原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

P21waf1、MDM2 和P53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的 :探讨P2 1waf1、MDM2、P5 3蛋白在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达及其对于HCC诊断的意义。方法 :应用免疫组织化学SP法检测 6 1例原发性肝细胞癌及 5 9例相应癌旁肝组织中P2 1waf1、MDM2和P5 3蛋白的表达 ,并对它们之间的关系及其与肝癌的临床病理特征的关系进行统计学分析。结果 :P2 1waf1、MDM2和P5 3蛋白在HCC中的阳性表达率分别为 31.15 % (19/ 6 1)、2 6 .2 3% (16 / 6 1)和 5 7.38% (35 / 6 1) ,明显高于癌旁肝组织 (P <0 .0 0 1)。HCC中P2 1waf1与MDM、P5 3蛋白表达无明显相关性 (P >0 .0 5 )。这三种蛋白的表达与肝硬化及不典型增生无关 (P >0 .0 5 )。结论 :P2 1waf1、MDM2和P5 3高表达均在HCC的发生中起作用 ,但不是早期事件 ;HCC中存在不依赖wt-P5 3途径的P2 1waf1的表达 ,HCC中P2 1waf1的表达不能反映 p5 3的基因状态。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

肝细胞癌组织中中期因子表达及其与乙型肝炎病毒感染的关系

目的　探讨肝细胞癌 (HCC)组织中中期因子 (midkine ,MK)的表达及其与乙肝病毒(HBV)感染的关系。方法　采用原位杂交及免疫组织化学方法检测 6 2例HCC、癌旁肝组织及 10例正常肝组织中MKmRNA、MK蛋白表达及HBVDNA水平。结果　 6 2例HCC组织中MKmRNA、MK蛋白表达阳性率分别为 74 2 %、75 8% ,明显高于无表达的癌旁肝组织及正常肝组织 (均P <0 0 1)。肝癌组织HBVDNA核型阳性率 (6 2 9% ,39/ 6 2 )明显高于癌旁肝组织 (6 5 % ,4 / 6 2 ) (P <0 0 1)。肝癌组织MKmRNA、MK蛋白表达与HBVDNA核型存在密切相关。结论　MKmRNA及其蛋白在HCC组织中呈过度表达 ,并可能与HBVDNA核型存在有密切联系     

胃癌组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的比较胃癌和癌旁组织中p53基因突变及p53蛋白的表达与淋巴结转移和预后的关系。方法采用PCR．SSCP技术和免疫组织化学S-P法，对石蜡包埋组织进行p53基因外显子6．7和8，9以及p53蛋白的检测。结果（1）p53蛋白的阳性表达在癌组织和癌旁组织中分别为47．6％和38．1％；有淋巴结转移的病例p53蛋白表达52．8％。（2）癌组织中p53外显子7的突变率为23．9％；癌旁组织中突变率为19．0％。癌组织中p53外显子6的突变率为10．5％；癌旁组织为8．6％。癌组织中p53外显子8，9的突变率为1．9％；癌旁组织为1．0％。结论有淋巴结转移的病例中，筇3外显子的突变率和蛋白的表达率均明显增高，提示p53外显子的突变在胃癌的发生发展中是一个重要因素，并促进肿瘤的转移。p53基因突变与p53蛋白高表达在癌组织和癌旁组织中无显著差异。     

抑癌基因p16在肝细胞癌及癌旁组织中的分布,表达及意义

目的 :探讨抑癌基因 p16与原发肝癌 (primaryhepatocellularcarcinoma ,HCC)发生及恶性程度的关系。方法 :p16是一种新的抑癌基因 ,应用免疫组织化学法检测了 6 9例HCC和 6 3例癌旁组织的 p16表达。结果 :p16蛋白免疫组织化学阳性信号为棕黄色颗粒 ,主要分布在胞浆 ,少数细胞核内也可见阳性显色 ,p16蛋白在癌组织及癌旁组织中的阳性率分别为 2 6 5 % (18/6 9)和 92 % (5 8/6 3) ,两者比较差异显著 (P <0 0 1)。 6 9例HCC标本 ,Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中 p16蛋白的检出率分别为 5 2 6 % (10 /19)、 2 3 3 % (7/30 )、5 % (1/2 0 ) ,p16蛋白在高分化HCC中的表达率明显高于低分化HCC组 (P <0 0 5 )。结论 :抑癌基因 p16的表达和分布与HCC发生、发展及恶性程度有密切的关系 ,提示p16基因失活可能发生在HCC的早期     

P63和MDM2在下咽癌中的表达

目的 :探讨下咽癌中蛋白质P6 3和MDM2的表达及其与癌增殖和分化的关系。方法 :采用免疫组化 (envision)法分析 33例下咽癌中P6 3和MDM2的表达。结果 :P6 3蛋白表达阳性率正常上皮为 5 5 .0 % ,癌旁组织为 93.3% ,下咽癌组织为 90 .9% ;MDM2蛋白表达阳性率正常上皮为 5 .0 % ,癌旁组织为 6 6 .6 % ,下咽癌组织为 5 1.5 % ,P6 3蛋白与MDM2蛋白表达在正常上皮、癌旁组织、下咽癌组织差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。P6 3与MDM2无显著相关性。结论 :P6 3和MDM2基因在下咽癌发生、发展中有重要作用。     

PTTG基因在人肝细胞癌中的表达

研究PTTG基因与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :应用免疫组织化学 (SP法 )和原位杂交 (DNA -RNA)技术检测 6 1例人肝细胞癌和癌旁肝组织中PTTGmRNA和PTTG蛋白的表达。结果 :PTTGmRNA在肝癌和癌旁组织阳性率分别为 72 .1% (44 /6 1)和 93.4 % (5 7/6 1) ,肝癌和癌旁组织PTTG蛋白阳性率分别为 78.7% (48/6 )和 91.8% (5 6 /6 1) ,相关性研究显示PTTGmRNA和PTTG蛋白表达结果关系密切 (P <0 .0 0 5 )。结论 :PTTG基因的过度表达参与了人肝细胞癌的发生发展过程。     

P21^wafl、MDM2和P53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨P21waf1、MDM2、P53蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及其对于HCC诊断的意义.方法应用免疫组织化学SP法检测61例原发性肝细胞癌及59例相应癌旁肝组织中P21waf1、MDM2和P53蛋白的表达,并对它们之间的关系及其与肝癌的临床病理特征的关系进行统计学分析.结果P21waf1、MDM2和P53蛋白在HCC中的阳性表达率分别为31.15%(19/61)、26.23% (16/61)和57.38% (35/61),明显高于癌旁肝组织(P＜0.001).HCC中P21waf1与MDM、P53蛋白表达无明显相关性(P＞0.05).这三种蛋白的表达与肝硬化及不典型增生无关(P＞0.05).结论 P21waf1、MDM2和P53高表达均在HCC的发生中起作用,但不是早期事件;HCC中存在不依赖wt-P53途径的P21waf1的表达,HCC 中P21waf1的表达不能反映p53的基因状态.     

p16/Rb蛋白表达及核因子-κB活性在肝细胞肝癌中的意义

目的　探讨 p16和Rb蛋白 (pRb)以及核因子 κB(NF κB)活性在肝细胞肝癌 (HCC)发生中的相互关系及作用。方法　以Western印迹检测 35例HCC及癌旁组织 (距肿瘤至少 3cm)中p16蛋白和 pRb表达 ;以凝胶电泳迁移实验 (EMSA)和竞争实验检测组织中NF κB转录活性。 结果HCC及癌旁组织 p16蛋白表达率分别为 37% (13/ 35 )和 4 8% (17/ 35 ) ;pRb表达率分别为 34%(12 / 35 )和 74 % (2 6 / 35 ) ,两组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;NF κB有结合活性者分别为 77% (2 7/ 35 )和 86 % (30 / 35 )。p16蛋白和pRb均表达的HCC中NF κB有转录活性者占 4 0 % (4/ 10 ) ,两者均无表达的HCC中NF κB有转录活性者占 90 % (18/ 2 0 ) ,两组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;p16和 pRb均表达的癌旁组织中核因子 κB有转录活性者占 76 % (13/ 17) ,两者均无表达的癌旁组织中NF κB有转录活性者占 89% (8/ 9) ,差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论　p16功能缺失在HCC发生过程中是早期事件 ,Rb功能缺失出现较晚 ;p16蛋白和Rb蛋白表达呈正相关关系 ;p16或Rb蛋白表达缺失 ,除影响细胞周期 ,还通过影响NF κB活性而抑制肝细胞凋亡 ,在HCC发生发展中发挥重要作用。     

MDM2蛋白过度表达致p53功能失活在原发性肝细胞癌发生中的作用

OBJECTIVE: This paper was to evaluate the role of p53 mutation, and p53 and MDM2 proteins expression in hepatocarcinogenesis. METHODS: Using streptavidin-peroxidase conjugation method (SP), the expression of p53 and MDM2 proteins was observed in 61 cases of primary hepatocarcinomas (HCC) and 59 cases of corresponding paracancerous tissue, among which p53 mutations in exons 5-8 were detected in 21 cases by polymerase chain reaction single-strand confirmation polymorphism analysis (PCR-SSCP). RESULTS: Positive nuclear p53 and MDM2 immunostainings were demonstrated in 57.38% (35/61) and 26.23% (16/61) of HCC, and 1.69% (1/59) and 3.39% (2/59) of corresponding paracancerous tissue, respectively. The expressions of p53 and MDM2 proteins in HCCs were significantly higher than those in paracancerous tissues (P < 0.01). The expressions of p53 and MDM2 were not significantly correlated (P > 0.05). There were 42.86% (9/21) mutations in exon 7 of p53 gene and no mutation was observed in exons 5, 6, 8 in HCCs and in paracancerous tissues. In cases of p53 mutations, there were 66.67% (6/9) of p53 overexpression and 11.11% (1/9) of overexpression of both p53 and MDM2. MDM2 overexpression also appeared in 25% (3/12) of cases without mutation. CONCLUSIONS: Mutation of p53 gene and functional inactivation of p53 resulting from MDM2 overexpression play an important role in carcinogenesis of HCC. It is possible that p53 mutations and MDM2 overexpression induced by other mechanisms are involved in carcinogenesis of HCC.     

Oncogene Mdm2 takes part in hepatocarcinogenesis

1　ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＭｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｐ53ｇｅｎｅａｒｅｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎａｌｔｅｒａｔｉｏｎｆｏｕｎｄｉｎｈｕｍａｎｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓ[1,2 ] .ＢｕｔｔｈｅｒｅｈａｖｅｂｅｅｎｆｅｗｒｅｐｏｒｔｓａｂｏｕｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＭｄｍ 2-ｉｎｄｕｃｅｄＰ53ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎＨＣＣ .Ｗｅａｎａ ｌｙｚｅｄｔｈｅｐ53ｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎｅｘｏｎｓ 5～ 8ｂｙｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ -ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆ…     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

P53 Gene Mutation and Expression of MDM2, P53, P16 Protein and their Relationship in Human Glioma

To investigate the effect of P53 protein accumulation and p53 gene mutation in the pathogenesis of glioma and to study the role of MDM2, P53 and P16 protein in glioma formation and progression and their relationship with each other, LSAB immunohistochemical staining method and non-isotopic PCR-SSCP techniques were used to detect the expression of MDM2, P53 and P16 protein and p53 gene mutation in 48 cases of gliomas. The results showed that the positive expression rate of MDM2, P53 and the negative rate of P16 was 22.9 %, 41.7 % and 60.4 %, respectively. The latter two in high grade （grade Ⅲ , Ⅳ） gliomas had a significantly higher rate than in the low grade （grade Ⅱ ） gliomas. Moreover, the co-expression of MDM2 and P53 protein was confirmed in only 1 of 48 cases. No significant difference was found in the rate of the expression of MDM2 between high grade and low grade gliomas （P〉0.1） . PCR-SSCP results showed that mutation of 5 --8 exons of p53 gene was detected in 17 out of 48 cases （35.42 %） . Mutation was detected in 16 of 20 cases of positive p53 expression, and another one was detected in 28 cases of negative expression cases. The correlation between p53 mutation and p53 immunopositivity was observed in 89.6 % of the cases. P53 gene mutation and the level of MDM2, P53 and PI6 protein were not related to age, gender of the patients, tumor location and size. It is concluded that the mutation of p53 and deletion of p16 might play important roles in the tumorigenesis of gliomas and it was significantly associated with the grade of tumor differentiation. P53 protein accumulation can indirectly reflect p53 mutation. MDM2 amplification and overexpression might be an early event in the growth of human gliomas.     

p53和MDM2蛋白在胰腺癌组织中表达的临床病理学意义

目的：探讨胰腺浸润性导管癌中p53和MDM2蛋白表达的临床病理学意义。方法：应用免疫组织化学方法检测59例胰腺癌标本中p53和MDM2蛋白表达,观察与胰腺癌临床病理学参数的关系。结果：p53与MDM2蛋白阳性表达率分别为67．8％和28．8％;p53蛋白在〈65岁中表达率较高,MDM2蛋白表达与年龄无关;p53和MDM2蛋白阳性表达组与其他组相比。生存时间明显缩短。结论：p53和MDM2蛋白的过表达可能反映了胰腺癌的恶性增生过程,两者的联合表达有助于判定肿瘤的预后。     

p53基因突变与人食管癌转移的关系研究

目的：探讨ｐ５３基因突变与人食管癌淋巴结转移的关系。方法：采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术,对４７例食管瘤组织中ｐ５３ 基因第５～８外显子进行了突变分析。结果：４７例食管癌标本中,ｐ５３基因第５～８外显子出现突变者２０例,其突变率为４２．６％;其中２２例伴有淋巴结转移的原发癌中１３例出现了突变（５９．１％）,其与无淋巴结转移组（２８．０％,７／２５）相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ｐ５３基因突变与人食管癌的转移可能关系密切。     

PTTG基因表达在原发性肝细胞癌发生中的作用及其机制的初步研究

目的研究PTTG基因表达在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用.方法应用原位杂交(DNA-RNA)技术与免疫组化SP法分别检测61例原发性肝细胞癌及癌旁肝组织中PTTG mRNA和PTTG蛋白及c-myc mRNA和c-myc蛋白的表达.结果在原发性肝细胞癌(HCC)中,PTTG mRNA和PTTG蛋白阳性细胞呈弥漫性、小巢状或散在分布,在胞浆内呈全浆型、膜下型表达.PTTG mRNA和PTTG蛋白在HCC中表达率分别为72.1%(44/61)和78.7%(48/61),在癌旁肝组织中分别为93.4%(57/61)和91.8%(56/61),在HCC中表达明显低于癌旁组织(P＜0.005,P＜0.05).相关性检验显示癌及癌旁PTTG基因表达与c-myc基因表达呈正相关(P＜0.005).结论PTTG基因过度表达参与了肝细胞癌发生发展,过度表达的PTTG可能通过激活癌基因c-myc来参与肝细胞恶性转化和肝细胞癌的发生发展过程.     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

MDM2和p53在口腔黏膜鳞状细胞癌和口腔白斑中的表达

目的：探讨分析鼠双微染色体2（murine double minute 2,MDM2）和p53在正常人口腔黏膜（NOM）、口腔白斑（OLK）及口腔黏膜鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其在OLK及OSCC发生发展中的作用和临床诊断意义。方法：选取2010年1月至2013年1月我院收治的口腔黏膜鳞状细胞癌患者56例和口腔白斑患者44例,随机选取50例健康人员为对照组,采用免疫组织化学SP方法对50例NOM、56例OSCC以及44例OLK患者的组织中MDM2蛋白和p53蛋白进行检测。结果：MDM2和p53阳性表达率在NOM、OLK及OSCC组织中呈明显的逐渐升高趋势,对照组正常黏膜中MDM2和p53阳性表达为0,口腔白斑组MDM2和p53阳性表达为56.8%和38.6%;口腔鳞癌组MDM2和p53阳性率分别为76.8%和69.6%,与对照组相比均差异显著（P〈0.05）;口腔白斑组和口腔鳞癌组在MDM2阳性率无显著性差异（P〉0.05）,而p53阳性率差异显著（P〈0.05）。MDM2和p53蛋白在口腔白斑组（r=0.628）及口腔鳞癌组（r=0.829）均呈现正相关。结论：MDM2和p53蛋白功能异常是口腔黏膜上皮发生癌变的重要因素之一。MDM2和p53表达水平与OLK和0SCC发展进程密切相关,在口腔鳞癌的形成过程中起协同作用。