纳米氧化锆磷酸钙骨支架体内免疫及相容性研究

目的检测纳米氧化锆磷酸钙骨支架的体内致免疫反应和生物相容性。方法将材料植入新西兰大白兔股部肌袋内,在植入前和植入后3、7、14、21d不同时间点内抽血查T淋巴细胞亚型T4和T8数量并计算其比值,对数据进行统计学分析;在植入后3、7、14、21d分别处死动物观察材料对植入局部周围组织的致敏作用及植入局部周围组织的炎性反应。结果材料植入后周围组织大体和组织学观察未见明显的过敏、炎性及排斥反应,植入后血液内T淋巴细胞亚群与植入前统计学结果无明显差别。结论纳米氧化锆磷酸钙骨支架无免疫源性,体内植入具有良好的相容性。     

微小颗粒骨磷酸钙复合物作为骨组织工程支架材料的实验研究

目的探讨使用同种异体微小颗粒骨磷酸钙骨水泥（CPC）复合物作为骨组织工程支架材料的方法。方法采用同种异体微小颗粒骨CPC复合物作为支架材料，将rh—BMP与CPC液相混合，再与兔骨膜成骨细胞及毛细血管内皮细胞复合培养，制成组织工程化人工骨。将人工骨移植到兔骶棘肌肌袋内，于术后4、8、12周进行Masson三色法组织学观察、扫描及透射电镜观察，观察其骨化及血管化情况。再将兔的桡骨制成骨缺损模型，用组织工程人工骨进行修复，于术后4、8、12周摄X线片检查、苏木精-伊红染色，观察骨缺损修复情况。结果肌袋内成骨实验，除4周时A组与B组的新骨形成面积百分比无显著性差异（P〉0．05）外，其余时间段两组的新生骨面积及新生血管面积相比具有显著性差异（P〈0．05）。修复骨缺损实验，A组新骨形成的速度、质量均明显优于B组。结论同种异体微小颗粒骨CPC复合物是一种良好的骨组织工程支架材料，有利于组织工程骨快速完成骨化及血管化。     

HA-ZrO_2/BMP增韧复合骨的研制及其在兔椎体间的成骨作用

目的　寻找用于椎体间植骨的人工骨材料。方法　用羟基磷灰石 (HA)、氧化锆 (ZrO2 )与骨形态发生蛋白 (BMP)三者混合制成HA ZrO2 /BMP增韧复合骨 ,将兔腰椎间盘钻除后植入 ,分别于 3、6、9、12周取标本进行肉眼、X线片、组织学、扫描电镜观察其成骨作用。结果　 3周时有纤维组织长入 ,6周时有一定的骨组织开始长入 ,9周时骨组织长入更多 ,12周时有大量骨组织长入。结论　HA ZrO2 /BMP增韧复合骨具有良好的成骨作用     

HA—ZrO2／BMP增韧复合骨的研制及其在兔椎体间的成骨作用

目的：寻找用于椎体间植骨的人工骨材料。方法：用羟基磷灰石（HA）、氧化锆（ZrO2）与骨形态发生蛋白（BMP）三者混合制成HA－ZrO2/BMP增韧复合骨,将兔腰椎间盘钻除后植入,分别于3、6、9、12周取标本进行肉眼、X线片、组织学、扫描电镜观察其成骨作用。结果：3周时有纤维组织长入,6周时有一定的骨组织开始长入,9周时骨组织长入更多,12周时有大量骨组织长入,结论：HA－ZrO2/BMP增韧复合具有良好的成骨作用。     

以珊瑚转化羟基磷灰石为支架材料构建组织工程骨的实验研究

目的 探讨以珊瑚转化羟基磷灰石（CHA）作为骨组织工程支架材料的可行性。寻找最佳支架材料,为组织工程研究开辟新的途径。方法 取4周龄兔骨髓,分离骨髓基质细胞,体外培养,诱导分化为成骨细胞,胰酶消化后离心收集细胞,接种至高温灭菌的CHA材料,无菌条件下植入8只裸鼠皮下组织中,对照组为同体单纯植入CHA,分别于6、8周取材,行大体观察、X线摄征及组织学染色,观察新骨形成情况。结果 实验组6周时大体标本浅红色,X线片有较高密度阻射影像,组织学检查可见有新骨形成,8周时大体标本呈红色,质硬,X线阻射影像密度更高,镜下可见大量新骨形成并相互连接成骨小梁样结构。骨细胞位于陷窝中,对照组8周大体标本均为白色,周围软组织包裹,X线片仅见CHA阻射影。组织学检查无新骨形成,为大量纤维组织长入CHA孔洞内。结论 CHA可作为骨组织工程的支架材料,具有广阔的应用前景。     

纳米羟基磷灰石-40%二氧化锆生物陶瓷材料组织相容性评价

[目的]评估纳米羟基磷灰石-二氧化锆生物陶瓷材料组织相容性.[方法]根据ISO10993-1标准,采用细胞毒性试验、急性毒性试验、溶血试验和体内植入(90 d)试验对纳米羟基磷灰石-二氧化锆生物陶瓷材料组织相容性进行评估.[结果]纳米羟基磷灰石-二氧化锆生物陶瓷材料组织相容性的细胞毒性评分小于I级,细胞生长无明显抑制现象,无急性毒性反应,无溶血反应,体内植入符合植入材料生物学评价要求.[结论]纳米羟基磷灰石-二氧化锆生物陶瓷材料具有良好的组织相容性,作为骨组织工程中生物支架材料具有广阔临床应用前景.     

蛇床子素和纳米氧化锆强韧化磷酸钙支架对成骨细胞增殖影响的研究

目的研究蛇床子素与纳米氧化锆强韧化磷酸钙骨支架的相容性，以及其在体外对幼兔成骨细胞增殖和成骨作用的影响。方法酶消化法分离培养幼兔股骨成骨细胞，噻唑兰法(MTT)测量成骨细胞增殖率，用碱性磷酸酶试剂盒测定细胞内骨碱性磷酸酶(ALP)活性。结果蛇床子素对大鼠新生成骨细胞的增殖和ALP活性具有显著的促进作用，与纳米氧化锆强韧化磷酸钙人工骨支架生物相容性良好。结论纳米氧化锆强韧化磷酸钙人工骨支架复合蛇床子素刺激的成骨细胞，是一种性能良好的复合骨组织工程材料。     

仿生增强型纳米羟基磷灰石-聚乳酸复合支架研究现状

骨组织工程是修复骨缺损最有前途的方法,寻找理想的支架材料是目前骨组织工程研究的热点之一。近年来采用仿生学原理制备的增强型纳米羟基磷灰石聚乳酸复合支架材料因具有良好的生物相容性和生物降解性而广泛研究。该文就纳米羟基磷灰石-聚乳酸复合支架材料的制备、力学性能及影响因素、与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化骨、与骨形态发生蛋白复合构建活性人工骨的成骨性能研究现状作一简要综述。     

碳酸化羟基磷灰石水泥复合活性多肽修复骨缺损的研究

目的 通过动物实验观察碳酸化羟基磷灰石水泥复合活性多肽P19修复骨缺损的效果。方法 在10只杂种犬肱骨近端制作骨缺损动物模型，采用碳酸化羟基磷灰石水泥复合活性多肽P19修复骨缺损，并以单纯碳酸化羟基磷灰石水泥作为对照，在修复骨缺损后5d，4、8、12、16周处死动物，通过X线和组织学观察其修复效果。结果 实验组和对照组修复材料均能完全充填骨缺损，界面与骨组织结合紧密，生物相容性良好，随着植入时间的延长，实验组修复材料可逐渐降解并被新生骨爬行替代，而对照组降解和新生骨替代速度相对较慢。结论 碳酸化羟基磷灰石水泥是一种新型的骨缺损修复材料，活性多肽P19后可以促进碳酸化羟基磷灰石成骨和降解性能。     

骨组织工程中硅磷酸钙材料研究进展

硅磷酸钙是一种具有良好的骨传导性能、成骨性能及可控降解性能的新型多孔生物陶瓷材料,主要包括含硅羟基磷灰石和含硅磷酸三钙.在骨组织工程中,硅磷酸钙有较高的生物学活性,对成骨细胞的黏附、增殖及分化等起着重要作用,并可减少环境改变引起的细胞损害,是较为理想的骨替代材料.硅磷酸钙自身不具有成骨性能,这是作为骨支架材料的一大缺憾,有待更深入研究.该文就硅在骨组织代谢中的作用、硅磷酸钙结构和理化性质以及硅磷酸钙实验研究和临床应用进展作一综述.     

成骨细胞株与强韧化纳米人工骨支架联合培养实验研究

目的 :观察成骨细胞株 ( 3T3 E1)在新型纳米氧化锆强韧化高孔隙率人工骨支架 (下文简称人工骨支架 )材料上生长情况。方法 :成骨细胞株 ( 3T3 -E1)与人工骨支架联合培养 ,通过光镜观察和细胞计数的方法了解成骨细胞与支架结合能力 ,扫描电镜观察细胞生长的情况。结果 :新型强韧化纳米人工骨材料与建株成骨细胞有良好的结合能力 ,成骨细胞株 ( 3T3 E1)在人工骨材料上生长良好。结论 :纳米骨支架是较理想的骨组织工程支架材料 ,成骨细胞复合支架用于骨缺损的修复 ,具有广阔的临床应用前景。     

兔成骨细胞与纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工骨细胞支架生物相容性研究

目的 研究成骨细胞与纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工骨细胞支架在体外培养条件下的生物相容性。方法 将成骨细胞株置于含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养，分为纳米支架复合细胞组和单纯细胞组，不同时间用倒置相差显微镜、HE染色光镜及扫描电镜观察。MTT法进行细胞增殖测定，并进行细胞微量蛋白含量检测和碱性磷酸酶的定量检测。结果 成骨细胞体外培养时复合或不复合纳米支架均生长良好，表现出典型的细胞形态特征和生物学特性，纳米支架利于细胞的贴附、生长与增殖，并对细胞的功能无不良影响。结论 纳米支架是较理想的骨组织工程支架材料，成骨细胞复合纳米支架用于骨缺损的修复，具有广阔的临床应用前景。     

珍珠层聚乳酸人工骨复合成骨细胞体内异位成骨研究

目的探讨珍珠层聚乳酸(nacre／polylactic acid，N／P)人工骨与同种异体成骨细胞复合，植入体内后异位成骨的作用机制，以及作为骨组织工程支架材料的可行性。方法成年雄性新西兰大白兔18只，按2、4和8周3个时间点随机分成3组，每组6只。将体外培养的同种异体新西兰大白兔成骨细胞，种植到N／P人工骨材料上，并植入每只兔左侧背部皮下为实验组；以不复合成骨细胞的N／P人工骨材料植入右侧背部皮下作对照，分别于植入后不同时间点取材，经大体观察、组织学检查和免疫组织化学方法检测。结果实验组2周时材料周围有少许炎性细胞聚集，4周时有类骨质形成，8周时有成熟骨组织形成，其中可见骨髓腔；对照组2、4周时仅见大量纤维组织长入材料内，8周时材料内纤维组织增多，但无成骨发生。结论N／P人工骨可作为理想的骨组织工程支架材料。     

以生物衍生材料为支架的组织工程骨移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的检测体外构建的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化，对移植组织进行组织学观察，探讨以生物衍生材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞，经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体骨为支架材料于体外构建。将健康新西兰白兔48只制成1cm长桡骨缺损模型后，随机分成A～D4组，每组12只，分别用部分脱钙冻干骨（partial demineralized freeze—dried bone，PDFDB）、组织工程骨、自体骨、同种异体骨植入兔桡骨节段性缺损。术后1、2、4周取材，用流式细胞仪检测4种材料移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化；通过常规组织学检测观察2、4、8、12周时4种材料的成骨作用。结果B组术后2周材料孔隙内有成骨细胞和成软骨细胞，可见骨、软骨混合性新生物形成，周边分布有破骨细胞，部分网架呈蚕食状被破坏吸收。术后4周，形成的新生骨过渡为编织骨。A、B组材料植入后1、2周外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞较术前明显升高（P〈0．05）；术后4周CD4^＋T细胞较术前轻度偏高，但无统计学差异（P〉0．05）。C组术后CD4^＋和CD8^＋T细胞升高不明显（P〉0．05）。D组术后1、2、4周外周血CD4^＋和CD8^＋T细胞较术前及其他各组同期均明显增高（P〈.．05）。结论PDFDB为支架材料构建的细胞一材料复合物移植后外周血T淋巴细胞增高，但不影响其良好的修复骨缺损能力，生物衍生骨可作为支架材料应用于骨组织工程研究。     

生物工程骨在山羊脊柱横突间植骨融合的实验研究

目的构建一种理想的骨移植替代材料。方法以关中奶山羊为实验对象,体外分离并培养骨髓间充质干细胞（MSCs）;构建人工骨复合物,以珊瑚羟基磷灰石（CHA）为支架,加入经过血管内皮生长因子（VEGF）基因转染的MSCs为三联复合物进行联合培养;将自体髂骨和构建好的生物工程骨植入山羊腰椎横突间进行对比观察研究。结果 8周触诊发现2组均无活动度。8周后摄X线片结果显示2组均已形成骨小梁。HE染色发现,基因增强工程骨在12周形成更加成熟的骨组织。生物力学测量显示2组移植骨在最大压缩强度和弹性模量上差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 CHAMSCs-VEGF三联成骨复合物在成骨的速度和质量上接近生物自体移植骨,有望广泛应用于临床。     

聚(丙交酯-co-乙交酯)仿生基质材料的制备

目的　将能与细胞表面整合素受体特异性结合的多肽共价结合于改性聚 (丙交酯 co 乙交酯 ) (PLGA)材料上 ,以提高材料对骨组织工程种子细胞的黏附能力。方法　用固相合成法合成 [K] 16 GRGDSPC多肽并鉴定 ;取 1g/L多肽溶液与已用交联剂预处理的改性PLGA材料室温下反应 ,用X射线光电子光谱法 (XPS)表征。结果　PLGA改性后引入了含活性基团的氨基酸序列 ,所合成的多肽序列为 [K] 16 GRGDSPC ,纯度达 95 %以上 ;XPS检测表明多肽成功地固定于PLGA多孔基质材料上。结论　在PLGA基质材料上固定 [K] 16 GRGDSPC多肽 ,为实现对骨组织工程种子细胞的高效黏附奠定了基础。     

Immunological study on the transplantation of an improved deproteinized heterogeneous bone scaffold material in tissue engineering

Objective： To observe the immune response after the transplantation of a deproteinized heterogeneous bone scaffold and provides the theoretic reference for clinical practice.
Methods： The fresh pig bone and deproteinized bone were transplanted respectively to establish BABL/C thigh muscle pouches model of male mice and take the samples for detection at 1, 2, 4, 6 weeks after operation. Lymphocyte stimulation index, subset analysis, serum specific antibody IgG, cytokine detection and topographic histologic reaction after implantation were investigated.
Results： After the transplantation of deproteinized bone, lymphocyte stimulation index, CD4^＋ and CD8^＋ T-lymphocyte subsets, serum specific antibody IgG and cytokines in deproteinized bone group were significantly lower than those in fresh pig bone group at each time point （P〈0.05）. The histological examination found that in fresh bone group at each time point, a large quantity of inflammatory cells infiltrated in the surrounding of bone graft, and they were mainly lymphocytes, including macrophages and monocytes. In deproteinized bone group, there were few inflammatory cells infiltration around bone graft one week after operation. The lymphocytes were decreased as time went by. At 6 weeks, fibroblasts and fibrous tissue grew into the graft, and osteoclasts and osteoprogenitor cells appeared on the verge.
Conclusions： The established heterogeneous deproteinized bone has low immunogenicity and is a potentially ideal scaffold material for bone tissue engineering.     

完全脱蛋白骨复合rhBMP2构建人工骨及其体内异位成骨

目的: 探讨异种完全脱蛋白骨复合基因重组骨形态发生蛋白(rhBMP2) 在体外构建人工骨的可行性,并对其体内异位成骨进行评估。方法: 体外将兔骨髓基质细胞进行成骨诱导, 然后接种复合rhBMP2的小牛完全脱蛋白骨, 构建组织工程骨, 植入自体大腿肌袋内, 术后4、8周处死动物分别进行常规组织学检查、碱性磷酸酶活性测定、折弯力学测试, 观测这种组织工程骨在体内的异位成骨作用。结果: 这种方法构建和组织工程骨在体内异位成骨效应显著且抗折能力较强。结论: 异种完全脱蛋白骨复合rhBMP2可作为骨组织工程支架材料, 这种组织工程骨在体内的成骨能力随植入时间的延长而增加。     

异种脱蛋白松质骨为载体构建组织工程骨用于脊柱横突间融合的实验观察

目的探讨异种脱蛋白松质骨（deproteinization bone,DPB）作为骨组织工程载体的性能及其用于山羊脊柱横突间融合的作用。方法取成年猪股骨远端松质骨通过理化方法制成DPB载体,对其形态结构、组成成分、生物力学特性以及材料对种子细胞生物学行为的影响进行检测分析。将载体材料复合一定量的自体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2）构建组织工程骨。取6～8月龄雄性山羊12只,制成L3-4双侧横突间植骨模型,左侧植入组织工程骨为A组,右侧植入等体积自体髂骨作对照为B组。分别于4、8及12周行X线片和组织学观察并对比分析。结果采用脱蛋白处理后的松质骨可见大小不等、相互交通、开放孔隙的网架结构。孔径200～500μm,孔隙率60％左右。其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为胶原,力学性能保存良好,有良好的细胞相容性。两组移植后不同时间点X线表现：A组植入横突间第4周与横突桥接处部分区域模糊,以内侧明显;第8周上下桥接部间隙变小,大量连续骨痂生成;12周后完全融合。早期A组密度略低于B组,12周后基本相同。移植区组织学观察：A组植入后第4周以多点方式形成新骨,第8周岛状生长的骨组织贯穿整个移植材料,12周编织骨交错排列,髓腔形成,成骨活性接近自体髂骨移植。B组,4周时有较多新骨形成;8周时出现大量胶原纤维,周边成骨明显;12周时,纤维组织减少,成骨活跃。结论异种DPB是一种良好的组织工程骨载体材料,可为再血管化和成骨细胞的分化提供一个稳定的环境。