晶状体损伤对视神经损伤后再生影响的研究

目的观察单纯视神经损伤及视神经损伤联合晶状体损伤后视神经中Nogo-A mRNA及Nogo-A的表达,探讨晶状体损伤促进视神经损伤后再生的机制。方法 66只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组,6只)、单纯视神经损伤组(B组,30只)和视神经损伤联合晶状体损伤组(C组,30只)。分别于造模后7d、14d、21d处死大鼠2只(A组)、10只(B组)、10只(C组),光镜下观察视神经的病理变化,免疫组织化学染色检测Nogo-A表达情况,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、半定量分析不同组视神经Nogo-A mRNA的表达。结果大鼠正常视神经中表达Nogo-A mRNA及Nogo-A,但表达量较低;损伤视神经后7d Nogo-A mRNA的表达量显著升高,至伤后21d B组及C组均维持较高的水平。B组损伤后7d Nogo-A表达阳性的细胞数开始增多(136.80±3.94),与A组比较差异有统计学意义(P<0.05),并保持高表达;C组损伤后21d Nogo-A的表达较B组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论视神经损伤后髓鞘相关抑制因子Nogo-A表达增高,晶状体损伤促进视神经再生的机制可能与Nogo-A有关。     

实时荧光聚合酶链反应检测视神经损伤后NgRmRNA表达的变化

目的：定量检测成年大鼠视神经损伤后NgR mRNA表达的变化情况,探讨Nogo-A和NgR在视神经损伤后的表达变化间的关系.方法：采用荧光定量PCR（：Fluoresence Quantive polymerase chainreaction,FQ-PCR）法,定量分析视神经损伤后1,3,5,7,15d视神经NgRmRNA表达的变化.结果：大鼠视神经钳夹伤后其NgR mRNA表达无显著变化.结论：Nogo-A和其受体NgR表达变化的不一致,提示了Nogo-A除了抑制再生外,可能还有其它尚未阐明的功能.     

Nogo-A mRNA在视神经损伤后视网膜中的表达和分布

目的 定位检测Nogo-A mRNA在成年大鼠正常视网膜和视神经损伤后视网膜中的表达和分布。方法 将90只成年大鼠随机分为2组，有眼为对照组，左眼为实验组。实验组在眼球后2mm用视神经损伤夹夹持9s，根据处死时间不同分别于夹伤后1、3、7d取出大鼠眼球，沿其长轴制作视网膜冰冻切片。应用原位杂交方法检测视网膜中Nogo-A mRNA的表达和定位。将切片图像输入图像分析仪进行处理。结果 视网膜中可见Nogo-A mRNA在不同细胞层中的表达：视网膜神经节细胞层、内颗粒层、外颗粒层中可见Nogo-A mRNA表达，其中以视网膜神经节细胞层为最多。夹伤组中1、3、7d组分别与对照组比较，阳性细胞染色面积差异有极显著统计学意义（t=3．82，4．21，4．07；P〈0．01），A值差异有非常显著统计学意义（t=3．90，4．52，3．78；P〈0．01）。结论 Nogo-A mRNA在视神经损伤后视网膜中的表达明显增多，在抑制视神经损伤后轴突再乍的机制中可能起重要作用。     

反义寡核苷酸抑制大鼠损伤视神经 Nogo-A mRNA的表达

目的:观察反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A的影响.方法:实验分为对照组、随机序列组、和2,5,10μmol/L 3种Nogo-A反义寡核苷酸浓度组.大鼠视神经钳夹伤后,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),半定量分析反义寡核苷酸对损伤视神经Nogo-A mRNA表达量的变化.结果:反义寡核苜酸均显著降低Nogo-A mRNA的表达(P＜0.01),随机序列对Nogo-AmRNA的表达无影响(P＞0.05).结论:反义寡核苷酸对视神经损伤后Nogo-A mRNA表达有抑制作用.     

大鼠视神经损伤后一氧化氮合酶的变化及牛磺酸的影响

目的研究大鼠视神经挫伤后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的变化及牛磺酸的影响。方法通过建立外伤性视神经损伤的动物模型,随机分为正常对照组、损伤组（视神经钳夹＋蒸馏水组）及牛磺酸组（视神经钳夹＋牛磺酸组）,于损伤后3d、7d、14d和28d以免疫组化染色法测定视神经iNOS的活性。结果在损伤后3d、7d、14d及28d,损伤组及牛磺酸组视神经组织iNOS表达较正常对照组升高（F=256．43,213．62,188．76,231．78,P〈0．05）;牛磺酸组较损伤组iNOS表达降低（F=256．43,213．62,188．76,231．78,P〈0．05）。结论视神经损伤诱导视神经iNOS的表达。牛磺酸可能通过对iNOS的抑制在大鼠视神经损伤中起到视神经保护作用。     

大鼠视神经损伤后Toll样受体4在视网膜中的表达

背景Toll样受体4（TLR4）是一种重要的免疫相关受体,在多种疾病的发生中起致炎作用。研究发现,视神经损伤后继发的炎症反应可进一步引起视网膜损伤,因此视神经损伤后TLR4的表达及其效应值得研究。目的研究大鼠视神经损伤后视网膜TLR4的表达情况。方法选取成年健康SPF级SD大鼠24只,按随机数字表法随机分为视神经损伤3d组和视神经损伤7d组。取大鼠右眼用视神经钳夹法制备视神经损伤模型,左眼不予处理为对照组。分别于视神经损伤后3d和7d用过量麻醉法处死大鼠并分离视网膜,采用免疫荧光法检测各组大鼠视网膜中TLR4的表达;分别采用逆转录PCR法（RT—PCR）和Westernblot法检测大鼠视网膜中TLR4mRNA及其蛋白的表达;采用TUNEL染色法观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡情况。结果视网膜免疫荧光法检测结果显示,TLR4在大鼠视网膜中呈绿色荧光,视神经损伤3d组和视神经损伤7d组造模眼视网膜中的荧光强度较对照组左眼均明显增强,绿色荧光主要分布在视网膜内层。RT—PCR法检测表明,模型眼视网膜损伤后3d和7d视网膜中TLR4mRNA相对表达量分别为2．92±0．06和3．92±0．12,对照眼TLR4mRNA的相对表达量分别为2．87±0．12和3．44±0．17,大鼠模型眼TLR4mRNA表达的灰度值较对照眼明显增加,差异均有统计学意义（t3d=-12．888,P〈0．001;t7d=-4．669,P=0．010）。Westernblot法检测显示,大鼠模型眼视网膜损伤3d和7d视网膜中TLR4蛋白的相对表达量分别为1．14±0．05和1．49±0．03,对照眼TLR4蛋白的相对表达量分别为0．99±0．09和1．38±0．07,模型眼视网膜中TLR4蛋白表达量明显高于对照眼,差异均有统计学意义（t3d=-11．324,P〈0．001;t7d=-5．638,P=0．005）。TUNEL染色显示,模型眼RGCs凋亡数较对照眼增多。结论TLR4在视神经损伤大鼠视网膜内层的表达明显上调,提示TLR4通路可能参与RGCs的损伤。     

地塞米松对兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活及Nogo-A表达的影响

目的观察地塞米松对家兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)存活的影响及损伤视神经、视网膜Nogo-A表达的变化。方法采用兔球后视神经钳夹伤模型,健康成年家兔分为正常对照组、损伤组、治疗组。分别于损伤后3d、7d、14d处死动物,观察单位面积RGC存活数量及损伤后Nogo-A在视神经、视网膜的表达变化。结果视神经损伤后,治疗组RGC的存活数高于损伤组及对照组(P<0.01)。对照组、损伤组损伤后3d、7d、14d视神经、视网膜Nogo-A表达增强,至损伤后7d达高峰;治疗组视神经、视网膜表达亦增强,各时间点均弱于损伤组、对照组,差异有显著统计学意义(P<0·01)。结论视神经损伤后,地塞米松能够增加RGC的存活数量,能够下调No-go-A的表达,这可能是地塞米松治疗作用机制之一。     

大鼠视神经损伤后视网膜CNTF及CNTFRα mRNA的表达

目的研究视神经损伤后睫状神经营养因子及其受体在大鼠视网膜中的表达变化。方法采用钳夹法制作大鼠视神经损伤模型。分别于伤后1、3、7、14、28d取眼球,以正常大鼠视网膜为对照,提取视网膜组织RNA,运用RT-PCR检测视神经损伤后CNTF和CNTFRαmRNA的表达变化。结果在正常视网膜中存在CNTF和CNTFRαmRNA的表达,视神经损伤后CNTF和CNTFRαmRNA表达量逐渐增加,第7d达到最高,第14d下降,具有统计学意义(P<0.01)。28dCNTF表达仍高于正常组(P<0.01)。结论视神经损伤刺激了视网膜细胞表达CNTF和CNTFRα增加,可能是视网膜神经元自我保护的一种反应。     

在晶状体损伤诱导的视神经长时程再生过程中MMP-12的表达规律

目的:探讨晶状体损伤诱导SD大鼠视神经钳压损伤后轴突长时程再生过程中MMP-12的表达变化。方法:建立SD大鼠视神经损伤模型和晶状体损伤模型,将实验动物24只分为对照组(仅开放眼眶暴露视神经)、晶状体损伤组、视神经损伤组、晶状体损伤联合视神经损伤组,每组各6只大鼠。采用有参转录组测序分析损伤视神经区域差异基因表达变化,筛选相关高表达差异基因,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)定量分析损伤区MMP-12的表达量变化。结果:转录组测序主成因分析表明,晶状体损伤联合视神经损伤是基因表达变化中的主要成因。基因表达差异分析显示,晶状体损伤联合视神经损伤组中,存在MMP-12基因表达上调。在建模成功后14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12 mRNA表达量与对照组、视神经损伤组和晶状体损伤组比较上调(P<0.05);在7、28d时,各组间表达无差异。在建模成功后7、14、21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组的MMP-12蛋白表达量与对照组和视神经损伤组比较上调(P<0.05);21d时,晶状体损伤联合视神经损伤组与视神经损伤组比较上...     

反义寡核苷酸对视神经少突胶质细胞Nogo-A mRNA表达调控的实验研究

目的 研究反义寡核苷酸对体外培养的视神经少突胶质细胞Nogo-A表达的影响,为进一步研究视神经损伤修复奠定基础。方法 使用新生2d的Wistar大鼠视神经,采用组织块接种法获得少突胶质细胞,并通过GC抗体免疫染色对培养的细胞进行鉴定。实验分为对照组(A)、随机序列组(B)和2μmol/L(C)、5μmol/L(D)、10μmol/L(E)三种Nogo-A反义寡核苷酸浓度组。细胞培养24h后,提取总RNA,使用RT-PCR检测Nogo-A mRNA的表达变化。结果 视神经组织接种后3d,有圆形或梭形的细胞自视神经迁出;11d左右,细胞基本铺满盖玻片;GC抗体免疫组化显示获得的细胞为少突胶质细胞。RT-PCR结果显示三种浓度的反义寡核苷酸组,Nogo-A mRNA的表达均显著降低(P<0.01),随机序列对Nogo-A mRNA的表达无影响(P>0.05)。结论 Nogo-A反义寡核苷酸可有效地、特异性地抑制靶基因的表达。     

牛磺酸对大鼠视神经损伤后MMP-2和MMP-9表达的促进作用

目的观察视神经损伤后基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2和MMP-9的表达及牛磺酸对其表达的影响,探讨牛磺酸在视神经再生修复方面的作用。方法 84只大鼠随机分为4组,正常组(12只)不作处理,对照组、预治疗组、治疗组(每组24只)建立大鼠视神经不完全损伤模型,预治疗组于造模前3d、治疗组于造模后1h开始每天1次给予体积分数5%牛磺酸腹腔注射,对照组造模后1h每天1次给予等量蒸馏水腹腔注射。各组分别于伤后3d、7d、14d、28d取视神经采用免疫组织化学法检测MMP-9平均光密度值,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2mRNA。结果对照组、预治疗组、治疗组视神经损伤后MMP-9和MMP-2mRNA的表达较正常组均增高,预治疗组及治疗组与对照组相比,各时间点MMP-9和MMP-2mRNA的阳性表达均明显升高(均为P<0.05)。在视神经损伤后3d时预治疗组MMP-9光密度值为39.53±4.05、MMP-2mRNA灰度值为1.746±0.268,其阳性表达与治疗组的MMP-9光密度值32.96±3.62、MMP-2mRNA灰度值1.303±0.289相比均明显增高(均为P<0.05),其后两组相近,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论视神经损伤后MMP-2和MMP-9的表达增强,牛磺酸治疗可以提高视神经组织中MMP-2、MMP-9的表达,对视神经损伤后的再生修复有一定的促进作用。     

视神经损伤后脑衰反应调节蛋白-2表达及其磷酸化修饰的变化及意义

背景 脑衰反应调节蛋白-2(CRMP-2)具有促进中枢神经轴突生长的作用,但中枢神经损伤后在细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)诱导下CRMP-2会发生过度磷酸化修饰,从而导致生长锥塌陷,阻碍神经系统的修复.视神经作为一种特殊的中枢神经组织,其损伤后是否发生CRMP-2表达的变化和磷酸化修饰鲜见研究报道. 目的 探讨视神经钳夹伤小鼠模型视神经组织中CRMP-2表达及其磷酸化修饰水平的动态变化及意义.方法 选取8～9周龄健康BALB/c小鼠48只,雌雄不限.采用随机数字表法将小鼠随机分为假手术组和损伤后3、7、14 d组,每组12只.各损伤组小鼠右眼术中暴露视神经,用小号动脉夹于球后2 mm处夹持视神经10s,假手术组小鼠手术操作同各损伤组,但不钳夹视神经.分别于术后3、7、14 d获取小鼠视神经组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2蛋白、磷酸化CRMP-2(p-CRMP-2)及CDK5的表达变化,检测结果进行组间比较.结果 假手术组及损伤后3、7、14d组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA及蛋白相对表达量的总体比较差异均无统计学意义(CRMP-2 mRNA:F=2.971,P=0.097;CRMP4蛋白:F=1.202,P=0.370).假手术组及损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2蛋白的相对表达量分别为0.001±0.000、0.064±0.003、0.136±0.005和0.346±0.012,CDK5蛋白的相对表达量分别为0.440±0.009、0.723±0.011、0.874±0.015和0.952±0.019,总体比较差异均有统计学意义(p-CRMP-2:F=445.600,P＜0.001;CDK5:F=186.600,P＜0.001),其中损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2和CDK5蛋白的相对表达量均明显高于假手术组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 小鼠视神经钳夹伤后视神经组织中CRMP-2的表达无明显变化,但视神经组织中CDK5和p-CRMP-2蛋白表达均明显上调,且随着损伤后时间的延长上调更为明显.     

大鼠视神经损伤及修复过程中视网膜睫状神经营养因子mRNA的表达

目的 探讨大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子（CNTF）mRNA在视网膜上的表达及意义。 方法 35只健康雄性SD大鼠，随机取5只作为正常对照组；另两组为视神经单纯切断组和视神经-坐骨神经吻合组，每组各15只大鼠。建立大鼠视神经单纯切断和神经-坐骨神经吻合模型，分别于建立模型后3、7、14 d取视网膜组织，应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法观察正常大鼠及各模型大鼠视网膜上CNTF mRNA的表达情况。 结果 在正常大鼠视网膜上，CNTF mRNA有微量表达，视神经单纯切断后其表达增加（3、7、14 d CNTF mRNA的表达分别增加100%、594%和485%），视神经切断并吻合一段坐骨神经后，表达增加更明显（3、7、14 d CNTF mRNA的表达分别增加258%、752%和515%）。 结论 视神经损伤后，可通过提高内源性CNTF来应答视网膜神经节细胞（RGC）轴索反应，保护RGC，为外源性CNTF的应用提供理论依据。 （中华眼底病杂志，2004，20：355-357）     

Neuroprotective effects of brimonidine treatment in a rodent model of ischemic optic neuropathy

Ischemic optic neuropathy (ION) is a common disorder caused by disruption of the arterial blood supply to the optic nerve. It can result in significant loss of visual acuity and/or visual field. An ischemic optic nerve injury was produced in rats by intravenous injection of Rose Bengal dye followed by argon green laser application to the retinal arteries overlying the optic nerve, causing a coagulopathy within the blood vessels and disruption of optic nerve and retinal perfusion. The effect of brimonidine tartrate eye drops on survival of retinal ganglion cell axons in this experimental paradigm was studied. One eye was treated and the contralateral eye served as a control. Four groups of animals were used for this study. Group 1 received 7 days of treatment with 0.15% brimonidine tartrate eye drops twice a day prior to the ischemic injury. Group 2 animals received 0.15% brimonidine tartrate eye drops twice a day for 14 days after photocoagulation injury. Animal groups 3 and 4 received eye drops of 0.9% NaCl twice a day either daily for 7 days before injury or daily for 14 days, respectively. All rats were sacrificed 5 months after the injury to ascertain long-term optic axon survival. Coagulopathy-induced optic nerve ischemia resulted in a 71% loss of optic axons. Treatment with brimonidine daily for the 7 days prior to the injury resulted in a greater survival of optic axons, with only a 56.1% loss compared to control. Brimonidine treatment every day for 14 days after the ischemic injury did not result in a significant rescue of optic axons compared to injury alone. In summary, the application of brimonidine eye drops for one week prior to an ischemic injury resulted in a statistically significant increase in survival of optic axons within the injured optic nerves. Brimonidine treatment of the eye after the ischemic injury did not result in axon rescue, and axon loss was similar to the injured optic nerves treated with saline only. These results suggest that brimonidine may have potential use for prevention of ION in at-risk patients.