甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

TAM和MPA联合用药对卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP生长的影响

目的探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)和甲孕酮(medroxyprogesterone,MPA)联合用药对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV-3/DDP生长影响的机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、电子显微镜及流式细胞仪测定用药前后SKOV-3/DDP细胞生长、形态学、周期及凋亡率的变化.结果低浓度的TAM和MPA联合用药组对SKOV-3/DDP细胞生长无影响.高浓度用药组可抑制卵巢癌细胞生长,电子显微镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,1×10-6～1×10-4mol/L的TAM和MPA联合用药组在抑制细胞增殖的同时尚可诱导细胞凋亡,其细胞凋亡率分别为4.06%、11.77%、19.3%,两两比较,差异均有显著性(P＜0.05).结论TAM和MPA联合用药既对顺铂耐药的卵巢癌细胞有杀灭作用,又因其较小的副作用及肯定的临床意义有可能成为卵巢癌有效的化疗辅助用药.     

TAM和MPA联合用药对卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP生长的影响

目的:探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)和甲孕酮(medroxyprogesterone,MPA)联合用药对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV-3／DDP生长影响的机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、电子显微镜及流式细胞仪测定用药前后SKOV-3／DDP细胞生长、形态学、周期及凋亡率的变化。结果:低浓度的TAM和MPA联合用药组对SKOV-3／DDP细胞生长无影响。高浓度用药组可抑制卵巢癌细胞生长,电子显微镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,1×10-6~1×10-4mol／L的TAM和MPA联合用药组在抑制细胞增殖的同时尚可诱导细胞凋亡,其细胞凋亡率分别为4.06％、11.77％、19.3％,两两比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:TAM和MPA联合用药既对顺铂耐药的卵巢癌细胞有杀灭作用,又因其较小的副作用及肯定的临床意义有可能成为卵巢癌有效的化疗辅助用药。     

两种有机磷酸酯对人成神经细胞瘤细胞生长与钙摄取的影响

目的　探讨具有迟发性神经毒性的有机磷酸酯 (organophosphates,OPs)对人成神经细胞瘤细胞SH SY5Y的毒性作用。方法　采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定SH SY5Y细胞活力 ;用培养的SH SY5Y细胞与45CaCl2 和磷酸三邻甲苯酯 (tri o cresylphosphate ,TOCP)或甲胺磷共育后 ,洗脱 ,裂解 ,经液闪仪计数测定细胞对钙的摄取情况。结果　甲胺磷在较低浓度 (7× 10 -7～ 7× 10 -6mol/L)时可刺激SH SY5Y细胞的生长 ,在 7× 10 -7mol/L浓度时细胞的增长比对照增加了 2 8% ,而在高浓度 (7× 10 -4～ 7× 10 -3mol/L)时抑制细胞生长 ,在 7× 10 -3 mol/L时的抑制率为 6 2 % ;但TOCP只在高浓度 (7× 10 -3 mol/L)时才对细胞的生长有抑制作用 (抑制率为 34% )。TOCP在几乎所有的测试浓度下都对SH SY5Y细胞的钙摄取量有影响 :在低浓度 (1× 10 -9～ 1× 10 -7mol/L)时刺激细胞的钙摄取 ,细胞的钙摄取量最高增加 2 4 1% ,但在高浓度 (1× 10 -6～ 1× 10 -4mol/L)时抑制细胞的钙摄取 ,最高的抑制率达 5 5 %。结论　OPs的神经毒性可能涉及阻遏神经细胞生长和干扰细胞钙平衡。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

防己诺林碱联用紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV3/ADM细胞作用机制的初步研究

目的评价防己诺林碱调控紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用。方法采用MTT法和细胞摄取研究防己诺林碱调控紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用。结果细胞生长抑制试验表明,紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞耐药明显。0.5、1和5μg·mL~(-1)浓度的防己诺林碱分别与紫杉醇联用后,紫杉醇对细胞的半数抑制浓度(IC_(50))降为(0.542±0.117)、(0.924±0.153)和(1.931±0.375)μg·mL~(-1),耐药逆转倍数If分别为16.1、9.4和4.5倍,与单用紫杉醇相比差异有统计学意义(P0.05)。细胞摄取试验研究表明,联用防己诺林碱浓度达到0.5μg·mL~(-1)及以上时,能够显著增加紫杉醇的细胞摄取(P0.05)。结论防己诺林碱是潜在的逆转紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药候选活性化合物。     

大肠癌多药耐药逆转的临床研究

目的　探讨环孢霉素A(CsA)联合他莫昔芬 (TAM)逆转大肠癌多药耐药的临床疗效。方法　用免疫组织化学技术对大肠癌的P -蛋白表达进行检测 ,筛选阳性病例同时进行骨髓微小转移测定 ,选择二者皆为阳性患者作为研究对象 ,并随机分为两组 ,比较CsA联合TAM加化疗组与单纯化疗组疗效。结果　在大肠癌中P -蛋白表达阳性率为 6 6 6 % (5 6 /84 ) ,在p糖蛋白 (P -gp)阳性病例中 ,骨髓微小转移 (BMM)阳性率为 5 7 1% (32 /5 6 )。CsA联合TAM对逆转大肠癌多药耐药有一定作用 ,加逆转剂组疗效高于不加逆转剂组 (P <0 .0 5 )。结论　CsA联合TAM对逆转大肠癌多药耐药的临床应用安全 ,且有一定疗效     

靶向Survivin反义寡核苷酸逆转MCF-7乳腺癌细胞三苯氧胺耐药的研究

目的探讨Survivin基因在乳腺癌细胞获得性三苯氧胺(TAM)耐药性形成中的作用以及靶向Survivin mRNA逆转乳腺癌细胞TAM耐药性的可行性。方法建立TAM耐药细胞株(TAM-R),用靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)联合10~(-5)M TAM分别作用于MCF-7细胞和MCF-7/TAM-R细胞72 h后,采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞仪、原位杂交法检测细胞活性、克隆形成率、凋亡率及Survivin mRNA表达的变化。结果 MCF-7/TAM-R组的Survivin mRNA表达明显高于MCF-7组;ASODN联合应用TAM能够逆转MCF-7/TAM-R细胞对TAM的耐药性,其细胞活性、克隆形成率以及凋亡抑制程度明显强于TAM组(P0.05);靶向Survivin的反义寡核苷酸能够抑制Survivin mRNA的表达。结论 MCF-7细胞可能通过上调Survivin基因来对抗长期TAM刺激所诱导的细胞凋亡,从而促进TAM耐药性的形成,靶向Survivin mRNA的反义寡核苷酸能够逆转MCF-7细胞对TAM的耐药。     

锌对免疫细胞功能影响的体外实验研究

用不同浓度含锌培养液在体外培养小鼠脾脏淋巴细胞。当锌浓度在0.12～0.5×10~(-4)mol/L时,~3H-TdR掺入淋巴细胞量明显增加;与分裂原共同培养时,锌明显促进淋巴细胞对ConA和LPS的增殖反应,其促增殖的最佳浓度为0.12×10~(-4)mol/L。锌浓度在1.0×10~(-4)mol/L以上时呈现对细胞的毒性作用。锌还促进混合淋巴细胞反应;增强胸腺细胞对IL-1的增殖反应。     

溴泰君(W198)联合加温逆转MCF-7/ADM细胞株耐药的实验研究

[目的]观察溴泰君(W198)联合加温对人乳腺癌耐药细胞的耐药逆转作用.[方法]以人乳腺癌细胞MCF-7为对照,以人乳腺癌耐药细胞MCF-7/Adm为研究对象,当阿霉素(Adm)作用浓度为1μg·ml-1时,不同温度加温(37℃～42℃)与不同浓度(0.125μmol·L-1～1.0μmol·L-1)W198联合作用1h条件下,检测MCF-7及MCF-7/Adm的细胞生长抑制率、细胞内Adm的荧光强度、细胞表面P-糖蛋白(p-gp)荧光强度,统计分析其与加温温度和W198浓度间的变化趋势.[结果]MCF-7/Adm细胞对Adm的敏感性明显低于MCF-7细胞.加温联合W198作用于MCF-7/Adm,随加温温度和W198浓度增加,细胞表面P-gp表达降低,细胞内Adm浓度及细胞生长抑制率增加.42℃加温与1.0μmol·L-1W198联合作用时能最大程度的逆转MCF-7/Adm对Adm的耐药.[结论]加温联合W198对于人乳腺癌耐药细胞的耐药逆转具有协同作用.     

体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制

目的:通过对人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪测定SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内Bcl-2蛋白及细胞膜上Fas、Fas-L表达情况。结果:相对于SKOV-3细胞;SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内Bcl-2蛋白表达及细胞膜Fas、Fas-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2水平升高及细胞膜Fas、Fas-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP顺铂耐药的部分机理。     

抑制ClC-3表达促进顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的作用机制

目的:探讨抑制ClC-3基因表达对顺铂(DDP)复制的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞损伤促进作用过程中的具体作用机制,为应用DDP治疗卵巢癌提供实验依据。方法:转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒到人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法观察热休克蛋白(HSP70)、溶酶体组织蛋白酶D(cathepsin D)蛋白表达。结果:与SKOV3细胞比较,SK-OV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达增加(P<0.05)。转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达降低(P<0.05),cathepsin D蛋白表达增加(P<0.05)。结论:抑制ClC-3基因表达促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的可能作用机制与溶酶体膜通透性(LMP)增加有关。     

冬凌草甲素抑制人卵巢癌细胞恶性行为及机制研究

目的 研究冬凌草甲素（Oridonin）对人卵巢癌（Human ovarian cancer）SKOV3 细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子机制。方法 采用CCK-8 法检测不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）的冬凌草甲素作用SKOV3细胞24、48 和72h 后细胞活力的变化,计算半数抑制浓度（IC50）。采用Annexin V-FITC/PI 双染法检测SKOV3细胞凋亡。采用划痕修复实验检测SKOV3细胞的迁移能力,Transwell小室实验检测SKOV3的侵袭能力。Western blot检测SKOV3细胞上皮细胞间充质转化（EMT）蛋白［E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）］和Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因（C-myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白的表达。结果 冬凌草甲素可抑制SKOV3 细胞活力,且具有时间-剂量依赖性,作用24、48 和72 h后IC50值为23.57、12.48和7.29μmol/L。与对照组比较,5、10和20μmol/L冬凌草甲素作用SKOV3细胞24h 后,细胞凋亡率明显升高,迁移率和侵袭率降低（P<0.05）。与对照组比较,5、10和20μmol/L冬凌草甲素可升高E-cadherin 蛋白表达（P<0.05）,降低Vimentin 表达（P<0.05）。与对照组比较,5、10和20 μmol/L冬凌草甲素可降低β-catenin、C-myc和Cyclin D1表达（P<0.05）。结论 冬凌草甲素具有抑制SKOV3细胞增殖、转移和侵袭能力的作用,该作用与其抑制Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

氟虫腈对PC12细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究氟虫腈对神经细胞凋亡的影响并初步探讨其神经毒作用机制.方法 设3.13×10~(-6)、1.25×10~(-5)、5.00×10~(-5)mol/L 3个氟虫腈染毒组和1个对照组,用荧光显微镜检测各组PC12细胞凋亡荧光强度并用流式细胞仪对凋亡率进行测定,并对3个染毒组Bcl-2蛋白表达进行荧光强度检测.结果 细胞凋亡荧光强度检测发现,3.13×10~(-6)mol/L染毒组细胞凋亡率为17.00%±0.57%,5.00×10~(-5)mol/L染毒组细胞坏死率为13.95%±1.95%,均明显高于对照组(分别为9.80%±0.30%、3.10%±0.40%),差异均有统计学意义(P<0.05).对Bcl-2蛋白表达含量进行定性检测,结果显示,3.13×10~(-6)mol/L染毒组Bcl-2蛋白表达明显低于对照组,其他染毒组Bcl-2蛋白表达与对照组比较无明显差异.结论 氟虫腈在较低剂量时可能是通过影响Bcl-2蛋白表达来诱导PCI2细胞凋亡,而在较高剂量时可能通过其他非细胞凋亡途径直接致细胞坏死发生.     

MDR1及MDR3基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨MDR1(Multidrug resistance gene-1)及MDR3(Multidrug resistance gene-3)基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:两种质粒一起瞬时转染A2780/DDP细胞,空载体组及未转染组作为对照。Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术、MTT法、RT-PCR、western blot分别检测A2780/DDP细胞早晚期凋亡、细胞增殖活性、MDR1和MDR3 mRNA表达及caspase-3蛋白水平。结果:两种质粒(pSuppressorNeo MDR1 siRNA,MDR3 siRNA)均未能逆转A2780/DDP细胞顺铂耐药:①流式显示转染MDR1 siRNA组、MDR3 siRNA组和pSuppressorNeo空载体组后相比较未转染A2780/DDP细胞凋亡率无显著改变(P>0.05);②在一定药物浓度范围内,转染MDR1和MDR3小分子干扰RNA均未能增强顺铂对A2780/DDP细胞的细胞毒作用;③与空载体组和未转染细胞相比,A2780/DDP细胞的MDR3及MDR1 mRNA表达均低下(P>0.05);④Caspase-3蛋白表达未见增加。结论:顺铂所致的卵巢癌细胞多药耐药与MDR1及MDR3基因过度表达均无关,卵巢癌细胞顺铂耐药为非P-gp     

4-氨基酚在预阳极化碳糊电极的电化学行为及测定

目的研究4-氨基酚在预阳极化碳糊电极上的电化学行为。方法在碱性溶液中,用循环伏安法将碳糊电极制成预阳极化碳糊电极,研究4-氨基酚在预阳极化碳糊电极上的电化学反应过程,并优化实验条件。结果与裸碳糊电极相比,在pH=8.44的Britton-Robinson缓冲溶液中,4-氨基酚在预阳极化碳糊电极上氧化还原电流响应显著增强。在最佳实验条件下,4-氨基酚浓度在2.5×10^-7~2.5×10^-4mol/L范围内与峰电流呈良好的线性关系,检出限为3.5×10^-8mol/L,加标回收率在96.5%~103.0%。结论该方法用于模拟废水样中4-氨基酚的测定,结果较满意。