实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

多重荧光定量PCR法快速鉴定MRSA的临床研究

目的 构建mecA、nuc、内标基因3种基因联合检测的单管多通道Taqman探针荧光定量PCR法,用于鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),并与传统细菌培养和鉴定方法进行比较,评估其临床应用价值.方法 以169例临床标本和经常规细菌培养和VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定的金黄色葡萄球菌(SA)15...     

医院感染MRSA的mecA基因和耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因和耐消毒剂基因qacA携带情况。方法采用全自动微生物分析系统VITEK2-COMPACT及配套鉴定卡、药敏卡对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行鉴定和药敏试验．并用WHONET5．6软件进行数据统计分析;用PCR扩增mecA基因和qacA基因,并对阳性基因进行测序分析。结果2009年1月至12月共分离金黄色葡萄球菌260株,其中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）140株f53．8％1．对其中50株进行mecA基因和qacA基因检测,发现mecA基因阳性50株,阳性率为100％。未检出qacA基因。结论50株MRSA菌株均携带meCA基因,均未检测到耐消毒剂基风ⅡacA。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的评价与应用

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的临床应用价值。方法经培养鉴定的70例已知细菌中22例为MRSA,48例为非MRSA,对已知细菌用实时荧光定量PCR进行检测,了解该方法的特异性和敏感性。对临床88例医护人员和患者的鼻拭子进行实时荧光定量PCR检测,了解医院内MRSA的携带情况。结果培养为MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为MRSA,敏感性为100%;培养为非MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为非MRSA,特异性为100%。实时荧光定量PCR检测MRSA的敏感性可确定为1×103cfu/mL。48例患者的鼻拭子mecA耐药基因阳性26例,金黄色葡萄球菌阳性28例,两者同时阳性(即为MRSA)20例,MRSA阳性检出率为41.6%;40例医护人员鼻拭子mecA耐药基因阳性12例,金黄色葡萄球菌阳性13例,两者同时阳性(即为MRSA)9例,MRSA阳性检出率为22.5%。结论实时荧光定量PCR可用于临床对MRSA的快速检测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法的建立和评价

目的建立实时荧光PCR快速筛查耐甲氧西林葡萄球菌株和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株的方法。方法以耐甲氧西林mecA基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中耐甲氧西林葡萄球菌的实时荧光PCR方法,结合对金黄色葡萄球菌的特异性NUC基因进行实时荧光检测,可鉴定是否为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株。以纸片扩散法作为对照方法,对所建立的实时荧光PCR检测方法检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法的整个检测过程只需要1.5h;对22例临床样本进行检测,所建立的荧光PCR方法比纸片法多检出2例耐甲氧西林菌株;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测结果一致。结论本研究建立的实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法不仅能实现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速检测,更可能为指导临床用药提供有价值的参考。     

实时荧光PCR在检测MRSA引起血流感染中的研究

目的建立检测引起血流感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的实时荧光PCR法。方法设计mecA引物,优化荧光实时PCR实验条件,并用该法检测临床分离的78株金黄色葡萄球菌引起血流感染标本,其结果与头孢西丁纸片扩散法的结果进行比较。结果 78株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性38株、阴性40株;头孢西丁纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 51株,经配对卡方检验,荧光实时PCR法检出率显著高于头孢西丁纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA引起的血流感染,比一般MRSA表型检测更加简便、快速。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产色筛选平板法和聚合酶链反应（PCR）检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

多重PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立一种直接、快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重PCR方法。方法设计3对引物,在同一反应管中同时扩增检测mecA、femA和IS431基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果9株MRSA菌株mecA、fe-mA和IS431均阳性,5株凝固酶阴性的耐甲氧西林的葡萄球菌mecA和IS431阳性,7株甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌femA和IS431阳性,11株甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌IS431阳性,而大肠杆菌、肺炎链球菌等非葡萄球菌mecA、femA和IS431均阴性;当MRSA茵浓度达102CFU／ml时就可检出。结论通过同时扩增mecA、femA和IS431基因的多重PCR技术,能准确、快速地鉴定耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的相关性研究

目的研究携带TSST-1和PVL基因的金黄色葡萄球菌耐药特点、分布特征及与致病性的关系。方法临床收集74株金黄色葡萄球菌,采用PCR法检测TSST-1、PVL和mecA基因,纸片扩散法进行17种抗菌剂的耐药性检测。结果 74株金黄色葡萄球菌中mecA基因检出率为55.4%,其中22株检出PVL基因(30.3%),PVL阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为15株(36.6%),甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)为7株(21.2%),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。5株金黄色葡萄球菌中检出TSST-1基因(6.3%),均为MRSA。MRSA耐药性严重,并呈多重耐药性,携带基因PVL和TSST-1的MRSA除对万古霉素敏感外,对其他抗菌剂均耐药。结论携带基因TSST-1和PVL的金黄色葡萄球菌耐药性及致病力更强,增加了临床抗感染治疗的难度。     

葡萄球菌耐消毒剂基因qacA／B检测及临床意义

目的 了解临床分离的葡萄球菌mecA基因及耐消毒剂基因qacA/B的存在状况.方法 临床分离的40株葡萄球菌,分别用头孢西丁(30 μg)筛查法和聚合酶链反应(PCR)法检测mecA基因,同时采用PCR法检测其耐消毒剂基因qacA/B.结果 40株葡萄球菌中36株mecA基因阳性,占90.0%(36/40);11株检出qacA/B基因者均为mecA阳性葡萄球菌,其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),1株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),qacA/B阳性率为27.5%(11/40).结论 含qacA/B基因的葡萄球菌全部为mecA基因阳性,提示对临床常用消毒剂耐药的金黄色葡萄球菌同时也对甲氧西林耐药.因此检测葡萄球菌耐消毒剂基因,对合理选用消毒剂,控制葡萄球菌感染传播具有临床意义.     

多重实时荧光定量聚合酶链反应检测携带耐药基因及肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌

目的 建立一种快速鉴定携带耐药基因和肠毒素A基因的金黄色葡萄球菌的方法.方法 根据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因nuc、甲氧西林耐药基因mecA和肠毒素A基因sea的序列,设计特异性的引物和不同荧光素标记的TaqMan探针,通过反应体系和反应条件的优化,建立了能同时检测鉴定耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌的多...     

qPCR快速检测痰标本中MRSA的临床应用

目的探讨实时荧光定量PCR(qPCR)法快速检测痰液标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法痰标本经裂解获取DNA,应用qPCR法检测mecA和Sa442基因,同时对痰标本进行常规培养鉴定。结果以痰培养鉴定结果为金标准,在887份合格痰标本中,PCR检测MRSA的灵敏度为95.7%,特异度为91.2%,阳性预测值为37.8%,阴性预测值为99.7%。结论 qPCR法可用于快速检测痰标本MRSA,排除MRSA的定植和感染。     

引物标记技术在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的在GeXP系统中应用CY5标记的特异引物代替通用引物,建立一种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法设计mecA与nuc基因引物,经聚合酶链反应(PCR)扩增琼脂糖电泳验证引物特异性并优化PCR反应条件。用荧光染料CY5标记单条引物(单独标记上游或下游引物)。以提取的MRSA、甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)核酸为模板液,采用已标记引物进行单重及多重PCR,产物经琼脂糖电泳与GeXP毛细管电泳分析,验证应用效果。再通过采用混合标记引物的GeXP系统检测100株MRSA,分析其应用效果。结果单标记下游引物的GeXP-PCR的杂质扩增峰较少。经GeXP系统检测分析的MRSA、MRCNS、MSSA均出现目的特征峰,能明确辨别其含有大小不同的基因片段,结果与琼脂糖电泳一致;经GeXP系统分析的100株MRSA均含有nuc与mecA片段,与VITEKⅡCompact检测结果相符。结论单独标记下游引物应用于GeXP检测MRSA的方法可行。     

三种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的比较

[摘要]目的:对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)3种检测方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法：用检测mecA基因的PCR扩增法、苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁制片扩散法对临床分离的84株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较。结果:苯唑西林纸片扩散法检的敏感性、特异性分别为97.6%、95.3%,mecA基因的PCR扩增法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性、特异性均为100.0%。结论:PCR技术检测MRSA具有快速、敏感和特异的特点,是一种非常有效的鉴别方法。纸片扩散法简便易行,成本低廉, 尤其是头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性较苯唑西林纸片扩散法更高,值得在临床实验室中推广应用。 [关键词]　耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；mecA基因；PCR；苯唑西林；头孢西丁     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的用PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为参比方法,评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的临床应用价值。方法临床分离的163株葡萄球菌,分别用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、PCR法检测mecA基因,以PCR扩增法检测mecA基因作为参比方法进行比较。结果163株临床分离的葡萄球菌经PCR法检测mecA基因,阳性率为81.0%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为74.1%和83.8%。头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法用于检测MRSA与PCR法检测mecA基因有很好的一致性,其敏感性和特异性均为100.0%,而对于凝固酶阴性葡萄球菌,头孢西丁纸片扩散法比苯唑西林纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性高,敏感性分别为100.0%和94.3%,特异性分别为96.0%和88.0%。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度,但对于mecA基因阴性的凝固酶阴性葡萄球菌,用头孢西丁纸片法检测,约有5%菌株要误报为MRCNS。由于头孢西丁纸片扩散法操作简单,较苯唑西林纸片扩散法检出MRS的敏感度和特异性高,结果与PCR法检测mecA基因有很好的相关性,不需特殊仪器设备,可在临床微生物实验室常规开展。     

西安地区血培养标本分离的MRSA mecA与qacA/B基因检测

目的了解西安地区血培养标本中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)mecA和qacA/B基因携带情况,以便推测其抗药性。方法采用细菌培养鉴定技术和基因扩增方法,对收集2008年1月-2010年2月期间西安地区多家住院与门诊患者血培养标本进行了分离和检测。结果在2年内从西安地区3所医院血培养标本中分离鉴定出56株MRSA,mecA基因均为阳性,携带率为100%;有7株MRSA检出qacA/B基因阳性,携带率为12.5%。结论西安地区部分医院血培养标本分离的MRSA检测出qacA/B基因阳性率为12.5%,携带率较低。     

复合PCR鉴别葡萄球菌及其多重耐药基因

目的　建立既可鉴别金黄色葡萄球菌又可同时检测其耐药基因的分子诊断方法。方法　对应于femB、mecA、ileS基因的 3对引物与快速提取的单菌落模板DNA进行单管同步扩增 ,电泳观察PCR片段 ;mecA、ileS耐药基因扩增结果分别与苯唑西林、莫匹罗星药敏试验对比 ,分析菌株的耐药性。结果　检测femB基因可快速特异性地筛选出金黄色葡萄球菌 ,mecA基因的检出与常规药敏试验鉴定耐甲氧西林葡萄球菌 (MRS)的结果基本一致 ,而拥有ileS基因的全部葡萄球菌分离株对莫匹罗星耐药。结论　复合PCR可快速敏感地从葡萄球菌中区分金黄色葡萄菌 ,并同时检出MRSA和耐莫匹罗星的多重耐药菌株。     

多通道Taqman-探针荧光定量PCR 鉴定MRSA方法的建立

目的 建立基于mec A/nuc/fem B三基因联合的Taqman-探针荧光定量PCR鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 以常规检验标本中分离和采用VITEK 2 Compact微生物分析仪鉴定为凝固酶阳性的MRSA为研究对象,通过PrimerPremier5.0和Beacon Designer 7软件设计针对mec A/nuc/fem B特异性PCR引物及Taqman荧光探针,荧光探针5'端分别采用FAM,HEX及ROX标记,3'端采用BHQ1标记,在荧光定量PCR仪进行检测。结果 ①1 g/dl凝胶电泳结果显示mec A/nuc/fem B三个基因引物特异性较好,扩增出的条带分子量与预期分子量一致且未见非特异性扩增; ②在单管单通道及单管多通道的PCR检测中mec A/nuc/fem B均获得特异性扩增,且三个基因在单管多通道的PCR扩增效果与单管单通道的相类似。结论 成功建立了多通道Taqman-探针荧光定量PCR鉴定MRSA的方法,mec A/nuc/fem B三种基因联合检测可有效区分凝固酶阴性和阳性的MRSA,提高鉴定MRSA的准确率。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的评估实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)MecA耐药基因的价值。方法选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。