MicroRNA-133b调节FGFR1-ERK1/2-SOX2信号通路对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的影响

目的 探讨microRNA-133b(miR-133b)对裸鼠肺癌NCI-H1975细胞移植瘤生长的抑制作用以及对成纤维细胞生长因子受体1-细胞外信号调节激酶1/2-性别决定区Y-box蛋白2信号通路（FGFR1-ERK1/2-SOX2）的影响。方法 q RT-PCR检测人肺成纤维细胞、肺癌细胞株miR-133b表达。miR-133b过表达NCIH1975细胞。将NCI-H1975细胞分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+pcDNA3.1组、miR-133b mimic+pcDNA3.1 FGFR1组。CCK-8法检测NCI-H1975细胞增殖抑制率，Transwell实验观察NCI-H1975细胞侵袭、迁移情况。复制裸鼠移植瘤模型并分组，将裸鼠分为对照组、mimic NC组、miR-133b mimic组、miR-133b mimic+AZD4547组，观察各组裸鼠肿瘤体积与重量，HE染色观察各组裸鼠肿瘤组织变化，TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组织化学法观察裸鼠肿瘤组织Ki-67、Cyclin D1、VEGF-A的表达...     

基因芯片筛选MiR-133b在结直肠癌细胞系中的靶基因

目的将miR-133b转染后与未转染的结直肠癌细胞配对进行基因芯片高通量测序及基因的功能注释,筛选出miR-133b在结直肠癌中相关的靶基因。方法将结直肠癌细胞系SW620及HT29分成4组进行转染,将miR-133b mimics转染组与NC转染组配对进行基因芯片测序,经多重筛选后的基因进行功能注释。结果 1.两种细胞系与对照组相比较,miR-133b mimics转染组miR-133b的表达显著上调(SW620:(502.46±16.84),P0.01;HT29:(332.39±13.04),P0.01)。2.最终筛选出9个相关靶基因,通过功能注释后发现其中有部分基因可能参与了结直肠癌的发生发展、侵袭转移等过程。结论 1.miR-133b mimics可成功转染于结直肠癌细胞系SW620及HT29,且在这两种细胞系中高表达。2.经过基因芯片及靶基因预测软件筛选出的miR-133b的9个靶基因,可能与结直肠癌机制相关。     

鼻咽癌CNE1细胞株裸鼠肌肉和皮下移植瘤模型的建立及比较

目的 建立人类鼻咽癌CNE1细胞系balb/c裸鼠的肌肉移植瘤模型,观察高分化细胞系CNE1在体内的生长及侵袭能力,为下一步研究鼻咽癌亚临床灶奠定基础.方法 体外培养LMP1阳性表达的CNE1细胞系,细胞免疫组化法检测LMP1表达情况,将细胞悬液分别注射balb/c裸鼠臀大肌和臀部皮下,各12只.定期观察并测量移植瘤大小,待有裸鼠濒临死亡时处死全部裸鼠取标本,4%多聚甲醛固定后石蜡包埋切片,分别做免疫组化分析及苏木精-伊红染色,观察肿瘤细胞浸润及转移情况.结果 与皮下组相比,肌肉组癌细胞向周围侵袭明显,组织切片中可见肌肉组织内癌巢及癌细胞侵入肌细胞现象.肌肉组移植瘤体内平均潜伏期[(11.92±2.02)d]和瘤体平均倍增时间[(2.32±0.24)d]均较皮下组[(15.40±2.46)d、(3.01±0.32)d]明显缩短(均P<0.01);平均瘤重(1.32±0.17)g较皮下组(1.13±0.15)g明显增加(P<0.05);淋巴结和肝脏转移12例,较皮下组(5例)明显增多(P<0.05);成瘤率(12例/10例)二者无显著差异(P>0.05).结论 裸鼠肌肉移植瘤模型对研究鼻咽癌细胞在体内的生长和侵袭能力较为省时、高效.     

聚酰胺-胺型树枝状高聚合物介导survivin反义寡核苷酸抑制结直肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的 探讨聚酰胺-胺型树枝状高聚合物(PAMAM)介导survivin反义寡核苷酸(survivin-ASODN)对结直肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 以人结直肠癌细胞SW620裸鼠皮下注射建立结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型.将PAMAM和阳离子脂质体分别与survivin-ASODN混合得到载反义基因转染复合物.透射电镜观察复合物的形态.激光散射粒径分析仪测定粒径,zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位,离心法和紫外分光分度仪测定复合物的包封率和体外DNA释放速度.将两种反义基因复合物注射裸鼠移植瘤体内,观察两组移植瘤体积,Western bloting方法检测移植瘤组织中survivin基因的表达.结果 PAMAM-survivin-ASODN复合物的粒径小于脂质体-survivinASODN复合物的粒径(P〈0.01),而zeta电位高于PAMAM-survivin-ASODN复合物zeta电位(P<0.05),基因包封率两组无显著差异.PAMAM对DNA持续释放达14d.但脂质体复合物只持续5 d.PAMAM-survivin-ASODN复合物治疗组裸鼠移植瘤survivin蛋白表达低于脂质体-survivin-ASODN复合物组(P<0.05).PAMAM-survivin-ASODN复合物治疗组移植瘤体积低于脂质体-survivin-ASODN复合物组(P<0.05).结论 PAMAM能将survivin-ASODN高效递送到结直肠癌移植瘤细胞.降低survivin蛋白的表达,抑制移植瘤生长.     

反义血管内皮生长因子(VEGF)转染体内抑制胆囊癌VEGF及其受体表达的研究

目的:探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠移植瘤的生长及VEGF、Flt-1和KDR表达的影响。方法:通过裸鼠皮下接种体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞建立人胆囊癌裸鼠移植瘤模型,并将裸鼠分为对照组(A组)、VEGF SODN Oligifectamine组(B组)和VEGF ASODN Oligifectamine组(C组),各组裸鼠在接种后24h内,在接种部位皮下分别缓慢注射200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGF SODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl)及VEGF ASODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl),每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,并运用免疫组化技术检测胆囊癌裸鼠移植瘤中VEGF、Flt-1和KDR的表达变化。结果:A、B、C组裸鼠2周时的成瘤率分别为87.5%、87.5%和37.5%,C组显著低于A、B组(P<0.05),5周时各组的成瘤率均为100%。各组裸鼠移植瘤5周时的体积和瘤重分别为:A组(253.49±27.11)mm3和(1.96±0.17)g,B组(255.84±26.51)mm3和(1.86±0.21)g,C组(125.45±17.49)mm3和(0.97±0.13)g,C组显著低于A、B组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达均无统计学差异(P>0.05),而C组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达较A、B组明显减弱(P<0.05)。结论:VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF、Flt-1和KDR在蛋白水平的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长及血管的形成。     

DADS上调miR-200b抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长与侵袭

目的 探索miR-200b和二烯丙基二硫(DADS)相关的抑瘤机制,为揭示DADS抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的内在分子机制提供理论依据.方法 采用qRT-PCR分别检测不同浓度的DADS对Y79细胞miR-200b表达的影响,DADS分别设置六种浓度:0 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L和400 μmol/L.MTT和Transwell侵袭实验分别检测DADS和miR-200b对Y79细胞生长及侵袭能力的影响,将实验设置成五个组,即miRNA阴性对照组(瞬时转染scramble 40μmol/L);miR-200b组(瞬时转染miR-200b-mimics 40μmol/L);DADS阴性对照组(DMSO 10μmol/L,即mock组);DADS组(DADS 200μmol/L)和DADS+miR-200b组(瞬时共转染miR-200b-mimics 40μmol/L)和DADS (200μmol/L).结果 DADS可上调Y79细胞中miR-200b的表达,且其呈剂量依赖性(P<0.05);在MTT实验中,miR-200b组的OD值(0.549±0.057)较miRNA阴性对照组(0.737±0.135)明显降低;DADS组的OD值(0.508±0.064)较DADS阴性对照组(0.722±0.145)明显降低;而DADS+miR-200b组的OD值(0.362±0.081)较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组降低最为显著(P<0.05),即DADS可以通过上调miR-200b抑制Y79细胞的增殖能力.在Transwell侵袭实验中,外源性的高表达miR-200b组(105±13)较miRNA阴性对照组(162±12)能够显著抑制Y79细胞的穿膜细胞数,DADS组(102±13)较DADS阴性对照组(154±8)能够显著降低Y79的穿膜细胞数,且DADS+miR-200b组(77±8),细胞穿膜细胞数较miRNA阴性对照组和DADS阴性对照组减少最显著(P<0.05),即DADS通过上调miR-200b抑制Y79细胞侵袭.结论 DADS通过上调miR-200b的表达抑制视网膜母细胞瘤细胞的生长及侵袭.     

miR-614过表达抑制肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长

目的:探讨miR-614过表达对肺腺癌A549细胞增殖、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将培养至对数生长期的人A549细胞分为对照组、miR-NC组(脂质体转染miR-NC mimic)和miR-614组(脂质体转染miR-614 mimic).RT-qPCR检测每组A549细胞中miR-614的表达,CCK-8法检测每组A549细胞增殖活性;Transwell法检测检测每组A549细胞侵袭细胞数,Western Blot法检测每组A549细胞血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)和Ki-67蛋白的相对表达量.皮下种植0.2 mL各组A549细胞悬液(5 ×106/mL),构建裸鼠移植瘤的模型,每周测量1次移植瘤组织的体积,造模5周后进行移植瘤组织称重.结果:miR-614组A549细胞增殖活性和侵袭细胞数低于miR-NC组(P＜0.05),细胞VEGF、MMP-2和Ki-67蛋白表达低于miR-NC组(P＜0.05),TIMP-2蛋白表达高于miR-NC组(P＜0.05);miR-614组裸鼠移植瘤质量低于miR-NC组,且造模3周、4周和5周后,移植瘤体积低于miR-NC组(P＜0.05).结论:miR-614过表达可抑制A549细胞的增殖和侵袭,进而抑制肿瘤生长.     

miR-18a对结肠癌血管生成的影响

目的 探讨miR-18a对结肠癌血管生成的影响及其机制.方法 以用合成的miR-18a模拟物转染人结肠癌细胞系SW620细胞.应用MTT法检测过表达miR-18a对细胞增殖活性的影响.分别用稳转miR-18a的SW620细胞接种建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型.每周测量瘤体积.5周后麻醉处死裸鼠.免疫组化法检测增殖细胞核标志物Ki 67和血管内皮细胞标志物CD31的表达.应用Western blotting法检测血管生成相关的mTOR通路中mTOR下游靶蛋白S6K1和4E BP1的磷酸化情况,并检测肿瘤组织血管生成相关因子缺氧诱导因子1 α(HIF-1α)和血管内皮生长凶子(VEGF)的表达.结果 miR-18a过表达显著降低SW620细胞的增殖能力(P＜0.01).并且,该基因对裸鼠人结肠癌移植瘤有明显的生长抑制作用,SW620组瘤体显著减小,抑瘤率达71.8％(P＜0.01).免疫组化检测显示,miR-18a显著抑制细胞增殖核抗原蛋白Ki-67(P ＜0.01)和血管内皮细胞标记物CD31(P＜0.05)的表达.Western blot法检测显示,miR-18a显著抑制S6KI(P＜0.01)和4E-BPI(P ＜0.05)的磷酸化,而且抑制肿瘤组织中HIF-1 α (P＜0.05)和VEGF蛋白(P＜0.01)的表达.结论 过表达miR-18a抑制结肠癌生长和血管生成,这可能与其抑制mTOR/VEGF通路有关,提示过表达miR-18a 可能成为结肠癌治疗的新方法.     

双氢青蒿素干预结直肠癌模型动物肿瘤生长的实验研究

[目的]观察双氢青蒿素(DHA)对结直肠癌模型动物肿瘤生长的影响.[方法]选用SPF级BALB/c裸鼠,背部皮下接种结直肠癌LoVo细胞悬液复制结直肠癌模型;造模成功裸鼠随机分成5组:模型对照组,5-Fu组(腹腔注射5-Fu 20 nag·kg-1·d-1,共5d),DHA高、中、低剂量组(分别按120、60、30mg·kg-1·d-1剂量灌胃给药).14 d后,检测活体肿瘤及解剖剥离后裸瘤体积、平均瘤体质量、肿瘤生长速率和抑瘤率.[结果]治疗后DHA各给药组及5一Fu组活体肿瘤的体积及肿瘤生长速率均减少,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01);5-FU组及DHA高、中剂量组的裸瘤体积显著小于模型组(P<0.05或P<0.01);各给药组瘤体质量显著低于模型组(均P<0.05);DHA高、中剂量组的抑瘤率显著高于5-FU组(P<0.05),但DHA低剂量组抑癌率显著低于5-FU组(P<0.05).[结论]DHA对结直肠癌模型动物肿瘤生长具有一定的抑制作用.     

氟尿嘧啶缓释制剂抑制人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤生长的机制研究

目的探讨氟尿嘧啶缓释制剂对人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤生长的抑制作用,进一步验证氟尿嘧啶缓释制剂是一种有效抑制肿瘤生长,副作用少的新型化疗药。方法 24只裸鼠接种人结直肠癌细胞LOVO细胞株,建立裸鼠皮下种植瘤模型,随机分为PBS对照组、5-FU注射液化疗组和缓释剂植入组,每组8只,记录三组裸鼠肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,比较各组种植瘤生长情况,并HE染色观察各组肿瘤组织病理学改变,免疫组化法检测Bcl-2/Bax蛋白水平表达的变化。结果裸鼠皮下接种肿瘤细胞7d后成功致瘤。用药后肿瘤生长曲线及第30天肿瘤体积大小:PBS对照组为(3240+187)mm3、5-FU注射液化疗组为(1568+86)mm3、缓释剂植入组为(600+38)mm3,三组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。HE染色:缓释剂植入组相比其他组肿瘤细胞异性型明显,恶性程度明显,腺管状结构不明显,小区肿瘤细胞有凋亡明显,仅有少量坏死,肿瘤组织边界清晰,未见侵袭脂肪及肌层组织。5-FU注射液化疗组、缓释剂植入组Bcl-2蛋白表达均低于PBS对照组,Bax表达均高于PBS对照组;其中5-FU注射液化疗组Bcl-2低于缓释组,Bax高于缓释组。结论氟尿嘧啶缓释制剂对人结直肠癌裸鼠皮下种植瘤有较好的抑瘤作用,作用机制很可能通过介导下调Bcl-2和上调Bax的表达。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。