Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中的应用

目的探讨Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Alport综合征中（AS）的应用。方法通过间接免疫荧光检测皮肤、肾脏基底膜Ⅳ型胶原α3、α5链表达,协助诊断2例AS患儿,并明确其遗传型。结果例1,男童,肉眼血尿,阳性家族史（其母4岁时出现血尿、蛋白尿持续至今）,皮肤基底膜α5链染色阴性,其母皮肤基底膜α5链染色间断阳性,确诊X连锁显性遗传型AS。例2,女童,肉眼血尿,家族史阴性,肾活检病理电镜下基底膜厚薄不均,致密层分层、网状改变。皮肤基底膜α5链染色阳性,肾脏基底膜上α3链呈阴性,α5链在肾小球基底膜呈阴性,包氏囊和肾小管基底膜阳性,确诊常染色体隐性遗传型AS。结论Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测对于诊断AS及确定遗传型具有重要价值,但对染色结果要正确理解。     

早期诊断Alport′s综合征5例及文献复习

目的探讨早期诊断Alport′s综合征(AS)的方法及文献复习。方法临床表现为孤立性血尿和肾病综合征(NS)5例,均行肾组织光镜、免疫荧光电镜检查和皮肤基底膜(EBM)Ⅳ型胶原α链免疫测定,2例行肾小球基底膜(GBM)Ⅳ型胶原α链免疫测定。结果患儿光镜均表现肾小球轻微病变或局灶节段增生,电镜表现肾小球基底膜弥漫性变薄,无诊断意义。患儿EBM和GBMα1均( )连续,但3例男童EBMα5链(-)、GBMα3、α5(-);2例女童EBMα5( )但不连续,GBMα3、α5( )但不连续,达到早期诊断目的。结论对于孤立性血尿、NS(激素治疗耐药),肾活检电镜表现基底膜变薄患儿,有条件应常规进行皮肤和GBMⅣ型胶原α链检测,为诊断和鉴别诊断提供依据。     

早期诊断Alport''''s综合征5例及文献复习

目的探讨早期诊断Alport’s综合征（AS）的方法及文献复习。方法临床表现为孤立性血尿和肾病综合征（NS）5例，均行肾组织光镜、免疫荧光电镜检查和皮肤基底膜（EBM）Ⅳ型胶原α链免疫测定，2例行肾小球基底膜（GBM）Ⅳ型胶原α链免疫测定。结果患儿光镜均表现肾小球轻微病变或局灶节段增生，电镜表现肾小球基底膜弥漫性变薄，无诊断意义。患儿EBM和GBMα1均（＋）连续，但3例男童EBMα5链（-）、GBMα3、α5（-）；2例女童EBMα5（＋）但不连续，GBMα3、α5（＋）但不连续，达到早期诊断日的。结论对于孤立性血尿、NS（激素治疗耐药），肾活检电镜表现基底膜变薄患儿，有条件应常规进行皮肤和GBMⅣ型胶原α链检测，为诊断和鉴别诊断提供依据。     

检测不同组织基底膜IV型胶原α链确定Alport综合征遗传型

目的 探讨中国人不同遗传型Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）患者基底膜α链的表达及其在判断遗传型方面的应用。方法 应用间接免疫荧光学方法,对确诊为ＡＳ的７例Ｘ连锁显性遗传型男性先证者、１例无家族史的ＡＳ女童及其部分农系成员不同组织基底膜中Ⅳ型胶原α链［α（Ⅳ）］的表达进行了检测并与正常组对照。结果 Ｘ连锁显性遗传型男性患者,皮肤基底膜（ＥＢＭ）α５（Ⅳ）链、明小球基底膜（ＧＢＭ）、肾小球基底膜（ＴＢＭ）及     

皮肤及肾组织Ⅳ型胶原α链测定在早期诊断遗传性肾病的意义

目的　探讨皮肤及肾组织基底膜Ⅳ型胶原α链在薄基底膜肾病 (TBMN)患儿中早期诊断Alport′s综合征 (AS)中的作用。方法　对 2 1例有肾脏病家族史且诊断为TBMN患儿采用间接免疫荧光法检测皮肤基底膜 (EBM)及肾小球基底膜 (GBM )Ⅳ型胶原α链分布情况。结果　 2 1例中 18例EBMα1α5( )连续 ,GBMα1α3 α5( )连续。另 3例中 1例男童肾炎性肾病 :EBMα1( )连续、α5(- ) ,GBMα1( )连续、α3 α5(- ) ;2例女童孤立性血尿 :EBMα1( )连续、α5( )不连续 ,GBMα1( )连续、α3 α5( )不连续。此 3例最后确诊为AS。结论　对TBMN患儿行皮肤及肾活检检测基底膜α1、α3 、α5链 ,可早期发现AS患儿     

91例儿童Alport综合征临床、病理特点及误诊分析

目的探讨儿童Alport综合征(AS)临床、病理特点和诊治情况,以提高对AS的认识。方法收集确诊的91例AS患儿临床资料进行回顾性分析。结果 91例患儿均有血尿,86例伴有蛋白尿。61例X连锁显性遗传AS(XL-AS)患儿有阳性家族史。肾活检的82例患儿中74例有轻度或轻-中度系膜增生,48例系膜区少量免疫复合物,53例肾小球基底膜(GBM)有变薄、增厚和撕裂。63例进行了肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链免疫荧光检测,确诊AS 58例,其中53例符合XL-AS,5例符合常染色体隐性遗传AS。91例AS患儿中,58例通过肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链免疫荧光确诊,21例通过电镜确诊,1例通过皮肤活检确诊;12例基因诊断确诊。发现6个COL4A5基因新突变。45例曾被误诊其他疾病,其中41例接受过激素和/或免疫抑制剂治疗。结论儿童AS临床表现缺乏特异性,特征性GBM电镜改变仅见于部分患儿,本区域儿童AS误诊误治率仍较高。COL4A5基因新突变比例较高。     

基底膜α(Ⅳ)链染色正常的Alport综合征基因突变特点

目的　检测、分析编码基底膜Ⅳ型胶原α5链基因COL4A5突变及其特点 ,正确理解α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果及意义。方法　报告 1例 7岁男性患儿 ,血尿半年 ,肾功能、听力及眼部检查均正常 ;肾脏病理电镜示基底膜大部分均匀变薄 ;有血尿、肾功能不全家族史。应用间接免疫荧光学方法检测该患儿肾脏基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链。应用逆转录 聚合酶链反应和直接测序的方法分析α5 (Ⅳ )链mR NA ,应用PCR和直接测序方法分析COL4A5基因。结果　患儿肾小球基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链染色均正常。mRNA和基因组DNA分析均证实碱基替代突变 (917G >A) ,导致α5链第 2 39位甘氨酸被精氨酸取代 ,为新发现的突变。结论　首次报道了皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色正常 (阳性 )的我国X连锁型Alport综合征男性患者COL4A5基因突变及特点。提示应正确应用和理解基底膜α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果 ,X连锁型Alport综合征男性患者皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色即便正常 (阳性 ) ,当家族史及其它临床资料仍怀疑Alport综合征时 ,应进行COL4A5基因的检测和分析。     

儿童Alport综合征30例肾脏和皮肤IV胶原分布特点

目的 通过分析30例Alport综合征(AS)患儿肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,探讨Ⅳ胶原分布与临床表型的关系.方法 对30例Alport综合征患儿资料进行总结,并分析肾组织穿刺和皮肤活检中肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,总结不同的Ⅳ型胶原α链分布方式与临床表型的相关关系.结果 30例患儿中29例表现为肾脏和(或)皮肤Ⅳ胶原α链分布异常,1例正常.其中24例(占80.0%)为X连锁显性遗传性AS(XDAS).男20例,女4例;5例(占16.7%)为常染色体隐件遗传性AS(ARAS).XDAS组患儿1例临床表现为孤立性血尿型(4.2%),6例为血尿合并蛋白尿型(25.0%),16例为肾病综合征型(66.7%),1例为肾功能不全型(4.1%);平均尿蛋白定量男1.74 g/24h,女0.83g/24 h;3例发现高频听力减退均为男性,男性患儿病情明显重于女性.ARAS组患儿5例均表现为血尿合并蛋白尿型;平均尿蛋白定量0.62 g/24 h;未发现眼耳损害.结论 XDAS患儿病情重,病程进展快,不同性别在病情严重程度上存在明显的差异;ARAS患儿病情相对较轻.Alport综合征的Ⅳ型胶原α链分布与临床表型密切相关.肾脏和皮肤Ⅳ胶原免疫荧光检测是目前诊断Alport综合征的有效手段,对判断疾病严重程度和远期预后都有重要意义.     

以孤立性血尿为表现的薄基底膜肾病54例分析

目的探讨薄基底膜肾病(TBMN)的临床表现和病理特点。方法对54例临床表现为孤立性血尿、经肾活检证实的TBMN患儿进行分析。所有患儿行肾穿刺,分别进行光镜、免疫荧光和电镜观察及基底膜厚度测定。采用间接免疫荧光法检测皮肤基底膜(EBM)Ⅳ型胶原α1、α5和肾小球基底膜(GBM)Ⅳ型胶原α1、α3和α5链表达。结果所有病例肾小球基底膜弥漫性均匀性变薄,无基底膜分层、撕裂等改变,部分病例存在节段性足突消失。4段基底膜厚度分别为(170．7±45．0)nm、(175．6±47．9)nm、(181．8±36．3)nm和(170．0±32．9)nm。EBM和 GBMⅣ型胶原α链检测,发现异常2例。结论薄基底膜肾病主要表现为孤立性血尿,确诊有赖肾活检电镜基底膜厚度测定,须与Alport综合征鉴别。     

Alport综合征与Ⅳ型胶原

为探讨Ａｌｐｏｒｔ综合征时Ⅳ型胶原α链的分布改变，应用间接免疫荧光和免疫电镜的方法，观察了Ⅳ型胶原α１～α６（Ⅳ）和Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ型胶原在肾（１０３例）和皮肤（４０例）组织中的分布。结果：６３％的病例存在α３～α６（Ⅳ）的分布异常；两种异常类型直接与遗传方式有关：在Ｘ染色体连锁显性遗传时，男性肾和皮肤组织中α３～α６（Ⅳ）均消失，女性则呈不连续的节段性分布；在常染色体隐性遗传时，肾小球基底膜（ＧＢＭ）中α３～α５（Ⅳ）均消失，而ＧＢＭ外肾组织基膜中α３～α４（Ⅳ）消失，α５～α６（Ⅳ）的分布完全正常。提示，Ⅳ型胶原α链分布异常是Ａｌｐｏｒｔ综合征的一个诊断标志；皮肤活检观察α５～α６（Ⅳ）的分布有助于Ｘ染色体连锁显性遗传患者及携带者的诊断。     

儿童Alport综合征临床与病理分析

目的：了解Alport综合征患儿的临床与病理特点。方法：回顾性分析我院2007年2月至2009年2月10例诊断为Alport综合征患儿的临床及病理资料。结果：男7例,女3例,年龄2岁至6岁7月,平均3岁2月。10例患儿中5例有明确家族史;X连锁显性遗传8例,常染色体隐性遗传2例。临床表现为孤立性血尿5例,血尿合并蛋白尿3例,大量蛋白尿1例,肾病综合征1例;肾组织病理示：8例光镜为系膜增生性肾小球肾炎,2例为局灶节段性肾小球硬化;免疫荧光均以IgM沉积为主;电镜下1例出现典型的肾小球基底膜病变。所有患儿肾脏IV型胶原α链分布异常。结论：Alport综合征临床表现多样。肾组织病理光镜下主要以系膜增生为主,免疫荧光以IgM沉积为主。电镜下基底膜病变不明显,需结合IV型胶原α链免疫荧光检测明确诊断。［中国当代儿科杂志,2010,12（3）：188-191］     

儿童Alport综合征30例肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点

目的通过分析30例Alport综合征（AS）患儿肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,探讨Ⅳ胶原分布与临床表型的关系。方法对30例Alport综合征患儿资料进行总结,并分析。肾组织穿刺和皮肤活检中肾脏和皮肤Ⅳ胶原分布特点,总结不同的Ⅳ型胶原仪链分布方式与临床表型的相关关系：结果30例患儿中29例表现为肾脏和（或）皮肤Ⅳ胶原Ⅸ链分布异常,1例正常。其中24例（占80．0％）为X连锁显性遗传性AS（XDAS）,男20例,女4例;5例（占16．7％）为常染色体隐性遗传性AS（ARAS）。XDAS组患儿1例临床表现为孤立性血尿型（4．2％）,6例为血尿合并蛋白尿型（25．0％）,16例为肾痫综合征型（66．7％）,1例为肾功能不全型（4．1％）;平均尿蛋白定量男1．74g／24h,女0,83g／24h;3例发现高频听力减退均为男性,男性患儿病情明显重于女性。ARAS组患儿5例均表现为血尿合并蛋白尿型;平均尿蛋白定量0．62g／24h;未发现眼耳损害。结论XDAS患儿病情重,病程进展快,不同性别在病情严重程度上行住明显的差异;ARAS患儿病情相对较轻。Alport综合征的Ⅳ型胶原α链分布与临床表型密切相关。肾脏和皮肤Ⅳ胶原免疫荧光检测是目前诊断Alport综合征的有效手段,对判断疾病严重程度和远期预后鄯奄重要意义。     

Alport综合征与IV型胶原

为探讨Ａｌｐｏｒｔ综合征时Ⅳ型胶原α链的分布改变，应用间接免疫荧荧光和免疫电镜的方法，观察了Ⅳ型胶原α１￣α６（Ⅳ）和Ｉ、Ⅲ、Ⅴ和Ⅵ型胶原在肾（１０３例）和皮肤（４０例）组织中的分布。结果：６３％的病例存在α３￣α６（Ⅳ）的分布异常；两种异常类型直接与遗传方式有关：在Ｘ染色体连锁显性遗传时，男性肾和皮肤组织中α３￣α６（Ⅳ）均消失，女性则呈不连续的节段性分布；在常染色体隐性遗传时，肾小球基底膜（Ｇ     

超微病理检查结合免疫荧光学方法诊断遗传性肾炎

目的探讨诊断遗传性肾炎（Ａｌｐｏｒｔ综合征）的新指标。方法应用超微病理检查结合免疫荧光方法,对４例电镜显示肾小球基底膜（ＧＢＭ）变薄或厚薄不均的患儿进行研究。结果２例Ａｌｐｏｒｔ综合征患儿的肾活检组织标本电镜下ＧＢＭ弥漫性厚薄不均,广泛变厚和分层,并与变薄的ＧＢＭ并存。间接免疫荧光检查ＧＢＭ中抗Ⅳ型胶原α３链、α５链抗体完全阴性,抗Ⅳ型胶原α１链抗体明显增强。而２例薄基底膜肾病患儿肾活检组织尽管电镜下ＧＢＭ也有变薄、断裂和分层现象,且其中１例有节段性增厚,但间接免疫荧光检查ＧＢＭ中抗Ⅳ型胶原成分均无改变。结论超微病理结合间接免疫荧光学检查,有助于诊断Ａｌｐｏｒｔ综合征,并能将其与薄基底膜肾病相鉴别     

肾组织石蜡切片Ⅳ型胶原α链免疫组织化学染色法诊断Alport综合征

Alport综合征(Alport syndrome,As)的诊断问题日益受到关注.采用抗不同α(Ⅳ)的单克隆抗体,对肾及皮肤活检组织进行冰冻切片免疫荧光染色对Alport综合征的诊断具有重要价值[1],但冰冻切片难以长期保存,异地标本难以运送,相对于此石蜡切片有其优势.     

Alport综合征的诊治研究进展

Alport综合征(Alport syndrome,AS)是一种以血尿、进行性肾功能减退,常伴有神经性耳聋和眼部病变为临床特征的遗传性肾小球基底膜疾病,其发病机制为编码Ⅳ型胶原基因突变.AS的诊断需结合临床表现、肾脏病理改变和免疫荧光学检查及基因诊断等方面综合判断.目前AS尚无根治措施.随着AS发病机制的不断明确,基因...     

中国Alport综合征临床特征

为分析和总结我国Alport综合征(AS)患者临床特征，选取我院确诊为AS的患者77例(男55例，女22例)，以其尿液、肾功能、纯音测听、眼裂隙灯和眼底检查以及肾穿刺组织的常规检查作为临床表型资料进行分析和总结；并对74／77例患者进行了皮肤基底膜Ⅳ型胶原α5链免疫荧光学检查；对34／77例进行肾穿刺活组织检查。结果显示AS在16岁以前发病占92％，其中10岁以前占68％；首发症状以血尿并蛋白尿多见，占93．5％的患者均有血尿，部分伴发作性肉眼血尿；85．7％的患者伴有蛋白尿，且达肾病水平蛋白尿者为31．8％；感音神经性耳聋的男性患者发病率较国外报道高(分别为68％和55％)，而在女性患者却相对较低(7％和45％)；眼部病变发生率与国外报道类似。肾活检组织光镜下的病理变化以轻度系膜增生性肾小球肾炎多见(18／29例，62．1％)；常规免疫荧光学染色多为IgM沉积(9／24例)；52例男性患者皮肤基底膜中α5(Ⅳ)链染色49例阴性，3例阳性，女性患者中21例呈间断阳性，1例呈阳性；绝大多数患者(70／77例)有血尿或终末期肾脏病家族史；60％患者属于青少年型AS，且男性患者在儿童期便可出现肾功能下降。提示我国AS有以下临床特征：起病多在16岁以前，尤以10岁以前居多；血尿伴蛋白尿为常见首发症状；蛋白尿的发生率高且较重；男性患者发生感音神经性耳聋的比例较高；发生终末期肾脏病早且预后差。     

X连锁型Alport综合征女性COL4A5基因型及表型分析

目的 认识Alport综合征（AS）女性临床表型以及基因型特征。方法 AS女性共9例,年龄2－62岁;临床表现以血尿为主,伴蛋白尿（＋）－（＋＋）,除1例血BUN和肌酐升高,其余患者在进入本研究时肾功能均正常。未发现典型的眼部病变及感音神经性耳聋。AS男性共11例,年龄2－28岁;临床表现为血尿、蛋白尿（＋）－（＋＋＋＋）,2例进入本研究时（分别为17岁和28岁）已出现尿毒症或因尿毒症已行肾移植;7例伴有感音神经性耳聋,2例伴有眼部病变。以正常皮肤组织对照4例、正常肾组织对照2例及健康成人6例基因组DNA为对照。应用间接免疫荧光学方法,检测8／9例AS女性和9／11例AS男性皮肤基底膜、3／9例AS女性和6／11例AS男性肾脏基底膜Ⅳ型胶原α5链。应用PCR－SSCP 方法分析全部研究对象的COL4A5基因全部51个外显子,出现多态性的外显子直接测序分析。结果 AS女性与AS男性相比,临床症状相对轻,少有出现肾功能减退,多不伴有肾外症状。（1）AS女性皮肤和肾脏基底膜α5（Ⅳ）链均为间断阳性,而正常对照为连续阳性、男性AS表现为完全阴性。（2）PCR－SSCP分析显示5／9例女性AS患者分别在第4、9、20、39和第46外显子扩增产物的DNA条带出现特殊的迁移类型：DNA单链既有与正常对照的DNA迁移率相同的条带,同时还有不同于正常对照的DNA单链条带。（3）其中1例AS女性第4外显子DNA序列分析显示两种序列,一种与正常序列相同,另一种DNA序列出现C→A碱基替代突变。结论 X连锁型女性AS基因异常的特点为“杂合”,这种“杂合”状态可能成为女性AS临床表型相对较轻的分子基础。     

基因诊断儿童Alport综合征30例临床分析

目的　探讨儿童Alport综合征（Alport syndrome,AS）的临床表型与基因突变检测的临床意义。方法　回顾性分析2013年1月至2017年6月在广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科收治的30例基因突变患儿的资料。采集患儿及其家系成员的外周血样品,应用基因测序外显子序列捕获技术,寻找样品中是否存在Ⅳ型胶原α3链（COL4A3）、α4链（COL4A4）或α5链（COL4A5）三个突变基因,并对直系亲属行基因验证。结果　经过基因检测确诊Alport综合征（AS）30例,18例（60.00%）进行肾活检,光镜检查结果呈多样化,5例（16.67%）电镜检查表现为肾小球基底膜（glomerularbasementmembrane,GBM）弥漫性变薄、增厚和撕裂分层; 4例（13.33%）电镜表现为薄基底膜病（thin basement membrane nephropathy,TBMN）改变;免疫荧光检查3例（10.00%）肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链阴性。22例患儿基因诊断X连锁显性遗传Alport syndrome （X-linked Alport syndrome,XL-AS）,发现8个COL4A5新突变位点。8例患儿基因诊断为常染色体隐性遗传（autosomal recessive Alport Syndrome,AR-AS）,发现3个COL4A4新突变位点。结论　儿童Alport综合征临床表现多样化,缺乏特异性,肾组织病理类型各异,难以早期诊断。基因检测有助于AS的早期诊断,判断患儿的预后,避免不必要的药物治疗。     

6种固定液对小鼠皮肤急性炎性反应冷冻组织切片免疫组织化学染色效果的比较

目的探讨不同固定液对小鼠冷冻切片免疫组织化学染色的影响,筛选出相对适合的固定液。方法选取Balb/C小鼠2只,制作皮肤炎性反应模型。小鼠麻醉后剃除背部皮肤表面的毛发,局部暴露于70℃热水中35 s,形成1处1.5 cm×1.5 cm的深Ⅱ°皮肤烫伤,第7天取材,部位为以烫伤为中心的大小2.5 cm×2.5 cm全皮层组织,包埋后冷冻连续切片。取1组切片,即刻进行免疫组织化学染色,EAF(85%丙酮+10%甲醛+5%醋酸)、AAF(85%无水乙醇+10%甲醛+5%醋酸)、甲醛钙(100%甲醛+1%氯化钙)、甲醛(10%)、丙酮(100%)、乙醇(95%)6种固定液分别染色4张,2张切片不经固定液处理;取另一组切片,先采用丙酮、乙醇分别固定4张,另有2张切片不经固定液处理,再在-20℃保存14 d后取出进行免疫组织化学染色,检测表达于巨噬细胞胞浆的F4/80和表达于细胞膜表面的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)受体。结果小鼠皮肤炎性反应模型造模成功,HE染色结果提示炎性反应。即刻染色的切片中,F4/80表达结果显示,AAF、EAF、甲醛、甲醛钙固定切片为阴性,丙酮、乙醇固定和未固定切片为阳性;TNF-α表达结果显示,AAF、EAF固定切片为阴性,甲醛、甲醛钙、丙酮、乙醇固定和未固定切片为阳性。低温保存2周后,丙酮、乙醇固定切片的TNF-α阳性表达低于即刻染色组,但F4/80表达未见明显差异。结论不同固定液对冷冻切片的免疫组织化学染色结果有影响。丙酮和乙醇固定液更适用于炎性组织冷冻切片的固定,是相对理想的固定液。