胆红素对HBV DNA定量检测结果的影响

目的探讨高胆红素血清对实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的影响,并选择有效减低胆红素对HBV DNA测定干扰的方法。方法将不同浓度的HBV DNA标准品(S1-S4:3.0×10~7、3.0×10~6、3.0×10~5、3.0×10~4IU/ml)按相同比例分别添加到胆红素正常血清和高胆红素血清中,按不同浓度胆红素进行分组来考察不同浓度胆红素血症对HBV DNA测定结果的影响程度大小,然后再分别测定HBV DNA的结果,每个标本重复检测三次,同时观察扩增曲线是否存在差异。对影响测定的血清标本作10、100、1000倍稀释后,进行检测,并收集5例临床高胆红素的乙肝血清标本进行验证。结果血清胆红素浓度介于401~500μmol/L、501~600μmol/L、600μmol/L三个组,HBV DNA定量检测结果高于胆红素正常血清组,差异有统计学意义(P0.05),血清胆红素浓度浓度介于20.6~100μmol/L、101~200μmol/L、201~300μmol/L和301~400μmol/L四个组,与胆红素正常血清组比较,差异无统计学意义(P0.05);血清胆红素浓度高于400μmol/L血清扩增时,扩增曲线先缓慢升高,其基线高于标准品,其阈值线处于拐点之下非S扩增区,之后升高呈现S型曲线;10、100、1000倍稀释后,扩增曲线平行且等间距,结果一致性较好。5例高胆红素血清有4例在定阈值线时,其阈值线处于拐点之下非S扩增区,定值偏高,结果高于稀释后的标本,差异有统计学意义(P0.05);有1例阈值线处于拐点处,其斜率低于标准品,结果低于稀释后的标本,差异有统计学意义(P0.05)。结论总胆红素高于400μmol/L对荧光定量PCR检测HBV DNA结果存在影响,通过稀释一般就可以降低胆红素因素干扰。     

斑点核酸杂交和荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA方法比较

目的评价斑点杂交(DH)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的临床应用价值.方法用DH和FQ-PCR分别检测乙型肝炎患者血清239例和健康体检者血清41例的HBV DNA.乙型肝炎血清学标志物用ELISA测定.结果用DH和FQ-PCR检测HBV DNA阳性率分别为HBeAg(+)组78.07%和100%(P<0.01);抗HBe(+)组18.18%和77.27%(P<0.01);HBeAg(-)、抗HBe(-)组11.86%和44.07%(P<0.01).健康体检者两法均为阴性.结论 FQ-PCR对乙型肝炎诊断、传染性的判断和抗病毒药物疗效评价方面比DH更具有临床应用价值.     

斑点核酸杂交和荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA方法比较

目的　评价斑点杂交 (DH)和荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测乙型肝炎病毒核酸 (HBVDNA)的临床应用价值。方法　用DH和FQ PCR分别检测乙型肝炎患者血清 2 39例和健康体检者血清 4 1例的HBVDNA。乙型肝炎血清学标志物用ELISA测定。结果　用DH和FQ PCR检测HBVDNA阳性率分别为 :HBeAg( )组 78.0 7%和 10 0 % (P <0 .0 1) ;抗HBe( )组 18.18%和 77.2 7% (P <0 .0 1) ;HBeAg( )、抗HBe( )组11.86 %和 4 4 .0 7% (P <0 .0 1)。健康体检者两法均为阴性。结论　FQ PCR对乙型肝炎诊断、传染性的判断和抗病毒药物疗效评价方面比DH更具有临床应用价值。     

FQ--PCR检测乙型肝炎患者血清HBV DNA

目的评价荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA的临床应用价值.方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测乙型肝炎患者血清251份和健康体检者血清116份的HBV DNA和HBV血清标志物.结果HBsAg、HBeAg和抗-HBc 3项阳性、HBsAg、抗-HBe和抗-HBc 3项阳性以及抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc同时或分别阳性的样品,HBV DNA阳性率分别为96.5%、56.6%和12.3%,HBV DNA拷贝数分别为1.12×10s/ml、1.45×106/ml和6.61×104/ml.用ELISA检测HBeAg阳性率仅为FQ-PCR检测HBV DNA阳性率的55.4%.结论FQ-PCR对乙型肝炎早期诊断,传染性的判断及疗效考核有临床实用意义.     

乙型肝炎血清标志物与HBV—DNA定量检测相关性探讨

目的探讨乙型肝炎（下称乙肝）患者大、小三阳血清与乙肝病毒（HBV）DNA定量的相关性。方法对420例酶联免疫吸附试验法检测为乙肝大、小三阳的血标本，进行荧光定量-聚合酶链反应（FQ-PCR）定量检测HBV—DNA。结果大三阳组（HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性）147例，HBV-DNA阳性141例，阳性率为96％；小三阳组（HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性）273例，HBV-DNA阳性195例，阳性率为71％。结论HBsAg和HBeAg可作为检测HBV感染和复制的量化指标；HBV定性和HBV-DNA同时检测，对临床诊断，治疗方案的选择和药物疗效观察有一定的指导意义。     

用聚合酶链反应检测乙肝患者HBV DNA

检测乙肝病毒HBV DNA 是诊断乙肝判断HBV复制的最重要的指标之一.用聚合酶链反应(PCR)在体外进行基因扩增可将体内极微量的HBV DNA扩增10~6倍,其灵敏度远远超过了目前常规应用的DNA 杂交技术.最近,我们用此方法对乙肝患者进     

荧光定量聚合酶链反应检测肝病患者HBV DNA

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法的临床应用价值.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和FQ-PCR法对240例不同的肝病患者及108例健康体检者进行乙型肝炎病毒标志物(HBVM)以及HBV DNA定量检测.结果不同临床类型(急慢性乙肝患者、肝硬化和肝癌)患者血清中HBV DNA的阳性检出率的差异具有显著性(x2=9.40,P<0.05);不同人群血清中HBV DNA阳性检出率的差异亦具有显著性(x2=125.31,P<0.001).ELISA检测结果为"HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)"和"HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)"的HBV感染者,体内HBV DNA含量显著高于HBVM阴性者;e抗原阳性和阴性者体内HBV DNA含量的差异亦具有显著性.HBV、HCV重叠感染者血清HBV DNA含量明显低于单纯HBV感染者(P<0.05).结论 FQ-PCR法检测HBV DNA具有灵敏度高、特异性好、结果可靠的优点,可反映HBV真实感染和低复制状态,对于乙肝的临床诊断、治疗方案选择和预后判断具有重要的指导意义.     

乙型肝炎病毒血清DNA定量检测的临床意义

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV DNA)定量检测的临床意义 ,以及与乙型肝炎血清学e系统 (HBe)标志、丙氨酸转氨酶 (ALT)和天冬氨酸转氨酶 (AST)水平的相关性。方法　采用荧光标记探针定量聚合酶链反应 (PCR)技术、酶联免疫吸附测定法及速率法 ,对 14 0例乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒血清DNA含量、血清学标志、ALT和AST进行检测 ;同时动态检测了 2 0例乙肝患者 2 4周拉米夫定治疗期间的血清HBe标记系统和HBV DNA含量变化。结果　e抗原 (HBeAg)阳性组的HBV DNA含量 (M =6 .4 8)显著高于e抗体 (HBeAb)阳性组的HBV DNA含量 (M =4 .2 8) ,差异有统计学意义 (H =2 8.4 8,P <0 .0 0 1) ;不同临床类型乙肝患者的HBV DNA含量检测结果之间的比较 ,差异无统计学意义 (H =2 .181,P >0 .0 5 ) ;在拉米夫定治疗期间 ,血清HBV DNA含量的下降和转阴明显先于血清学标志系统的转换。结论　HBeAg是反映HBV DNA复制的重要指标 ,HBeAg阳性表示乙型肝炎病毒复制活跃 ,但在抗病毒治疗期间 ,血清学标志指标反映HBV复制状态存在局限性 ,HBV DNA定量检测是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标 ;乙型肝炎患者病程的变化、ALT和AST水平与HBV复制是否活跃没有直接相关关系     

溶血对荧光定量PCR检测不同含量HBV DNA的影响

目的 研究不同程度溶血IL对荧光定量PCR检测不同含量HBV DNA的影响.方法 利用荧光定量PCR方法研究溶血对其检测不同含量HBV DNA的影响,并利用SPSSI7.0对结果进行统计学分析.结果 极重度溶血组(12.0 g/LHb)分别与高、中、低3个拷贝程度(106～107 IU/mL、104～105 IU/mL...     

24601例HBV阳性患者血清DNA水平流行病学分析

目的了解本地区乙型肝炎病毒（HBV）DNA载量流行病学特点。方法采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）定量检测2002年至2009年间HBV血清学标志物阳性的24 601例患者的HBVDNA载量。结果近8年间HBV DNA阳性率依次为46.99%、48.52%、54.07%、49.27%、51.76%、69.17%、67.14%和67.53%（r=0.857,P=0.007）;病毒载量分别为6.61±1.56、6.85±1.51、6.46±1.69、5.95±1.52、5.80±1.47、5.90±1.64、5.80±1.61和5.60±1.59（r=-0.934,P=0.001）;小于检测下限（〈103）百分率分别为1.92%、0.27%、1.46%、2.07%、8.42%、19.17%、21.68%、23.69%（r=0.929,P=0.001）。病毒载量最高峰值左移,由高载量（6.00~7.99）转为低载量（〈3.00）,而次高峰则由低载量转为高载量,由高载量的单峰逐渐呈现出双峰分布。结论近8年HBV DNA总阳性率逐年增高,HBV DNA阳性患者病毒载量均值逐年下降,小于检测下限载量患者比例逐年增加,分析认为口服抗病毒药物的应用普可能影响了病毒载量分布的变化。     

荧光定量聚合酶链反应检测肝病患者HBV DNA

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)法的临床应用价值。方法　采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和FQ PCR法对 2 4 0例不同的肝病患者及 10 8例健康体检者进行乙型肝炎病毒标志物 (HBVM )以及HBVDNA定量检测。结果　不同临床类型 (急慢性乙肝患者、肝硬化和肝癌 )患者血清中HBVDNA的阳性检出率的差异具有显著性 (x2 =9.4 0 ,P <0 .0 5 ) ;不同人群血清中HBVDNA阳性检出率的差异亦具有显著性 (x2=12 5 .31,P <0 .0 0 1)。ELISA检测结果为“HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)”和“HBsAg(+)HBeAb(+)HB cAb(+)”的HBV感染者 ,体内HBVDNA含量显著高于HBVM阴性者 ;e抗原阳性和阴性者体内HBVDNA含量的差异亦具有显著性。HBV、HCV重叠感染者血清HBVDNA含量明显低于单纯HBV感染者 (P <0 .0 5 )。结论　FQ PCR法检测HBVDNA具有灵敏度高、特异性好、结果可靠的优点 ,可反映HBV真实感染和低复制状态 ,对于乙肝的临床诊断、治疗方案选择和预后判断具有重要的指导意义     

HBV免疫标志物及DNA检测结果分析

目的通过了解HBV免疫标志物(HBVM)与HBV DNA的相互关系,为临床诊断和治疗乙肝提供可靠的依据。方法收集1156例受检者临床血清标本,同时采用酶联免疫吸附试验检测HBVM和荧光定量PCR检测HBV DNA,比较HBVM不同血清模式HBV DNA检出率及其含量,分析HBVM与HBV DNA之间的关系。结果血清HBV DNA阳性检出率及其量与HBVM有关,HBsAg、HBeAg抗HBc阳性血清模式组与其它各组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论HBeAg与HBV DNA含量明显相关;HBeAg阴性不能代表病毒复制停止。     

e抗原阴性乙肝患者HBV—DNA检出率与临床疾病状态的关系

研究肝病患者ｅ抗原转阴后病毒复制情况以及ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与临床疾病状态的关系。方法采用ＰＣＲ技术对１０８例ｅＡｇ阴性、ＨＢｓＡｇ阳性肝病患者进行血清ＨＢＶ－ＤＮＡ分析，同时进行肝功能指标检测。结果５０．９％的患者体内仍存在乙肝病毒复制。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性无症状携带者２７．８％、慢迁肝４５．８％、慢活肝７７．８％、肝硬化５６．５％、肝癌３７．５％。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性组ＡＬＴ值为１３８．６±１０２．８ＩＵ，而ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性组为３４．２±３０．２ＩＵ。结论ｅＡｇ阴性乙肝病毒感染者中仍有相当一部分存在乙肝病毒复制。慢性活动性肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率最高。但是疾病发展到晚期，病毒复制能力又开始下降。     

两种乙型肝炎病毒DNA定量检测方法的比较与评价

目的：评价两种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA方法的特点，方法：用美国DIGENE公司生产的Hybrid Capture-II HBV DNA试剂（HC－Ⅱ）和深圳匹基生物工程股份有限公司生产HBV DNA定量荧光PCR检测试剂（PG），定量检测HBsAg阳性的慢性乙肝患者血清中的HBV DNA，结果：HC－Ⅱ试剂的HBV DNA检测阳性率高达98．6％，PG试剂达到94．6％，两者的符合率为93．2％。用系列稀释的患者血清，测定两种定量检测方法的灵敏度，PG试剂略高于HC－Ⅱ试剂，HCⅡ在HBVDNA浓度较高时的关系精度较好，而在HBV DNA低滴度时，两者的定量误差均加大。用两种HBV，DNA定量检测方法监测抗病毒药物治疗慢性乙型肝炎的疗效，所测定的HBV DNA滴度呈相同变化趋势。结论：两种HBV DNA定量检测方法均有较高的灵敏度，在抗病毒药物疗效观察方面有较高的应用价值。     

HBV—DNA荧光定量PCR检测下限的确立

目的 确立本实验室荧光定量PCR检测HBV-DNA项目的检测下限.方法 分别测定原倍HBV-DNA质控血清及经100、200倍稀释后HBV-DNA含量.结果 原倍质控血清测定结果的均值为3.63×104 IU/mL（4.56）,在给定靶值范围2.14×104～2.14×105 IU/mL（4.33～5.33）的低值附近;100倍稀释后的检测结果的均值为3.32 × 102 IU/mL（2.52）,在试剂盒最低检测下限（500 IU/mL）以下,且100份标本能100%定量检测.结论 本实验室设备及所用的试剂、方法对HBV-DNA〉500 IU/mL的标本完全有能力定量检测;检测下限为500 IU/mL是符合要求的.     

标本扩增效率的计算及其对HBV DNA定量结果的影响

目的建立分析标本扩增效率的方法，分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图，计算得到Ct，HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8／ml的标本的扩增效率，井用得到的标本实际扩增效率加以校正。结果4个标准的扩增效率分别为0．80，0．80，0．84和0．85。标本的扩增效率在0．59—0．85之问，其中30份（75％）在0．7—0．85之间，8份（20％）在0．65，0．70之问，其余2份在0．65以下。部分校正后的HBV DNA定量结果比校正前高一个数量级。结论标本与标准的扩增效率不一定相同，标本扩增效率的降低导致标准曲线定量结果偏低，有必要用标本的实际扩增效率对结果进行校正。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA 定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应（PCR）与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测血清标本中乙型肝炎病毒（HBV）DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。     

实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA的比较

目的研究实时荧光聚合酶链反应(PCR)与COBAS Amplicor PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测血清标本中乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平的相关性。方法采用实时荧光定量PCR与COBAS AmplicorPCR-ELISA平行检测110例HBV携带者和40名健康体检者的血清标本,比较2种方法检测结果的相关性和差异程度。结果实时荧光PCR与COBAS Amplicor PCR-ELISA定量检测血清HBV DNA相关性较好,相关系数为0.944,对高浓度标本检测结果的差异性更小。结论我们采用的实时荧光PCR检测血清标本HBV DNA与COBAS Amplicor PCR-ELISA具有较好的相关性,可以为临床提供可靠的结果。