西黄丸抗肿瘤转移作用及其机制研究

目的:观察西黄丸对小鼠Lewis肺癌和B16黑色素瘤肺转移的作用并探讨其作用机制。方法:采用C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌和B16黑色素瘤肺转移模型,通过检测原位肿瘤、肺转移结节数及相关器官的相对质量来研究西黄丸抗肿瘤生长和转移的作用;采用ELISA法检测西黄丸对Lewis肺癌和B16黑色素瘤荷瘤小鼠外周血中IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10-水平的影响。结果:与模型组比较,西黄丸能显著降低小鼠Lewis肺癌原位肿瘤的平均瘤质量及肺转移结节数,高、中、低3个剂量组的肿瘤生长抑制率分别为83.7%、57.7%、32.1%,肿瘤转移抑制率分别为68.7%、48.0%、12.7%,环磷酰胺(CTX)组的肿瘤生长抑制率为60.7%,肿瘤转移抑制率为38.0%。西黄丸高、中、低剂量均能有效抑制小鼠B16黑色素瘤的肺转移,抑制率分别为56.0%、33.5%、8.4%,环磷酰胺组为31.4%。西黄丸可提高Lewis肺癌和B16黑色素瘤荷瘤小鼠外周血细胞IL-2、IFN-γ水平,同时降低IL-6、IL-10水平。结论:西黄丸能抑制小鼠Lewis肺癌和B16黑色素瘤的肺转移,其作用呈剂量依赖性。西黄丸抑制肿瘤转移的作用与其纠正荷瘤机体中的Th1/Th2平衡向Th2偏移,提高荷瘤机体的免疫力有关。     

狼毒对荷瘤小鼠体内恶性黑色素瘤细胞的抑制作用及其分子机制研究

目的 观察狼毒大戟提取液(LDE)对荷瘤小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 观察荷瘤小鼠空白组和狼毒治疗组的肿瘤生长情况;采用ELISA法检测小鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)和骨桥蛋白(OPN)的活性;Western Blot蛋白印迹法检测了狼毒大戟提取液对荷瘤小鼠黑色素瘤B16组织中的Bcl - 2/Bax凋亡蛋白的表达.结果 与对照组相比较,狼毒大戟提取液对荷瘤小鼠体内恶性黑色素瘤B16细胞的生长有显著的抑制作用,能明显减慢肿瘤体积生长趋势和减轻瘤重;与对照组相比较,狼毒治疗组的VEGF、OPN的水平有统计学意义(P＜0.05);HGF的的水平有显著的统计学意义(P＜0.01);狼毒能下调小鼠体内恶性黑色素瘤B16中Bcl - 2/Bax凋亡蛋白的表达.结论 狼毒大戟提取液是一种有效的抗恶性黑色素瘤B16细胞增殖的中药水提液成分.其作用机制可能与诱导细胞凋亡,影响细胞中相关蛋白表达以及肿瘤血管生长和肿瘤转移相关因子VEGF、HGF、OPN的活性有关.     

魟鱼软骨多糖对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用及对Laminin5γ2、HIF-α表达的影响

目的:研究魟鱼软骨多糖对小鼠黑色素瘤的抑制作用及对Laminin-5γ2、HIF-α表达的影响。方法:体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞,MTT法测定魟鱼软骨多糖不同剂量组对黑色素瘤细胞与基质之间粘附的影响,将培养的B16细胞悬液接种于C57BL/6小鼠右侧腋下部位,建立肿瘤模型。将实验分为空白对照组、魟鱼软骨多糖高、中、低剂量(700mg/kg、300mg/kg、100mg/kg)组、环磷酰胺(60mg/kg)组,观察肿瘤生长情况并计算原发瘤抑制率;采用Western blot方法检测Laminin-5γ2、HIF-α蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测Laminin-5γ2mRNA、HIF-αmRNA的表达。结果:应用魟鱼软骨多糖100、20、4、0.8mg/L,黑色素瘤细胞于基质间的粘附受到抑制,分别为16.67%、11.90%、9.52%、7.14%。小鼠原发瘤抑制率与空白对照租比较有显著性差异,魟鱼软骨多糖100、300、700mg/kg和环磷酰胺组抑癌率分别为14.77%,31.48%,44.55%;与空白对照组比较,魟鱼软骨多糖各剂量组随着药物浓度的升高,Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达受到抑制,Laminin-5γ2、HIF-α的基因表达显著降低。结论:魟鱼软骨多糖能够在一定程度上抑制小鼠黑色素瘤移植瘤的生长,可能与其减少肿瘤中Laminin-5γ2、HIF-α蛋白表达有关,Laminin-5γ2、HIF-α有望成为抗癌治疗的新靶点。     

狼毒对恶性黑色素瘤细胞生长的影响及其分子作用机制的研究

目的 通过中药狼毒提取液(LD extrat,LDE)对恶性黑色素瘤B16细胞生长抑制作用的研究,探讨其诱导细胞发生凋亡的作用机制.方法 选用狼毒提取液处理的体外培养的黑色素瘤B16细胞株为研究对象,采用MTT法分别在24,48和72 h测定狼毒提取液对黑色素瘤B16细胞存活率的影响.用Hoechst 33258荧光染色法观察狼毒提取液诱导细胞凋亡的现象以及细胞形态的变化.用Western blotting方法分析研究细胞凋亡有关蛋白Bcl-2/Bax表达的变化.结果 狼毒提取液对恶性黑色素瘤B16细胞的抑制作用随药物浓度的升高而增强并呈现一定的时效和量效关系.狼毒提取液作用黑色素瘤B16细胞24 h后,能诱导恶性黑色素瘤B16细胞的凋亡.Western blot分析证实狼毒提取液能下调抗细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平和上调促细胞凋亡蛋白Bax的表达,从而导致Bcl-2/Bax蛋白比率下调、引起癌细胞凋亡和细胞存活率降低.结论 狼毒提取液下调抗细胞凋亡Bcl-2蛋白和上调促细胞凋亡Bax蛋白的表达、降低Bcl-2/Bax蛋白比率可能是狼毒提取液诱导肿瘤细胞凋亡、抑制恶性黑色素瘤B16细胞生长重要作用的分子机制.     

当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响

目的:研究中药当归对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定当归对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察当归对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:当归水提液能显著抑制B16-BL6细胞的增殖;对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的粘附有双向调节的作用;对B16-BL6细胞穿越基底膜的运动能力有显著抑制作用但对B16-BL6细胞侵袭基底膜能力没有显著影响。低剂量当归能明显减少小鼠肺转移结节数目,减轻肺转移程度。结论:当归提取液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,作用可能与其能够抑制B16-BL6细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

化瘀丸对小鼠Lewis肺癌生长及血栓形成相关因子的干预作用

目的:观察以益气活血解毒为治法的化瘀丸对肿瘤生长及血栓形成相关因子的影响。方法:建立小鼠Lewis肺癌动物模型,造模后24 h随机分组并开始给药,实验分为5组:模型组(无菌水10 mL.kg-1 ig,0.9%NaCl 10 mL.kg-1 ip,1次/d)、低分子肝素组(无菌水10 mL.kg-1 ig,低分子肝素注射液100 u.kg-1 i,p)、环磷酰胺(CTX)组[无菌水10 mL.kg-1 ig,CTX50 mg.kg-1(1,61,1,16 d)ip,1次/d]、化瘀丸组(化瘀丸4 g.kg-1 ig,0.9%NaCl 10 mL.kg-1 ip,1次/d)、空白对照组(无菌水10 mL.kg-1 ig,0.9%NaCl 10 mL.kg-1 ip,1次/d),给药12 d或19 d。定期观察各组小鼠体重及肿瘤生长情况,接种后132,0 d处死小鼠,检测瘤重、肺转移数,酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、P-选择素(P-selectin)、内皮素-1(ET-1)水平。结果:化瘀丸组小鼠瘤重显著低于模型组(P<0.01),抑瘤率分别为34.97%(13 d)和31.52%(20 d),肺转移抑制率为83.25%(20 d)。20 d化瘀丸组小鼠血清ET-1水平低于模型组(P<0.05),P-selectin,ET-1水平低于低分子肝素组(P<0.05),并显著低于CTX组(P<0.01)。结论:化瘀丸作用于Lewis肺癌荷瘤小鼠,具有一定抗肿瘤生长的作用,并能降低荷瘤小鼠异常升高的血栓形成相关因子水平。     

丹参对小鼠黑色素瘤细胞株B16-BL6侵袭和转移能力的影响

目的研究活血化瘀中药丹参对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定丹参对B16-BL6细胞增殖能力的影响;采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察丹参对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果丹参水提液对B16-BL6细胞的增殖具有双向调节作用;能显著促进B16-BL6细胞与基底膜成分纤维粘连蛋白粘附,显著抑制B16-BL6细胞侵袭基底膜能力及趋化性运动能力;能显著减小肺转移结节体积,但对结节数目没有明显作用。结论丹参提取液能够显著减轻小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的肺转移程度,可能与其能够抑制B16-BL6细胞对基底膜的侵袭能力以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

鸡血藤对黑色素瘤细胞黏附、侵袭、运动和转移能力的影响

目的:研究活血化瘀中药鸡血藤对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、黏附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定鸡血藤对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞黏附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察鸡血藤对B16-BL6细胞生长、黏附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:鸡血藤水提液在最高无毒浓度下,对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的黏附及侵袭基底膜能力具有显著的抑制作用,但对穿越基底膜的运动能力无显著作用;高剂量鸡血藤能显著减少小鼠肺转移结节数目与直径,减轻肺转移程度。结论:鸡血藤提取液能抑制B16-BL6的转移,该作用可能与其抑制B16-BL6细胞与细胞外基质的黏附以及对基底膜的侵袭能力有关。     

茅莓总皂苷对黑色素瘤的抗肿瘤作用研究

目的：评价茅莓总皂苷对黑色素瘤的体内、外抗肿瘤药效作用。方法：A375人恶性黑色素瘤细胞体外常规传代培养,随机分5组,分别加入环磷酰胺,茅莓总皂苷高、中、低(0.01,0.001,0.000 1 mg·mL^-1)3个质量浓度,以不加药作阴性对照,MTT法检测茅莓总皂苷的体外抗肿瘤作用；用B16黑色素瘤细胞移植小鼠,随机分阳性药(环磷酰胺)组,茅莓总皂苷高、中、低(100,50,25 mg·kg^-1)剂量组及阴性药(生理盐水)组,观察体内抑瘤效果、荷瘤小鼠生存时间和生命延长率；同时采用TUNEL法检测茅莓总皂苷对B16黑色素瘤细胞凋亡的影响。结果：体外抑瘤试验显示,高、中质量浓度茅莓总皂苷组与阴性对照组比较,P<0.05,有统计学意义；体内抑瘤试验显示,高剂量组平均瘤体积明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率37.02%；荷B16黑色素瘤小鼠用茅莓总皂苷治疗后存活时间增加；茅莓总皂苷高、中、低剂量组黑色素瘤细胞凋亡指数分别为32.5%,20.5%和5.5%,与阴性对照组(3.5%)比较差异有统计学意义。结论：茅莓总皂苷对体内、外黑色素瘤细胞有抑制作用,并呈量效依赖关系,能通过促进黑色素瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤活性。     

蛇葡萄素体内外对小鼠B16黑色素瘤侵袭和转移的抑制作用

目的 :研究蛇葡萄素对B16小鼠黑色素瘤体内外抗侵袭和转移的作用。方法 :B16细胞由尾静脉注入C5 7BL/ 6小鼠体内建立实验性肺转移模型 ,蛇葡萄素以 3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药 ,连续 18d ,于停药后第 2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理 3d ,用具有聚碳酸酯和重建基底膜 (Matrigel)的Tran swell小室侵袭模型 ,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果 :剂量为 15 0 ,200 ,250mg·kg^-1的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成 ,与溶剂对照组比 ,抑制率分别为 30.97% ,40.58% ,61.16% (P<0.0 5)。经 20,40,80μmol·L^-1各浓度蛇葡萄素处理后 ,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为 36.06% ,59.58% ,79.09% (P<0 .01) ;对细胞的趋化运动抑制率分别为 51.59% ,56.51% ,66.75% (P<0.01) ;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。 结论 :蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。     

桔梗总皂苷对肺炎支原体感染大鼠肺组织SP-A的影响

目的:通过研究桔梗总皂苷对肺炎支原体(MP)感染大鼠肺部组织中肺表面活性蛋白A(SP-A)表达的影响,探讨其对肺炎支原体感染大鼠肺部组织可能的修复机制。方法:60只Wistar大鼠,雌雄各半,体重80~100 g,随机分为6组,每组10只。分别为空白组、模型组、阳性药(阿奇霉素)组(第1天为45 mg·kg-1,第2~5天为22.5 mg·kg-1)、桔梗总皂苷高、中、低(56,28,14 mg·kg-1)剂量组。采用肺炎支原体滴鼻法造模1次。造模后第2天开始ig给药,阿奇霉素给药5 d,桔梗总皂苷给药10 d后采集大鼠左肺及右肺组织中叶,常规HE染色,显微镜下观察肺组织病理改变,逆转录聚合酶链反应法(RTPCR)检测肺组织中SP-A mRNA的表达水平,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果:病理结果显示:模型组与空白组比较,肺组织可见明显的肺间质炎症(P0.01);与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中、低剂量组的肺组织炎症较模型组明显减轻(P0.05);肺组织中SP-A mRNA的表达水平显示:与空白组比较,模型组的肺组织SP-A mRNA表达明显下调(P0.01),与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中剂量组SP-A mRNA表达上调(P0.05)桔梗总皂苷低剂量组无显著差异。结论:桔梗总皂苷能够改善MP感染大鼠肺部组织的炎症,且对肺部的修复作用可能是通过上调SP-A表达实现的。     

四逆汤协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离治疗肺癌的研究

目的从蛋白质类泛素化修饰角度解析温里剂四逆汤协同壮观霉素B1抑制肺癌细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用机制。方法实验分对照组、壮观霉素B1组、四逆汤组和联合药物组,于人非小细胞肺癌A549细胞株作用48 h后,采用Westernblotting法检测小泛素相关修饰蛋白-1(SUMO1)、10号染色体缺失磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化Akt(p-AKT)和Caspase-9的蛋白表达水平;MTT实验绘制细胞增殖曲线;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果壮观霉素B1和四逆汤均能够降低A549细胞共价态SUMO1和p-Akt水平,增加PTEN和活化Caspase-9的蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,壮观霉素B1和四逆汤联合药物组对细胞的抑制作用显著强于各单独给药组。结论四逆汤能够协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离,进而抑制肺癌细胞增殖、转移和促进细胞凋亡。     

光叶娃儿藤解热抗炎作用实验研究

目的:观察光叶娃儿藤的解热和抗炎作用.方法:SD大鼠随机分为生理盐水对照组,阿司匹林组(0.1 g·kg-1),光叶娃儿藤低、中、高剂量组(6,12,24 g·kg-1).分别采用酵母混悬液复制大鼠发热模型和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法,观察光叶娃儿藤的解热和抗炎作用,同时紫外分光光度法测定大鼠角叉菜胶致炎足渗出物中的前列腺素E2(PGE2)的含量.结果:与生理盐水组比较,光叶娃儿藤中、高剂量组(12,24 g·kg-1)能显著降低酵母菌致大鼠发热模型的体温(P＜0.05),并能显著抑制角叉菜胶致大鼠的足肿胀度(P＜0.05)和足组织中的前列腺素E2(PGE2)的合成(P＜0.05).结论:光叶娃儿藤具有明显的解热和抗炎作用,其机制可能与抑制PGE2等炎症介质合成有关.     

广西地桃花对金黄色葡萄球菌肺炎小鼠的体内抗菌作用

目的:研究广西地桃花对金黄色葡萄球菌的体内抗菌作用。方法:108只KM小鼠随机分成9组,正常组,模型组,地桃花水提物高、中、低剂量组(40,20,10 g·kg-1),头孢唑林组(0.5 g·kg-1),地桃花+头孢唑林组(地桃花水提物20 g·kg-1,头孢唑林钠0.5 g·kg-1),左氧氟沙星组(0.09 g·kg-1),地桃花+左氧氟沙星组(地桃花水提物20 g·kg-1,左氧氟沙星0.09 g·kg-1),每组12只;除正常组外,其余各组采用滴鼻法建立小鼠金黄色葡萄球菌肺炎模型,小鼠在接种菌液24 h后给予相应的药物,连续给药4 d,头孢唑林针剂im给药,每日2次;左氧氟沙星片剂ig给药,每日1次;地桃花水提物ig给药,每日2次;HE染色观察肺组织病理学变化,检测小鼠肺组织菌落数,血常规白细胞计数(WBC),中性粒细胞百分比(NEU%),中性粒细胞绝对值(NEU),免疫球蛋白Ig G,Ig M的含量,观察不同治疗方法对细菌性肺炎模型小鼠的抗菌作用。结果:与模型组比较,地桃花水提物中、高剂量组的小鼠肺组织菌落数分别为(7.212±0.578),(6.210±0.570)×108CFU·g-1,头孢唑林组、地桃花+头孢唑林组小鼠肺组织菌落数分别为(3.928±0.165),(2.042±0.076)×108CFU·g-1,均显著低于模型组(P0.01),而且地桃花+头孢唑林组肺组织菌落数显著低于头孢唑林组(P0.01);左氧氟沙星组、地桃花+左氧氟沙星组肺组织菌落数分别为(5.375±0.837),(4.880±0.233)×108CFU·g-1,均显著低于模型组(P0.01),而且地桃花+左氧氟沙星组菌落数显著低于左氧氟沙星组(P0.01)。地桃花水提物中、高剂量组,以及地桃花+头孢唑林组、地桃花+左氧氟沙星组均可减少支气管炎性渗出物和肺泡炎性细胞浸润,促进肺泡结构恢复正常。地桃花水提物高剂量组,以及地桃花+头孢唑林组、地桃花+左氧氟沙星组均可减少小鼠血液WBC,NEU%,NEU和血清Ig G,Ig M水平(P0.05,P0.01)。结论:地桃花水提物对金黄色葡萄球菌具有一定的体内抗菌作用。地桃花分别与头孢唑林钠、左氧氟沙星联合使用对金黄色葡萄球菌呈现不同程度的联合抗菌作用。     

桑叶治疗2型糖尿病药效及其机制研究

目的:探讨桑叶对KKAy2型糖尿病小鼠血糖、胰岛素(Ins)敏感性及胰岛细胞Toll样受体TLR2,TLR4 mRNA表达的影响,初步探讨其降糖机制。方法:KKAy小鼠随机分为模型组、桑叶高、中、低剂量组(分别相当于含生药3.0,1.5,0.75 g.kg-1)和二甲双胍组(0.4 g.kg-1)。另设10只C57BL6小鼠为正常对照组。各给药组分别喂饲不同浓度的药物,模型组与对照组均ig等容量自来水。连续4周,末次给药后1 h取血,测定小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)含量,分析胰岛素敏感性的变化情况。提取小鼠胰岛细胞总RNA,Real time-PCR法测定胰岛细胞TLR2,TLR4 mRNA表达。结果:桑叶各剂量能明显降低KKAy小鼠的FPG(P<0.05或P<0.01)、降低血清Ins含量(P<0.05或P<0.01),明显降低KKAy小鼠胰岛素抵抗指数与胰岛细胞TLR2,TLR4 mRNA表达(P<0.05或P<0.01)结论:桑叶有较好的降血糖、增强胰岛素敏感性等作用,其作用可能与减弱胰岛细胞TLR2,TLR4表达、抑制炎症过程有关。     

槲皮素自微乳的抗肿瘤作用及其机制分析

目的:研究槲皮素自微乳(quercetin self-nanoemulsifying drug delivery system,Q-SNEDDS)抑制小鼠肉瘤细胞S180的分子机制。方法:制备槲皮素自微乳和空白自微乳,对其粒径和Zeta电位分别进行检测。体内实验分6组:空白组、环磷酰胺(20 mg·kg-1)组、槲皮素自微乳高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg-1)组、槲皮素组(50 mg·kg-1)。采用肿瘤细胞移植法建立S180移植瘤模型,用药10 d后,检测各组抑瘤率、肝指数、脾指数和胸腺指数等指标;采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)检测各组S180细胞的B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Bax,Bcl-2,Akt,磷酸化-Akt(p-Akt)的蛋白表达。结果:与空白组比较,槲皮素自微乳、环磷酰胺及槲皮素组均能抑制肿瘤细胞生长,槲皮素自微乳组抑瘤率高于槲皮素组(P0.05);环磷酰胺组脏器指数低于空白组(P0.05),槲皮素自微乳组脏器指数高于环磷酰胺组(P0.05)。与空白组比较,槲皮素自微乳上调S180细胞Bax mRNA和蛋白表达(P0.05),下调S180细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05),对Akt蛋白表达影响不明显,但是可以下调Akt mRNA和p-Akt蛋白的表达(P0.05)。结论:槲皮素自微乳具有体内抑制S180细胞的作用,槲皮素自微乳抑瘤作用高于槲皮素组。槲皮素自微乳可能通过抑制Akt信号通路,发挥其抗肿瘤的作用。     

生品和蜜炙款冬花不同提取物的镇咳祛痰作用

目的:研究款冬花生品与蜜炙品不同溶媒提取物的镇咳、祛痰作用.方法:镇咳实验:昆明种小鼠,随机分成空白、阴性(溶剂)对照、阳性枸橼酸喷托维林对照组(0.01 g·kg-1)、生品和蜜炙款冬花(按生药量计,下同)水提物高、低剂量组(6.20,3.10 g·kg-1)、醇提取物高、低剂量组(6.0,3.0 g·kg-1)、乙酸乙酯和石油醚提取物高、低剂量组(0.5,0.25 g·kg-1).给药体积为25 mL·kg-1,连续ig给药5d,然后观察25％浓氨水定量喷雾后出现咳嗽的潜伏期及2 min内的咳嗽次数.祛痰实验:SD大鼠随机分成空白、阴性、阳性氯化铵对照组(0.16 g·kg-1)、生品和蜜炙款冬花水提物高、低剂量组(2.70,1.35 g·kg-1);醇提物高、低剂量组(3.0,1.5 g·kg-1)、乙酸乙酯和石油醚提取物高、低剂量组(0.25,0.125 g·kg-1).给药体积为25mL· kg-,连续ig给药3d,毛细玻管法记录末次给药后2h大鼠痰液分泌量.结果:与模型对照组相比,生品和蜜炙款冬花醇提物镇咳效果显著,咳嗽潜伏期明显延长(P＜0.05),咳嗽次数明显减少(P＜0.01).两者水提物也有部分镇咳作用.与模型对照组痰量相比,蜜炙款冬花水提物高、低剂量组,生款冬花乙酸乙酯提取低剂量组,蜜款冬花乙酸乙酯提取物高剂量组痰量明显增多(P＜0.05).此外,生款冬花各溶媒提取物组小鼠体重下降显著(P＜0.05).结论:款冬花具有镇咳、祛痰作用.其镇咳成分极性较大,易溶于水和乙醇;祛痰成分极性较小,脂溶性较大.生款冬花各溶媒提取物可能具有一定毒性.     

夜香树甾体皂苷抗人肝癌裸鼠移植瘤的研究

目的: 观察夜香树甾体皂苷(SSCN)对肝癌HepG2移植瘤的抑制作用,并探讨其抑瘤的可能机制。方法: 从夜香树叶中提取并鉴定SSCN;建立BALB/c裸鼠HepG2肝癌模型,建模成功后将荷人肝癌裸鼠随机分为5组:生理盐水组(NS)、沙利度胺组(TLD 200 mg·kg^-1),SSCN低,中,高组(4,6,8 mg·kg^-1,ip, 隔日1次,连续30 d),观察SSCN的肿瘤抑制作用。治疗期间测量皮下移植瘤的长径和短径;30 d后处死裸鼠,剖取肿瘤,行常规制片,HE染色,镜下观察肿瘤病变;免疫组化染色,观察并检测移植瘤中增殖细胞核抗原PCNA和Ki-67蛋白的表达。结果: TLD组裸鼠ip对肝癌HepG2 BALB/c裸鼠相对肿瘤增殖率为42.19%,SSCN 4,6,8 mg·kg^-1的增殖率分别为48.26%,42.94%,41.57%,随着剂量的增高其相对肿瘤增殖率逐渐下降,SSCN抑制肿瘤生长的作用存在剂量依赖性。镜下观察,SSCN高剂量组见到大量坏死细胞外,部分肿瘤细胞体积较小,细胞核浓染。NS组荷瘤小鼠的肿瘤细胞中PCNA和Ki-67蛋白的表达率明显增高;而与NS组比较,TLD组和SSCN高剂量组PCNA和Ki-67蛋白的表达显著下降(P<0.05)。结论: 夜香树甾体皂苷体内对BALB/c小鼠肝癌移植瘤有一定的抑制作用,其作用机制可能是通过下调PCNA和Ki-67基因蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

冬虫夏草繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨冬虫夏草Cordyceps sinensis繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响。方法通过MTT法、平板克隆实验检测冬虫夏草繁育品对B16细胞增殖能力的影响;采用划痕实验、transwell小室实验检测其对B16细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测其对B16细胞黏附能力的影响;采用流式细胞仪检测其对B16细胞周期分布的影响;采用Western blotting法检测其对B16细胞中MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、P21及p-Akt蛋白表达的影响。结果冬虫夏草繁育品能够将B16细胞阻滞在G1/S期,从而显著抑制B16细胞的增殖,并显著降低B16细胞的迁移能力。同时可导致B16细胞MMP-9、MMP-2、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、p-Akt蛋白表达减少和Bax、P21蛋白表达增加。结论冬虫夏草繁育品能显著抑制B16细胞的增殖及迁移能力,其作用机制可能与调控细胞周期相关蛋白、MMPs家族蛋白及p-Akt蛋白的表达有关。