细胞因子与颅脑损伤

细胞因子尤其是白介素－1β（IL－1β）和肿瘤坏死因子（TNF－α）在颅脑损伤后的早期短暂的超量表达是造成继发性颅脑损害的重要因素。最新研究发现，IL－1β和TNF－α的大量生成与核转子录因子－kB(NF-kB)的激活密切相关，创伤应激首知NF－kB后，通过诱导表达细胞因子IL－β和TNF－α，然后三者之间形成促进炎症过度反应的反正馈环；激活的NF－kB同时诱导其他炎症介质的大量表达，从而进一步加剧颅脑损害的发生，因此，对核转录因子－kB的早期抑制将是治疗颅脑损伤的关键因素，是一种新的治疗途径。     

小鼠烧伤早期巨噬细胞糖皮质激素受体及细胞因子蛋白表达的变化

目的　探讨小鼠烧伤后早期巨噬细胞糖皮质激素受体 (GR)、核转录因子 (NF kB)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)和白介素 1β(IL 1β)蛋白表达的变化。 方法　将培养的巨噬细胞株ANA 1注入小鼠腹腔内 ,小鼠行 15 %TBSAⅢ度烧伤 ,收集腹腔巨噬细胞 ,应用免疫组化和Westernblot方法 ,观察烧伤后 2、6小时巨噬细胞GR、NF kB、TNF α和IL 1β蛋白表达的变化。 结果　烧伤后巨噬细胞免疫组化染色GR、NF kB阳性表达减弱 ,TNF α和IL 1β阳性反应增强。Westernblot分析表明烧伤后GR、NF kB蛋白含量降低。 结论　烧伤后巨噬细胞GR、NF kB蛋白减少 ,TNF α和IL 1β增加 ,说明巨噬细胞激活在烧伤后炎症反应中发挥重要作用     

中性粒细胞在心肌缺血再灌注中ICAM-1表达及核转录调控的实验研究

目的：研究心肌缺血再灌注时中性粒细胞（PMN）内核因子－kB活性变化与中性粒细胞细胞间粘附分子（ICAM－1）表达及中性粒细胞心肌浸润的关系。方法：新西兰兔24只分为：（1）缺血再灌注组（IR），（2）IR＋RDTC组，（3）假手术对照组，并分缺血前，再灌注后30、60、90、120、240、360min时相点。用流式细胞仪检测PMNs ICAM-1的表达，凝胶电泳迁移率分析检测NF－kB的活性，酶法测定PMNs浸润数。结果，心肌再灌注30nin后NF－kB活性开始增高，120min达到高峰，之后活性下降；PMNs ICAM-1的表达在心肌再灌注120min开始增高，并与PMNs浸润数升高有相关性；PDTC能抑制NF－kB的活化及PMNs ICAM-1的表达和PMNs浸润。结论：心肌缺血再灌注时刺激NF－kB的活化，启动PMNs ICAM-1的表达而参与缺血再灌注损伤的发生过程。     

氯喹抑制EC DNA、内毒素协同诱导的IL-6释放

为明确氯喹抑制细菌DNA，内毒素协同诱导IL－6释放的作用机制，将小鼠于实验前1h经腹腔注射D－DalN敏化，观察氯喹对CpG,ODN或LPS攻击小鼠7天内死亡率的影响；体外培养ANA－1细胞，观察氯喹对EC DNA和LPS共同诱导IL－6释放能力的影响，体外培养THP－1细胞，观察氯喹对EC DNA和LPS刺激THP－1细胞后TLR9、TLR4表达与NF－κB活化的影响。结果发现，小鼠在CpG ODN或LPS攻击后4h内全部死亡，但预先给予氯喹（30mg/kg)的CpG ODN,LPS攻击小鼠仅分别有4只和5只死亡（P＜0．05），氯喹可明显降低EC DNA、LPS协同诱导的IL－6释放（P＜0．01），EC DNA和LPS均可诱导TLR7、TLR4的表达和NF－κBp65的活化，氯喹可显著抑制ECDNA和LPS诱导的TLR8表达的以及LPS诱导的NF－κB活化，对TLR4的表达抑制作用较弱，对CpG ODN诱导的NF－kB活化抑制作用亦较弱，提示氯喹能够明显降低ECDNA和LPS协同诱导的IL－6释放，该作用与氯喹对CpGODN,LPS攻击小鼠的保护作用密切相关。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及核调控机理的实验研究

目的：研究细胞脂多糖（LPS）诱导的肺微血管内皮细胞（PMVEC）ICAM－1的表达及调控机制，方法：100ng.ml^-1LPS刺激PMVEC0h,2h,4h,6h,8h或10ng.ml^-1，50ng.ml^-1,100ng.ml^-1LPS刺激6h，免疫细胞化学检测PMVECICAM－1的表达，凝胶电泳迁移率变化分析检测NF－κB的活化，并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVEC ICAM－1表达的影响。结果：PMVECICAM－1的表达与LPS的刺激呈时相－剂量依赖方式，LPS的刺激迅速活化NF－κB，60min达到高峰，后逐渐下降，PDTC能显著降低ICAM－1的表达（P＜0．01），结论：LPS刺激诱导NF－κB的活化，启动ICAM－1的合成表达。     

高尔基蛋白73参与炎症反应的分子机制研究

目的：通过研究高尔基蛋白73（GP73）对炎症反应的影响,揭示其参与肿瘤发生发展可能的机制。方法基于TCGA数据库中肝癌患者的GP73与炎症因子NF－κB、IL－1β、IL－6、TNF－α等基因表达相关性的分析,推测GP73可能参与炎症反应。依据数据分析结果设计细胞实验,构建过表达GP73的质粒和敲低GP73的小干扰RNA （ siRNA）,通过检测野生型、过表达和敲低表达GP73细胞系中NF－κB的转录活性以及炎症因子IL－1β、IL－6、TNF－α等基因的表达,来验证GP73在炎症反应中发挥的作用。结果 TCGA数据库分析结果提示,临床肝癌患者的GP73基因表达与NF－κB、IL－1β、IL－16及TNF－α的表达均呈正相关;细胞实验结果显示,过表达GP73细胞系与野生型相比,细胞内NF－κB转录活性升高,而敲低GP73细胞系内NF－κB转录活性降低;过表达GP73细胞系与野生型相比细胞内IL－1β、IL－6及TNF－α的表达均升高;二硫代氨基甲酸吡咯烷（ PDTC）能抑制GP73激活炎症反应,NF－κB为GP73激活炎症反应的关键分子。结论 GP73可能参与炎症反应,并因此促进肿瘤的发生发展。     

哮喘豚鼠模型血淋巴细胞及嗜酸细胞与肺微血管内皮细胞粘附性的研究

观察哮喘豚鼠模型哮酸细胞和淋巴细胞与肺微血管内皮细胞的粘附率，探讨肺微血管内皮细胞在豚鼠模型血清孵育下的功能变化及淡症细胞与其粘附的分子基础，设豚鼠哮喘模型及对照组观察分 离的外周血淋巴细胞和哮酸细胞与内皮细胞的粘附率，RT－PCR法测定内皮细胞VCAM－1及eotaxin mRNA的表达强度，EMSA法测定NF－κB的AP－1的DNA结合活性，与组血清孵育相比，肺微血管内皮细胞在模型组血清刺激下；（1）与两组外周血淋巴细胞及仅与模型组哮酸细胞的粘附率显著升高（P＜0．01）；（2）VCAM－1和eotaxin mRNA表达量显著增多（P＜0．01或P＜0．05），NF－κB和AP－1的DNA结合活性也显著升高（P＜0．01），肺微血管内皮细胞可被哮喘模型血清激活，使粘附分子，趋化因子及核转录因子的合成和分泌显著增多，从而显著提高其与炎症细胞的粘附率，哮酸细胞的粘附需其自身及内皮细胞两者激活，肺微血管内皮细胞活化及NF－κB的和AP－1的DNA结合活性增高在哮喘发病中可能起重要作用。     

干扰素-γ增强内毒素对血管内皮细胞核因子-κB的活化及其机制

目的 探讨干扰素（IFN）-γ对内皮细胞上Toll样受体4（toll like receptor-4，TLR4）和髓样分化蛋白-2（myeloid differentiation protein-2，MD-2）表达的影响以及在内毒素（LPS）对内皮细胞激活中的影响。方法 分离、培养人脐静脉内皮细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot方法检测IFN-γ刺激后内皮细胞TLR4、MD-2表达的变化；TransAM法检测核因子（NF）-κB活性，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测IL-8水平。结果 IFN-γ能明显上调内皮细胞TLR4、MD-2的表达，并且TLR4、MD-2表达的增加与IFN-γ呈一定的剂量依赖关系；IFN-γ对内皮细胞NF-γB的活性无明显影响，但用IFN-γ孵育后的内皮细胞却对LPS的反应明显增强，NF-κB活性明显增高，白细胞介素（IL）-8分泌明显增加，且与IFN-γy呈剂量依赖关系。结论 IFN-γ通过上调内皮细胞上的LPS受体-TLR4、MD-2而促进LPS对内皮细胞的活化。     

内毒素直接作用于血管内皮细胞激活信号分子的研究

目的：对内毒素（LPS）直接作用于血管内皮细胞（VECs)激活的多种信号通路的主要激酶及转录因子进行筛选研究。方法：10ng.ml^-1浓度的LPS刺激细胞至预定时相点后,用免疫细胞化学观察信号分子的磷酸化和／或核转位,结果：LPS直接作用于VECs在5－15min内即可观察到多种信号分子的激活,随刺激时间延长,信号分子激活程度逐步增,至一定时相点后活性又消失,这些信号分子的活性在持续时间上存在一定的差异。这些激活的信号分子包括p38、ERK1／2MAPK、CREB、STAT5、STAT6、NF－kB家庭成员p65、p50、p52、c-Rel、Rel-B等。结论：LPS直接作用于VECs可以迅速激活多种信号分子,诱导信号分子的磷酸化和／或核转位。LPS诱导的CREB磷酸化、不同NF－kB家族成员核转位持续时间的差异是第一次报道。     

高速枪弹伤时内皮细胞内皮素释放及mRNA转录的变化

目的：探讨高速枪弹伤时产生的强压力波对血管内皮细胞内皮素（ＥＴ－１）的释放及基因表达的影响。方法：以高速枪弹致伤犬腹部以及高速枪弹压力波致伤培养人脐静脉内皮细胞为实验模型，采用放射免疫及斑点杂交的方法，从整体、细胞、基因不同层次观察内皮细胞ＥＴ－１释放及表达的特点。结果：致伤犬和培养的内皮细胞在压力波作用下，ＥＴ－１释放和基因表达的变化具有相似的趋势，出现即刻和延迟反应，即伤后１０分钟至６小时ＥＴ－１释放明显增加，ｍＲＮＡ（ＥＴ－１）转录增强则出现在伤后４～６小时。结论：压力波是导致ＥＴ－１释放及基因表达紊乱的重要力学因素，ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录增强可能是压力波对ＥＴ－１调节的延迟效应的分子病理学基础。     

外源性 bFGF对大鼠创伤性脑损伤后学习记忆功能障碍的治疗作用

目的：探讨外源性碱性成纤维生长因子（bFGF)对脑创伤后学习记忆功能障碍的治疗作用。方法：以Mmarmarou's方法制作大鼠重型弥漫性脑创伤模型；利用HE染色，原位细胞凋亡检测及Morris水迷宫技术，对大鼠伤后海马区神经细胞的病理改变及空间学习记忆功能的变化进行动态观察。结果：伤后给予外源性bFGF可明显抑制大鼠海马CA2－3区神经细胞的坏死，凋亡过程，治疗组Morris水迷宫测试潜伏期于伤后第8天及第10天较创伤组明显缩短。结论：海马是学习记忆形成的重要脑功能结构。外源性bFGF通过抑制伤后海马神经细胞缺失，可使大鼠的空间学习记忆功能功能障碍得到明显改善。     

创伤性后颅窝血肿

目的：总结创伤性后颅窝血肿（THPF）的临床特点。方法：对我科1999年3月-2001年10月间收治并接受手术治疗的9例THPF的病例资料进行回顾性分析。结果：（1）9例均有枕部着力的致伤机制，其中跌倒和低高度坠落伤7例；硬膜外血肿8例，小脑挫裂伤伴小脑血肿1例；（2）就诊时GCS13-15分6例，7例头部外伤后有短暂的昏迷史或创伤后遗忘，4例有头痛或呕吐主诉；（3）8例接受硬膜外血肿清除后颅减压术，1例行小脑血肿清除后颅减压加侧脑室外引流术；其中7例恢复良好，1例中残，1例死亡。结论：THPF有着不同于幕上创伤性颅内血肿的临床特点，及时准确地诊断和积极地治疗是改善预后的关键。     

体外原代培养肝细胞牵张损伤模型的建立及细胞骨架、 粘弹性变化的实验研究

目的 建立培养肝细胞牵张损伤模型,探讨肝细胞损伤、细胞骨架和粘弹性的改变及其发生机制。方法：用BioFlex培养皿培养原代肝细胞贴壁生长后,通过小型生物撞击机分别以驱动压力150kPa、250kPa牵张损伤细胞。然后对正常肝细胞及牵张损伤后肝细胞骨架Factin微丝排列及分布变化在激光共聚焦显微镜下进行形态学观察,同时测定肝细胞的粘弹性。结果 牵张损伤后肝细胞微丝大部分断裂,网状结构消失,收缩呈絮状,或遗留粗大的微丝束,粘弹性显著降低。结论 肝细胞粘弹性显著降低与细胞骨架的损伤断裂,可能是细胞损伤力学特性变化的分子生物学机制。     

破坏载荷下椎间盘对胸腰段脊柱应力分布影响的研究

目的：对比正常与退变椎间盘在破坏载荷下对胸腰段脊柱应力分布的影响，探讨其生物力学背景及临床意义，为临床诊断及治疗提供理论依据。方法：用三维有限元法建立正常及退变椎间盘的胸腰段脊柱活动节段的力学模型，并对其在垂直压缩，屈曲压缩，屈曲分离三种外加载荷下的应力分布进行对比分析。结果：垂直压缩及屈曲压缩载荷下，正常的椎间盘的胸腰段脊柱活动节段显示椎体上，上终板的中央及松质骨邻近终板的中央部位应力值最高，椎间盘纤维环的后外侧应力集中；退变椎间盘的胸腰段脊柱显示椎体松质骨的应力分布相对平均，邻近终板的中央部分应力水平减低，周边部分水平相应上升，椎间盘纤维环的后侧应力集中；屈曲分离载荷下，退变椎间盘的胸腰段脊柱与正常相比，椎体皮质骨，松质骨，终板及纤维环应力水平有所降低，后部结构的应力水平相应上升。结论：正常与退变椎间盘对破坏载荷下胸腰段脊柱应力分布的影响明显不同，椎间盘退变后载荷的传递方式发生了改变。     

硫酸镁对改善实验性创伤性脑损伤后脑细胞线粒体呼吸功能作用的研究

目的 观察硫酸镁对创伤后大鼠脑线粒呼吸功能变化,并探讨可能作用机制,为临床进一步应用镁离子治疗创伤性损伤提供依据。方法 本实验采用BIM－Ⅲ型小型多功能生物撞击机造成大鼠中型颅脑损伤,用氧电极法分析线粒体呼吸功能（呼吸Ⅲ态,Ⅳ态和呼吸控制率）,并行透视电镜观察线粒体超微结构。结果（1）未治组伤后24、72小时呼吸Ⅲ态和呼吸控制率明显下降;治疗1组呼吸功能有所恢复;治疗2组呼吸控制率及呼吸Ⅲ态较治疗1组有显著升高（P＜0．05）,呼吸Ⅳ态稍有延长,但相差不显著。（2）电镜结果显示伤后未治组与治疗1组、治疗2组线粒体结构均有不同程度的损害,但应用Mg^2 治疗后线粒体损害程度减轻。结论 创伤性颅脑损伤后脑线粒体呼吸功能明显下降。应用硫酸镁治疗颅脑损伤大鼠可明显改善脑线粒体呼吸功能,形态学（电镜）观察也发现线粒体损害减轻。治疗时间延长,呼吸功能改善越明显。     

培养软骨、肌肉和骨蜡移植修复生长板缺损的实验研究

目的 比较培养软骨、肌肉和骨蜡移植修复生长板缺损作用，证明实验动物模型的可靠性。方法 24只6周龄新西兰白兔随机分为3组，手术造成右侧胫骨近端生长板内侧1／3－1／2缺损，未作处理的左侧胫骨为正常对照。分别将培养软骨、肌肉和骨蜡植入生长板缺损处，手术后第8周行双下肢X线摄片和组织学检查，观察胫骨近端发育及生长板缺损修复情况。结果 肌肉和骨蜡植入组胫骨发生明显内翻及短缩畸，两组间比较无显著性差异（P＞0．05）。生长板缺损部位由大量致密新生骨充填。培养软骨植入组胫骨发育良好，明显优于肌肉和骨蜡植入组（P＜0．01）。移植软骨再生修复生长板缺损，恢复其组织结构和生长功能。结论 在6周龄兔胫骨近端内侧生长板1／3－1／2缺损移植实验中，培养软骨可有效修复生长板缺损和防止胫骨畸形，而肌肉和骨蜡无此修复作用。     

失神经肌肉的组织、细胞学改变的研究进展

骨骼肌是周围神经系统的靶器官,它的发生、功能和结构的维持都受到运动神经的支配和调节,一旦失去神经支配,骨骼肌将失去收缩功能,肌纤维会逐渐萎缩,同时肌细胞发生一系列的改变。本文就骨骼肌在失神经支配后,发生萎缩的组织、细胞学方面改变的研究进展作一综述。     

热休克预处理对大鼠肝脏缺血再灌注时线粒体的保护作用

目的 研究热休克预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时线粒体功能的影响。方法 大鼠分为热休克组（HS组）和对照组（C组），HS组大鼠缺血再灌注前48小时先行热休克预处理。随后两组均采用钳夹肝十二指韧带，造成肝脏缺血再灌注损伤，检测缺血前（n=5)、缺血后（n=10)和再灌注后（n=10)肝脏线粒体膜电位（MPM）和呼吸功能的变化。同时比较两组再灌注后三磷酸腺苷（ATP）的恢复情况。结果 缺血30分钟后，C组MPM明显降低，再灌注后仍未恢复。HS组MPM在缺血和再灌注后均保持在较高水平。C组线粒体呼吸控制率（RCR）在缺血30分钟后降至4.89 0.35)，而HS组维持在接近正常的水平。再灌注后，HS组ATP水平的恢复明显早于C组。结论 热休克预处理可防止肝脏缺血时线粒体膜完整性的破坏，并有助于线粒体在再灌注时产生高能磷酸化合物。     

山莨菪碱预防重型颅脑损伤后呼吸功能不全的临床观察

探讨山莨菪碱预防重型颅脑损伤后呼吸功能不全的预防作用。方法 按预先设计的标准选取78例GCS评分小于8分的重型颅脑损伤患者，随机分成预防组和对照组，预防组在入院后或手术后即开始接受静脉内注射山莨菪碱0.8-1.2mg/kg，稀释至250ml，24小时持续给药，连续使用7-10天，对照组不用此药，每天监测肺通气，氧合功能以及颅内压，心血管功能变化。结果 预防组病例的肺通气，氧合功能基本维持在正常水平，对照组病例有明显下降，两组病例颅内压，心血管功能变化无明显差异。结论 山莨菪碱预防重型颅脑损伤后呼吸不全疗效显著。     

伤口愈合中P物质、降钙素基因相关肽在大鼠肌成纤维细胞分化中的作用

目的 探讨大鼠皮肤伤口愈合中感觉神经肽与肌成纤维细胞分化的关系。方法 Wistar大鼠30只,随机分为辣椒素组(n=15)与对照组(n=15)。辣椒素组大鼠皮内注射大剂量辣椒素,以毁损感觉神经元,减少皮肤损伤时神经末梢释放感觉神经肽,停止注射1周后行背部皮肤切割伤。分别于伤后3、6、9天测定伤口面积,以免疫组化结合图像分析技术,观察2组大鼠伤口肉芽组织感觉神经肽P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)阳性染色,并探讨与肉芽组织肌成纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的关系。对照组除不注射辣椒素外,余处理同辣椒素组。结果辣椒素组大鼠肉芽组织SP、CGRP、α-SMA阳性表达均明显低于对照组,辣椒素组伤口面积为对照组的1．48倍。结论大鼠皮肤伤口愈合时,肉芽组织肌成纤维细胞分化与感觉神经肽有关。