S型与R型人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549 细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2(S型与R型)对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,以阐述人参活性成分抗肿瘤活性的构效关系及可能机制.方法:采用MTT实验测定细胞增殖;碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数,观察人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞增殖周期的影响.AnnexinV-PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫荧光实验对作为细胞凋亡标志的Caspase-3活性进行测定.结果:人参皂苷Rh2对人肺腺癌A549细胞毒活性明显存在构效关系,其中25 mg·L-1的20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rh2作用48 h对肿瘤细胞株A549的增殖抑制率分别为28.5%,33.6%,IC50值分别为33.4,28.5 mg·L-1.20 mg·L-1的20(S)-人参皂苷Rh2作用A549细胞24 h后g0/G1期细胞比例显著高于对照组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P＜0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异,说明20(S)-人参皂苷Rh2能阻滞细胞周期于G1期.30 mg·L-1的S型和R型人参皂苷Rh2作用A549细胞24 h后,无论是早期还是晚期凋亡率均明显高于正常组细胞(P＜0.05),并且20(S)-人参皂苷Rh2组早期凋亡率明显高于20(R)-人参皂苷Rh2组,表现出明显的构效效应(P＜0.05).20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rh2作用6 h的A549细胞中标记Caspase-3活性的荧光亮度明显增强,说明Caspase-3的激活参与了人参皂苷Rh2诱导的A549细胞凋亡.结论:S型和R型人参皂苷Rh2均可剂量依赖性地抑制A549细胞增殖,并且20(S)-人参皂苷Rh,的抗肿瘤活性明显强于20(R)-人参皂苷Rh2,阻滞细胞周期于G1期,具有构效效应;S型和R型人参皂苷Rh2均具有促进A549细胞凋亡作用,并且20(S)-人参皂苷Rh2组早期凋亡率明显高于20(R)-人参皂苷Rh2组,具有构效效应.     

人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2(ginenoside-Rh2,GS-Rh2)对人食管癌细胞Eca-109生长抑制及细胞周期的影响.方法:应用MTT法测定GS-Rh2对细胞的生长抑制作用,HE染色后光镜观察细胞形态变化,应用免疫细胞化学和Western blot检测细胞周期调控因子cyclinE,CDK2(cyclin-dependent kinase 2),p21WAF1基因蛋白表达,采用半定量RT-PCR检测基因mRNA表达.结果:GS-Rh2对Eca-109细胞生长有抑制作用,并呈剂量、时间依赖性.20μg·mL-1GS-Rh2作用1 d后细胞达到半数抑制,作用3 d的Eca-109细胞较对照细胞数目明显减少,细胞形态向正常细胞方向逆转.细胞周期分析显示,随着GS-Rh2药物剂量的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,S和G2/M期细胞数逐渐减少,10μg·mL-1和20μg·mL-1 GS-Rh2处理组和对照组比较有显著性差异.20μg·mL-1SS-Rh2处理细胞后,随着作用时间延长,cyclinE和CDK2蛋白及其mRNA表达水平逐渐增高,而p21WAF1蛋白及其mRNA表达水平逐渐降低.结论:GS-Rh2可以将人食管癌细胞Eca-109阻滞于G0/G1期,诱导肿瘤细胞分化,并且通过影响细胞周期调控因子cy-clinE,CDK2,p21WAF1基因的表达抑制食管癌细胞的增殖.     

人参多糖体外诱导人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究人参多糖体外对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的作用。方法应用MTT法、流式细胞仪、Annexin V-PI双标、Hoechest荧光染色、TUNEL法等多种方法,体外研究人参多糖对A549细胞的凋亡作用；采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2表达的变化。结果人参多糖对A549细胞生长具有抑制作用,并有促凋亡效应；对细胞周期的影响表现为G_0/G_1期的阻滞,未见bcl-2表达的下调。电镜和Hoechst、TUNEL法都可观察到凋亡形态学的改变。结论人参多糖可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,这有可能是人参多糖抗肿瘤作用机制之一,其凋亡的发生与bcl-2的表达无明显关系。     

HPLC法测定西洋参茎叶总皂苷降解物中20（S）-人参皂苷Rh2的含量

20(S)-人参皂苷Rh2对多种癌细胞具有较强的抑制作用,且能使癌细胞在其增殖过程中产生一种诱导作用,诱导癌细胞逆转为正常细胞.但20(S)-人参皂苷Rh2在自然界存在甚少,红参中仅为十万分之一.为了获得大量20(S)-人参皂苷Rh2,一般采用总皂苷提纯,制备二醇组皂苷,再进行降解制备20(S)-人参皂苷Rh2.本文采用HPLC法测定西洋参降解物中20(S)-人参皂苷Rh2的含量,取得满意结果.     

人参皂苷Rh2对小鼠移植瘤生长及对细胞间连接黏附分子表达的影响

目的：观察人参皂苷Rh₂对小鼠移植瘤生长及其对细胞间连接黏附分子(JAM)在癌组织表达的影响，探讨其抗肿瘤作用。方法：昆明种小鼠40只，前肢皮下接种S180小鼠癌性腹水0.2 mL，成瘤后随机分为2组，实验组给予人参皂苷Rh₂(20 mg·kg^-1)灌服，2 mL/只；对照组给予等量生理盐水，6周后取材。用免疫组化法观察JAM-1，JAM-2在癌细胞、淋巴管及血管的表达。结果：对照组JAM-1阳性表达的肿瘤细胞吸光度(A)549.90，实验组340.55，P<0.05；JAM-2阳性表达弱。对照组JAM-1和JAM-2阳性表达的血管数密度分别为2.33和1.34，实验组分别为1.09和0.9。对照组JAM-1和JAM-2阳性表达的淋巴管数密度分别为2.23和1.88，实验组分别为0.99和0.79；两组间的差异均为P<0.05。结论：人参皂苷Rh₂通过下调JAM在肿瘤细胞的表达，抑制肿瘤组织血管及淋巴管的生成，进而抑制肿瘤生长。     

人参皂苷Rh2抗肝癌作用机制的研究进展

人参皂苷 Rh_2是一种含有达玛烷型骨架的四环三萜类皂苷单体,具有毒性低、相对分子质量小、脂溶性好、抗癌作用强等优势,是人参中主要的抗癌有效成分。近年来,有关人参皂苷 Rh_2的研究成果不断涌现,其对发病率和死亡率较高的多种癌症,均表现出明显的抗癌活性,其中人参皂苷 Rh_2抗肝癌的作用显著,因此关于抗肝癌作用机制的研究逐渐被人们重视。该文查阅中国知网,万方数据,维普数据,Pub Med等多个中英文数据库近20年来100余篇国内外相关文献资料,并对其中有关人参皂苷 Rh_2抗肝癌作用机制的内容进行详细的整理、归纳、分析和总结,发现虽然有关人参皂苷 Rh_2抗肝癌相关研究的报道不少,但是对于人参皂苷 Rh_2抗肝癌的作用机制没有进行系统的阐述,因此该文全面地探讨了人参皂苷 Rh_2抗肝癌的作用机制,明确了人参皂苷 Rh_2抗肝癌的作用机制可能与抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞分化、促进肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞侵袭与转移、降低肝癌细胞耐药性和提高机体免疫力等作用有关。首次对人参皂苷 Rh_2抗肝癌的作用机制进行较全面的整理,为科研人员开展有关人参皂苷 Rh_2抗肝癌的相关研究提供了参考和借鉴,为人参皂苷 Rh_2的进一步研究提供依据和思路,为肝癌的治疗提供新的研究方向,为肝癌患者带来了新希望。     

人参皂苷Rg_3调节免疫检查点PD-L1抑制肺癌Lewis细胞增殖的作用及机制研究

目的研究人参皂苷Rg_3对小鼠非小细胞肺癌Lewis细胞(LLC)中免疫检查点程序性死亡分子1配体(PD-L1)的调节作用及其作用机制。方法通过MTT法及细胞长时程动态监测法观察人参皂苷Rg_3对LLC增殖的影响;20 ng/mLγ干扰素(IFN-γ)处理LLC制备PD-L1高表达体外模型,采用人参皂苷Rg_3进行干预,流式细胞术及免疫荧光检测人参皂苷Rg_3对PD-L1表达的影响;采用Western blotting法验证人参皂苷Rg_3对PI3K/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路相关蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg_3 16、32、64、128μmol/L能够显著抑制LLC增殖(P0.01)及减少IFN-γ诱导的PD-L1表达(P0.05);人参皂苷Rg_3 32、64μmol/L能够降低PI3K、m TOR蛋白的表达水平(P0.01);人参皂苷Rg_3 16、32、64μmol/L能够抑制Akt蛋白的磷酸化(P0.05)。结论人参皂苷Rg_3能够显著抑制LLC中PD-L1表达,通过抑制PI3K/Akt/m TOR通路,阻断PD-L1介导的肿瘤细胞免疫逃逸,增强T细胞的免疫应答作用,抑制LLC生长。     

RP-HPLC同时测定西洋参总皂苷转化产物中人参皂苷Rg1、Rh1、Rd、Rg3和C-K的含量

目的:建立RP-HPLC法同时测定西洋参总皂苷转化产物中人参皂苷Rg1、Rd、Rh1、Rg3和C-K的含量。方法:采用WelchromC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;检测波长为203nm。结果:人参皂苷Rg1,Rh1,Rd,Rg3和C-K的线性范围分别为0.740~7.400μg(r=0.9999);0.536~5.360μg(r=0.9999);1.128~11.280μg(r=0.9999);0.3080~3.080μg(r=0.9999);0.376~3.7600μg(r=0.9999)。平均加样回收率分别为97.12%(RSD=1.22%),98.50%(RSD=0.87%),98.00%(RSD=1.06%),98.12%(RSD=1.66%)和96.65%(RSD=1.48%)。结论:该法操作简便,结果可靠,适用于西洋参转化产物的含量测定。     

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究

目的：观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法：采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡和周期的影响。结果：猫爪草总皂苷对A549细胞增殖和集落形成均有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进A549细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论：猫爪草总皂苷能较好的抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。     

人参皂苷Rg3抑制腺样囊性癌细胞SACC-83增殖作用研究

目的:探讨Rg3抑制人腺样囊性癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法:用一定质量浓度的Rg3处理人腺样囊性癌细胞系SACC-83细胞,MTT法检测细胞增殖活力,荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态,流式细胞仪分析细胞周期和细胞增殖指数,免疫组织化学观察hTERT的表达变化。结果:Rg3抑制SACC-83细胞生长,呈时间-浓度效应关系;经20 mg.L-1 Rg3处理细胞24,48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光;用不同浓度的Rg3处理细胞72 h后,均诱导了细胞凋亡和细胞周期的改变,G0/G1的细胞比率增加,S期和G2/M期的细胞比率下降,细胞增殖指数降低,并与Rg3浓度有明显依赖关系;免疫组化染色显示Rg3抑制了SACC-83细胞的hTERT蛋白表达。结论:Rg3可通过诱导人腺样囊性癌细胞SACC-83细胞凋亡和下调细胞的端粒酶活性,使细胞增殖受到抑制。     

人参皂苷Rh_2对胃癌细胞SGC7901/ADR耐药敏感性的影响

目的观察人参皂苷Rh_2(G-Rh_2)对人胃癌SGC7901/ADR耐药细胞增殖、细胞周期及化疗敏感性的影响。方法 MTT法检测G-Rh_2与阿霉素(ADR)联用对SGC7901/ADR细胞增殖的影响,并计算逆转倍数(RF);流式细胞术检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞周期的影响;蛋白印迹法检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果与ADR单药处理后细胞的半数抑制浓度(IC50)值(54.52μmol/L)比较,G-Rh_2与ADR联用时SGC7901/ADR细胞IC50值(30.14μmol/L)明显下降,RF为1.81;G-Rh_2与ADR联用能够将SGC7901/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,与ADR单药处理比较,联用组细胞P-gp、Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 G-Rh_2联合ADR能够提高SGC7901/ADR细胞的化疗敏感性,可能通过阻滞细胞周期、增加细胞凋亡进而抑制细胞增殖。     

人参皂苷Rg_2、Rh_1对神经系统作用及相关机制的研究进展

通过检索人参皂苷Rg_2和Rh_1神经系统药理研究文献,综述人参皂苷Rg_2和Rh_1在此方面的药理作用及其相关作用机制的研究进展。现代药理学研究显示,人参皂苷Rg2和Rh1在神经系统方面具有很强的药理活性,具有保护神经细胞、抗脑缺血再灌注损伤、治疗阿尔茨海默病及血管性痴呆、抗抑郁等作用。     

HPLC法测定林下山参制浆前后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化

目的分析林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化情况。方法采用HPLC-UV法,Innoval ODS-2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水溶液进行梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样体积20μL;检测波长203 nm。结果林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2质量分数分别由制浆前的0.651、0.506、0.363、0.014、0.023、0.031 mg/g变化为制浆后的0.517、0.413、0.105、0.122、0.214、0.098 mg/g。人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2分别在2.5~100 mg/L具有良好的线性关系,r2均大于0.999 5;精密度、稳定性及重复性良好;平均加样回收率为95%~105%,RSD为1.25%~3.05%。结论林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量在制浆前、后发生变化。林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1的含量降低,稀有人参皂苷Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量分别增高8.7、9.3、3.2倍。基于HPLC最佳分离参数建立的6种人参皂苷成分同时分析的方法具有较好的准确性和可靠性,可为林下山参浆的质量评价提供科学依据。     

人参皂苷Rh_2通过激活p38诱导K562细胞自噬凋亡的实验研究

为了研究人参皂苷Rh2对人白血病细胞K562的凋亡作用,并从自噬角度来探讨其机制。实验采用CCK-8方法检测人参皂苷单体Rh2对人白血病K562细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;Hoechest染色观察细胞核染色质的形态;吖啶橙和MDC染色观察Rh2对细胞自噬的影响;Western blot和RT-PCR检测Rh2对白血病细胞自噬重要基因的表达的影响;运用自噬抑制剂(3-MA)研究自噬对细胞增殖和凋亡的影响。CCK-8显示人参皂苷Rh2在低浓度时能有效抑制白血病细胞增殖,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性;FCM和Hoechest显示Rh2能增加细胞的凋亡和染色质呈凋亡形态改变;吖啶橙和MDC染色发现Rh2组细胞的绿色荧光增强,并出现大量酸性自噬小泡;Western blot和RT-PCR结果发现Rh2能上调Beclin-1,LC3A,LC3B,激活型Caspase-3和p-p38的表达;运用细胞自噬剂(3-MA)会削弱Rh2对K562的增殖抑制和促凋亡作用。人参皂苷Rh2可能通过激活磷酸化的p38,诱导细胞自噬途径,从而抑制K562细胞增殖和促进凋亡作用。     

不同构型拟人参皂苷Rg_2、拟人参皂苷Rh_1和拟原人参三醇合成方法的研究

目的探索一种高效制备拟人参皂苷Rg_2、拟人参皂苷Rh_1和拟原人参三醇(PPT)的新方法,为制备拟人参皂苷和PPT提供理论依据。方法依次以人参皂苷Re、人参皂苷Rh_1和PPT为原料,通过简单的3步反应(乙酰化反应、一步消去-加成反应、还原反应)进行制备,然后再利用色谱分离纯化,通过NMR、HR-ESI-MS、IR进行结构鉴定。结果拟人参皂苷Rg_2(E/Z)、拟人参皂苷Rh_1(E/Z)和拟PPT(E/Z)产率分别是41%/13%、43%/11%、56%/15%。其中20(Z)-拟PPT为新化合物。结论通过价格相对低廉且原料易得的人参皂苷Re、人参皂苷Rh_1和PPT制备出活性较好的拟人参皂苷Rg_2、拟人参皂苷Rh_1和拟PPT,为制备其他类型的拟人参皂苷提供了一种新的思路。同时此方法操作简单,产率较高。     

响应曲面法(RSM)优化人参皂苷Rh_4和Rk_3的制备工艺

目的以人参皂苷Rh_4(GRh_4)和Rk_3(GRk_3)的生成量作为考察指标,利用响应曲面法(RSM)优化GRh_4和GRk_3的制备工艺。方法利用HPLC测定GRh_4和GRk_3的量,以人参皂苷Rg1(GRg1)为底物,采用高温热裂解,对影响热裂解的酸浓度、反应温度及时间进行考察,运用RSM选择最优GRh_4和GRk_3的热裂解工艺条件。结果经HPLC测定,根据Design Expert 7.1.6软件预测经高温热裂解GRg1制备GRk_3和GRh_4的最佳工艺参数:甲酸浓度为0.02%,反应温度为116.4℃,反应时间为2.22 h;在此条件下GRk_3和GRh_4之和最大为123.56 mg,得率为61.78%。结论 RSM优化后的高温热裂解条件,适合大规模制备GRk_3和GRh_4。     

人参皂苷Rh_2促进K562细胞自噬凋亡的体内实验研究

该实验为研究人参皂苷Rh_2对人白血病细胞体内抑制作用,并从自噬凋亡角度来探讨其机制。采用人白血病K562细胞异体移植瘤模型,灌胃人参皂苷Rh_2后,测取肿瘤直径、体积、抑瘤率,观察人参皂苷Rh_2的抗肿瘤活性;化学发光法检测瘤组织HDAC和HAT活性;Western blotting法检测HDAC1,HDAC2,HDAC3,HDAC4,HDAC5,HDAC6的表达;Real-time PCR法检测自噬重要基因和HDAC6,Hsp90的mRNA表达水平;HE染色观察细胞凋亡,免疫组化法检测HDAC6,Hsp90和激活型的caspase 3蛋白表达水平。结果显示,人参皂苷Rh_2能抑制K562细胞异体移植瘤的生长,抑制率达53.10%;人参皂苷Rh_2能明显降低HDAC活性和降低HDAC1,HDAC2,HDAC6表达;人参皂苷Rh_2能抑制HDAC6和Hsp90表达,并增加自噬重要基因beclin-1,LC3A和LC3B表达;组织病理学结果显示人参皂苷Rh_2可明显增加肿瘤细胞凋亡。人参皂苷Rh_2具有较好的体内抗肿瘤作用,可能通过HDAC6,Hsp90通路调节自噬凋亡,抑制肿瘤细胞在体内增殖。