非霍奇金淋巴瘤与基因重排

研究非霍奇金淋巴瘤与基因重排的关系,用PCR技术检测免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体γ基因(TCRγ)的克隆性重排。结果:①211例非霍奇金淋巴瘤患者中,IgH阳性108例,TCRγ阳性45例,双阳性12例,阴性46例;②系统观察10例患者,发现临床完全缓解时仍有5/10患者呈克隆性基因重排。结论提示,基因克隆性重排的PCR分析在非霍奇金淋巴瘤的早期诊断及评估治疗有效性方面是有用的。     

非霍奇金淋巴瘤抗原受体基因重排检测中双重重排现象的初步研究

目的　检测非霍奇金淋巴瘤 (NHL)抗原受体基因双重重排的发生率及初步探讨其病理意义和可能机制。方法　采用PCR方法 ,联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,检测 12 5例NHL患者IgH基因及TCR基因克隆性重排 ;检测B NHL和T NHL中抗原受体基因双重重排的发生率 ,并对其中的 117例NHL患者采用免疫组织化学EnVision两步法检测Ki6 7蛋白表达并计算增殖指数 ,分析NHL不同重排类型与增殖指数间的关系。结果　联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,96例B NHL患者中有 8例 (8% )检测到发生双重重排 ,2 9例T NHL患者中有 5例 (17% )检测到发生双重重排。B NHL中 6 5例检测到IgH基因克隆性重排 ,8例发生双重重排 ,15例为多克隆重排 ;T NHL中有 15例检测到TCR基因克隆性重排 ,5例发生双重重排 ,9例为多克隆重排。上述病例同时平行检测了Ki6 7,并计算增殖指数 ,经One way检验 ,在B NHL和T NHL中 ,克隆性重排、双重重排及多克隆重排的淋巴瘤增殖指数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　淋巴瘤抗原受体基因的双重重排在成熟NHL中并非罕见 ;增殖指数与NHL基因双重重排无相关性     

探讨肝原发性黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的病理学特征

目的探讨肝原发性黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的临床病理特征、免疫表型和基因重排特点。方法对2例原发于肝黏膜相关淋巴组织淋巴瘤进行回顾性研究,包括临床病理观察、免疫组化检测及多聚酶链反应（PCR）检测基因重排。结果2例均为偶然发现肝占位性病变,肿瘤组织主要由中心细胞样B细胞和单核细胞样B细胞构成,均见肿瘤细胞侵犯胆管上皮、侵袭肝细胞索形成淋巴上皮病变,肿瘤细胞CD20、CD79α和Pax-5（＋）,T细胞标记（-）,IgH基因均呈单克隆重排。结论原发性肝MALT型淋巴瘤是一种惰性淋巴瘤,多为偶然发现的肝占位性病变,诊断及鉴别诊断需要结合病理形态、免疫组化标记及必要的基因重排检测。     

CD45RO阳性的B细胞性淋巴瘤

目的 研究免疫表型异常淋巴瘤的起源。方法 从48例B细胞淋巴瘤中筛选出3例CD45RO、CD20和CD79a( )，CD3(-)的淋巴瘤。采用免疫组化、PCR和基因扫描技术对其免疫表型，免疫球蛋白重链基因重排(IgH)和T细胞受体基因重排(TCR)进行深入研究。结果 3例淋巴瘤均为结外淋巴瘤。1例为滤泡性淋巴瘤，2例为弥漫性大B细胞性淋巴瘤。PCR和基因扫描显示3例均有IgH克隆性扩增；PCR未显示TCR扩增；高敏感性基因扫描显示低峰值TCR克隆性扩增，提示可能为背景T细胞扩增。结论 CD45RO不是T细胞特异性抗原，CD45RO阳性细胞不能完全等同于T细胞，因此，在研究和临床病理诊断中应选用多种抗体配合使用。     

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中IgH基因克隆性重排检测基本方法.方法应用PCR方法,采用IgH FR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况.结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤（MALT）3例中有2例（2/3）,弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例（2/2）,滤泡淋巴瘤1例中0例（0/1）,套细胞淋巴瘤1例中1例（1/1）检测到IgH基因的克隆性重排.总检测率为5/7（71%）,4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排.结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法.     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排在非霍奇金淋巴瘤患者微小残留病中的应用及临床意义

目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排,并探讨其在监测微小残留病变(MRD)中的临床意义。方法提取63例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法检测IgH(VH FR3-JH)和TCRγ(Vγ-Jγ)克隆性基因重排,与病理组织学检查进行比较。并随访患者以监测和检测MRD。结果 63例中有49例[30例B细胞NHL(B-NHL)和19例T细胞NHL(T-NHL)]初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功。30例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性27例(90%),19例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性14例(74%);其病理活检标本基因重排结果分别为87%和74%(P0.05)。另14例(9例B-NHL,5例T-NHL)临床缓解患者中,仅1例(B-NHL)提取出血浆游离DNA并检测到IgH基因单克隆重排。随访治疗缓解的患者共56例,其中24例患者血浆游离DNA基因重排持续阴性,2年存活率达83%;27例患者血浆游离DNA基因重排缓解时呈阴性随后转阳,5例患者缓解后始终能检测到血浆游离DNA基因重排,其2年存活率分别为26%和20%(P0.05)。结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便,与病理活检标本检测具有相同的临床意义。在MRD的监测中,利用血浆游离DNA检测单克隆性重排具有一定的早期预测复发的作用。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的分子病理诊断结果分析

目的 分析黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALTL)的分子病理诊断结果.方法 选取我院收治的MALTL患者50例,回顾性分析其相关资料,所有患者均制作石蜡包埋标本,观察分析其原发病灶形态学、分布、免疫球蛋白重链(IgH)基因克隆性重排、免疫表型等情况.结果 50例患者病灶分布主要在胃部(38.0％);免疫组化显示BCL-2均呈阳性,CD21、cyclinD1、CD23、CD50、CD1、CD3均呈阴性;BCL-2、CD20均呈阳性;MALTL标本lambda或kappa与IgH基因单克隆性重排二者联合测定阳性率68.0％.结论 临床诊断MALTL时免疫组织化学检测、组织形态学特点均为基础手段,而lambda或kappa限制性表达与IgH基因单克隆性重排检测等联合可达到更高阳性率,值得研究.     

抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的应用

本研究旨在探讨抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的意义。收集分析了31例淋巴瘤组织,石蜡包埋切片,HE染色后观察形态,免疫组织化学分析免疫表型。采用BIOMED-2标准化试剂盒检测抗原受体基因重排克隆性。结果表明,31例病例中形态学及免疫组织化学分析疑似T细胞淋巴瘤12例,T细胞反应性增生1例,B细胞淋巴瘤16例,B细胞反应性增生2例。基因重排克隆性检测免疫球蛋白(Ig)阳性率94.44%(17/18),T细胞抗原受体(TCR)阳性率92.31%(12/13),2例阴性。最终12例确诊为T细胞淋巴瘤,B细胞淋巴瘤17例,反应性增生2例,阳性检出率为93%。结论:抗原受体重排基因克隆性分析是诊断淋巴瘤的一种有效辅助手段。     

应用PCR方法检测淋巴细胞白血病IgH和TCRγ基因重排

本文应用PCR方法扩增IgH基因重排产生的CDR-Ⅲ区序列和TCRγ基因重排产生的V_9区序列,共检测了20例淋巴细胞白血病病人,其中15例B淋巴细胞白血病均发生IgH基因重排,并有2例出现两种基因扩增产物,它的大小为70-140bp;另5例T淋巴细胞白血病中有2例发生TCRγ基因重排,扩增产物的大小为170-230bp,而在正常人和非淋巴细胞白血病中均未发现有IgH和TCRγ基因重排。     

急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链基因克隆性重排的研究

目的：初步阐明急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)免疫球蛋白重链(IgH)基因克隆性重排的发生及其异质性。方法：通过逆转录，聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光双脱氧核苷酸末端终止法以及生物信息学技术，对25例经细胞形态学、免疫表型和细胞遗传学确诊为B-ALL患的IgH基因克隆性重排进行了测序研究。结果：25例患中有24例(96％)IgH基因发生了克隆性重排，其中54．2％(13／24)为单克隆性重排，45．8％(11／24)为寡克隆性重排。根据同一个体不同寡克隆CDR3区的同源性，这些寡克隆可分为不相关(54．5％)、部分相关(27．3％)和完全相关(18．2％)。结论：25例B—ALL患的IgH基因中96％发生克隆性重排，其中54．2％为单克隆性重排，45．8％为寡克隆性重排，个体的寡克隆之间54．5％存在异质性。     

原发性皮肤边缘区B细胞淋巴瘤临床病理特征

目的 探讨原发皮肤边缘区B细胞淋巴瘤(PCMZL)的临床和病理学特征,诊断和鉴别诊断.方法 对2例PCMZL和1例皮肤淋巴组织增生(CLP)病例进行临床特征、组织形态学、免疫表型及PCR IgH基因重排分析.结果 免疫组化示2例PCMZL的小淋巴细胞CD20和CD79(卅),bcL-2、BOB.1和Oct-2(++),MUM-1(+),CD5、CD10、bel-6和CD23(-);浆细胞CD138、MUM-1(++),限制性表达轻链kappa.1例CLP的小淋巴细胞CD20、CD3和bcl-2(++),MUMl(+);浆细胞同时表达K及λ.IgH扩增2例PCMZL呈单克隆性,1例CLP显示多克隆性.结论 PCMZL属MALT-L家族,形态学上肿瘤细胞由异源性小淋巴细胞组成,免疫学上显示后生发中心标记.浆细胞轻链限制性和B细胞抗原受体基因克隆性重排对诊断有非常重要的帮助.     

非霍奇金淋巴瘤bcl-2／IgH基因重排及微小残留病变的检测

探索bcl-2基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生及演变中的作用,以bcl-2/IgH重排为克隆标志,建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变的方法。用多聚酶链反应(PCR)检测bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度。经检测9种恶性淋巴瘤细胞系中Su-DHL-4和Su-DHL-6有bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度为1:10~5。29例NHL石蜡包埋的组织标本中,共检出6例有bcl-2基因重排,其中滤泡型NHL(F-NHL)4例(36.4％),弥漫型NHL(D-NHL)2例(18.2％),全部在B细胞性NHL中检出。16例F-NHL患者中,4例外周血和骨髓中同时检出bcl-2(MBR)/IgH基因重排,化疗达CR后依然存在。结论提示,bcl-2基因重排主要与低度恶性的B细胞性淋巴瘤有关,重排方式以bcl-2(MBR)/IgH为主。bcl-2基因重排的检测为对滤泡性淋巴瘤微小残留病变的检测提供了一个快速、敏感、特异的方法,对该疾病的分期、疗效和预后的评估有一定的临床价值。     

软组织恶性淋巴瘤4例病理学观察及基因诊断

目的 探讨软组织恶性淋巴瘤的病理特点及基因诊断方法。方法 在组织学诊断基础上,辅以免疫组织化学染色法,利用PCR技术检测石蜡切片标本IgH及TCRβ基因重排,予以确诊。结果 将病变不够典型、淋巴瘤诊断依据不充分或诊断意见不一致的4例病例确诊为软组织恶性淋巴瘤,发生部位为大腿、小腿、前臂及肩胛下,均为B细胞性弥漫性非霍奇金淋巴瘤,免疫组化：CD45（LCA）（ ）,CD20（L26）（ ）,CD45RO（UCHL1）（一）,Mac387(-),S-100(-),NSE(-),desmin(-)。PCR：IgH基因重排（ ）,TCRβ基因重排（-）。结论 软组织恶性淋巴瘤组织学形态复杂多变,基因诊断等析技术可用于软组织恶性淋巴瘤的鉴别诊断。     

非霍奇金淋巴瘤365例WHO新分类的临床病理分析

目的　探讨广东地区非霍奇金淋巴瘤的临床病理特征。方法　按照WHO恶性淋巴瘤新分类诊断标准对广东地区 3家医院 36 5例NHL进行重新分类。从患者的年龄、性别、部位、免疫标记、基因重排检测、病理诊断 6个方面进行统计学分析。结果　 36 5例NHL中 ,结内 14 1例 ,结外 2 2 4例 ;在 2 2 4例结外淋巴瘤中 ,最常见的部位依次是消化道、鼻腔、颅内 ;B细胞淋巴瘤 2 71例 ,T细胞淋巴瘤 92例 ,非T非B淋巴瘤 2例 ;113例B细胞淋巴瘤IgH基因重排检测 ,阳性率为 82 3% ;4 5例T细胞淋巴瘤TCRγ基因重排检测 ,阳性率为 91 1%。在B细胞淋巴瘤中 ,最常见的依次是弥漫性大B细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织型边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤。在 92例T细胞淋巴瘤中 ,最常见的是周围T细胞淋巴瘤。结论　广东地区结外淋巴瘤的比率超过结内 ,T细胞淋巴瘤的发病率较西方国家高 ,但滤泡性淋巴瘤的发病率较西方国家低     

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P0.001;75.8%vs 16.1%(P0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。     

结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤3例临床病理观察

目的探讨结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)的临床病理特征和病理诊断。方法复习3例NLPHL患者的临床病理资料、免疫表型、EBV原位杂交及抗原受体基因重排PCR检测结果。结果 3例NLPHL中,淋巴结结构破坏,淋巴组织呈结节性或结节-弥漫性增生,可见进行转化的生发中心(PTGC),小淋巴细胞背景中散在大型单个核或多分叶核异型肿瘤细胞。免疫组化:3例肿瘤细胞CD20、PAX5、Oct-2和BOB.1均(+);仅1例CD30弱(+);2例bcl-6(+);CD3、CD15和LMP1(-);CD21(+)显示扩大的不规则滤泡树突细胞网。3例EBV原位杂交均(-)。运用激光显微切割收集肿瘤细胞并对其进行抗原受体基因重排PCR检测,2例IgH单克隆性重排(+)(1例为Fr2a,1例为Fr3a),3例TCRγ多克隆性重排。结论 NLPHL是一种罕见的具有独特临床病理特征的霍奇金淋巴瘤亚型,细致的形态学观察及完善的免疫组化检查有助于诊断和鉴别诊断。     

半巢式聚合酶链反应方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排

目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）bcl-2／IgH基因重排，并通过测定产物的序列，以了解所建方法的可靠性、方法运用专业引物设计软件设计bcl-2／IgH基因重排半巢式PCR引物，对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR（touch down PCR）扩增，检测bcl-2／IgH基因重排，并对其产物进行克隆和序列分析。结果 通过一步法检测到bcl-2／IgH基因重排8例，其中DLBCL6例，新鲜扁桃体组织2例；进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性，新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示：一步法检测到的8例中有3例为假阳性，而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2／IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191，LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2／IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性，其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合，进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增，提高诊断的准确性。     

非霍奇金淋巴瘤IgH及TCRγ基因重排的意义

在淋巴瘤的病理诊断中 ,区分淋巴细胞良性反应性增生和恶性淋巴瘤一直是临床病理诊断工作中的难题 ,单凭形态学分析常常难以作出判断。近年来随着分子免疫学研究的不断深入及PCR技术在肿瘤研究中的应用 ,为非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的诊断提供了分子生物学手段。为此 ,我们应用NHL石蜡包埋组织的DNA模板 ,结合免疫组织化学分析结果 ,探讨用PCR方法检测NHL克隆性IgH及TCRγ基因重排及其在NHL诊断与鉴别诊断中的意义。材料和方法1　材料　收集中山大学肿瘤医院及中山大学附属第三医院1998～ 2 0 0 0年NHL石蜡包埋标本 6 7例 ,男 4 1例…     

B-NHL患者骨髓和外周血细胞克隆性IgH基因重排的检测及临床意义

为探讨骨髓(BM)和外周血(PB)细胞克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)分期、疗效及预后判断方面的价值,采用半巢式PCR,对治疗前B-NHL患者BM 46例和PB 38例及治疗缓解后的BM和PB 10例进行了该标志的检测.对照组为非肿瘤或非B细胞来源肿瘤患者的BM或PB共33例.结果显示在B-NHL组,治疗前形态学有瘤细胞侵犯的3例BM及2例PB,克隆性IgHCDR3重排阳性;在形态学未见异常的BM和PB中克隆性IgH重排阳性率分别为65.1%及44.4%,与B-NHL分期及有无全身症状无关.10例病理组织克隆性IgH重排阳性的病人,7例缓解后BM和PB重排转为阴性,处于持续完全缓解状态;2例行自体外周血干细胞移植后BM或PB重排持续阳性者复发;1例移植后10个月BM克隆性IgH重排阳性,仍处于完全缓解.对照组33例中仅1例克隆性IgH重排阳性,本方法的特异性为97%.研究提示,PCR法能早期诊断BM及PB的瘤细胞浸润.临床缓解期BM或PB克隆性IgH重排阳性预示可能近期复发,阴性者可能持续缓解,个别IgH阳性者仍长期生存,其机理有待进一步研究.