缺氧诱导因子1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌的放疗增效作用

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）反义寡核苷酸结合放射对人喉鳞状细胞癌（简称喉癌）裸鼠移植瘤生长抑制敏感性的影响。方法对25只裸鼠建立喉癌裸鼠模型,分为5组：A组（正义放疗）、B组（反义放疗）、C组（空脂质体放疗）、D组（放疗）和E组（空白对照）,治疗期间每3 d测量1次鼠重、瘤体最大长径及最大垂直径,治疗21 d后将实验鼠脱颈处死,瘤体称重后应用流式细胞仪、免疫组化观察抑瘤、凋亡情况及相关蛋白表达。结果反义放疗组瘤重（1.037±0.106）g明显低于其余4组（P〈0.05）,抑瘤率（50.21±8.10）%和凋亡率（34.52±4.159）%明显高于其余4组（P〈0.05）。免疫组化PV法染色显示：HIF-1α正义放疗组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少;正义放疗组p53表达于胞核呈棕色颗粒浓染,而反义放疗组表达较少;VEGF正义对照组胞浆有大量棕色颗粒沉积着色,而反义放疗组表达较少。流式细胞仪检测结果显示：反义放疗组的HIF-1α、p53、VEGF蛋白表达的荧光指数（fluorescen-ceindex,FI）分别为0.98±0.28、2.13±0.03、1.09±0.36明显低于其余4组（P〈0.05）。结论 HIF-1α反义寡核苷酸结合放疗可以抑制喉癌异体移植瘤的生长,增加肿瘤细胞凋亡率,其机制之一可能是HIF-1α的下调降低了喉癌组织中p53、VEGF的蛋白表达,因此HIF-1α反义寡核苷酸增加喉癌对放疗的敏感性。     

缺氧诱导因子-1α在中耳胆脂瘤组织中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子- 1α(HIF- 1α)在中耳胆脂瘤发病机制中的作用,检测其在中耳胆脂瘤和外 耳道正常上皮中的表达情况。方法:取31例中耳胆脂瘤和10例外耳道正常上皮标本,用免疫组织化学技术检测 HIF-1α蛋白的表达。结果:在中耳胆脂瘤中HIF-1α的表达较外耳道正常上皮明显增多(P<0.05)。结论:中耳 胆脂瘤中HIF-1α的表达显著升高,推测HIF-1在中耳胆脂瘤的发生、发展过程中具有极其重要的作用,并且缺 氧有可能是中耳胆脂瘤发病机制中的一个诱因。     

缺氧诱导因子-1α在甲状腺癌中的调节机制

肿瘤组织内局部缺氧是导致肿瘤预后差的重要因素,缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor -1a, HIF-1α)是低氧环境下促进肿瘤侵袭、转移的主要调节因子,其在肿瘤细胞内的表达作用与多种因素有关。HIF-1α在甲状腺癌中的调节机制可能与BRAFV600E调控、HIF-1α、CXCR4和VEGF表达调节、PTEN表达调节、CD44V6表达调节有关。     

缺氧诱导因子-1α与P糖蛋白在喉鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨H IF-1α、P-gp在喉鳞癌及喉黏膜正常上皮中的表达差异,两者在喉鳞癌中表达与临床病理特征的关系及表达间的相关性。方法应用免疫组化染色技术检测H IF-1α和P-gp在86例喉鳞癌及32例喉黏膜正常上皮中的表达。结果H IF-1α与P-gp在喉鳞癌组织中阳性表达率均高于喉黏膜正常上皮组织(P0.05)。喉鳞癌组织中H IF-1α阳性表达率与肿瘤临床分期、淋巴结转移有关(P0.05);P-gp阳性表达率与肿瘤临床分期、组织学分级、淋巴结转移有关(P0.05)。H IF-1α和P-gp蛋白在表达水平上成正相关(r=0.442,P0.01)。结论H IF-1α与P-gp的高表达可能在喉鳞癌病情进展中起一定作用,并可作为评估喉鳞癌临床病理特征的有效生物学指标。     

XIAP反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞化疗增敏作用的研究

目的 通过X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)转染喉癌Hep-2细胞,探讨其对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法 体外培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,应用脂质体法进行XIAP ASODN基因转染,荧光显微镜下观察计算转...     

缺氧诱导因子-1α与头颈肿瘤

缺氧诱导因子-1α因在细胞缺氧诱导所产生的各种特异性应答中具有关键性的作用,近来成为肿瘤研究的热点之一.本文就其结构、功能、调节及在头颈肿瘤中的研究进展做一综述.     

缺氧诱导因子-1α与碳酸酐酶Ⅸ在鼻息肉组织中的表达及相关性分析

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、碳酸酐酶Ⅸ(CA Ⅸ)在鼻息肉组织中的表达及其相关性,探讨HIF-1α、CA Ⅸ在鼻息肉发病过程中的作用.方法:收集28例鼻息肉组织(鼻息肉组)和12例正常下鼻甲组织(对照组),用免疫组织化学法检测鼻息肉组与对照组中HIF-1α与CA Ⅸ的表达,观察比较2组之间表达的差异.结果:免疫组织化学染色显示鼻息肉组HIF-1α、CA Ⅸ免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组.图像分析显示,鼻息肉组HIF-1α、CA Ⅸ的积分吸收度值(103/HP)分别为21.76±3.52、26.87±4.60,与对照组3.37±1.65、3.25±1.20相比差异有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组中HIF-1α表达与CA Ⅸ表达密切相关(r=0.820,P<0.01).结论:鼻息肉组中HIF-1α、CA Ⅸ表达均上调,且二者有协同表达关系,说明鼻息肉组织中存在缺氧现象,再加上感染、炎症等作用使氧耗增多,能量代谢失调,加重局部缺氧,HIF-1α表达升高,并且能够激活、上调CAⅨ的表达,从而在缺氧状况下维持细胞的正常pH值,使细胞适应缺氧微环境,从而保证缺氧区域细胞的持续生长和增殖,最终形成恶性循环,导致鼻息肉的形成.     

缺氧诱导因子-1α与头颈肿瘤

缺氧诱导因子-1α因在细胞缺氧诱导所产生的各种特异性应答中具有关键性的作用，近来成为肿瘤研究的热点之一。本就其结构、功能、调节及在头颈肿瘤中的研究进展做一综述。     

HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用

目的：通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法：体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6h后4Gy7射线照射。低氧培养24h后RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达,流式细胞仪检测HIF-1α蛋白水平及细胞凋亡率,MTT检测细胞存活情况。结果：低氧使人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射的敏感性下降;低氧并未影响HIF-1αmRNA的表达,HIF-1α蛋白在低氧6h时表达已开始升高,低氧36h时达高峰,之后表达逐渐下降;放射刺激对HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）;各浓度的反义寡核苷酸转染组降低HIF-1α的转录及蛋白水平;MTT结果显示随反义核苷酸浓度增高,其增殖抑制效应越强（P〈0．05）,正义对照核苷酸及脂质体对照没有显著的抑制效应（P〉0、05）,但转染浓度在400nmol／L以上时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;放疗后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显,较对照组及单纯放射组细胞凋亡率增加（P〈0．01）。结论：低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射有抵抗作用,这种抵抗作用与低氧时HIF-1α蛋白表达上调有关,而放射本身并未上调HF-1α蛋白的表达;HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低HIF-1α蛋白表达,提高低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放疗的敏感性。     

低氧诱导因子-1α反义寡核酸联合化疗对Hep-2细胞的影响

目的 探讨应用反义寡核苷酸抑制低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞(简称Hep-2细胞)化疗敏感性的影响.方法 体外培养Hep-2细胞,脂质体介导反义寡核苷酸转染6h,给予化疗药物顺铂低氧培养24 h后,RT-PCR方法检测HIF-1...     

缺氧诱导因子1α和环氧化酶2在喉鳞癌组织中的表达及意义

目的 探讨喉鳞癌组织中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)和环氧化酶2(cyclooxygenage-2,COX-2)的表达情况及其与患者临床病理资料的关系和对预后的影响.方法 免疫组化Envision二步法检测60例喉鳞癌标本中HIF-1α和COX-2蛋白的表达,15例不典型增生、10例声带白斑、10例声带息肉标本作对照.结合喉鳞癌患者临床和病理资料进行分析.结果 60例喉鳞癌组织中HIF-1α呈高表达为35.0%(21/60),COX-2高表达为38.3%(23/60).两者阳性表达率与不典型增生、声带白斑及声带息肉组相比差异均具有统计学意义(Fisher确切概率法,P值均<0.01).喉鳞癌组织中HIF-1α和COX-2的表达结果 呈正相关(r=0.526,P<0.01).喉癌HIF-1α高、低表达组在临床分期(X2=4.331,P<0.05)及淋巴转移方面(Fisher确切概率法,P<0.05)组间差异具统计学意义;COX-2高、低表达组在T分期及临床分期方面组间差异具统计学意义(X2值分别为6.792和8.539,P值均<0.01).单因素分析HIF-1α高、低表达组间生存率及无瘤生存率差异均具统计学意义(X2值分别为6.003和5.010,P值均<0.05),COX-2高、低表达组生存率差异及无瘤生存率差异均具统计学意义(X2值分别为9.489和6.102,P值均<0.05).多因素分析提示复发及COX-2表达是影响喉癌患者预后的重要危险因素(相对危险度分别为7.104和5.714,P值均<0.01).结论 HIF-1α和COX-2在喉鳞癌发生、发展中起重要作用,两者可能有协同关系.COX-2表达及肿瘤复发情况可能作为评估喉鳞癌预后的重要危险因素.     

缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1表达对鼻咽癌患者预后的影响

目的探讨鼻咽癌组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)表达活性与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取宁波市镇海龙赛医院耳鼻喉科收治的鼻咽癌患者63例(鼻咽癌组)和慢性鼻咽炎患者20例(对照组),分别取鼻咽病灶组织,免疫组织化学法检测HIF-1ɑ和GLUT-1表达活性,分析其表达水平与患者临床病理特征及生存期的关系。结果鼻咽癌组HIF-1α和GLUT-1阳性表达率分别为55.56%(35/63)、58.73%(37/63),显著高于对照组的10.00%(2/20)、15.00%(3/20),组间差异具有统计学意义(P<0.01)。HIF-1α、GLUT-1阳性表达率与鼻咽癌患者的临床分期、淋巴结转移具有显著相关性(P<0.05);HIF-1α阳性者3年生存率75.76%,显著低于阴性患者的85.19%(P<0.05);GLUT-1阳性者3年生存率75.00%,显著低于阴性患者的88.89%(P<0.05)。结论 HIF-1α和GLUT-1在鼻咽癌组织中高表达,且与患者的临床分期、淋巴结转移和预后相关。     

缺氧诱导因子和血管生成素在喉癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-IX(HIF-1α)及血管生成素-2(Ang-2)在喉癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学法检测52例喉癌组织和10例正常喉组织中HIF-1α、Ang-2蛋白的表达.结果:HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织和正常喉组织中的表达差异有统计学意义(均P<0.05);HIF-1α蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期和淋巴结转移有关(均P<0.05),而与患者的性别、年龄、分化程度无关(均P>0.05);Ang-2蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.01或P<0.05),而患者的性别、年龄对其表达无明显影响(均P>0.05);HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织中的表达呈正相关(r=0.607,P<0.01).结论;HIF-1α和Ang-2蛋白在喉癌组织中的高表达,可能与肿瘤的生长、浸润及转移有密切关系.     

缺氧诱导因子-1α与微血管密度在人鼻咽癌中的表达及相关性研究

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中的表达,并用CD34标记测定微血管密度(MVD),探讨HIF-1α和MVD在鼻咽癌各种临床病理因素中的作用以及它们之间的相互联系.方法:采用免疫组织化学SABC及SP法检测58例鼻咽癌和20例慢性鼻咽炎组织中HIF-1α的表达情况,并用CD34行免疫组织化学染色,计数MVD,并结合临床病理特征进行分析.结果:鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织HIF-1α的阳性表达率分别为79.31%和10.oo%,差异具有统计学意义(P＜0.01).鼻咽癌组织MVD为39.32±7.99,慢性鼻咽炎为18.73±2.39,差异有统计学意义(P＜0.01).鼻咽癌组织中,有淋巴结转移组HIF-1α阳性表达率(92.6%)明显高于无淋巴结转移组(67.7%),有淋巴结转移组MVD(44.41±5.63)高于无淋巴结转移组(34.89±7.09).不同临床病理分期的HIF-1α的表达和MVD均差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).HIF-1α的表达与MVD呈正相关(P＜0.01).结论:HIF-1α参与了鼻咽癌的发生、浸润和转移;血管生成在鼻咽癌的浸润和转移中起了重要作用;鼻咽癌中HIF-1α的表达与肿瘤血管生成密切相关,在鼻咽癌发展过程中起重要作用,可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点.     

E1A基因对裸鼠移植瘤生长的抑制和化学治疗的增敏作用

目的 探讨E1A基因对人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和化学治疗(化疗)增敏作用及其相关机理。方法 通过裸鼠致瘤实验，观察了E1A基因的抑瘤作用。通过模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验，观察E1A基因及其与博来霉素联合应用在动物体内的疗效。采用免疫组织化学染色检测E1A基因对HER-2／neu表达的影响。结果 裸鼠致瘤实验结果显示：686LN-1-E1A细胞形成的肿瘤较686LN-1和686LN-1-vect的出瘤时间晚，生长慢，瘤重小，抑瘤率为71．8％。模拟E1A基因治疗临床应用的裸鼠实验结果显示：与对照组相比，博来霉素组、E1A基因组和E1A基因加博来霉素组的抑瘤率分别为：53．1％、76．8％和96．7％，与博来霉素组相比，E1A基因加博来霉素组的抑瘤率为：92．8％。免疫组织化学染色显示E1A基因能抑制HER-2／neu的表达。结论 E1A基因能够明显抑制人舌鳞状细胞癌淋巴结转移癌细胞裸鼠移植瘤的生长并显著增加其对博来霉素敏感性，具有较好的临床应用前景，该作用可能与E1A基因抑制HER-2／neu的表达有关。     

Survivin反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗的增敏作用

目的探讨SUrvivin在放疗诱导喉癌细胞凋亡中的作用以及Survivin反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASODN）技术对HeP-2细胞株增殖、凋亡及其放疗敏感性的影响。方法人工合成硫代SurvivinASODN,通过脂质体法转染人喉鳞状细胞癌Hep一2细胞株后,采用：①流式细胞法测定SurvivinASODN转染Hep一2细胞的转染率;②RT-PCR法检测基因转染后SurvivinmRNA的表达情况变化;③流式细胞仪检测射线照射后细胞凋亡率及Survivin蛋白的变化。结果①各浓度带FITC标记的SurvivinASODN转染细胞后6小时,取转染细胞制成的单细胞悬液,于流式细胞仪进行检查,发现转染效率均为94％～98％;②各浓度SurvivinASODN作用于Hep-2细胞24小时后,均出现SurvivinmRNA的表达下调,并呈剂量依赖关系,同时伴有细胞凋亡率的升高;③放疗~DSurvivinASODN转染组细胞凋亡率均显著高于单纯放疗组细胞凋亡率（P〈0．05）,随着SurvivinASODN剂量的增加,细胞凋亡率逐渐增加（P〈O．01）。放疗加ASODN转染组细胞Survivin蛋白表达率低于单纯放疗各组细胞Survivin蛋白表达率（P〈0．05）。各实验组与对照组中凋亡率的变化与Survivin蛋白荧光指数的变化呈负相关。结论喉癌细胞对放疗的抵抗作用与Survivin蛋白的表达水平有关,Survivin反义寡核苷酸转染Hep-2细胞株能够提高细胞对放疗的敏感性。     

缺氧诱导因子-1α和BNIP3在喉癌组织中的表达及相关性研究

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和BNIP3在喉癌组织中的表达及相关性.方法:采用SP免疫组织化学方法对45例喉癌组织、12例癌旁正常黏膜组织中HIF-1α和BNIP3的表达进行检测.结果:HIF-1α、BNIP3表达于细胞质及细胞核,喉癌组织中的HIF-1α和BNIP3的表达高于癌旁正常黏膜组织(P＜0.05),并且两者的表达呈正相关(P＜0.05,).结论:HIF-1α与BNIP3在喉癌中的高表达密切相关.两者的高表达在喉癌的发生发展中可能具有重要作用,HIF-1α可能诱导BNIP3的表达,针对HIF-1α和BNIP3的靶向治疗有望成为新的治疗方法.     

组织缺氧诱导因子-1α及相关靶基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达

目的 检测喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织缺氧诱导因子-10α( hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter protein-1,GLUT-1)、血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白表达情况,并通过体外实验进一步验证低氧对喉鳞癌细胞HIF-1α及其下游靶基因GLUT-1、VEGF的表达上调方面的重要促进作用.方法 采用SP免疫组织化学和免疫细胞化学方法检测喉鳞癌组织和Hep-2细胞中HIF-1α、GLUT-1、VEGF蛋白的表达,分析HIF-1α与GLUT-1、VEGF表达的相关性.结果 35例喉癌患者组织切片中16例HIF-1α表达阳性(45.7％),16例GLUT-1表达阳性(阳性率45.7％),19例VEGF表达阳性(阳性率54.3％).HIF-1α和VEGF的表达水平与喉癌病理分级和淋巴转移有关(P值均＜0.05);GLUT-1表达水平与淋巴转移有关(P＜0.05).体外实验结果显示,Hep-2细胞在低氧条件下HIF-1α、GLUT-1、VEGF的蛋白表达明显增加(P值均＜0.05).结论 HIF-1α可作为转录调控因子参与调控GLUT-1、VEGF的表达,进而在喉癌的发生、侵袭、转移过程中发挥重要作用.     

缺氧诱导因子1α与黏蛋白5在慢性鼻-鼻窦炎组织中的表达与意义

目的：探讨缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）与黏蛋白5AC（MUC5AC）、黏蛋白5B （MUC5B）mRNA在慢性鼻-鼻窦炎（CRS）中的表达水平及其相关性。方法选82例CRS伴鼻息肉（CRS with nasal polyps,CRSwNP）组、88例CRS不伴鼻息肉（CRS without nasal polyps,CRSsNP）组以及15例正常上颌窦口黏膜作为对照组。收集3组鼻窦黏膜,采用免疫组织化学法和逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测HIF-1α与MUC5AC、MUC5B的表达并分析相关性。结果①免疫组化结果：光镜下, CRSsNP或CRSwNP组中黏膜上皮MUC5AC的染色更多,主要位于胞浆内,呈浅黄色或棕黄色颗粒;MUC5B主要在黏膜下腺腺体的黏液细胞中表达;HIF-1α主要定位在黏膜上皮细胞核,在胞浆内也有表达,呈浅黄色或棕黄色颗粒,较对照组明显增多。②qRT-PCR结果：CRSwNP组中HIF-1α、MUC5AC、MUC5B mRNA的相对表达量分别为1.565±0.145、0.980±0.215、1.432±0.263;CRSsNP组中相对表达量分别为1.612±0.253、0.901±0.279、1.509±0.289;对照组中相对表达量分别为0.381±0.162、0.357±0.164、0.400±0.218;CRSsNP组、CRSwNP组与对照组比较差异均有统计学意义（P均<0.05）。CRSsNP组、CRSwNP组中HIF-1α与MUC5AC、MUC5B mRNA的表达均呈正相关（CRSwNP组：r=0.501、0.676,CRSsNP组：r=0.527、0.601,P均<0.05）。结论 HIF-1α与MUC5AC、MUC5B mRNA在CRS中表达水平明显升高,且HIF-1α与MUC5AC、MUC5B mRNA表达存在密切联系。     

糖皮质激素对鼻息肉缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在鼻息肉组织中的表达及相关性, 探讨局部应用糖皮质激素类药物对鼻息肉的作用机制。方法 采用免疫组化SP法检测鼻息肉组织在应用丙酸氟替卡松鼻喷剂治疗前、后及下鼻甲HIF-1α及VEGF的表达变化。结果 鼻息肉组织中HIF-1α和VEGF的表达水平明显高于下鼻甲组织（P均＜0.01）;激素治疗后HIF-1α、VEGF表达下降(P＜0.05)。鼻息肉的发病与组织中HIF-1α、VEGF的表达呈明显正相关（r=0.627, P＜0.05）。结论 局部应用糖皮质激素可降低HIF 1α、VEGF的表达,有效治疗鼻息肉。