幽门螺杆菌核酸疫苗的研究

幽门螺杆菌(H.pylori)与多种胃肠道疾病密切相关,在人群中的感染率较高,目前的"三联"或"四联"抗H.pylori治疗由于治疗费用、抗生素耐药等受到一定限制,为了有效控制H.pylori感染,疫苗尤其是核酸疫苗的研制逐渐成为该研究领域的热点,被认为是防治H.pylori最有前景的方法.     

幽门螺杆菌ureI核酸疫苗免疫活性的初步研究

目的 观察幽门螺杆菌ureI核酸疫苗诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答及细胞免疫应答水平.方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/ureI、空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分别肌注免疫C57BL/6小鼠.ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平以及脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IFN-γ含量,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,PCR和免疫荧光组化法检测ureI基因和蛋白表达.结果 pcDNA3.1(+)/ureI能够诱导小鼠产生特异性IgG抗体,该组小鼠脾淋巴细胞经UreI重组蛋白刺激后,其刺激指数和培养上清中IL-4、IFN-γ含量明显升高; ureI基因可在小鼠肌细胞中有效表达.结论 pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗能刺激C57BL/6小鼠产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研究该疫苗的免疫保护作用奠定了基础.     

尿素酶疫苗在防治幽门螺杆菌感染的动物实验研究

目的利用人类幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的小鼠模型研究Ｈｐ粗抗原及纯化尿素酶在预防与治疗Ｈｐ感染的作用。方法超声粉碎制备Ｈｐ全菌抗原,化学提纯制备Ｈｐ尿素酶,霍乱毒素（ＣＴ）为免疫佐剂。实验分为预防与治疗两部分。预防部分把实验动物无特定致病菌（Ｓ．Ｐ．Ｆ．）ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠分成５组,分别通过灌胃方法给予尿素酶（２５０μｇ）加ＣＴ（２μｇ）、Ｈｐ粗抗原（１ｍｇ）加ＣＴ（２μｇ）、生理盐水、单纯尿素酶（２５０μｇ）、单纯ＣＴ（２μｇ）,每周１次,共４次。２周后再用活Ｈｐ灌胃,再４周后处死动物。治疗部分把已感染Ｈｐ的小白鼠分成５组,分组与治疗方法同预防部分,治疗结束后４周处死动物,取胃粘膜行尿素酶试验与改良Ｇｉｅｍｓａ染色检查Ｈｐ情况。结果预防实验的保护率分别为,尿素酶加ＣＴ７０％（７／１０）,Ｈｐ粗抗原＋ＣＴ８０％（８／１０）,生理盐水、单纯尿素酶、单纯ＣＴ保护率均为０。治疗实验各组Ｈｐ根除率分别为：尿素酶加ＣＴ６３．６％（７／１１）,Ｈｐ粗抗原加ＣＴ４４．４％（４／９）,生理盐水组、单纯尿素酶、单纯ＣＴ组均无治疗作用。结论由尿素酶加免疫佐剂组成的口服疫苗,不仅有预防Ｈｐ感染的作用,同时也有根除已感染的Ｈｐ的作用。     

幽门螺杆菌靶向核酸疫苗的构建及免疫学评价

目的:为了提高幽门螺杆菌DNA疫苗的免疫原性,构建具有靶向作用于APC细胞的核酸疫苗.方法:利用基因工程技术,将靶向基因片段和过氧化氢酶基因融合构建了核酸疫苗.体外转染293T细胞,间接免疫荧光和ELISA检测其基因表达情况.用该核酸疫苗肌肉免疫注射BALB/c小鼠后,测定其血清IgG、IgG1和IgG2a水平.结果:间接免疫荧光检测转染DNA疫苗的293T细胞,表明该疫苗能在真核细胞中表达目的抗原,通过ELISA方法测定表明其仍具有IgG抗体结合能力.BALB/c小鼠免疫后血清测定结果表明,该靶向核酸疫苗诱导的抗体水平高于对照质粒pDNAkat,抗体分型实验显示靶向核酸疫苗pcDNAkathIgz和pcDNAkat,促进了免疫反应类型由Th2向Th1的部分偏转.结论:成功构建了靶向APC细胞的幽门螺杆菌核酸疫苗,并在小鼠体内诱导了较高的抗体水平.     

幽门螺杆菌疫苗的研究

自从1982年Warren和Marshall^[1]首次从人胃黏膜标本分离培养出幽门螺杆菌(Hdicobacter pylofi，H．pylofi，以下仍按中国习惯称Hp)以来，人们对其与胃十二指肠疾病的关系认识越来越深入，寻找有效的Hp疫苗以预防及治疗相关疾病的研究也随之展开。本文对大量相关文献进行纵览，就此问题综述如下。     

幽门螺杆菌疫苗口服免疫小鼠后胃肠免疫应答研究

目的 观测Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的胃肠免疫反应。方法 采用ELISPOT和ELISA法检测了胃粘膜、PP结抗原特异性形成细胞(AFC)和小肠粘液sIgA。结果 抗原免疫组、抗原 佐剂组胃肠粘膜抗原特异性sIgA-AFC、IgG-AFC数量明显增加,尤以sIgA-AFC为甚,并且抗原 佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组;小肠粘液特异sIgA两免疫组明显高于对照组。结论 口服免疫可有效诱导胃肠道粘膜免疫,局部sIgA可能在抗Hp感染中具有重要作用。     

幽门螺杆菌疫苗研究现状

接种疫苗通常被认为是预防和治疗幽门螺杆菌（Hp）感染及其相关疾病最有效的方法。因此，Hp疫苗可以是：（1）预防性的，也就是在感染Hp前给予疫苗。（2）治疗性的，即在感染Hp后，给予疫苗，这样做的目的是减少Hp感染定植的数量甚至根除Hp感染。至今已在免疫途径、剂型（抗原和佐剂等方面）的选择、疫苗筛选评价平台、疫苗免疫机制等方面进行了广泛而深入的研究。本文就Hp疫苗的研究现状从以上方面作一综述。     

幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗免疫预防研究

目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(Kat)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Kat在BL21(DE3)大肠杆菌表达,表达Kat的包涵体经洗涤、变性、复性,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Kat重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。BALB/c小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Kat重组蛋白+CT、脂质体包裹Kat重组蛋白、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果以包涵体为主的表达产物占全菌总蛋白的24.4%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为0.7±0.4μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Kat重组蛋白+CT组、脂质体包裹Kat重组蛋白组、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体部能分代替免疫佐剂的作用,将其作为Hp疫苗的免疫佐剂,具有广泛的应用前景。     

幽门螺杆菌疫苗的研究现状及前景

幽门螺杆菌已被确认为上消化道疾病的重要病菌，近年来对免疫预测幽门螺杆菌感染得到了广泛重视，动物实验已取得令人满意的进展。免疫预防螺杆菌感染的关键是刺激宿主粘膜免疫系统产生保护性免疫反应，本文重点介绍此方面的研究进展前景。     

幽门螺杆菌疫苗研究的进展

幽门螺杆菌疫苗研究的进展潘其英多数幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染者血液中有大量的抗Ｈｐ抗体存在。虽然有这种抗体存在，但细菌仍可在胃上皮定居，并持续存在，除非使用治疗手段将其去除［１］。天然引起的免疫反应并不能够清除Ｈｐ感染，人工引起的保护性免疫会有什么作用呢...     

重组幽门螺杆菌疫苗免疫保护机制的研究

目的 研究以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的重组幽门螺杆菌（Hp)疫苗诱导小鼠产生保护性免疫应答的机制。方法 将表达Hp尿素酶B亚单位（UreB)，黏附素（HpaA)及尿素酶B亚单位/黏附素融合蛋白（UreB/HpaA)的减毒鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium)给小鼠分别灌胃，另设单纯减毒鼠伤寒沙门菌和生理盐水免疫鼠为对照，免疫4周后以Hp活菌攻击，观察各组小鼠的免疫保护率，攻击前后血清中抗Hp抗体IgC1,IgG2a和IgA的变化。小鼠脾脏和胃黏膜中γ干扰素（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）mRNA表达变化。结果 UreB,HpaA及UreB/HpaA组的免疫保护率分别为50%，41%和77%，和生理盐水组相比，攻击前各鼠伤寒沙门菌免疫组IgG1,IgG2a均轻度升高而IgA无变化，攻击后各鼠伤寒沙门菌免疫组IgG2a升高显著并以UreB/HpaA组为最，而IgG1和IgA的升高无统计学差异。胃黏膜攻击前生理盐水组无IFN-γ表达，其余各组均100%表达；攻击后生理盐水组IFN-γ轻度表达，但仍明显低于各鼠伤寒沙门菌免疫组，IL-4在攻击前后各组均无表达，脾IFN-γ和IL-4在所有组攻击前后均全部表达。结论 以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的Hp疫苗在小鼠体内诱导出以TH1反应为主的保护性免疫应答。     

幽门螺杆菌粘膜疫苗的研究进展

胃窦部幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可引起许多胃十二指肠疾病,包括B型(胃窦)胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌.临床上对Hp感染的治疗主要采用以抗生素为主的治疗方案,虽可在一定程度治愈Hp感染,但不能预防Hp再感染,同时抗生素的使用可导致Hp耐药菌株的产生和带来许多严重的副作用.而Hp疫苗可以解决这一难题,使得Hp疫苗接种成为了根治Hp感染和预防再感染的唯一方法.目前,Hp疫苗的研究进展迅速,粘膜疫苗以其有效的保护性免疫效果成为这一研究的热点.我们对Hp粘膜疫苗的组成、接种途径、免疫效果及保护性免疫机制等方面的研究进展加一综述.     

微粒包裹型幽门螺杆菌疫苗口服诱导小鼠粘膜免疫应答的研究

幽门螺杆菌（Helocobacter pylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况,ELISPOT法分析派伊尔氏结（PP结）抗原特异性抗体形成细胞（ASC）的数量增减。发现微粒包裹型Hp疫苗免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应,PP结抗原特异性抗体形成细胞（ASC）数量与肠道sIgA水平密切相关。     

幽门螺杆菌尿素酶临床应用和疫苗研制进展

尿素酶为幽门螺杆菌在胃内定植和生存所必需,是幽门螺杆菌的主要毒力因子。近年来,对幽门螺杆菌尿素酶分子生物学特性、致病机理的深入研究使人们在幽门螺杆菌的诊断、治疗和疫苗研制方面有了一些新的认识和进展。     

幽门螺杆菌疫苗免疫小鼠的Th免疫应答及作用

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗诱导小鼠保护性免疫应答的机制。方法 以霍乱毒素(CT)加Hp全菌超声粉碎抗原免疫小鼠，并设CT组和生理盐水(NS)组为对照。免疫4周后以Hp攻击；在攻击前后不同时间点分批处死小鼠，比较免疫组和对照组胃黏膜唧定植及各项免疫指标的变化。结果 (1)攻击后5、26周后免疫组和CT组、NS组相比胃黏膜Hp定植量明显降低。(2)各时间点免疫组IgG1、IgG2a、IgA均高于NS组、CT组。(3)攻击前和攻击后5周免疫组和CT组胃黏膜Th1型细胞因子表达较NS组明显升高。攻击后26周免疫组和CT组除白细胞介素(IL)-12外，干扰素(IFN)-γ和IL-2表达均明显降低，而NS组Thl型细胞因子表达明显升高。(4)Th2型细胞因子在攻击前免疫组和CT组胃黏膜均有轻度表达；攻击后5周免疫组和CT组IL-4和IL-10均无表达，IL-6表达低于NS组；攻击后26周免疫组IL-4和IL-10再次表达，CT组仅表达IL-10，IL-6表达各组无明显差异。(5)各细胞因子在所有组脾脏攻击前后各时间点表达无差异。(6)与NS组相比，攻击后5周免疫组鼠胃黏膜出现明显的炎症反应，CT组也有轻度炎症反应；攻击后26周NS组炎症加重而免疫组则有所减轻。结论 (1)以CT为佐剂的Hp疫苗可诱导Thl和Th2混合型初始免疫应答；(2)Hp攻击后早期增强的Thl反应起主要免疫保护作用同时导致免疫后胃炎；晚期随Th2反应的增强Thl反应和免疫后胃炎强度减弱。     

口服疫苗预防幽门螺杆菌感染的实验研究

目的：利用感染人类幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）的小鼠模型,研究Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ粗制抗原与霍乱毒素（ＣＴ）或重组霍乱毒素Ｂ亚单位（ｒＣＴＢ）组成的口服疫苗预防ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染的作用。方法：无特殊病原菌级Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分为４组,通过灌胃方法分别予各组小鼠以Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ超声粉碎抗原１ｍｇ加ＣＴ１０μｇ、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ超声粉碎抗原１ｍｇ加ｒＣＴＢ１０μｇ、单纯Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ超声粉碎抗原１     

幽门螺杆菌疫苗的研究进展

现今的幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)治疗方案是以抗生素联合应用质子泵抑制剂 (ＰＰＩ)或 (和 )铋剂的“三联”或“四联”疗法 ,但由于患者依从性、药物副作用、停药后复发和再感染 ,特别是耐药菌株迅速增加等问题的存在使其应用前景受限。免疫防治为解决这一棘手问题提供了新手段。现已普遍认为Ｈｐ疫苗是在全球范围内控制Ｈｐ感染的最有效方法[1] 。在 1990年Ｈｐ疫苗的构想提出时 ,还有许多人对发展Ｈｐ疫苗持怀疑态度 ,而如今Ｈｐ疫苗的研制已成为世界Ｈｐ研究领域的热点 ,并取得了令人瞩目的进展。一、Ｈｐ…     

幽门螺杆菌尿素酶试剂的比较

幽门螺杆菌尿素酶试剂的比较肖清水自从１９８３年澳大利亚学者Ｍａｒｓｈａｌ和Ｗａｒｒｅｎ首先报道从人胃粘膜活体标本中成功地分离出幽门螺杆菌（ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）以来，国内外学者对此进行了广泛深入地研究。在临床上对患者进行胃镜检查...     

幽门螺杆菌疫苗研究的现状及展望

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)的发现是2 0世纪消化疾病研究领域的又一里程碑。Ｈｐ是全世界人群感染最广泛的致病菌 ,已确认Ｈｐ感染是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病因 ,与胃癌及胃粘膜相关组织淋巴瘤 (胃ＭＡＬＴ淋巴瘤 )的发病也密切相关。Ｈｐ感染的防治是临床亟待解决的问题。现今的抗Ｈｐ感染治疗方案是以铋剂或质子泵抑制剂联合应用抗生素的“三联”或“四联”疗法 ,但由于药物的副作用及耐药菌株的迅速增加使其应用受限。近 10年来的研究表明 :Ｈｐ疫苗有可能成为控制这一全球性感染的更有效的方法。Ｈｐ…