低于高血压组,[Ca2＋]i／[Mg2＋]i比值降低;电针对正常家免心肌细胞[Ca2＋]i和[Mg2＋]i均无明显影响。结果提示心肌细胞内游离Ca2＋、Mg2＋在针刺调整血压的过程中可能发挥一定的作用。     

NK细胞胞浆内游离Ca^2＋浓度和分布的测定

目的确定NK细胞胞浆内Ca2+的浓度及分布的检测方法.方法应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2+的分布,并用Fluo-3/AM和PluromicF-127对胞浆内游离Ca2+的浓度进行测定.结果最佳负载条件是用2μmol/ml的Fluo-3/AM在37℃恒温下孵育60分钟,同时加入1μl/ml25%的Pluronic F-127以阻断Ca2+荧光示踪Fluo-3/AM的外排和房室化.静息状态下NK细胞胞浆内Ca2+分布不均衡,Ca2+浓度为91.3±4.8nM(-x±s).结论应用Fluo-3AM和PluronicF-127结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2+的准确,简单,灵敏的方法之一.     

胆囊胆固醇成石机制研究：胆汁酸构成对胆汁游离Ca^2＋的影响

该研究对30例胆囊胆固醇结石患者及20例对照胆囊胆汁进行成份分析，发现胆固醇结石患者胆汁游离Ca2 浓度增高，胆汁酸构成有改变：二羟基胆汁酸所占比例增高，甘氨酸结合胆汁所占比例降低；多因素分析结果显示：影响胆汁游离Ca2 浓度的主要因素是总胆汁酸及胆汁酸构成。认为：胆汁的胆汁酸构成是影响胆汁游离Ca2 浓度的一个重要因素．胆囊胆固醇结石患者胆汁酸构成发生了改变。研究提示：改变胆汁的胆汁酸构成．有可能在胆道内降低胆汁游离Ca2 的浓度，从而促进胆汁中钙盐的溶解．防止胆固醇草木结晶的形成．这对于胆石症的预防和治疗有着重要的指导意义。     

染铅鼠海马神经原长时程增强过程中Ca^2＋浓度及PKC活性的…

为探讨中枢神经系统铅中毒的生化机制，以慢性染铅鼠为动物模型，用高叔刺激诱发海马区产生长时程增强后，以Ｆｕｒａ－２为Ｃａ＾２＋指示剂，测定海马神经元Ｃａ＾２＋浓度，以放射性［ｒ－＾３２Ｐ］－ＡＴＰ掺入外源性底物方法测定神经元胞浆及胞膜ＰＫＣ活性。结果：染铅组长时程增强过程中Ｃａ＾２＋浓度明显升高（２３６．４８±６１．８３ｎｍｏｌ／Ｌ，与对照组比较有统计学意义（Ｐ〈０．０００１）。ＰＫＣ活性亦升高（胞     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^2＋浓度及Ca^2＋/钙调蛋白依赖性蛋白激酶K表达的影响

目的探讨尼莫地平（nimodipin，NIM）对戊四氮（pentylenetetrazol，PrZ）点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]）、Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ。（calcium／calmodulin—dependent protein kinase Ⅱn，CaMKⅡα）蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM＋PTZ组，采用P佗慢性点燃癫痫模型，应用Mor—ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力，运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca^2＋]．变化，Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损，其海马细胞内[Ca^2＋]．明显升高（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少（P〈0．05）；与PrZ组比较，NIM＋PrZ组大鼠空间学习记忆能力好转，其海马细胞内[Ca^2＋]．下降（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平升高（P〈0．05）。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常，由此引起大鼠空间学习记忆能力受损；NIM可以降低细胞内[Ca^2＋]．，提高CaMKⅡα的表达，改善癫痫大鼠的学习记忆能力。     

低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响

目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性.     

维拉帕米对海洛因诱发的乳鼠心肌细胞钙活动异常的作用

【目的】 研究海洛因对乳鼠心肌细胞钙活动的影响以及维拉帕米对海洛因作用下的乳鼠心肌细胞钙活动的影响作用.【方法】 使用体外培养5 d的SD乳鼠心肌细胞,标记细胞内游离钙,应用激光共聚焦显微镜下检测细胞内荧光强度变化可指示细胞内游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)变化;并应用碘化丙啶进行活性细胞检测.【结果】 0.01 mol/L海洛因可增加培养心肌细胞平均细胞内钙浓度和钙瞬变的幅度,对自发性收缩节律无明显影响;20 μmol/L维拉帕米可明显抑制海洛因诱导的钙超载,并可降低收缩节律,减少细胞死亡.【结论】 海洛因可导致心肌细胞钙超载和钙活动异常,导致细胞死亡,维拉帕米可抑制细胞内钙活动,保护心肌细胞.     

肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca2+]i变化及其机制探讨

目的:研究肺纤维化(PF)大鼠肺微血管内皮细胞内的Ca2 变化,探讨其在PF中的作用机制.方法:SD大鼠20只,随机分为PF组和对照组,每组10只动物,按5 mg/kg体质量分别气管滴注博莱霉素及等量生理盐水,取外周肺组织原代培养肺微血管内皮细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2 ]i及中电导钙激活钾通道蛋白1(IKca1)表达,计算机图像分析免疫细胞化学法IKca1的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜检测PMVECs内[Ca2 ]i:PF组为(166.56±24.17)明显高于对照组(95.79±13.51),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).间接免疫荧光法检测IKca1表达:PF组为(679.29±206.98)明显低于对照组(958.75±188.84),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);免疫细胞化学检测IKca1表达:PF组(169.08±14.81)明显低于对照组(189.78±13.73),两组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PF时,肺微血管内皮细胞[Ca2 ]i过载,其发生机制可能与IKca活性异常有关.     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法:取新生2~3 d W istar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养。将细胞随机分为:对照组(C组),谷氨酸组(G组),氯胺酮组(K组),余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组(标记为GK1~GK3组),培养30 m in后取各细胞检测[Ca2+]i,再培养48 h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较,G组细胞发生了大量凋亡(P<0.01),[Ca2+]i显著升高(P<0.01);与G组比较,GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低(P<0.05),GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低(P<0.01)。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。     

氯化钾除极对分离的豚鼠心室肌细胞胞浆内[Ca^2＋]i的影响

用酶解法分离单个豚鼠心室肌细胞，以荧光探针Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ标记胸浆内游离钙离子，用激光扫人聚焦显微镜实时测定胞浆内「Ｃａ＾＋」变化。分别观察了在正常台氏液和无钙台氏液中３０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ除极对胞浆内「Ｃａ＾２＋」ｉ的影响。     

Genistein对aFGF诱导的AGZY-83A细胞增殖的抑制作用

目的 探讨酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）诱导的肺腺癌细胞株ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞增殖的抑制作用。方法 以不同浓度的ａＦＧＦ刺激ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,再对由ａＦＧＦ引起增殖的细胞施加不同浓度的Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,用细胞计数器计数细胞,观察Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对细胞增殖的抑制作用。结果 ａＦＧＦ可使该细胞株增殖比明显增加,而Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可引起细胞     

青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响

目的考察青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性及[Ca2 ]i的影响。方法青龙衣多糖对S180小鼠ip给药7 d,比色法结合试剂盒测定S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,采用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM荧光探针测定红细胞内[Ca2 ]i。结果青龙衣多糖能提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性(P<0.05);降低S180小鼠红细胞[Ca2 ]i(P<0.05),并且青龙衣多糖的作用呈剂量依赖性,以高剂量组的作用最佳(P<0.01)。结论青龙衣多糖通过提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,排除离子跨膜转运障碍,稳定其能量代谢和物质代谢,有利于维持细胞内Ca2 的正常浓度。     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。