反义Gαq/11亚基ODNs对平滑肌细胞DNA合成和PC蛋白表达的影响

目的：探讨Ｇｑ蛋白介导血管活性多肽对ｖＳＭＣＤＮＡ合成及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达的影响。方法：用硫代修饰的Ｇαｑ／１１亚基反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ），以６μｍｏｌ／Ｌ的浓度加入含１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＴ－１刺激无血清ＤＭＥＭ培养基中体外培养ｖＳＭＣ。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ｖＳＭＣＤＮＡ合成、免疫细胞化学技术检测ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白表达。结果：Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ可明显抑制ｖＳＭＣＤＮＡ的合成，在１２ｈ，２４ｈ时抑制率分别为８４２％和８５３％；Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ亦明显降低ｖＳＭＣＰＣＮＡ蛋白的表达。而相同浓度的正义Ｇαｑ／１１ＯＤＮｓ只呈现少量抑制作用。结论：本实验提示Ｇαｑ／１１ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能进一步应用于由血管活性多肽刺激引起的ｖＳＭＣ增生性疾病如经皮冠脉腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的防治的研究     

G蛋白在调节血管平滑肌细胞功能活动中的作用

Ｇ蛋白在信号传导过程中起“分子开关”作用。研究显示，胞外血管活性多肽、生长因子及细胞因子均通过激活血管平滑肌细胞膜上的Ｇ蛋白，控制血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的舒缩、合成、分泌、分化、迁移和增殖等功能。Ｇ蛋白对维持血管壁的完整性以及调节血管张力起极为重要的作用。Ｇ蛋白含量异常及功能紊乱，均可能与高血压、动脉粥样硬化、冠心病和经皮冠脉腔内血管成形术后再狭窄等有极为重要的关系     

纤维粘连蛋白和层粘蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长的分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以上呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

周期性应变诱导血管平滑肌细胞桩蛋白和踝蛋白的表达

利用脉动膜式张应力系统,给离体培养的VSMCs施加14%,1 Hz的周期性应变,免疫荧光细胞化学染色,激光共聚焦扫描显微镜观察、分析桩蛋白和踝蛋白的表达变化.结果表明,周期性应变促进VSMCs桩蛋白和踝蛋白的表达增加.说明桩蛋白和踝蛋白是周期性应变条件下VSMCs细胞内信号传递的重要信号物质.     

去甲肾上腺素对培养兔主动脉平滑肌细胞G蛋白mRNA的影响

目的和方法：去甲肾上腺素（ＮＥ）的脱敏感与Ｇ蛋白的变化有关。本实验将ＮＥ同家兔主动脉平滑肌细胞共同培养，用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交定量分析观察ＮＥ的作用与Ｇ蛋白表达的关系。结果：Ｇｓα在ＮＥ处理２４ｈ后显著升高，４８ｈ降至对照水平；Ｇｉ２α２４ｈ亦显著升高，但４８ｈ下降并略低于对照。Ｇｏα２４、４８ｈ均高于对照；Ｇｉ３α未能检测到。结论：ＮＥ对平滑肌细胞几种主要Ｇ蛋白亚型的基因表达是有显著影响的     

脓毒血症时大鼠心脏Gαq／11的变化

Ｇ蛋白是连接多种细胞膜受体与效应器之间信号转导的重要蛋白质。其中Ｇαｑ／１１是调节肌醇磷脂信号转导途径的关键物质。脓毒血症往往导致不同程度的心功能障碍，其发生又可促进脓毒血症的进展与恶化。有研究表明，内毒素休克大鼠心肌细胞蛋白激酶（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉ...     

G蛋白介导促胰液素对大鼠胃平滑肌细胞的舒张作用

本研究应用人鼠游离胃平滑肌细胞和采用[35S]GTPγS结合法测定肌细胞的G蛋白,观察促胰液素舒张胃个沿肌细胞中的G蛋白的变化及其信号转导通路。结果显示：（1）促膝液素对胃体、胃窦平滑肌细胞均有舒张作用,促膝液素抗血清可阻断促腔激素对胃窦平滑肌细胞的舒张反应,Forskolin与cAMP抑制剂分别加强和抑制促胰液素的这一作用。（2）Gαs抗体可抑制促胰液素的舒张作用,促胰液素明显引起Gαs抗体与[35S]GTPγS结合的增加,表明胃平滑肌细胞中促胰液素受体与Gs蛋白相偶联,激活cAMP系统介导促胰液素舒张胃平滑肌细胞。     

血管成形术后平滑肌细胞癌基因产物Fos及热休克蛋白—70的表达及…

目的：研究血管成形术后平滑肌细胞中Ｆｏｓ、热休克蛋白－７０的表达及意义。方法：将１０只新西兰家兔随机分为正常对照组（血管数为ｎ＝４），血管成形术组（ｎ＝８），血管成形术＋低分子量肝素组（ｎ＝８），以２Ｆ ＰＴＣＡ导管对两侧髂动脉进行血管成形术，术后１小时、２小时部分平滑肌细胞阳性，２小时表达增多；正常动脉内热休克蛋白－７０位于平滑肌细胞胞浆内，血管成形术后１、２小时平滑肌细胞核呈阳性；血管成形术＋     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长和分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以下呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖和骨架蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素(NE)对血管平滑肌细胞(VSMC)骨架蛋白表达与增殖之间的关系,探讨神经因素对VSMC的调控作用.方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,用BrdU标记增殖的细胞;免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达.结果:血清培养对VSMC有明显促增殖作用,而血清饥饿则能可逆性抑制VSMC增殖;NE能明显促VSMC增殖和下调SM22α的表达;随血清培养SM α-actin表达减少,血清饥饿培养可使SM α-actin表达可逆性上调;β-tubulin和desmin随血清培养其表达减少更明显,第6代基本不表达,而血清饥饿也不能上调其表达,NE对SM α-actin、β-tubulin和desmin的表达有下调作用.结论:NE可促进VSMC增殖和下调SM α-actin、β-tubulin和Desmin骨架蛋白的表达作用.     

神经调节蛋白1对冠状动脉平滑肌细胞表达血管生成因子的影响

目的:探讨神经调节蛋白1(neuregulin-1,NRG-1)对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMCs)表达血管生成因子的影响。方法:培养HCASMCs,实验使用第3代细胞。用Western blot法检测细胞Erb B的表达和磷酸化。在正常、缺氧缺血清或NRG-1(100μg/L)处理条件下,用Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)和血管生成素2(Ang-2)表达的改变。结果:Erb B2、Erb B3和Erb B4均能在HCASMCs中表达,加入NRG-1后,这3种Erb B的磷酸化水平均增加。与对照组比较,在缺氧缺血清组HCASMCs中VEGF和Ang-1的表达明显增加(P0.05),而Ang-2的表达差异无统计学显著性。与缺氧缺血清组比较,NRG-1处理组的HCASMCs表达VEGF和Ang-1进一步显著增加(P0.05),而Ang-2的表达差异无统计学显著性。结论:HCASMCs能表达Erb B2、Erb B3和Erb B4,加入NRG-1增强Erb B2、Erb B3和Erb B4的磷酸化。缺氧缺血清和NRG-1处理均能增加VEGF和Ang-1在HCASMCs中的表达。     

雌激素对血管平滑肌细胞中c-fos和增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究并比较雌激素和／或血清对血管平滑肌细胞(VSMC)中c-fos和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法：分别在有或无他莫昔芬(TAM)(雌激素受体ER拮抗剂)预处理的情况下,采用免疫细胞化学和图像分析方法,研究雌二醇(E2)和/或新生小牛血清(NCS)对传代大鼠VSMC中的c-fos和PCNA蛋白表达的影响。结果：E2以及NCS均能上调细胞中c-fos和PCNA蛋白的表达,TAM能阻断其效应。结论：雌激素能促进传代VSMC增生,ER介导其作用。     

27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响

目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P 0.05)、迁移能力上升(P 0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P 0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P 0.05),迁移能力下降(P 0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P 0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P 0.05),迁移能力上升(P 0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P 0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。     

重组反义AT1R腺病毒对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

为探讨腺病毒介导反义人AT1R转染对培养的人血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖和凋亡的影响 ,用重组反义人AT1R的复制缺陷型腺病毒 (Ad CMV ahAT1)转染体外培养的人VSMCs,用RT PCR和免疫组化法检测AT1R的表达 ,用流式细胞仪检测VSMCs的增殖指数和凋亡率 ,绘制DNA合成直方图。结果显示 :与对照组比较 ,转染Ad CMV ahAT1后 4 8h的VSMCs,AT1RmRNA低 5 0 % ,AT1R蛋白呈低表达 (P <0 0 1) ;给予AngⅡ刺激的VSMCs的增殖指数明显增加 (与DMEM组比 ,P <0 0 1) ,转染Ad CMV ahAT1组的增殖指数则显著降低 (与DMEM组比P <0 0 5 ,与AngⅡ对照组比P <0 0 1)。Ad CMV ahAT1组在二倍体峰之前出现凋亡峰 ,各时相点细胞凋亡率分别为 18%(6h)、2 0 % (12h)、2 8% (2 4h)、2 6 % (4 8h)、3% (72h)和 1% (96h) ,而在其它各对照组未出现凋亡峰。这些提示腺病毒介导的反义人AT1R转染 ,通过抑制AT1R的表达 ,明显抑制人VSMCs的增殖和AngⅡ刺激的人VSMCs增殖 ,并诱导VSMCs凋亡。     

低切应力对动脉粥样硬化形成及血管平滑肌细胞α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的影响

目的为探讨低切应力对颈总动脉粥样硬化形成及其血管平滑肌细胞增殖的影响,建立了低切应力颈总动脉粥样硬化模型;并观察了血管平滑肌细胞的α-肌动蛋白和c-Myc蛋白表达的变化。方法手术结扎家兔左颈外动脉,术后高脂饲料喂养。组织学和免疫组织化学方法观察粥样斑块的形成和α-肌动蛋白及c-Myc蛋白表达的变化。结果在低切应力颈总动脉粥样硬化模型中,颈总动脉较早出现明显粥样斑块,管壁增厚,管腔内径变小;颈总动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的α-actin含量减少、c-Myc表达增高。结论低切应力促进了动脉粥样硬化斑块的形成,促使粥样硬化动脉VSMC增殖能力增强。     

大鼠血管平滑肌细胞形态和DNA合成对基底膜周期性应变的响应

目的：探索基底膜伸张应变与血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和重排的关系。了解融合和非融合细胞生长状况对应力作用的响应。方法：应用自行研制的基底膜伸张装置，模拟生理状况下血管平滑肌细胞受到的二维拉伸应变，通过基底膜伸张的单向循环加载方式，使膜上生长的细胞变形，结合显微形态观测。计算机图象处理，[甲基^3-氢]胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入实验，综合考查应变对VSMC形态变化和DNA合成的影响，结果：（1）加载30′-6h细胞辅展面积进行性增加，6-24h细胞铺展面积缩小；（2）非融合生长的细胞随细胞增殖和加载时间延长。细胞排布处于调整变化中；（3）融合生长的细胞，加载10h后，细胞排布趋于稳定并呈平行排列，且有舒缩活动，（4）与对照组比较加载24h^3H-TdR掺入明显升高。结论：未融合生长的细胞对应变刺激的响应以细胞增殖为主，融合生长的细胞对应变刺激的响应以细胞重排为主。并表现组织特异功能一收缩活动。     

压力诱导血管平滑肌细胞整合素β3、桩蛋白和纽蛋白的变化

目的 研究压力对大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞整合素β3、桩蛋白和纽蛋白的分布与表达的影响，探讨它们在血管平滑肌细胞的机械应力信号转导中的作用。方法 不同压力(160mmHg和80mmHg)灌流大鼠颈总动脉30min，免疫组织化学和免疫电镜观察整合素β3、桩蛋白和纽蛋白在血管平滑肌细胞上的表达和分布变化。结果 高压和常压灌流对大鼠颈总动脉平滑肌细胞的整合素β3、桩蛋白和纽蛋白的表达无明显影响，但高压使整合素β3、桩蛋白和纽蛋白在平滑肌细胞膜上的分布发生改变，向离管腔面的平滑肌细胞膜聚集。结论 高压诱导了整合素β3、桩蛋白和纽蛋白向离管腔面的平滑肌细胞膜聚集。提示整合素β3、桩蛋白和纽蛋白可能在血管平滑肌细胞的机械应力信号转导中发挥作用。     

粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的影响

为研究粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的调控作用 ,采用纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMCs)粘附迁移并活化粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK) ,将FAK反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞 ,观察对FAK磷酸化、细胞粘附迁移以及凋亡的影响。结果表明 ,FN在有效地诱导SMCs粘附迁移并活化FAK的同时 ,凋亡细胞数显著低于对照 ,(8 96± 1 2 ) %和(2 3 45± 9 6 ) %。脂质体可有效地介导ODNs转染 ,转染效率为 (86 7± 4 5 ) % ,FAK磷酸化表达量明显减少 ,不同浓度FN组 5～ 6 0mg L ,细胞铺展率减少 17 89%～ 2 7 6 7% ,10、2 0、40和 6 0mg LFN组迁移细胞数也分别显著减少2 3 2 6 %、2 1 6 3%、19 31%、17 88% ,凋亡细胞数比对照高 33 5 7% (P <0 0 5 ) ,也显著高于FN组。据此可以认为FAK活化及其介导的信号转导通路是细胞外基质诱导SMC粘附迁移并抑制其凋亡的重要因素。反义FAKODNs可有效地对此进行调控     

慢性血小板减少性紫癜患者血小板Gα蛋白及多种G蛋白偶联受体的表达

目的 研究慢性特发性血小板减少性紫癜(chronic idiopathic thrombocytopenic purpura,CITP)患者血小板G蛋白信号相关分子的表达变化.方法 纳入2015年7月~2016年1月我院收治的CITP患者92例为观察组、同期健康体检志愿者92例为对照组,取空腹静脉血10 ml,检测对象G蛋白偶联的跨膜受体,包括二磷酸腺苷受体P2Y1、P2Y12,α2A-肾上腺素能受体(α2A-AR),血栓烷A2受体(thromboxane A2 receptor,TXA2-R),蛋白酶激活受体(PAR)-1,PAR-4,同时检测血小板Gα蛋白的表达.结果 观察组P2Y1、P2Y12、α2A-AR、TXA2-R、PAR-1、PAR-4及血小板Gα蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).P2Y1、P2Y12、α2A-AR、TXA2-R、PAR-1、PAR-4及血小板Gα蛋白的表达均与血小板计数呈负相关(P<0.05).结论 CITP患者可检出血小板Gα蛋白及多种G蛋白偶联受体的高表达,且上述信号分子的表达与血小板计数呈负相关,提示G蛋白偶联受体的信号转导途径可能参与了CITP的免疫病理机制.     

γ射线辐射对大鼠胸主动脉平滑肌细胞肾上腺髓质素和内皮素生成的影响

为观察^60COγ射线辐射对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）肾上腺髓质素（Adm)内皮素（ET）生成的影响，以探讨辐射防治再狭窄的机制，采用逆转录－竞争性聚合酶链反应观察经0,1,,24,25Gy辐射的培养大鼠血管平滑肌细胞Adm和ET mRNA水平；用放免方法测定相应的Adm和ET的生成。发现1Gy辐射对VSMC Adm和ET的生成及基因表达均无显著影响。14Gy辐射后VSMC生成的Adm较对照组增加270％（P＜0．05），ET的生成较对照组降低27．3％（P＜0．01）；25Gy辐射使VSMC生成的Adm和ET含量分别增加233％（P＜0．05）和降低58．0％（P＜0．01）。14和25Gy辐射分别使细胞Adm mRNA水平较对照组增加82．4％（P＜0．01）和101％（P＜0．01），使ET mRNA水平较对照组降低47．1％（P＜0．01）及40．2％（P＜0．01）。表明^60Coγ射线辐射可以促进Adm的蛋白及基因表达，而抑制ET的蛋白及基因表达，增加了Adm/ET比值。