锌指基因1对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:研究过锌指基因1(JAZF1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能的影响及其信号通路。方法:体外培养脑胶质瘤细胞株,分为对照组、空载组和过表达组;分别于无血清的RPMI 1640培养基中,加入AdvJAZF1-GFP或空载体Adv-GFP,对照组不予转染腺病毒。MTT法检测细胞活力,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:对照组和空载组细胞活力和凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),过表达组细胞活力低于其他2组、细胞的凋亡率高于其他2组(均P<0.05);对照组和空载组β-actenin、GSK-3β、APC、Bax和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),过表达组β-actenin、GSK-3β、APC和Bax蛋白表达低于其他2组,Bcl-2蛋白表达高于其他2组(P<0.05)。结论:过表达JAZF1可能可通过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控β-catenin、GSK-3β、B...     

miRNA-9过表达对Aβ损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨micro RNA-9(mi R-9)过表达对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤的PC12细胞及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法:PC12细胞分为mi R-9过表达组(E组)、空转染对照组(NC组)、不转染的损伤细胞模型组(NT组),采用CCK-8法检测细胞增殖;采用Annexin-V-PE检测细胞凋亡;采用RT-q PCR检测Bcl-2、Bax m RNA的表达,Western-Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与NC组及NT组比较,E组的PC12细胞转染48 h后增殖增加,凋亡率降低,Bcl-2表达增加,Bax表达下降(P0.05)。结论:mi R-9过表达可保护Aβ损伤的PC12细胞。     

水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞的作用及机制研究

目的研究水飞蓟素(silymarin,SM)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨基因P21、Caspase-3、Bax及Bcl-2在其中有无调控作用。方法取对数生长期人骨肉瘤Saos-2细胞进行实验,实验分对照组及不同药物浓度梯度组,倒置相差显微镜观察细胞形态变化。CCK-8法测定细胞增殖。Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。RT-PCR检测增殖抑制基因P21及凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2m RNA表达水平。Western Blot检测P21、Caspase-3蛋白表达水平。结果对照组细胞生长良好,不同药物浓度组细胞变小、变圆,呈凋亡样改变,浓度越高,上述细胞形态改变越明显。CCK-8检测结果显示,不同药物浓度组细胞增殖受抑制,呈时间及剂量依赖性。Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,与对照组相比,不同药物浓度组细胞凋亡数量增多,呈剂量依赖性。RTPCR检测结果分析显示,与对照组相比,不同药物浓度组增殖抑制基因P21及促凋亡基因Caspase-3、Baxm RNA表达量均明显增加(P<0.05),而抗凋亡基因Bcl-2m RNA表达量明显下降(P<0.05)。Western Blot检测结果分析显示,与对照组相比,不同药物浓度组P21、Caspase-3蛋白表达量均明显增加(P<0.05)。结论水飞蓟素能够抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及诱导其凋亡。水飞蓟素可通过上调基因P21、Caspase-3、Bax表达及下调基因Bcl-2表达对人骨肉瘤Saos-2细胞产生抑制作用。     

小檗碱上调程序性细胞死亡蛋白4抑制黑色素瘤B16细胞增殖及促细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响。方法使用CCK-8法检测细胞增殖活力;使用流式细胞仪检测细胞周期;使用脂质体转染siRNA敲减程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)基因;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)明确敲减情况;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;使用Western-blotting检测PDCD4增殖、凋亡情况及其相关蛋白表达。结果小檗碱可抑制黑色素瘤B16细胞的增殖活力,并将其细胞周期阻滞于G0/G1期; PDCD4是小檗碱抑制B16细胞增殖、促细胞凋亡的关键基因;小檗碱处理可增高PDCD4、Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,降低Ki-67、Bcl-2的表达水平,敲除PDCD4能减弱小檗碱对黑色素瘤B16细胞Ki-67、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的影响。结论小檗碱通过上调PDCD4来抑制黑色素瘤B16细胞增殖并促使其凋亡。     

二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法选用人绒毛膜癌细胞系JEG-3,分为对照组和二甲双胍组(终浓度为5、10、20、40mmol/L)处理48h后,使用流式细胞术和免疫荧光检测细胞凋亡情况,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫蛋白印迹检测凋亡相关基因半胱天冬酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和凋亡调节蛋白(Bax)的mRNA及蛋白变化趋势。结果和对照组相比,二甲双胍组的JEG-3细胞早晚期凋亡率显著上升,同时Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白表达水平显著增加,但Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低。结论二甲双胍可以通过Caspase-3及Bcl-2/Bax通路诱导JEG-3细胞发生凋亡。     

缺氧环境中胸腺素β4基因转染骨髓间充质干细胞凋亡率及Bax和Bcl-2的表达

背景：研究表明体外培养细胞加入胸腺素β4能增加细胞的抗凋亡能力,若在缺氧环境中上调胸腺素β4基因在骨髓间充干细胞中的表达,其抗凋亡能力如何改变,目前鲜见报道。
　　目的：观察胸腺素β4基因修饰的骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的凋亡率改变,并探讨其是否通过调控Bax、Bcl-2表达影响凋亡能力。
　　方法：将携带有胸腺素β4基因的慢病毒转染骨髓间充质干细胞,转染完毕后利用Western blot法检测胸腺素β4在骨髓间充质干细胞中的表达。将细胞分为胸腺素β4转染组、对照病毒组、未转染组,分别置于缺氧环境中。流式细胞仪检测3组细胞凋亡率;Western blot法检测3组细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。
　　结果与结论：Western blot检测结果示,胸腺素β4基因在骨髓间充质干细胞中成功表达。流式细胞仪结果示,胸腺素β4转染组细胞凋亡率较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组凋亡率差异无显著性意义。Western blot结果显示,Bcl-2蛋白在胸腺素β4转染组中表达量较对照病毒组、未转染组高,Bax蛋白在胸腺素β4转染组表达量较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组中Bax、Bcl-2表达差异无显著性意义。提示过表达胸腺素β4基因可增加骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的抗凋亡能力,其可能的作用机制是调控Bax和Bcl-2蛋白表达水平。     

褐藻多糖硫酸酯通过调控PCNA-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨褐藻多糖硫酸酯对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hela细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中PCNA-AS1基因表达水平。转染PCNA-AS1小干扰RNA或PCNA-AS1过表达载体至Hela细胞后,上述相同方法观察干扰PCNA-AS1表达或过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯处理对Hela细胞抑制率、凋亡率及CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达的影响。结果褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白及PCNA-AS1表达水平显著降低(P0.05)。干扰PCNA-AS1表达后,Hela细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯可抑制宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA-AS1表达有关。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞抑制作用的研究

目的研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体蛋白(TRAIL)对前列腺癌(PC-3)及膀胱癌细胞(5637)的抑制作用。方法 PC-3和5637细胞分为对照组(仅加培养液)和实验组(加入40 ng/ml的TRAIL蛋白处理),细胞培养12 h后加入TRAIL蛋白,24 h后应用PCR、Western blot技术检测细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2及凋亡信号通路中Caspase-3和Caspase-8基因和蛋白的表达。结果应用SPSS统计分析软件,组间比较采用t检验,结果显示:PC3和5637细胞在TRAIL蛋白作用24 h后Bcl-2基因和蛋白表达水平均降低,而Caspase-8、Caspase-3基因和蛋白表达则增加。与对照组相比,其差异具显著性意义。结论 TRAIL蛋白通过下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,增强Caspase-8、Caspase-3的表达从而诱导两种肿瘤细胞的凋亡达到抑癌效应。     

上调人1型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的通过构建基因真核表达载体,探讨人1型大麻素受体(hCB1R)对人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-hCB1R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞,免疫印迹(Western blot)法及免疫荧光细胞化学染色(ECL)联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB1R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hCB1R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 hCB1R转染HeLa细胞后表达相对分子质量为40 000的hCB1R蛋白,细胞膜和细胞质中均有hCB1R表达;过表达的hCB1R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示HeLa细胞株呈现凋亡,hCB1R对宫颈癌HeLa细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌HeLa细胞凋亡。结论上调HeLa细胞hCB1R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

银杏叶提取物通过激活PI3K/AKT通路抑制IL-1β诱导血管内皮细胞的凋亡

目的研究银杏叶提取物对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,用IL-1β诱导血管内皮细胞建立细胞凋亡模型:分为对照组、IL-1β组、不同剂量的银杏叶提取物处理组(20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml),对照组为空白对照,IL-1β刺激组给予10 ng/ml IL-1β处理细胞,银杏叶提取物处理组给予相应剂量银杏叶提取物处理细胞。通过CCK-8法检测不同剂量的银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮的增殖影响,流式细胞术检测银杏叶提取物对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路蛋白PI3K、AKT、p-AKT和凋亡蛋白caspase 3、Bax和Bcl-2的表达情况,RT-PCR检测凋亡相关基因caspase 3、Bax和Bcl-2的表达变化。结果不同剂量的银杏叶提取物能显著提高IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力,尤其是200μg/ml的银杏叶提取物组对IL-1β诱导血管内皮细胞的增殖能力作用非常显著。与对照组比较,IL-1β组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显上升,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降。与IL-1β组比较,银杏叶提取物预处理组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白caspase 3和Bax的表达明显下降,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升(P 0. 05)。同时与对照组比较,IL-1β组细胞通路蛋白PI3K和p-AKT蛋白的表达明显下降,而给予银杏叶提取物预处理后,其PI3K和p-AKT蛋白的表达明显上升(P 0. 05)。结论银杏叶提取物对IL-1β诱导的血管内皮细胞的凋亡具有一定的抑制作用,且其具体的抑制机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

Tip30基因过表达对人胃癌细胞生长的影响及分子机制

目的 探讨Tip30基因过表达对人胃癌AGS细胞增殖、凋亡的影响及相关分子机制.方法 人胃癌AGS细胞中Tip30基因过表达采用腺病毒转染法,使用实时定量PCR和Western blotting验证Tip30过表达的效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析p53、Bax、Bcl-2蛋白表达. 结果 过表达组AGS细胞Tip30基因mRNA和蛋白表达水平均显著高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,Tip30过表达后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P＜0.05);Tip30过表达后AGS细胞凋亡率相比对照组显著增大,Tip30过表达促进AGS细胞凋亡与上调p53、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平相关. 结论 Tip30基因过表达可抑制人胃癌AGS细胞增殖活性、体外迁移能力,且促进胃癌细胞凋亡.     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

去松果体对β-淀粉样蛋白诱导海马细胞凋亡及相关基因表达的探讨

目的探讨松果体摘除对β-淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性影响。方法SD大鼠随机分为松果体摘除组和假手术组,术后40d给Aβ1-40右侧海马注射,7d后标本用改进甲醇刚果红染色以及HE、TUNEL法检测海马凋亡细胞、SABC法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达。结果实验组海马细胞凋亡数比对照组增多(P<0.01),Aβ周围Bax表达比对照组增强(P<0.01);而Bcl-2在两组中表达无明显差别(P>0.05)。结论大鼠松果体摘除可以使Aβ1-40诱导海马细胞凋亡增多,与Bax表达增强有关。     

汉黄芩苷通过调控AKT信号通路促进肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的 探究汉黄芩苷(Wogonoside)对抑制肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其机制。方法 体外培养肝癌细胞HepG2,随机分为对照组、汉黄芩苷治疗组、AKT激动剂处理组。通过CCK-8实验检测不同浓度汉黄芩苷对细胞活力的影响,运用Western blot实验检测肝癌细胞内Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平及AKT蛋白磷酸化水平,通过流式细胞技术检测肝癌细胞凋亡程度。结果 与对照组比较,汉黄芩苷治疗组细胞增殖能力显著降低(P<0.05),且存在量效关系,凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达水平显著增加(P<0.05),而抗凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),凋亡程度显著增加(P<0.05)。与汉黄芩苷治疗组相比,AKT激动剂处理组凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著增加(P<0.05),凋亡程度显著降低(P<0.05)。结论 汉黄芩苷具有抑制肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制与调节AKT信号通路...     

Na+/H+交换器-1抑制诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的可能机制

背景肺动脉平滑肌细胞( pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC)的增殖在缺氧肺动脉高压肺血管重构中起重要作用.解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸研究所在前期实验中通过构建 Na+ /H+交换器- 1( sodium/proton exchanger isoform-1, Na+ /H+ exchanger isoform-1, Na+ /H+ antiporter isoform-1, NHE-1)特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,发现 NHE-1抑制可诱导细胞内酸化而抑制 PASMC增殖,并促进其凋亡.但这种促凋亡作用是通过什么途径来完成,尚不清楚.目的探讨 Bcl-2、 Bax蛋白表达在 NHE-1抑制而诱导大鼠 PASMC凋亡中的作用.设计分组对照实验.地点和材料实验在解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所完成.转染表达 NHE-1特异性核酶基因的体外培养大鼠 PASMC( PRZ细胞)、转染 PLXSN空载体的大鼠 PASMC( PX细胞)、未处理大鼠 PASMC细胞( PA细胞)为前期实验所制备.干预已构建 NHE-1特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,同时转染 pLXSN空载体入另一组大鼠 PASMC内,后者与未转染的大鼠 PASMC细胞为对照组.用荧光指示剂( Fura-2/AM)测定法检测转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化; RT-PCR方法检测细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化,免疫组化法检测细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.主要观察指标①转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化.②细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化.③细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.结果转染 NHE-1特异性核酶基因后,大鼠 PASMC内 [Ca2+ ]i显著升高,细胞内 [Ca2+ ]i在 PA细胞 [(95.94± 6.39) nmol/L]与 PX细胞 [(98.08± 7.37) nmol/L]之间差异无显著性意义( P 》0.05),而 PRZ细胞 [(198.08± 16.59) nmol/L]显著高于 PA细胞及 PX细胞 , 差异有显著性意义( P《 0.001).Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的平均积分光密度分别为 2.21± 0.18, 2.09± 0.30, 1.45± 0.20), Bax mRNA和蛋白表达显著增加( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的 ABax/Aβ-actin分别为 0.17± 0.02, 0.23± 0.06, 0.59± 0.08).结论 NHE-1抑制诱导的 PASMC凋亡与 [Ca2+ ]i增加、 Bcl-2表达降低及 Bax表达增加有关.     

去松果体对β—淀粉样蛋白诱导海马细胞凋亡及相关基因表达的探讨

目的：探讨松果体除对β－淀粉样蛋白（Aβ）神经毒性影响。方法：SD大鼠随机分为松果体除组和假手术组，术后40d给Aβ1-40右侧海马注射，7d后标本用改进甲醇刚果红染色以及HE、TUNEL法检测海马凋亡细胞、SABC法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达。结果：实验组海马细胞凋亡数比对照组增多（P＜0．01），Aβ周围Bax表达比对照组增强（P＜0．01）；而Bcl-2在两组中表达无明显差别（P＞0．05）。结论：大鼠松果体除可以使Aβ1-40诱导海马细胞凋亡增多，与Bax表达增强有关。     

沉默MADD基因诱导甲状腺癌细胞凋亡及机制研究

目的研究沉默有丝分裂原激酶活化死亡结构域蛋白(MADD)基因对甲状腺癌细胞SW579凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人甲状腺癌细胞SW579,将MADD小干扰RNA(MADD siRNA)转染至甲状腺癌细胞,同时转染阴性对照(siRNA Control)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测细胞中MADD的表达,确定转染效率。当细胞转染后48 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达情况。结果转染后甲状腺癌细胞中MADD的转录和表达水平显著降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);MTT法检测结果显示沉默MADD能够抑制甲状腺癌细胞增殖;流式细胞术检测结果显示,沉默MADD能够诱导甲状腺癌细胞凋亡;Western blot检测结果显示,沉默MADD能够上调甲状腺癌细胞中Cleaved Caspase-3和Bax蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论沉默MADD能够在体外抑制甲状腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与活化Caspase-3及上调Bax蛋白的表达相关。     

吲哚美辛诱导的胃癌细胞凋亡与Wnt/β-连接蛋白信号通路及其下游凋亡调控蛋白的关系

目的:探讨Wnt/β-连接蛋白(Catenin)信号通路及其下游凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达与吲哚美辛引起的胃癌细胞凋亡的关系.方法:用终浓度为50、100、200 μmol/L的吲哚美辛干预SGC7901细胞24 h,并设不加吲哚美辛的对照组.用CCK8法检测细胞增殖活性,用TUNEL法检测涂片中胃癌细胞的凋亡率,用Western blot法检测细胞内β-Catenin、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果:SGC7901细胞在50 μmol/L的吲哚美辛作用24 h后细胞存活率为(92.71±4.81)％,100和200 μmol/L浓度组的细胞存活率则明显降低.对照组细胞的凋亡率为0,吲哚美辛干预后的细胞的凋亡率明显升高.对照组β-Catenin和Bcl-2蛋白表达最高而Caspase-3表达最低.吲哚美辛干预后β-Catenin和Bcl-2的表达明显降低,Caspase-3表达明显增高,且表现出明显的浓度依赖性.结论:Wnt/β-Catenin信号通路在吲哚美辛引导的SGC7901细胞凋亡过程中发挥重要的作用,其下游调控蛋白Bcl-2、Caspase-3共同参与了这一过程的调控.